本發(fā)明屬于植物凈化環(huán)境污染的領(lǐng)域，涉及精胺的新用途，具體為精胺在提高植物凈化甲醛污染中的新用途。

背景技術(shù)：

煙草（Nicotiana tabacum L.）是一種在我國(guó)種植廣泛的經(jīng)濟(jì)作物。煙草葉片較大，氣孔數(shù)目多，氣孔較大，是吸收環(huán)境中甲醛的極佳的植物材料。作為模式已經(jīng)被廣泛研究，用¹³C標(biāo)記的H¹³CHO處理煙草葉片經(jīng)¹³C-NMR分析結(jié)果說(shuō)明甲醛在煙草葉片中代謝產(chǎn)生四種有機(jī)酸[4-¹³C]Asn、[3-¹³C]Gln、[U-¹³C]OA和H¹³COOH，沒(méi)有糖類(lèi)物質(zhì)產(chǎn)生。煙草代謝HCHO的途徑可概括為：HCHO進(jìn)入煙草細(xì)胞后，在細(xì)胞質(zhì)溶膠中首先與GSM（谷胱甘肽）結(jié)合形成了加合物HM-GSH（S-羥甲基谷胱甘肽），在FALDH（甲醛脫氫酶）催化下產(chǎn)生Forml-GSH（甲酰谷胱甘肽），隨后在ESD（甲?；入赘孰乃饷福┳饔孟律杉姿?，然后擴(kuò)散進(jìn)入葉綠體中，在GOS（乙醛酸合成酶）作用下生成Glyoxylic acid（乙醛酸），乙醛酸進(jìn)入過(guò)氧化物酶體，被GO（乙醇酸氧化酶）氧化為OA（草酸），草酸進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)溶膠中被OCS（草酰胺-CoA合成酶）催化生成Oxalyl-CoA（草酰-CoA），進(jìn)而形成CO₂，與PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）在PEPC（磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶）作用下形成OAA（草酰乙酸），OAA最終進(jìn)入線粒體中的TCA循環(huán)，終產(chǎn)物為Gln或Asn。

葉綠體與植物的光合作用密切相關(guān)并在植物甲醛代謝中發(fā)揮著非常重要的作用，葉綠素的含量直接反應(yīng)葉綠體的受破壞程度，當(dāng)植物受到環(huán)境中的甲醛脅迫時(shí)，植物會(huì)出現(xiàn)病變并加速衰老，最明顯的表現(xiàn)之一是植物葉綠體遭到破以及葉綠素的分解加速和含量快速下降，通過(guò)測(cè)定葉綠素含量，能反映出植物在逆境脅迫下的生命活力。植物的器官在衰老或者受到甲醛的脅迫時(shí)，由于體內(nèi)活性氧代謝加強(qiáng)，而使過(guò)氧化氫（H₂O₂）和丙二醛(MDA)產(chǎn)生積累，并發(fā)生膜脂過(guò)氧化作用。H₂O₂可以直接或間接的氧化細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老或者解體。MDA是自由基進(jìn)行膜脂過(guò)氧化作用過(guò)程中的最終產(chǎn)物之一，丙二醛和酶結(jié)合、交聯(lián)使之失活從而導(dǎo)致細(xì)胞膜作用的紊亂，以至于生物膜的結(jié)構(gòu)和功能被破壞。MDA和H₂O₂通常被作為質(zhì)膜過(guò)氧化指標(biāo)，用來(lái)表示細(xì)胞膜脂過(guò)氧化程度與植物在逆境下遭受傷害反應(yīng)的強(qiáng)弱。植物體內(nèi)這兩種物質(zhì)積累越多，說(shuō)明植物受損害越嚴(yán)重。SOD、CAT、POD 、APX等統(tǒng)稱(chēng)為保護(hù)酶系統(tǒng)，保護(hù)酶體系清除活性氧的能力是決定植物對(duì)脅迫抗性的關(guān)鍵因素。植物受到甲醛脅迫時(shí)，體內(nèi)主要利用抗氧化酶系統(tǒng)來(lái)清除活性氧，來(lái)解除或者減少甲醛脅迫對(duì)植物的損害。

