專利名稱：人參皂苷Rg1分子印跡材料,其制備方法,其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明專利涉及合成及其在靶向分離中應用的領域，具體涉及人參皂苷Rgl分子印跡材料的制備及利用該材料為固相萃取劑分離、純化植物中的Rgl擬似物的方法。
背景技術：
(1)人參皂苷Rgl具有促進神經(jīng)干細胞增殖的作用，對于腦卒中后遺癥、神經(jīng)退行性病變等疾病的治療有重要作用。鑒于臨床缺乏促神經(jīng)干細胞增殖的藥物，利用Rgl為模板，合成分子印跡材料，從中藥、民族藥、天然植物中靶向篩選活性成分有重要意義。(2)中草藥所含成分復雜，為了提高中草藥的治療效果，就要盡最大限度提取有效成分，去除無效成分及有毒成分。因此，中草藥活性成分分離提取對于提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床療效都極為重要。傳統(tǒng)中藥活性成分的分離提取常采用硅膠柱、C18鍵合相柱、 Al2O3柱等利用成分的吸附系數(shù)差異實現(xiàn)分離，但最大缺點是選擇性差，富集容量低，尤其對一些結構復雜，多手性碳原子，且含量低的活性化合物，分離提純難度大，采用這些常規(guī)分離手段往往需要反復操作，提取率極低，手性構型可能因此改變而失活。分子印跡材料是為模板分子量身定做的高分子材料，由于其經(jīng)洗脫模板分子后，能留下在形狀、大小以及識別位點都與模板分子相匹配的空穴，該空穴能重新識別模板分。由于其兼有高效、穩(wěn)定和特異選擇性且合成價格低廉的特點，因而具有較廣泛應用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于避免常規(guī)中藥提取方法技術存在的問題，建立一種基于Rgl印跡材料為新型吸附分離材料，并以此作固相萃取柱的固定相從中藥粗提物中定向分離、富集Rgl擬似物的方法，由此可以獲得高提取率的目標成分。本發(fā)明通過以下的技術方案實現(xiàn)的，具體包括步驟如下1. Rgl印跡材料的制備(1)將Rgl、功能單體和交聯(lián)劑按照質(zhì)量比10 360 3600溶解在裝有70mL致孔劑乙腈溶液的圓底燒瓶中；(2)再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈80mg后，通氮氣脫氧15min ；(3)將密封好的圓底燒瓶放入冰水浴中，紫外燈照射Mh，使聚合完全；(4)將制得的材料用10% (W/V)十二烷基硫酸鈉(SDS)的0. 2mol/L氫氧化鈉溶液混合液反復洗滌后，用紫外光譜檢測直至無模板分子吸收為至。以甲醇為溶劑，通過索氏提取的方法洗去模板分子及沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，洗脫液以紫外光譜進行檢查直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，最后用去離子水洗滌材料至中性。(5)將除去模板分子的材料真空干燥2h，獲得Rgl分子印跡材料；(6)非印跡材料的制備方法，除不加入模板分子外，其余步驟同上。2.固相萃取分離純化中藥粗提液中的Rgl擬似物(1)固相萃取分離純化中藥粗提物中的Rgl擬似物稱取藥材粉末(過50目篩)5. Og,加入甲醇提取液40mL，浸泡Ih后，放入超聲波中超聲40min后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用甲醇溶解并定容至5mL，備用；(2)將上述得到的Rgl分子印跡材料采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，并用甲醇溶液平衡柱子；取野沙參藥材粗提取液5mL上樣后，用甲醇洗脫保留在萃取柱中的Rgl， 將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的Rgl。本發(fā)明制備的分子印跡材料形貌為規(guī)則球形且單分散，粒徑4-20 μ m左右，對Rgl 擬似物具有很好的識別性能，作為固相萃取的填料，可用于中藥中Rgl擬似物成分的高效分離、富集及純化。與Cw鍵合固相萃取柱，硅膠固相萃取柱及非印跡材料萃取柱相比，Rgl印跡固相萃取柱對提取液中的Rgl擬似物有更好的選擇性，柱容量最高，達到6mg/g，是C18鍵合固相萃取柱和硅膠固相萃取柱的4-6倍，非印跡材料固相萃取柱的4倍。同時洗脫率達到94%， 亦高于其它吸附劑固相萃取柱。


