技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領域，涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖及海洋微生物技術(shù)，具體為一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑及其制備方法和應用。
背景技術(shù)：
：從近年來水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展歷程，幾乎所有養(yǎng)殖品種都經(jīng)歷過由盛而衰的演變過程，其原因除市場因素之外，病害的影響有時也起著主導作用。所不同的是維持其周期長短而已。目前養(yǎng)殖刺參的主要疾病種類有：寄生蟲病、皮膚潰爛病、圍口部腫脹病、溢腸癥、身體扭曲癥、僵化病等?？赡転槲⑸镄圆≡毦?、病毒、支原體、衣原體、立克次氏體、有害原生動物、寄生蟲等）對刺參（宿主）的感染、侵害所致。造成刺參病害及死亡原因也可以說是多方面的。主要有如下因素：近海水域污染嚴重，生態(tài)環(huán)境遭到破壞而導致沿岸水質(zhì)條件發(fā)生變化。據(jù)資料統(tǒng)計表明85%以上的養(yǎng)殖病害是水質(zhì)環(huán)境條件差的原因造成的結(jié)果。水質(zhì)問題是造成刺參發(fā)病的重要原因之一。受降雨因素影響，池中淡水比率增大，鹽度發(fā)生急劇變化也是導致刺參死亡的原因之一。外來病害傳入，產(chǎn)生交叉感染，導致了蔓延擴大的嚴重后果。如果盲目地購進外地海參苗種進行越冬或養(yǎng)殖，會將帶病苗種引入，由此產(chǎn)生交叉感染。近幾年來，大部分育苗單位都采用蝦池種參進行育苗，由于蝦池種參嚴重退化、變異及多代繁育產(chǎn)生幼體抗病力低下等問題，這也是產(chǎn)生病害、死亡率高的一個原因。另外，養(yǎng)殖池投放大苗和小苗的死亡率差距較大，投放大苗和生態(tài)養(yǎng)殖苗抗病力強、死亡率低，投放小苗抗病力差、死亡率高。管理不善，措施不力，缺乏科學管理意識。如養(yǎng)殖池老化不加改建或改造不到位，放苗密度超越承載容量，盲目投放病苗等都是產(chǎn)生病害的重要原因。目前海參養(yǎng)殖發(fā)生的疾病主要有以下幾種：（1）爛邊病發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為：在顯微鏡下耳狀幼體邊緣突起處組織增生，顏色加深變黑，邊緣變得模糊不清，逐步潰爛，最后整個幼體解體消失。經(jīng)蘇木-伊紅染色發(fā)現(xiàn)細胞核固縮深染，組織細胞壞死。存活個體的發(fā)育遲緩、變態(tài)率低，即使幼體能變態(tài)附板1周左右也大多“化板”消失。（2）爛胃病發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為：幼體胃壁增厚、粗糙，胃的周邊界限變得模糊不清，繼而萎縮變小、變形，嚴重時整個胃壁發(fā)生糜爛，最終可導致幼體死亡?；疾∮左w攝食能力下降或不攝食，發(fā)育遲緩、形態(tài)大小不齊，從耳狀幼體到樽形幼體變態(tài)率低。發(fā)病原因一方面是由于餌料品質(zhì)不佳如投喂老化、沉淀變質(zhì)的單胞藻餌料，或餌料營養(yǎng)單一如單獨投喂金藻類、扁藻等餌料。另一方面，一些細菌感染幼體也可以導致此病發(fā)生。（3）化板癥發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為：附著的幼體收縮不伸展，觸手收縮，活力下降，附著力差，并逐漸失去附著在附著基上的能力而沉落池底。在光學顯微鏡下，患病幼體表皮出現(xiàn)褐色“銹”斑和污物，有的患病稚參體外包被一層透明的薄膜，皮膚逐步潰爛直至解體，骨片散落。鏡檢池底可見大量骨片。（4）氣泡病發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為：幼體體內(nèi)吞有氣泡，攝食能力下降或不攝食，最終也可導致幼體死亡。目前養(yǎng)殖水體微生物制劑以投放光合細菌居多，但由于光合細菌代謝機制的限制，不可能成為改善微生態(tài)與水質(zhì)的主力，應選用其它分解轉(zhuǎn)化和適應能力強，對養(yǎng)殖生物和人類無害的微生物。芽孢桿菌屬的大部分細菌符合此要求，且本身又是魚池常見的菌種。芽孢桿菌，革蘭氏染色陽性，是普遍存在的一類好氣性細菌，多屬芽孢桿菌屬，能分泌出活性強的多種酶類，在其生命過程中又能以孢子體形式存在，易于生產(chǎn)和保存，作為飼料微生態(tài)添加劑和水體微生態(tài)調(diào)控劑都有廣闊前景。但是單一的芽孢桿菌效果不佳，且芽孢桿菌的載體影響了其在水中的活性。