煤焦化廢水cod降解用菌種馴化試劑盒及馴化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于一種菌種馴化試劑盒及馴化方法，特別涉及一種用于降解煤焦化廢水 COD用菌種馴化試劑盒及馴化方法。
【背景技術(shù)】：
[0002] 煤焦化又稱煤炭高溫干餾。以煤為原料，在隔絕空氣條件下，加熱到950°C左右，經(jīng) 高溫干餾生產(chǎn)焦炭，同時(shí)獲得煤氣、煤焦油并回收其它化工產(chǎn)品的一種煤轉(zhuǎn)化工藝。
[0003] 煤焦化行業(yè)造成的水污染相當(dāng)嚴(yán)重。我國煤炭儲(chǔ)量大，煤焦化廢水排放量大，其廢 水的成分相當(dāng)復(fù)雜，排出的廢水中含有大量難以降解的有機(jī)污染物，據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)顯示，煤焦 化廢水含有高達(dá)300多種污染物質(zhì)，不論是對環(huán)境還是對人類本身都有著較大的影響。
[0004] 煤焦化企業(yè)排放廢水含有大量有毒、有害物質(zhì)。綜合廢水中COD -般在5000mg/L 左右，廢水所含有機(jī)污染物包括酚類、多環(huán)芳香族化合物及含氮、氧、硫的雜環(huán)化合物等。廢 水中的易降解有機(jī)物主要是酚類化合物和苯類化合物；可降解類有機(jī)物有砒咯、萘、呋喃、 咪唑；難降解的有機(jī)物主要有吡啶、咔唑、聯(lián)苯、三聯(lián)苯等。
[0005] 目前國內(nèi)處理煤焦化廢水的主要工藝路線基本遵行"預(yù)處理+生化處理+深度處 理"，其中生化處理是污水處理工藝的重要階段。通過對國內(nèi)多個(gè)煤焦化企業(yè)的實(shí)地走訪， 目前對于預(yù)處理后的煤焦化廢水，一般采用缺氧、好氧生物法處理（A/ο工藝）。微生物是廢 水生物處理過程的核心，制約著污水處理的效果。在污水廠啟動(dòng)初期或運(yùn)行受到?jīng)_擊需要 重新恢復(fù)運(yùn)行時(shí)，國內(nèi)普遍采用的方法是向污水處理設(shè)施中投加污泥和營養(yǎng)物質(zhì)，或者投 加市場上現(xiàn)有的專用微生物菌劑，達(dá)到污水處理設(shè)施正常運(yùn)行的目的。對于煤焦化廢水的 處理，投加污泥和菌劑的效果受到以下幾方面問題的制約：一、煤焦化廢水中含有多種對微 生物有毒害作用的物質(zhì)，投加到污水中的污泥或菌種中的部分微生物容易被廢水中的毒性 物質(zhì)所抑制，為解決此問題往往需要對污泥或菌種在投加前進(jìn)行長時(shí)間的馴化；二、煤焦化 廢水中有大量難降解有機(jī)物，這些物質(zhì)很難被微生物利用并降解，解決這個(gè)問題通常需要 工藝的合理設(shè)計(jì)與污泥或菌劑的馴化共同解決；三、與普通污水相比，煤焦化廢水處理設(shè)施 的啟動(dòng)時(shí)間更長，需要更長時(shí)間的馴化。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明的目的在于解決以上問題，提供一種煤焦化廢水COD降解用菌種馴化試劑 盒及馴化方法，經(jīng)本試劑盒馴化后的菌種投放到煤焦化廢水中，可以大大縮短污水處理啟 動(dòng)時(shí)間，提高COD降解效率。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種煤焦化廢水COD降解用菌種馴化 試劑盒，其特征在于：它是由富集管、馴化預(yù)制管A、馴化預(yù)制管B組成；其中：
[0008] ( -）、富集管：
[0009] 富集管的制備：
[0010] (1)、取牛肉膏l(xiāng)-2g，蛋白胨l-2g，磷酸二氫鉀640-780mg，磷酸氫二鈉 0. 75-1. 25g，用IL水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和5% HCl調(diào)pH至7. 00-7. 50， 分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基20ml ;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115°C滅菌 25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)富集管制備 完成；
[0011] (2)、取苯酚18-22mg，萘酚3-7mg，2-甲基苯酚3-7mg，3-甲基苯酚3-7mg，喹啉 l-2mg，用100mL無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0. 22 μ m無菌濾膜過濾除菌；過濾除菌 完成后，取2ml經(jīng)過過濾除菌的溶液，在無菌條件下加入到步驟（1)中的基礎(chǔ)富集管中，至 此富集管制備完成；
[0012] (二）、馴化預(yù)制管A:
[0013] 馴化預(yù)制管A的制備：
[0014] (1)、取牛肉膏0.8-1.2g，蛋白胨0.8-1.2g，丙三醇0.2-0.4ml，磷酸二氫鉀 640-780mg，磷酸氫二鈉0. 75-1. 25g，用IL水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5 %的碳酸鈉和5 % HCl調(diào)pH至7. 50-8. 00,分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基30ml ;分裝完畢后，將螺 口管蓋擰松，115°C滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管 蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A制備完成；
[0015] (2)、取苯酚23-27mg，萘酚8-12mg，2-甲基苯酚8-12mg，3-甲基苯酚8-12mg，喹啉 2_4mg，苯胺4_6mg，P比啶0. 4-0. 6mg，間甲苯胺4_6mg，辛基十二燒醇0. 1-0. 2mg，用100mL無 菌水溶解，溶解后在無菌條件下用〇. 22 μ m無菌濾膜過濾除菌，過濾除菌后的溶液為水添 加物A ;
[0016] (3)、取萘 130-170mg，吲哚 230-270mg，甲苯 3-7mg，鄰苯二甲酸二丁酯 2-3mg，苯并 咪唑2-3mg，用100ml75 %乙醇溶解，此溶液為醇添加物A ;
[0017] (4)、分別取水添加物A 3ml，醇添加物A 0.012ml，在無菌條件下裝到步驟（1)中 的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A中，至此馴化預(yù)制管A制備完成；
[0018] (三）、馴化預(yù)制管B:
[0019] 馴化預(yù)制管B的制備：
[0020] (1)、取牛肉膏0. 5-0. 7g，蛋白胨0. 5-0. 7g，丙三醇0. 6-0. 8ml，磷酸二氫鉀 640-780mg，磷酸氫二鈉0. 75-1. 25g，用IL水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5 %的碳酸鈉和5 % HCl調(diào)pH至7. 50-8. 00,分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基30ml ;分裝完畢后，將螺 口管蓋擰松，115°C滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管 蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B制備完成；
