專利名稱：吸附儲(chǔ)存dna的介質(zhì)和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物載體制造領(lǐng)域，特別是涉及一種吸附儲(chǔ)存生物樣品中的DNA的介 質(zhì)和制備方法。
背景技術(shù)：
在室溫下對(duì)各種生物樣品進(jìn)行收集、儲(chǔ)存、運(yùn)輸和純化其核酸并進(jìn)行PCR、SNP分 析、STR分型以及限制酶解作用分析是目前在醫(yī)學(xué)診斷、法醫(yī)學(xué)鑒定、流行病學(xué)預(yù)防檢測(cè)等 領(lǐng)域常用的操作技術(shù)和方法。對(duì)于生物樣品(特別是血液)中DNA的保存和運(yùn)輸通常需要 冷藏，其設(shè)備昂貴，操作步驟也繁瑣。更重要的是，由于沒有有效的方法防止樣品中的DNA 遭到破壞，所以樣品不能長(zhǎng)期保存。此外，由于冷藏保存的生物樣品中有一些細(xì)菌或病毒沒 被殺滅，對(duì)這些生物樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，對(duì)檢測(cè)操作人員也是不安全的。在一些偏遠(yuǎn)、經(jīng)濟(jì)落 后的地區(qū)，病人血液樣品不能及時(shí)被檢測(cè)。因此，這些血液樣品如何保存及安全地運(yùn)輸?shù)綑z 測(cè)設(shè)備齊全的單位進(jìn)行檢驗(yàn)也是一個(gè)現(xiàn)實(shí)問題。鑒于這些問題，澳大利亞人Burgoyne發(fā)明 了“DNA儲(chǔ)存的固體介質(zhì)和方法”等一系列專利(US Pat 5,807, 527 ；US Pat 5,976, 572 ；US Pat5, 972，386 ；US Pat. NO. 5，497，562)，這些專利公開技術(shù)的核心內(nèi)容是以一種吸附性的 濾紙(例如美國(guó)Whatman 3匪濾紙或No. 1濾紙)為基質(zhì)，與一種弱堿(Tris)、一種螯合劑 (EDTA)、一種陰離子去垢劑(SDS)和尿酸結(jié)合，形成具有堿性pH值的產(chǎn)品，它可以吸附生物 樣品，特別是血液樣品。被吸附在該固體介質(zhì)上的血液樣品經(jīng)過洗滌可以提取DNA或進(jìn)行 DNA擴(kuò)增(PCR)。但我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用該發(fā)明制備的固體介質(zhì)在使用過程中DNA出現(xiàn) 大量丟失，因?yàn)檠簶悠坊蚱渌飿悠吩谶M(jìn)行PCR之前必須清洗掉雜質(zhì)和污染物，這是 生物樣品提取DNA或進(jìn)行DNA擴(kuò)增必須的步驟。由于在洗滌該樣品過程中大量的DNA被洗 脫而損失掉，極大地影響了繼續(xù)進(jìn)行的DNA擴(kuò)增過程。該發(fā)明中存在一個(gè)重要的問題是生 物樣品中的DNA是如何吸附在濾紙上？我們知道濾紙(包括美國(guó)Whatman 3M濾紙或No. 1 濾紙)的組成是純棉纖維或木質(zhì)纖維，這類纖維的表面動(dòng)電層電位是負(fù)的，而DNA分子也是 帶負(fù)電的生物大分子，特別是在堿性條件下。因此DNA分子與構(gòu)成濾紙的纖維素之間存在 著靜電排斥作用，該排斥力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于纖維素與DNA分子間的范德華力，使得在洗滌吸附有 血液的固體介質(zhì)時(shí)DNA大量丟失。而該專利中并未描述是否對(duì)該濾紙或纖維進(jìn)行了改造或 修飾。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供在常溫下能過吸附儲(chǔ)存DNA，為 后續(xù)DNA的純化和擴(kuò)增提供足夠數(shù)量模板的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 1000-10的比例，將陽(yáng)離子聚合物溶解在質(zhì)量濃度為0.1%-10%的酸的水溶液中或溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比 例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為2% -10%的十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5-10分鐘，取出，用蒸餾水清洗 1-3次，再放入A溶液中浸泡5-10分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或?qū)⑺鲫?yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置5-10分 鐘后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或按質(zhì)量比為1 10-200的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)?漿內(nèi)，攪拌均勻，放置5-15分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比 為100-10 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。所述陽(yáng)離子聚合物為脫乙酰度為5% 99%的殼聚糖、羧基殼聚糖、羧甲基殼 聚糖、季銨化殼聚糖、烷基化殼聚糖、殼聚糖交聯(lián)物、接枝共聚殼聚糖、分子量為300 300, 000的多聚賴氨酸、分子量為400Da 75kDa聚乙烯亞胺、季銨化聚乙烯亞胺或聚乙二 醇化的聚乙烯亞胺。所述酸為醋酸、檸檬酸或馬來酸。所述濾紙為木漿濾紙或棉纖維濾紙。一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法，由下述步驟組成(1)按質(zhì)量比為1 1000-10的比例，將陽(yáng)離子聚合物溶解在質(zhì)量濃度為 0.1%-10%的酸的水溶液中或溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比 例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為2 %-10 %的十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5-10分鐘，取出，用蒸餾水清洗 1-3次，再放入A溶液中浸泡5-10分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或?qū)⑺鲫?yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置5-10分 鐘后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或按質(zhì)量比為1 10-200的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)?漿內(nèi)，攪拌均勻，放置5-15分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比 為100-10 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。