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，獲得一種能夠抑制海參養(yǎng)殖過程中霉菌病發(fā)生的水質(zhì)修復劑，本發(fā)明提供了一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑及其制備方法和應用。技術(shù)方案：一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：（1）制備益生菌原液：將在LB瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長良好的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和彎曲芽孢桿菌分別接種至BS液體培養(yǎng)基中，在pH為7.5～7.9，溫度為35～38℃振蕩培養(yǎng)10～16小時，再以1～5:1:1的體積比混合，制備成益生菌原液；（2）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：向在密閉式發(fā)酵反應器中加入發(fā)酵液，并按2～8%的體積比加入營養(yǎng)物質(zhì)，再將步驟（1）制備的益生菌原液按體積比2～8%接種，進行發(fā)酵，壓力為0.05～0.35MPa，溫度為35～38℃，發(fā)酵24～36小時；（3）噴霧干燥處理：將步驟（2）制得的發(fā)酵產(chǎn)物噴霧至吸附載體上，在4～8℃條件下晾干；其中，所述營養(yǎng)物質(zhì)，按重量份計包括蠶蛹粉1～9份、玉米粉2～7份、大麥粉3～8份、氯化鈉1～3份、海水12～28份；所述吸附載體，按重量份計包括麩皮2～8份、絲素蛋白1～9份、海泡石粉3～8份。優(yōu)選的，步驟（1）制備益生菌原液：將在LB瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長良好的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和彎曲芽孢桿菌分別接種至BS液體培養(yǎng)基中，在pH為7.8，溫度為37℃振蕩培養(yǎng)13小時，再以3:1:1的體積比混合，制備成益生菌原液。優(yōu)選的，步驟（2）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：向在密閉式發(fā)酵反應器中加入發(fā)酵液，并按6%的體積比加入營養(yǎng)物質(zhì)，再將步驟（1）制備的益生菌原液按體積比4%接種，進行發(fā)酵，壓力為0.26MPa，溫度為37℃，發(fā)酵30小時。優(yōu)選的，步驟（3）噴霧干燥處理：將步驟（2）制得的發(fā)酵產(chǎn)物噴霧至吸附載體上，在6℃條件下晾干。優(yōu)選的，所述吸附載體中海泡石粉為100～200目。優(yōu)選的，步驟（1）中菌體濃度為1×108～1.8×108cfu/mL。優(yōu)選的，步驟（3）中吸附載體上混合菌體的終濃度為108～1010cfu/mL。任一所述方法制備獲得的防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑。所述的防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑在海參養(yǎng)殖中的應用。有益效果：（1）本發(fā)明所述防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑環(huán)境耐受性強，漂浮性、懸浮性以及沉浮可控性好，可以快速、長久抑制水體中藻類、霉菌的生長；（2）本發(fā)明所述防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑能夠修復水體酸化和臭底，緩解養(yǎng)殖環(huán)境對海參的應激反應，預防海參霉菌病的發(fā)生，提高養(yǎng)殖的質(zhì)量和產(chǎn)量。具體實施方式實施例1一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：（1）制備益生菌原液：將在LB瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長良好的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和彎曲芽孢桿菌分別接種至BS液體培養(yǎng)基中，在pH為7.5，溫度為35℃振蕩培養(yǎng)10小時，再以1:1:1的體積比混合，制備成益生菌原液；（2）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：向在密閉式發(fā)酵反應器中加入發(fā)酵液，并按2%的體積比加入營養(yǎng)物質(zhì)，再將步驟（1）制備的益生菌原液按體積比2%接種，進行發(fā)酵，壓力為0.05MPa，溫度為35℃，發(fā)酵24小時；（3）噴霧干燥處理：將步驟（2）制得的發(fā)酵產(chǎn)物噴霧至吸附載體上，在4℃條件下晾干；其中，所述營養(yǎng)物質(zhì)，按重量份計包括蠶蛹粉1份、玉米粉2份、大麥粉3份、氯化鈉1份、海水12份；所述吸附載體，按重量份計包括麩皮2份、絲素蛋白1份、海泡石粉3份。