專利名稱：雷帕霉素或其衍生物的制備色譜純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用高壓制備系統(tǒng)分離純化雷帕霉素或其衍生物的方法
背景技術(shù)：
雷帕霉素是由吸水鏈霉菌產(chǎn)生的大環(huán)三烯抗生素，發(fā)現(xiàn)它具有體外和體內(nèi)抗真菌活性，特別是抗白色念珠菌[C. Vezina 等人，J. Antibiot. 28，721 (1975) ；S. N. Sehgal 等人，J. Antibiot. 28,727(1975) ；H. A. Baker 等人，J. Antibiot. 31,539(1978)；美國專利 3，929，992 和美國專利 3，993，749]。雷帕霉素具有抗腫瘤(美國專利4，885，171和4，401，653)和免疫抑制作用 [FASEB3，3411 (1989)]，其用途包括預(yù)防或治療系統(tǒng)性紅斑瘡[美國專利5，078，999]，肺炎 [美國專利5，080, 899]，胰島素依賴型糖尿病[炎性疾病研究協(xié)會第五次國際會議(Fifth Int. Conf. Inflamm. Res. Assoc.) 121 (摘要)，(1990)]，平滑肌細(xì)胞增生及血管損傷引起的內(nèi)膜變厚[Morris, R.J.心肺移植(Heart Lung Transplant) 11 (pt. 2) ； 197 (1992)]，成年人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤[EP525，960A1]和眼炎[EP532，862A1]。雷帕霉素(結(jié)構(gòu)式II) 和雷帕霉素衍生物包括依維莫司(結(jié)構(gòu)式III)、泰姆西羅莫司(結(jié)構(gòu)式IV) —直被研究用于治療這些以及其它疾病。
權(quán)利要求
1.一種式(I)雷帕霉素或其衍生物的純化方法，其特征在于單獨使用正相制備色譜， 將式(I)的雷帕霉素或其衍生物吸附于所述制備色譜的固定相，經(jīng)一步色譜純化得到純度 99%以上的產(chǎn)物
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的烷基或烷氧基是指C1 C6的烷基或烷氧基；其中所述的芳基是苯基或取代苯基，苯基上的取代基選自C1 C5烷基、羥基、硝基、磺酸基或鹵素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的式(I)是雷帕霉素、依維莫司或泰姆西羅莫司ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法包括下述步驟a.將溶于流動相的樣品吸附在固定相中，b.用制備泵將流動相吸入制備柱洗脫樣品，c.收集雷帕霉素或其衍生物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的固定相為非鍵合硅膠，粒徑為3 100μ m, 孔徑為60 300A,形狀為無定型或球型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的固定相粒徑為5 20μ m，孔徑為60 120A,形狀為球型。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的流動相是指低極性有機(jī)溶劑與高極性有機(jī)溶劑的混合溶劑，其中低極性有機(jī)溶劑占的體積百分比大于60%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的低極性有機(jī)溶劑選自C5 C12的烷烴或環(huán)烷烴、C1 C8的鹵代烷烴或其混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的C5 C12的烷烴或環(huán)烷烴選自正己烷、正庚烷、環(huán)己烷，C1 C8的鹵代烷烴選自二氯甲烷、氯仿。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的高極性有機(jī)溶劑選自C1 C5的醇、C2 C10的酯、C3 C6的酮、C3 C6的環(huán)醚、乙腈或其混合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的C1 C5的醇選自甲醇、乙醇、異丙醇， C2 Cltl的酯選自乙酸乙酯、乙酸異丙酯，C3 C6的酮選自丙酮、丁酮，C3 C6的環(huán)醚選自四氫呋喃、二氧六環(huán)。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其所述的低極性有機(jī)溶劑占流動相的體積百分比為 70% 99. 9%。
13.一種制備權(quán)利要求1所述式(I)雷帕霉素或其衍生物的方法，其特征在于單獨使用反相制備色譜，將式(I)的雷帕霉素或其衍生物吸附于所述制備色譜的固定相，經(jīng)一步色譜純化得到純度99%以上的產(chǎn)物，包括步驟a.將樣品溶解并吸附在固定相中，b.用制備泵將流動相吸入制備柱洗脫樣品，c.收集雷帕霉素或其衍生物，
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的固定相選自鍵合硅膠，粒徑為5 100 μ m,孔徑為 60 300A。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的固定相的鍵合基團(tuán)選自烷基、苯基、烷基甲硅烷基中的至少一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的烷基選自丁基、辛基、十八烷基、二十三烷基中的至少一種。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述的固定相的粒徑為5 20μ m，孔徑為60 200A O
18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的流動相為包含至少一種有機(jī)溶劑的水溶液。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述的有機(jī)溶劑為=C1 C5的醇、乙腈、C3 C6 的環(huán)醚、C1-C5的酸。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述的C1 C5的醇選自甲醇、乙醇、異丙醇， C3 C6的環(huán)醚選自四氫呋喃、二氧六環(huán)，C1 C5的酸選自乙酸、甲酸、三氟乙酸。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述的流動相中，水占的體積百分比為5 60%。
全文摘要
本發(fā)明通過一次制備色譜純化得到高純度雷帕霉素或其衍生物，其中制備色譜純化是指通過正相制備色譜純化或反相制備色譜純化。
文檔編號B01D15/32GK102464668SQ201010546460
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者劉軍, 劉自兵, 吳忠偉, 吳泰志, 張福利, 趙小仁, 郭紅軍 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 浙江海正藥業(yè)股份有限公司