一種高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]作為優(yōu)質(zhì)的高蛋白動(dòng)物源，蝦蟹類因具有肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美和營養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn)而廣受關(guān)注。蝦蟹類養(yǎng)殖在我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖中所占的份額也在逐年提高。因蝦蟹類在水體中蛻殼生長時(shí)需一定的隱蔽場(chǎng)所，故目前在我國的淡水蝦蟹類池塘養(yǎng)殖中，主要采用的是種草養(yǎng)殖的生態(tài)模式。
[0003]水草作為池塘生態(tài)系統(tǒng)中的初級(jí)生產(chǎn)者，對(duì)于維持池塘生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定、提高養(yǎng)殖產(chǎn)量和效益具有重要的意義。水草因具有成本低、重復(fù)利用性高、凈化能力強(qiáng)和為蝦蟹類提供隱蔽場(chǎng)所等諸多優(yōu)點(diǎn)而備受養(yǎng)殖業(yè)者的重視和關(guān)注。但池塘中水草的健康是需要精心維護(hù)的。在高溫期，隨著水溫的不斷升高，養(yǎng)殖水體中的有害微生物劇增，水體中殘剩的肥料、飼料、生物排泄物和代謝產(chǎn)物不斷地累積，沉積于水體底部及水草上。這些物質(zhì)粘附于水草表面形成污泥，影響蝦蟹的附著和水草的光合和呼吸作用。時(shí)間一長將導(dǎo)致水草表面污濁潰爛、枯萎以及死亡，影響水環(huán)境質(zhì)量，甚至對(duì)蝦蟹類產(chǎn)生毒性影響。而沉積于水體底部的上述物質(zhì)可分解產(chǎn)生氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，降低水體溶氧，影響水環(huán)境質(zhì)量，危害蝦蟹健康。因此如何在保證養(yǎng)殖生物安全的前提下有效凈化養(yǎng)殖水質(zhì)、保證水草健康生長是養(yǎng)殖業(yè)者關(guān)注的焦點(diǎn)。
[0004]近年來，相關(guān)的研究和應(yīng)用取得了一定的效果，但同樣存在諸多問題。在蝦蟹養(yǎng)殖水體的凈化上，多采用安全高效的微生物控制技術(shù)，如EM菌、芽孢桿菌等，成本低、使用方便、效果顯著，可有效控制水體的有機(jī)污染，降低水體中氨氮、亞硝酸鹽的污染水平。但這些微生物制劑多為好氧微生物，在高溫季節(jié)使用可加大水體耗氧，可導(dǎo)致水體缺氧，同時(shí)對(duì)清除水草表面污泥、防止水草腐爛和枯萎效果不佳。目前在水草健康維護(hù)上多采用表面活性劑、絮凝劑等一類化學(xué)物質(zhì)，雖然短期內(nèi)有一定的效果，但需經(jīng)常使用，會(huì)對(duì)水體生態(tài)平衡產(chǎn)生一定的影響。因此蝦蟹養(yǎng)殖在高溫期的一項(xiàng)重點(diǎn)工作是水質(zhì)與水草的健康管理，需要開發(fā)一種環(huán)境友好的，集凈化水質(zhì)、防止缺氧、保草健草于一體的功能性生物制劑，為蝦蟹養(yǎng)殖的良性發(fā)展提供技術(shù)支撐。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草的生物制劑及其制備方法和應(yīng)用，利用短乳桿菌、糞腸球菌的高濃度培養(yǎng)物和黃腐酸鉀，經(jīng)合理加工和復(fù)配后直接投入養(yǎng)殖水體，可減輕水草表面污濁、拮抗水草表面的有害微生物、防止水草腐爛，有效降解養(yǎng)殖水體中的蛋白質(zhì)、碳水化合物等有機(jī)物質(zhì)，去除水體中氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，不增加水體耗氧率，促進(jìn)蝦蟹類的攝食，優(yōu)化和修復(fù)養(yǎng)殖環(huán)境，為高溫期的蝦蟹類營造一個(gè)健康良好的水體生態(tài)環(huán)境。