多胺作為一類(lèi)植物激素，具有調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育和延緩植物細(xì)胞衰老等生理功能，當(dāng)植物遭遇逆境脅迫時(shí)，植物體內(nèi)多胺不僅可以通過(guò)歧化反應(yīng)直接清除活性氧, 而且還可以通過(guò)提高抗氧化酶活性來(lái)減少活性氧的積累。精胺是含有兩個(gè)氨基和兩個(gè)亞氨基的多胺類(lèi)物質(zhì)，在植物體內(nèi)由丁二胺和S-腺苷蛋氨酸經(jīng)一系列酶促反應(yīng)后生成。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種提高植物凈化環(huán)境中甲醛污染能力促進(jìn)劑，即精胺（Spermine）在植物凈化甲醛污染中的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下述的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

1、野生型煙草（Nicotiana tabacum L.）的繼代培養(yǎng)與取材

在超凈工作臺(tái)中繼代無(wú)菌的野生型煙草于含有 MS 固體培養(yǎng)基的組培瓶中,于恒溫 25℃、24 h 光照的組培室中培養(yǎng)30天后，剪取大小和顏色相近的煙草葉片用于實(shí)驗(yàn)。

2、不同濃度梯度精胺促進(jìn)煙草葉片吸收甲醛的研究

設(shè)置不同實(shí)驗(yàn)組使4 mmol/L的甲醛溶液中精胺濃度分別為0 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組浸泡2g新鮮的煙草葉片于甲醛溶液，100 μmol·m^-2·s^-1光照，搖床轉(zhuǎn)速100 r·min^-1進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在6 h、12 h、24 h、48 h、72 h時(shí)分別測(cè)定剩余的甲醛含量；并在煙草葉片處理72小時(shí)后分別測(cè)定其葉綠素a和葉綠素b的含量；從而篩選出精胺的最佳添加濃度。

3、最適濃度的精胺刺激48h后煙草葉片生理生化指標(biāo)的的測(cè)定

取2g新鮮煙草葉片加入到含有最適精胺濃度的4 mmol/L 的甲醛溶液中，于100 μmol·m^-2·s^-1光照，搖床轉(zhuǎn)速100 r·min^-1下處理48小時(shí)，設(shè)置三組重復(fù)，處理后測(cè)定煙草葉片過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）活性，以及煙草葉片中過(guò)氧化氫（H₂O₂）含量和丙二醛（MDA），以確定精胺刺激對(duì)煙草葉片抗氧化酶含量的影響以及煙草葉片過(guò)氧化的程度，為精胺促進(jìn)植物對(duì)甲醛的代謝確定生理依據(jù)。

本發(fā)明提供的精胺作為提高植物環(huán)境中甲醛污染能力的促進(jìn)劑，具有使用方便，成本很低，實(shí)用性強(qiáng)，開(kāi)辟了用調(diào)節(jié)劑提高植物凈化甲醛污染的一條途徑，有助于科研工作者對(duì)精胺提高植物凈化甲醛污染能力分子機(jī)理的研究，為科研工作者研究植物中精胺與14-3-3蛋白相互作用提供了一定的理論支持；該調(diào)節(jié)劑顯著提高了植物凈化水體中甲醛污染的能力，在環(huán)境保護(hù)和水污染防治領(lǐng)域具有廣闊的前景，煙草作為科研中的模式植物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定代表性，也為將這一發(fā)明應(yīng)用到其他植物凈化水體中甲醛污染提供了新的思路。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所述的提高植物凈化甲醛污染能力的促進(jìn)劑，具有投入低、操作簡(jiǎn)單、效率高的特點(diǎn)，并能顯著提高了植物凈化水體中甲醛污染的能力。在環(huán)境保護(hù)和水污染防治領(lǐng)域具有廣闊的前景。常溫下，精胺是比較理想的植物凈化水體中甲醛污染的促進(jìn)劑，精胺刺激煙草葉片可以提高煙草葉片中與甲醛代謝相關(guān)的酶的活性，從而提高甲醛吸收率，對(duì)水體中甲醛污染防治具有重要意義。煙草作為科研中的模式植物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定代表性，也為將這一發(fā)明應(yīng)用到其他植物凈化水體中的甲醛污染提供了新的思路。本發(fā)明有助于科研工作者對(duì)精胺提高植物凈化甲醛污染能力分子機(jī)理的研究以及植物中精胺與14-3-3蛋白相互作用并調(diào)節(jié)相關(guān)抗氧化酶的活性的研究提供了一定的理論支持。