[0021] (2)、取苯酚 150-200mg，萘酚 20-25mg，2-甲基苯酚 40-50mg，3-甲基苯酚 40-50mg，喹啉8-10mg，苯胺10-15mg，吡啶0. 8-0. 9mg，間甲苯胺10-15mg，辛基十二烷醇 0. 3-0. 4mg，用100mL無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0. 22 μ m無菌濾膜過濾除菌，過濾 除菌后的溶液為水添加物B ;
[0022] (3)、取萘 740-760mg，吲哚 1200-1300mg，甲苯 20-25mg，鄰苯二甲酸二丁酯 10-14mg，苯并咪唑10-14mg，用100mL 75%乙醇溶解，此溶液為醇添加物8;
[0023] (4)、分別取水添加物B 3ml，醇添加物B 0.012ml，在無菌條件下裝到步驟⑴中 的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B中，至此馴化預(yù)制管B制備完成。
[0024] -種采用煤焦化廢水COD降解用菌種馴化試劑盒馴化方法，其特征在于：包括以 下步驟：
[0025] (一）、缺氧階段馴化：
[0026] (1)、將待馴化樣品取l_3ml接種到第1富集管中，將第1富集管的管蓋擰緊，平放 入搖床28-35°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)；
[0027] (2)、取經(jīng)第1富集管培養(yǎng)的樣品5ml，接種到第1馴化預(yù)制管A中，將第1富集管 連同管內(nèi)剩余樣品放入4°C冷藏；
[0028] (3)、將第1馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30°C、100-150rpm震蕩培養(yǎng) 24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A130ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第1三角 瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù)制管A中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0029] (4)將第2馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30°C、100_150rpm震蕩培養(yǎng) 24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A2 30ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第2三角 瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù)制管A中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0030] (5)將第3馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30°C、100-150rpm震蕩培養(yǎng) 24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A3 30ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第3三角 瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第1馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0031] (6)、將第1馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28°C、100_150rpm震蕩培養(yǎng) 48-72h ;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液BI 30ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第4三角瓶 中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0032] (7)、將第2馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28°C、100_150rpm震蕩培養(yǎng) 48-72h ;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B2 30ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第5三角瓶 中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0033] (8)、將第3馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28°C、100_150rpm震蕩培養(yǎng) 48-72h ;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B3 30ml放入100mL經(jīng)過滅菌的第6三角瓶 中，然后放入4°C留存；取沉淀Iml，接種到第2富集管中，將第2富集管的管蓋擰緊，平放入 搖床28-35°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)后將第2富集管放入4°C保存，或加 入4ml無菌甘油，混勻后分裝到凍存管凍存；此馴化后菌種為缺氧馴化菌種；
[0034] (二）、好氧階段馴化：
[0035] (9)、當(dāng)樣品經(jīng)過步驟（5)的第3馴化預(yù)制管A培養(yǎng)完成后，將步驟⑵冷藏的第 1富集管取出并恢復(fù)室溫；待恢復(fù)室溫6-10h后，取5ml接種到上清液A3中；將接種后的上 清液A3放入搖床25-28°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)；培養(yǎng)完成后靜置30-60min， 棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接種到上清液A2中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0036] (10)將接種后的上清液A2放入搖床25-28°C、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)； 培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液