[0006]按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑，配方比例按重量份計(jì)如下:短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物50~60份，糞腸球菌的高濃度培養(yǎng)物35~45份，黃腐酸鉀液5~10份；將上述物料混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑。
[0007]所述高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑的制備方法，按重量份計(jì)步驟為:
(1)短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)短乳桿菌CGMCC1.558菌苔，接種到50~100mL滅菌的MRS液體培養(yǎng)基中，于32~37°C靜置培養(yǎng)30~40h ;然后將其接入5-8L經(jīng)滅菌的MRS液體培養(yǎng)基中，于32~37°C靜置培養(yǎng)30~35 h，制成菌種種子液備用；此時(shí)菌液的活菌數(shù)彡19CFU.mL S
在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積300~350L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121°C滅菌15min后冷卻備用；將上述菌種種子液接入發(fā)酵罐，在32~37°C、轉(zhuǎn)速60~80r.min 1的條件下培養(yǎng)30~35h，待菌液濃度多19CFU -mL 1時(shí)放入經(jīng)滅菌的25L桶中備用，得到短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物；
(2)糞腸球菌的高濃度培養(yǎng)物制備:從試管斜面上取一環(huán)糞腸球菌CGMCC1.2135菌苔，接種到50~100mL滅菌的MRS液體培養(yǎng)基中，于32~37°C靜置培養(yǎng)30~40h ;然后將其接入5-8L經(jīng)滅菌的MRS液體培養(yǎng)基中，于32~37°C靜置培養(yǎng)30~35 h，制成菌種種子液備用；此時(shí)菌液的活菌數(shù)彡19CFU.mL S
在0.5噸不銹鋼發(fā)酵罐中加入總體積300~350L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)121°C滅菌15min后冷卻備用；將上述菌種種子液接入發(fā)酵罐，在32~37°C、轉(zhuǎn)速60~80r.min 1的條件下培養(yǎng)30~35h，待菌液濃度彡19CFU -mL 1時(shí)放入經(jīng)滅菌的25L桶中備用，得到糞腸球菌的高濃度培養(yǎng)物；
(3)黃腐酸鉀液的制備:取黃腐酸鉀25~40份，加入65-80份水中，溶解攪拌均勻后于121 °C滅菌15 min，冷卻后備用，得到黃腐酸鉀液；
(4)混合:取步驟(I)制得的短乳桿菌的高濃度培養(yǎng)物50~60份，步驟(2)值得的糞腸球菌的高濃度培養(yǎng)物35~45份，步驟(3)制得的黃腐酸鉀液5~10份；將上述物料混合均勻后裝入包裝瓶中，即得產(chǎn)品高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑。
[0008]所述的MRS液體培養(yǎng)基為，牛肉膏10 g.L \蛋白胨10 g.L \酵母膏5 g.L \葡萄糖5 g.L1，檸檬酸二胺2 g.L1，吐溫80 I g.L1，乙酸鈉5 g.L1，磷酸氫二鉀2區(qū)^^硫酸鎂匕〗8*1^1、硫酸猛0.05 g-L1，碳酸I丐20 g-L1，調(diào)節(jié)pH值6.2~6.6，經(jīng)121°C滅菌15 min后冷卻備用；
所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其組份比例按重量份數(shù)計(jì):糖蜜15份，大豆粉5份，鮮魚膏5份，酵母膏5份，乙酸鈉2份，硫酸鎂0.1份，磷酸氫二鉀1.0份，水66.9份，于室溫下在發(fā)酵罐中溶解混合，調(diào)節(jié)溶液pH值6.2-6.6，121 °C滅菌15 min,冷卻后備用。
[0009]所述糖蜜中糖分含量彡55%。
[0010]用來調(diào)節(jié)pH的試劑為乳酸和碳酸氫鈉。
[0011]所述高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑的應(yīng)用，將高溫期蝦蟹養(yǎng)殖用凈水保草生物制劑用于養(yǎng)殖池塘中，用量為300~1000g/畝.米水深，連用1~2次。