附圖說(shuō)明

圖1為不同精胺濃度激煙草葉片，在4 mmol/L HCHO溶液中不同時(shí)間點(diǎn)HCHO剩余量的測(cè)定結(jié)果；圖中對(duì)照表示組培瓶中只加入4 mmol/L HCHO溶液，并未加入煙草葉片，也未加入精胺；0-200 μmol/L表示組培瓶中加入的4 mmol/L HCHO溶液中所含的精胺濃度；

圖2為在4 mmol/L HCHO溶液中，不同濃度精胺刺激煙草葉片72 h后煙草葉片中的葉綠素a含量（A圖）和葉綠素b含量（B圖）；

圖3為在4 mmol/L HCHO溶液中，未用精胺刺激以及最佳濃度（100 μmol/L）精胺刺激煙草葉片后MDA含量（A圖）和H₂O₂含量（B圖），圖中對(duì)照表示未經(jīng)任何處理的新鮮煙草葉片；甲醛（24）和甲醛（48）分別表示未加入精胺的4 mmol/L HCHO溶液處理煙草葉片24 h和48h后所測(cè)得結(jié)果；精胺（48）表示含100 μmol/L 精胺的4 mmol/L HCHO溶液處理煙草葉片48h后所測(cè)得結(jié)果；

圖4為在4 mmol/L HCHO溶液中，未用精胺刺激以及最佳濃度（100 μmol/L）精胺刺激煙草葉片后APX活性（A圖）、CAT活性（B圖）；

圖5為在4 mmol/L HCHO溶液中，未用精胺刺激以及最佳濃度（100 μmol/L）精胺刺激煙草葉片后POD活性（A圖）、SOD活性（B圖）。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明保護(hù)范圍不局限于所述內(nèi)容。實(shí)施例中方法如無(wú)特殊說(shuō)明，按常規(guī)操作進(jìn)行，如無(wú)特殊說(shuō)明使用試劑均為常規(guī)購(gòu)試劑或按常規(guī)方法配制的試劑。

實(shí)施例1：野生型（WT）煙草的無(wú)菌培養(yǎng)與處理，步驟如下：

1、配制MS固體培養(yǎng)基，于超凈工作臺(tái)中倒入組培瓶，待培養(yǎng)基凝固后，剪取帶有葉片的無(wú)菌培養(yǎng)的野生型煙草莖部3～5cm 插入培養(yǎng)基，于25℃恒溫光照培養(yǎng)，培養(yǎng)30天后，剪取大小顏色相近的煙草葉片用于本實(shí)驗(yàn)；

2、配制含有不同濃度（0 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L）精胺的4 mmol/L 的 HCHO 處理液；

3、將上述濃度梯度的處理液各100 mL加入含有2g新鮮野生型煙草葉片的組培瓶中,使葉片完全浸于處理液中；同時(shí)以不加的葉片的4 mmol/L 的HCHO溶液作為對(duì)照檢測(cè)HCHO的揮發(fā)程度，樣品置于照度為100 μmol·m^-2·s^-1日光燈下，同時(shí)在搖床上振蕩(100 r·min^-1)處理。

實(shí)施例2：不同HCHO處理液在不同時(shí)間點(diǎn)剩余HCHO含量的測(cè)定,以及處理72 h后葉片中剩余葉綠素含量的測(cè)定。

1、甲醛剩余量測(cè)定的步驟如下：在處理的不同時(shí)間點(diǎn)(6、12、24、24、48、72 h)，各取1 mL處理液，用Nash法測(cè)定處理液中殘留HCHO的含量；溶液剩余甲醛含量=處理液中殘留甲醛的含量/處理液起始的甲醛含量×100%；對(duì)照 CK中甲醛揮發(fā)量=處理液起始的甲醛含量–CK中溶液剩余甲醛含量（圖1）。