所述吸附載體中海泡石粉為100目。步驟（1）中菌體濃度為1×108cfu/mL。步驟（3）中吸附載體上混合菌體的終濃度為108cfu/mL。實施例2一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：（1）制備益生菌原液：將在LB瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長良好的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和彎曲芽孢桿菌分別接種至BS液體培養(yǎng)基中，在pH為7.8，溫度為37℃振蕩培養(yǎng)13小時，再以3:1:1的體積比混合，制備成益生菌原液；（2）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：向在密閉式發(fā)酵反應器中加入發(fā)酵液，并按6%的體積比加入營養(yǎng)物質(zhì)，再將步驟（1）制備的益生菌原液按體積比4%接種，進行發(fā)酵，壓力為0.26MPa，溫度為37℃，發(fā)酵30小時；（3）噴霧干燥處理：將步驟（2）制得的發(fā)酵產(chǎn)物噴霧至吸附載體上，在6℃條件下晾干；其中，所述營養(yǎng)物質(zhì)，按重量份計包括蠶蛹粉6份、玉米粉5份、大麥粉6份、氯化鈉2份、海水26份；所述吸附載體，按重量份計包括麩皮5份、絲素蛋白6份、海泡石粉5份。所述吸附載體中海泡石粉為150目。步驟（1）中菌體濃度為1.5×108cfu/mL。步驟（3）中吸附載體上混合菌體的終濃度為109cfu/mL。實施例3一種防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：（1）制備益生菌原液：將在LB瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長良好的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和彎曲芽孢桿菌分別接種至BS液體培養(yǎng)基中，在pH為7.9，溫度為38℃振蕩培養(yǎng)16小時，再以5:1:1的體積比混合，制備成益生菌原液；（2）液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：向在密閉式發(fā)酵反應器中加入發(fā)酵液，并按8%的體積比加入營養(yǎng)物質(zhì)，再將步驟（1）制備的益生菌原液按體積比8%接種，進行發(fā)酵，壓力為0.35MPa，溫度為38℃，發(fā)酵36小時；（3）噴霧干燥處理：將步驟（2）制得的發(fā)酵產(chǎn)物噴霧至吸附載體上，在8℃條件下晾干；其中，所述營養(yǎng)物質(zhì)，按重量份計包括蠶蛹粉9份、玉米粉7份、大麥粉8份、氯化鈉3份、海水28份；所述吸附載體，按重量份計包括麩皮8份、絲素蛋白9份、海泡石粉8份。所述吸附載體中海泡石粉為200目。步驟（1）中菌體濃度為1.8×108cfu/mL。步驟（3）中吸附載體上混合菌體的終濃度為1010cfu/mL。實施例1～3制備獲得的防海參霉菌病的海參養(yǎng)殖水質(zhì)修復劑使用效果：選取3處條件相同的海參養(yǎng)殖圈，平均水深1.5～2m，參苗規(guī)格35～50頭/500g，密度在9～10頭/m2。對照組未添加修復劑，實驗組除了定期潑灑實施例1～3所述的修復劑之外，飼喂方式和管理方式與對照組一樣。實驗周期為1個月，實驗組修復劑每隔3天潑灑一次，潑灑量為4g/m3。實驗期間，定期檢測水質(zhì)，觀察海參攝食情況，每隔10天下水摸探，測量海參體重。鹽度為35～38‰，水溫為16～23℃，pH為7.6～8.5，溶解氧不低于4mg/L。海參生長和免疫機能結(jié)果如下：頭數(shù)/m2平均增重/g呼吸爆發(fā)活力吞噬率/%對照組7.34.10.124±0.02128.32±0.215實施例18.911.30.639±0.07549.12±0.223實施例28.514.90.753±0.06859.84±0.0213實施例38.414.20.721±0.07253.6±0.0156當前第1頁1 2 3