所述陽(yáng)離子聚合物為脫乙酰度為5% 99%的殼聚糖、羧基殼聚糖、羧甲基殼 聚糖、季銨化殼聚糖、烷基化殼聚糖、殼聚糖交聯(lián)物、接枝共聚殼聚糖、分子量為300 300, 000的多聚賴氨酸、分子量為400Da 75kDa聚乙烯亞胺、季銨化聚乙烯亞胺或聚乙二 醇化的聚乙烯亞胺。所述酸為醋酸、檸檬酸或馬來酸。所述濾紙為木漿濾紙或棉纖維濾紙。本發(fā)明用陽(yáng)離子聚合物作為橋梁分子對(duì)普通濾紙進(jìn)行修飾，使得經(jīng)過修飾的濾紙 具有吸附、固定DNA的功能并能長(zhǎng)期保存，并使得在提取DNA過程中的洗滌步驟中DNA的損 失量降到極小，很好地適應(yīng)了后續(xù)DNA擴(kuò)增的要求。本發(fā)明的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)中 使用了蛋白變性劑使其具有了抗菌活性。可以直接從吸附了生物樣品的該固體介質(zhì)上提取 DNA或應(yīng)用PCR法進(jìn)行擴(kuò)增，用于醫(yī)學(xué)診斷，刑事現(xiàn)場(chǎng)取樣，物證保存，親子鑒定，生物樣品 的郵寄以及流行病學(xué)的檢測(cè)等。


圖1為殼聚糖浸漬的濾紙收集和提取血液DNA用于STR結(jié)果。圖2為普通濾紙及本發(fā)明吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)收集的DNA做模板進(jìn)行PCR的結(jié)果。在圖2中M為DNA marker ；電泳2、3道為使用普通濾紙收集的血液提取DNA做模 板進(jìn)行PCR的結(jié)果；電泳1、4道為用本發(fā)明的吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)收集血液提取的DNA做 模板進(jìn)行PCR的結(jié)果；電泳5道為普通濾紙收集的唾液提取DNA做模板進(jìn)行PCR的結(jié)果；電 泳6道為本發(fā)明吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)收集的唾液提取DNA做模板進(jìn)行PCR的結(jié)果；電泳7 道為本發(fā)明吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)收集的血樣經(jīng)高溫高濕條件下儲(chǔ)存6個(gè)月后的PCR結(jié)果； 電泳8道為普通濾紙收集的血樣經(jīng)高溫高濕條件下儲(chǔ)存6個(gè)月后的PCR結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)稱取分子量5. 6萬(wàn)、脫乙酰度85%的殼聚糖，用質(zhì)量濃度為的醋酸水溶 液配制成質(zhì)量百分比為0.5%的殼聚糖溶液；配制TE緩沖液(25mM Tris-HCL/10mM EDTA， pH8. 0) 500ml，配制質(zhì)量濃度為5%的十六烷基三甲基溴化銨水溶液500ml，將TE緩沖液與 十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合；制成A溶液；(2)取定量濾紙若干，浸于殼聚糖溶液中10分鐘，取出，用蒸餾水沖洗2次，再放入 A溶液中浸泡10分鐘，取出，40 50°C烘干，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例2用本發(fā)明的介質(zhì)收集和提取血液DNA用于STR基因座分型取志愿者的全血1滴(約0. 2ml)滴于經(jīng)實(shí)施例1制備一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì) 上，自然吹干，裝入信封，常溫下存放7天，從該濾紙上取直徑1. 2mm的帶血濾紙于離心管 (或96孔PCR板中)；加200ul滅菌去離子水，浸泡5min，吸出浸泡液，重復(fù)洗2次；100°C 干燥lOmin，待擴(kuò)增；在DNA提取管(或孔)中構(gòu)建IOul PCR體系，于AB-9700型擴(kuò)增儀中 擴(kuò)增28個(gè)循環(huán)；取Iul擴(kuò)增產(chǎn)物，于AB-3130XL型基因分析儀中進(jìn)行STR分型檢測(cè)。獲得 16個(gè)STR基因座DNA分型結(jié)果，且峰高均衡，圖譜指標(biāo)良好，無丟峰現(xiàn)象出現(xiàn)(圖1)。實(shí)施例3一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 100的比例，將脫乙酰度為85%的殼聚糖溶解在質(zhì)量濃度為 5%的檸檬酸水溶液中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì) 量濃度為8%的十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將木漿濾紙浸沒于陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡6分鐘，取出，用蒸餾水清洗2 次，再放入A溶液中浸泡8分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。本實(shí)施例也可以選脫乙酰度為5%的殼聚糖、脫乙酰度為50%的殼聚糖或脫乙酰 度為99%的殼聚糖替代脫乙酰度為85%的殼聚糖組成新的實(shí)施例。實(shí)施例4一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成
(1)按質(zhì)量比為1 10的比例，將羧基殼聚糖溶解在10%的醋酸的水溶液中制成 陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為5%的十六烷基三 甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將木漿濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5分鐘，取出，用蒸餾水清 洗1次，再放入A溶液中浸泡10分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例5一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 1000的比例，將羧甲基殼聚糖溶解在0. 