從圖1可以看出處理與對(duì)照相比，隨著時(shí)間的推移，溶液中HCHO的剩余量都有所下降，這說(shuō)明煙草對(duì)HCHO有一定的吸收，精胺刺激煙草葉片對(duì)煙草葉片吸收甲醛有顯著的促進(jìn)作用。在100 μmol/L的精胺刺激下，處理時(shí)間為72 h時(shí)，溶液中HCHO的剩余量已經(jīng)低于20%，且高于和低于100 μmol/L的精胺處理對(duì)照組中煙草葉片吸收甲醛的作用均有所下降，所以取100 μmol/L為后續(xù)實(shí)驗(yàn)添加精胺的最佳濃度。

2、葉綠素含量測(cè)定步驟如下:

（1）取上述實(shí)驗(yàn)處理 72 h 后的煙草葉片,用預(yù)冷無(wú)菌蒸餾水沖洗葉片 4-5 次,用紙巾吸干葉片表面殘留的蒸餾水,然后用 95 %乙醇提取葉綠素,用紫外分光光度法測(cè)定 665 nm 和 649 nm 處的光吸收值 OD₆₆₅ 和 OD₆₄₉,根據(jù)下述公式計(jì)算總?cè)~綠素、葉綠素a和b的含量。

（2）根據(jù)以下公式計(jì)算葉綠素含量，葉綠素a含量(mg·g^-1) =13.95×A₆₆₅–6.88×A₆₄₉; 葉綠素 b含量(mg·g^-1)=24.96×A₆₄₉–7.32×A₆₆₅;葉綠素含量[mg·g^-1 (FW)]=(色素濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù))/(樣品鮮重×1 000)。（見(jiàn)圖2）。

從圖2A可以看出，HCHO溶液中所添加的精胺濃度與處理72 h后的煙草葉片中葉綠素a的含量無(wú)明顯相關(guān)性，在精胺濃度為100 μmol/L時(shí)，葉綠素a的含量剩余稍微多余其他對(duì)照組。從圖2 B中可以看出葉綠素b的剩余量在溶液中精胺濃度為100 μmol/L為最多，這與（圖1）中100 μmol/L精胺刺激的煙草葉片吸收甲醛效果最顯著的實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)是一致的，且葉綠素b的含量差異較圖2 A的更顯著，對(duì)葉綠素b有較明顯的保護(hù)作用。

實(shí)施例3：含有100 μmol/L 精胺的HCHO處理液處理煙草葉片后葉片氧化脅迫指標(biāo)的測(cè)定

1、用含有100 μmol/L 精胺的HCHO處理液處理煙草葉片，取處理48 h的葉片，并用不加精胺的HCHO處理液處理煙草葉片，同樣取處理時(shí)間為24 h和48 h的葉片。以未作任何處理的新鮮煙草葉片作為對(duì)照。處理后，用預(yù)冷無(wú)菌蒸餾水沖洗葉片4-5次，去除葉片表面HCHO，無(wú)菌吸水紙吸干葉片表面水分，取上述樣品各0.2 g加入1 mL酶提取液（50 mM，pH7.8的磷酸緩沖液，1 mM EDTA；1 mM AsA ；1% PvP），冰浴研磨成勻漿液，轉(zhuǎn)入2 mL EP管，再加入1 mM提取液清洗研缽，并合并轉(zhuǎn)入EP管，4 ℃，12000 rpm 離心20 min。離心后取上清于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2、丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法來(lái)測(cè)定：在 0.4 mL含有0.6% TBA(硫代巴比妥酸)20% TCA (三氯乙酸)的溶液中加入0.4 mL抽提液,沸水浴15 min后即刻置于冰上冷卻。(12000 rpm/10 min), 讀上清液的光吸收值OD₅₃₂和OD₄₅₀。代入公式中:MDA 濃度(μmol/L)= 6.45×OD₅₃₂-0.56×OD₄₅₀ 從而計(jì)算MDA的濃度（圖3A）。