[0012]本發(fā)明中各組分的作用原理如下: 1、短乳桿菌:短乳桿菌LactobaciIIus brevis)屬乳桿菌目、乳桿菌科、短乳桿菌屬，分布較廣，在植物莖葉表面附有，在泡菜中更為常見，在人和動(dòng)物體消化系統(tǒng)中以小腸最多。短乳桿菌細(xì)胞呈桿狀，不形成芽孢，革蘭氏染色陽性；接觸酶、氧化酶陰性；在空氣中不生長，兼性厭氧，發(fā)酵葡萄糖、葡萄糖酸鈉、阿拉伯糖、果糖、核糖、乳糖、麥芽糖、蜜二糖、半乳糖產(chǎn)酸；能在與人體小腸膽鹽濃度接近的環(huán)境中生長；食鹽的適宜濃度大致為2°/『3% ;在pH 6.0附近生長良好，在pH 3.0的環(huán)境中也能表現(xiàn)出良好的耐酸性，但pH過低或者過高都會(huì)抑制其生長；發(fā)酵的適宜溫度是29.5~30°C。
[0013]短乳桿菌可自行產(chǎn)生天然的抗生素一乳酸桿菌素(Lactobacillin)，乳酸桿菌素具有刺激機(jī)體分泌抗體、提高免疫力和促進(jìn)有益菌的生長、選擇性殺死致病菌等重要功能。短乳桿菌產(chǎn)生的多糖能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素，引起非特異性免疫。短乳桿菌有較強(qiáng)的去除亞硝酸鹽能力，若亞硝酸鹽含量在250 mg噸1以內(nèi)，接種短乳桿菌48 h亞硝酸鹽就可全部去除，短乳桿菌去除亞硝酸鹽的最適pH值為5.0-6.0，最適溫度為30°C;若亞硝酸鹽含量在200 mg.L 1以內(nèi)，短乳桿菌對(duì)亞硝酸鹽的去除量與底物濃度有著極顯著的線性關(guān)系。
[0014]本發(fā)明利用其分泌乳酸和乳酸桿菌素來清除水草表面污泥并防止腐爛，同時(shí)轉(zhuǎn)化去除水體中的亞硝酸鹽、高溫期使用不耗水體溶氧等。
[0015]2、奠腸球菌:奠腸球菌/aecaWs)又叫奠鏈球菌，應(yīng)用C多糖抗原、根據(jù)蘭氏血清學(xué)分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞腸球菌、屎腸球菌和堅(jiān)忍鏈球菌，后者有牛鏈球菌和馬腸鏈球菌。糞腸球菌為畜禽飼料添加劑，可防治幼畜苗禽因腸道菌群失調(diào)引起的下痢，具有調(diào)節(jié)腸道正常菌群失調(diào)和促進(jìn)生長的作用。糞腸球菌菌形圓或橢圓，可順鏈的方向延長，直徑0.5-1.0 μ m，大多數(shù)成雙或短鏈狀排列，通常不運(yùn)動(dòng)。在豐富培養(yǎng)基上菌落大而光滑，直徑1~2 mm，全緣，罕見色素。其營養(yǎng)要求低，在普通營養(yǎng)瓊脂上也可生長。能在10~45°C、pH值9.6或含6.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長，并能耐65°C 30 min。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇，不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡單的培養(yǎng)基上生長不需葉酸。它在生長和代謝過程中產(chǎn)生對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物有益的營養(yǎng)物質(zhì)，如乳酸、氨基酸、維生素、酶及抑菌物質(zhì)。在飼料中添加糞腸球菌，不僅對(duì)飼料起到防腐作用，而且能增加飼料的風(fēng)味，促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物的食欲。糞腸球菌可將部分蛋白質(zhì)分解成酸胺和氨基酸，將大部分的碳水化合物的無氮浸出物轉(zhuǎn)化為乳酸，而且能使飼料里的纖維變軟，讓飼料的轉(zhuǎn)化吸收率變高。它還可作為池塘水質(zhì)和底質(zhì)改良劑，降解養(yǎng)殖環(huán)境中的有機(jī)碎肩，減少氨氮和亞硝酸鹽等有毒有害物質(zhì)，起到優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境，促進(jìn)水環(huán)境生態(tài)良性循環(huán)等功效，同時(shí)有利于提高飼料的消化率。
[0016]本發(fā)明利用其分泌的乳酸、氨基酸