的檸檬酸的水溶 液中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為10%的 十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將棉纖維濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡10分鐘，取出，用蒸餾水 清洗3次，再放入A溶液中浸泡5分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例6一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將季銨化殼聚糖溶解在0.5%的檸檬酸的水溶液 中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為6%的十六 烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將棉纖維濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5分鐘，取出，用蒸餾水 清洗2次，再放入A溶液中浸泡6分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例7一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將烷基化殼聚糖溶解在10%的檸檬酸的水溶液 中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為2%的十六 烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將所述陽(yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置8分鐘 后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例8一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將殼聚糖交聯(lián)物溶解在5%的馬來酸的水溶液中 制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為10%的十六 烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將所述陽(yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置10分 鐘后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，殼聚糖交聯(lián)物的分子量不同，都可以用本實(shí)施例的方法制備成吸附儲(chǔ) 存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例9一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將接枝共聚殼聚糖溶解在0. 的馬來酸的水 溶液中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為9%的
6十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將所述陽(yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置5分鐘 后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，接枝共聚殼聚糖的分子量不同，都可以用本實(shí)施例的方法制備成吸附 儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例10一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將多聚賴氨酸溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶 液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為8%的十六烷基三甲基溴化銨水溶 液混合，制成A溶液；(2)將所述陽(yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置10分 鐘后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，多聚賴氨酸的分子量不同(分子量在300 300，000中的任一種)，都 可以用本實(shí)施例的方法制備成吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例11一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將聚乙烯亞胺溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶 液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為5%的十六烷基三甲基溴化銨水溶 液混合，制成A溶液；(2)按質(zhì)量比為1 100的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)?漿內(nèi)，攪拌均勻，放置10分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比為 50 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，聚乙烯亞胺的分子量不同(分子量為400Da 75kDa中的任一種)，都 可以用本實(shí)施例的方法制備成吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例12一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將季銨化聚乙烯亞胺溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合 物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為7%的十六烷基三甲基溴化銨 水溶液混合，制成A溶液；(2)按質(zhì)量比為1 10的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)?漿內(nèi)，攪拌均勻，放置5分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比為 10 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)施例13一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1 500的比例，將聚乙二醇化的聚乙烯亞胺溶解在水中制成陽(yáng)離 子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為6%的十六烷基三甲基 溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)按質(zhì)量比為1 200的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)?漿內(nèi)，攪拌均勻，放置15分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比為