MDA是膜脂過(guò)氧化的產(chǎn)物之一，其含量反應(yīng)了膜脂過(guò)氧化的程度。從圖3A可以看出，未給予精胺刺激時(shí)煙草葉片在HCHO溶液中浸泡48 h后，葉片中MDA含量與未處理的新鮮葉片相比都有所增加，浸泡48小時(shí)后增加的更為顯著，在含有100 μmol/L精胺的HCHO中，MDA含量在葉片處理48 h后同樣比CK₀有所增加，但是MDA的增加量卻顯著低于未給予精胺刺激且處理48 h的葉片。這說(shuō)明精胺刺激延緩了煙草葉片的過(guò)氧化。

3、過(guò)氧化氫(H₂O₂)的含量的采用二甲酚橙法測(cè)定

（1）用 MiliQ 水來(lái)配制試劑 A(3.3 mM FeSO₄，3.3 mM (NH4)₂SO₄，412.5 mM H₂SO₄)與試劑 B(165 μM 二甲酚橙,165 mM 山梨醇)。使用前需將試劑 A 與試劑 B 按照 1:10 的比例混合后成為工作試劑。此工作試劑和 H₂O₂ 待測(cè)液按照 2:1 的比例混合后,水浴 30℃顯 色 30 min 后,測(cè)定其 560 nm 處光吸收值 OD₅₆₀。

（2）H₂O₂的含量參照標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=0.1734x-0.0055(x:H₂O₂ 濃度(mg/mL), y:OD₅₆₀,R²=0.9995) 計(jì)算（圖3B）。

H₂O₂是細(xì)胞過(guò)氧化的指標(biāo)之一，從圖3B中可以看出在HCHO溶液中浸泡處理相同時(shí)間的煙草葉片，有精胺刺激的煙草葉片細(xì)胞的H₂O₂含量低于處理相同時(shí)間的未給予精胺刺激的煙草葉片，甚至低于未給予精胺刺激處理24 h的葉片，只是略高于對(duì)照，這同樣說(shuō)明精胺刺激減緩了煙草葉片細(xì)胞的過(guò)氧化程度。

實(shí)施例4：含有100 μmol/L 精胺的甲醛處理液處理后煙草葉片抗氧化酶活性的測(cè)定

1、抗壞血酸過(guò)氧化物酶(Ascorbate peroxidase, APX)活性的測(cè)定采用Nakano的方法

（1）取酶提取液 100μL，加入 3 ml 反應(yīng)液(56 ul 30% H₂O₂ 1 mM，0.024 g ASA(抗壞血酸,0.25 mM),0.02 g EDTA-Na₂ (0.1mM),在 0.05 mol/L 的磷酸鹽緩沖液中溶解),空白對(duì)照不加樣品,加 100μL ddH₂O，在分光光度計(jì) 290 nm下測(cè)吸光度,每隔 1 min 讀一次吸光值,測(cè)定 3 min。

（2）計(jì)算方法:APX 總活性(U.g^-1FW)=(ΔOD₂₉₀ × V)/(a × W× t); a為反應(yīng)時(shí)上樣體積，W 為樣品鮮重，t為時(shí)間1 min（圖4 A）。

從圖4 A可以看出，與新鮮煙草葉片相比，經(jīng)HCHO處理的煙草葉片APX活性都有所下降，精胺刺激的48小時(shí)的葉片APX活性只是略高于未用精胺處理的對(duì)照組，說(shuō)明精胺刺激對(duì)APX的活性的影響很小，可能精胺提高煙草葉片吸收HCHO的能力與提高APX活性的相關(guān)性不大。

2、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性測(cè)定根據(jù)Aebi的方法有所修改：反應(yīng)液:0.1 mol/L pH 7.0的磷酸緩沖 液100 mL中加入0.1mol/L H₂O₂ 25 ml,用蒸餾水定容至 500 ml。取 100μL研磨提取的上清酶液,對(duì)照中加 入100μL磷酸緩沖液,加入 3 mL 上述的反應(yīng)液,馬上在用分光光度計(jì)測(cè)定240 nm下的吸光度值,每隔30秒讀一次值,測(cè)定 3 min。酶活計(jì)算參考APX的酶活計(jì)算方法（圖4 B）。