附圖1是人參皂苷Rgl分子式。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明本實施例在以本發(fā)明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方案和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。實施例1 1. Rgl分子印跡材料的優(yōu)選制備方法Rgl質(zhì)量為1 50mg，功能單體50 560mg丙烯酰胺和5_ 590mg甲基丙烯酸， 交聯(lián)劑EDMA 1000 5500mg混合，溶解于裝有5 80mL致孔劑乙腈液的圓底燒瓶中，加入引發(fā)劑AIBN 78mg，通氮氣脫氧15min，在氮氣保護下迅速封口。將密封好的燒瓶放入0°C的冰水浴中紫外等照射24h后，得到材料。反應后的材料用去離子水反復漂洗后，經(jīng)10% (W/ V)上二烷基硫酸鈉(SDS)的0. 2mol/L氫氧化鈉溶液反復洗滌以除去印跡分子，用去離子水洗滌至中性后，以甲醇為溶劑采用索氏提取器進行洗脫，除去未完全反應的有機試劑，以紫外光譜進行檢查洗脫液，直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，再用最后再用大量的去離子水反復洗滌至中性，真空干燥2小時，即得到Rgl印跡材料。2.固相萃取分離純化中藥粗提液中的擬Rgl分子稱取野沙參粉末5. 0g，加入甲醇溶液40ml，放入超聲波中超聲40min后，稱重用甲醇補足重量，過濾即得野沙參粗提取液。稱取200mg洗脫好的Rgl印跡材料，采用干法裝柱，依次加入甲醇和40%甲醇溶液平衡固相萃取柱后，取藥材粗提取液5mL，上樣，往柱中加壓，控制流速為0. 5mL/min，再用IOmL甲醇溶液洗脫保留在萃取柱上的Rgl。經(jīng)濃縮、干燥得到Rgl擬似物1. 3mg。
權利要求
1.本發(fā)明的目的在于提供一種制備人參皂苷(Rgl)分子印跡材料的方法，并提供利用該材料作為固相萃取固定相從中藥粗提物中定向分離、富集、純化Rgl及類似結構活性成分的方法。其特征在于可通過以下步驟得到(1)首先將Rgl、功能單體(丙烯酰胺和甲基丙烯酸)和交聯(lián)劑(乙二醇二甲基丙烯酸酯，EDMA)按比例超聲溶解在裝有致孔劑乙腈溶液的圓底燒瓶中；加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，在冰水浴中，紫外燈照射聚合Mh ；反應后的材料用去離子水反復漂洗后，經(jīng)10% (W/V) 十二烷基硫酸鈉(SDQ的0.2mol/L氫氧化鈉溶液反復洗滌以除去印跡分子和多余的動能單體，以紫外光譜進行檢查洗脫液，直至檢測不到以上物質(zhì)的吸收為止，再用最后再用大量的去離子水反復洗滌至中性，即得到Rgl印跡材料。(2)固相萃取分離純化中藥粗提物中的Rgl擬似物稱取藏藥珊瑚丸藥材粉末(過50 目篩)5. Og,加入甲醇40mL，浸泡Ih后，放入超聲波中超聲40min，冷卻至室溫后稱量用甲醇補足重量，過濾即得到藏藥珊瑚丸藥材機提取液；將上述得到的Rgl分子印跡材料采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，用甲醇溶液平衡柱子；取藏藥珊瑚丸藥材粗提取液上樣后，用甲醇洗脫保留在萃取柱中的Rgl擬似物，將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的Rgl 擬似物。
2.根據(jù)權利要求1的要求，該分子印跡材料制備采用的模板分子是Rgl。
3.根據(jù)權利要求1的要求，分子印跡材料制備采用的功能單體是丙烯酰胺和甲基丙烯酸。
4.根據(jù)權利要求1的要求，分子印跡材料制備采用的交聯(lián)劑是乙二醇二甲基丙烯酸酯 (EDMA)。
5.根據(jù)權利要求1的要求，分子印跡材料制備采用的引發(fā)劑是偶氮二異丁腈(AIBN)。
6.根據(jù)權利要求1的要求，分子印跡材料制備采用的斂孔劑是乙腈。
7.根據(jù)權利要求1的要求，洗除材料中模板分子及沒有聚合的交聯(lián)劑、功能單體和引發(fā)劑采用的是10% (W/V)十二烷基硫酸鈉(SDQ的0. 2mol/L氫氧化鈉溶液、甲醇和去離子水。
8.根據(jù)權利要求1的要求，聚合反應需在冰水浴中紫外燈照射下完成聚合。
9.根據(jù)權利要求1的要求，該材料可作為固相萃取固定相從中藥粗提物中定向分離、 富集、純化Rgl擬似物。
10.根據(jù)權利要求1的要求，該材料可作為填充料用于制備固相萃取柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人參皂苷Rg1分子印跡材料的制備及利用該材料為固相萃取劑分離、純化天然產(chǎn)物中的Rg1擬似物的方法。該材料屬于新型分離材料，可以作為固相萃取柱的固定相，用于從中藥快速高效地定向分離、富集Rg1擬似物，由此可以獲得高提取率的目標成分，該材料具有極強的應用價值。
文檔編號B01J20/30GK102166512SQ201110050539
公開日2011年8月31日 申請日期2011年3月3日 優(yōu)先權日2011年3月3日
發(fā)明者劉偉志, 劉慶山, 尹小英, 徐羽, 方亮, 谷雨龍, 黃火強 申請人:劉慶山