7100 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，實(shí)施例3-實(shí)施例13之一制備的吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)都能吸附儲(chǔ)存 DNA，再采用實(shí)施例2的方法用于STR基因座分型，都能獲得結(jié)果，且峰高均衡，圖譜指標(biāo)良 好，無丟峰現(xiàn)象出現(xiàn)。實(shí)施例14、收集和提取唾液中DNA用于基因分型志愿者唾液約Iml直接滴于實(shí)施例4制備的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)上，自然吹 干，裝入信封，常溫下存放7天，從該濾紙上取3個(gè)直徑1. 2mm的帶唾液紙片于離心管(或 96孔PCR板中)；加200ul滅菌去離子水，浸泡5min，吸出浸泡液，重復(fù)洗1_2次；100°C干 燥5-lOmin，加蓋(或封膜)待擴(kuò)增；在DNA提取管(孔)中構(gòu)建25ul PCR體系；擴(kuò)增產(chǎn)物 通過凝膠電泳(圖2)顯示應(yīng)用該發(fā)明的濾紙收集的唾液提取的DNA可以很好地應(yīng)用于基 因分型和鑒定。實(shí)驗(yàn)證明，實(shí)施例1、實(shí)施例3或?qū)嵤├?-實(shí)施例13之一制備的吸附儲(chǔ)存DNA的 介質(zhì)都能吸附儲(chǔ)存DNA，用本實(shí)施例的方法用于基因分型和鑒定。實(shí)例施15、高溫高濕條件保存的血液DNA用于PCR取志愿者的全血1滴(約0. 2ml)滴于實(shí)施例1制備的吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，自然 吹干，裝入信封，放入恒溫恒濕箱，溫度40°C，相對(duì)濕度92. 5%，在此條件下存放6個(gè)月，取 出，按實(shí)施例2的方法用于STR基因座分型，所得16個(gè)STR基因座DNA分型良好，與常溫下 存放的比較沒有差異。
權(quán)利要求
一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，其特征是用下述方法制成(1)按質(zhì)量比為1∶1000 10的比例，將陽(yáng)離子聚合物溶解在質(zhì)量濃度為0.1％ 10％的酸的水溶液中或溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1∶1的比例將TE緩沖液與質(zhì)量濃度為2％ 10％的十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5 10分鐘，取出，用蒸餾水清洗1 3次，再放入A溶液中浸泡5 10分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或?qū)⑺鲫?yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置5 10分鐘后再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或按質(zhì)量比為1∶10 200的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)瓭{內(nèi)，攪拌均勻，放置5 15分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比為100 10∶1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，其特征是所述陽(yáng)離子聚合物為 脫乙酰度為5% 99%的殼聚糖、羧基殼聚糖、羧甲基殼聚糖、季銨化殼聚糖、烷基化殼聚 糖、殼聚糖交聯(lián)物、接枝共聚殼聚糖、分子量為300 300，000的多聚賴氨酸、分子量為 400Da 75kDa聚乙烯亞胺、季銨化聚乙烯亞胺或聚乙二醇化的聚乙烯亞胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，其特征是所述酸為醋酸、檸檬酸或 馬來酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，其特征是所述濾紙為木漿濾紙或 棉纖維濾紙。
5. 一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法，其特征由下述步驟組成(1)按質(zhì)量比為1 1000-10的比例，將陽(yáng)離子聚合物溶解在質(zhì)量濃度為0. 1% -10% 的酸的水溶液中或溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；按體積比為1 1的比例將TE緩沖 液與質(zhì)量濃度為2% -10%的十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將濾紙浸沒于所述陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡5-10分鐘，取出，用蒸餾水清洗1-3 次，再放入A溶液中浸泡5-10分鐘后取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或?qū)⑺鲫?yáng)離子聚合物溶液噴淋在濾紙表面，使全部濾紙均勻噴濕，放置5-10分鐘后 再均勻噴淋A溶液，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)；或按質(zhì)量比為1 10-200的比例，將所述陽(yáng)離子聚合物溶液加入均勻的造濾紙?jiān)瓭{ 內(nèi)，攪拌均勻，放置5-15分鐘后，再加入A溶液，所述造濾紙?jiān)瓭{與所述A溶液的質(zhì)量比為 100-10 1，攪拌均勻，抄片，脫水，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法，其特征是所述陽(yáng)離子 聚合物為脫乙酰度為5% 99%的殼聚糖、羧基殼聚糖、羧甲基殼聚糖、季銨化殼聚糖、烷 基化殼聚糖、殼聚糖交聯(lián)物、接枝共聚殼聚糖、分子量為300 300，000的多聚賴氨酸、分子 量為400Da 75kDa聚乙烯亞胺、季銨化聚乙烯亞胺或聚乙二醇化的聚乙烯亞胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法，其特征是所述酸為醋 酸、檸檬酸或馬來酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)的制備方法，其特征是所述濾紙為 木漿濾紙或棉纖維濾紙。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)和制備方法，吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)是用下述方法制成(1)將陽(yáng)離子聚合物溶解在質(zhì)量濃度為0.1％-10％的酸的水溶液中或溶解在水中制成陽(yáng)離子聚合物溶液；將TE緩沖液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，制成A溶液；(2)將濾紙浸沒于陽(yáng)離子聚合物溶液中，浸泡，取出，用蒸餾水清洗，再放入A溶液中浸泡，取出，干燥，即制成一種吸附儲(chǔ)存DNA的介質(zhì)，本發(fā)明使用了蛋白變性劑使其具有了抗菌活性?？梢灾苯訌奈搅松飿悠返脑摴腆w介質(zhì)上提取DNA或應(yīng)用PCR法進(jìn)行擴(kuò)增，用于醫(yī)學(xué)診斷，刑事現(xiàn)場(chǎng)取樣，物證保存，親子鑒定，生物樣品的郵寄以及流行病學(xué)的檢測(cè)等。
文檔編號(hào)B01J20/26GK101912768SQ20101021930
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月7日
發(fā)明者葛志強(qiáng), 靳風(fēng)民 申請(qǐng)人:葛志強(qiáng)