從圖4 B中可以看出與新鮮葉片中CAT活性相比，HCHO處理過(guò)的煙草葉片CAT活性都有所提高，推測(cè)可能是CAT在煙草葉片甲醛的代謝中發(fā)揮了重要的作用，甲醛脅迫使CAT基因的表達(dá)上調(diào)，從而使葉片細(xì)胞中H₂O₂的代謝加快，減緩了煙草葉片的過(guò)氧化程度，所有實(shí)驗(yàn)組中精胺刺激的實(shí)驗(yàn)組CAT活性提高最為顯著，說(shuō)明精胺的刺激促進(jìn)了CAT活性的上調(diào)。

3、過(guò)氧化物酶(POD)活性測(cè)定參照Chance的愈創(chuàng)木酚方法改進(jìn)

反應(yīng)液配制:加入加熱溶解的愈創(chuàng)木酚56μL于100 mL的0.1 mol/L，pH 6.0的磷酸鹽緩沖液中，加熱溶解，冷卻后加入 38μL 30% H₂O₂,混勻,存放在4℃冰箱中。取 20μL提取的樣品上清,加入3 mL 反應(yīng)液,在分光光度計(jì)中測(cè) 470 nm下的吸光值, 每隔30秒讀一次,活性測(cè)定3 min。計(jì)算方法同APX 的方法（圖5A）。

從圖5A中可以看出，與新鮮煙草葉片相比HCHO脅迫在最初降低了POD的活性，隨著脅迫處理時(shí)間的增加到48 h時(shí)POD的活性有所恢復(fù)，處理48 h的實(shí)驗(yàn)組中精胺刺激組略高于未用精胺刺激的實(shí)驗(yàn)組，說(shuō)明精胺刺激煙草葉片在一定程度上加快POD活性的恢復(fù)，這說(shuō)明精胺刺激有助于提高煙草葉片POD活性的增強(qiáng)，進(jìn)而促進(jìn)煙草葉片對(duì)HCHO的代謝。

4、超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定參照 Gianopolitis 的氮藍(lán)四唑(NBT)的方法

（1）反應(yīng)液的配制:14.5 mmol/L 甲硫氨酸，30 mmol/L EDTA-Na₂，2.25 mmol/L 氮藍(lán)四唑(NBT)，60 umol/L 核黃素。

SOD的活性測(cè)定是在光照下反應(yīng)體系中產(chǎn)生氧自由基將硝基四唑藍(lán)還原成藍(lán)色物質(zhì),并且在 560 nm 處有最大吸光度，SOD 能與氧自由基反應(yīng),從而清除氧自由基抑制上述反應(yīng)。SOD活性測(cè)定操作取 4 mL EP管,加入 50μL 提取的上清液(2支對(duì)照管中加磷酸緩沖液 50 μL)然后再加入 3 mL 反應(yīng)液,其中一支對(duì)照管放于暗處,其 余各管放置于4000 lux日光下反應(yīng) 20 min，反應(yīng)結(jié)束后將各反應(yīng)樣品管放于暗處,以一開(kāi)始置于暗處的對(duì)照 管作空白對(duì)照,用分光光度計(jì)測(cè)定560 nm處的吸光值。

（2）計(jì)算:以抑制NBT光化學(xué)還原50%時(shí)所需要的酶量為一個(gè)酶活單位(U)。SOD總活力(U?g^-1FW)=[(照光對(duì)照管的吸光度-樣品管的吸光度) ×樣品液總的體 積]/(0.5×照光對(duì)照管的吸光度×樣品鮮重×樣品的上樣量) （圖5B）。

從圖5B中可以看出，SOD的活性在新鮮煙草葉片中與甲醛脅迫后的葉片中變化并不明顯，精胺刺激對(duì)SOD活性的提高只有微弱的作用。推測(cè)可能，SOD在煙草葉片清除H₂O₂的積累并沒(méi)有發(fā)揮顯著作用，而是主要依靠圖4B和5A中CAT以及POD的活性來(lái)清除H₂O₂的積累。