專(zhuān)利名稱(chēng)：一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應(yīng)用的制作方法
一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及親水色譜固定相技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應(yīng)用。
背景技木親水作用色譜最早是由Alpert 提出[A.J.Alpert, J.Chromatogr.A, 1990,499,177]，是近年來(lái)色譜領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。因其對(duì)極性化合物有很強(qiáng)的保留及很好的分離選擇性，并且與質(zhì)譜檢測(cè)良好的兼容性和靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用方面也越來(lái)越廣泛，也越來(lái)越受關(guān)注。隨著對(duì)硅膠的表面修飾，將硅膠表面固載上糖作為ー種新型的親水色譜固定相也得到了很快的發(fā)展[P.Hemstrom, et al, J.Sep.Sci, 2006, 29,1784]。糖基修飾的娃膠固定相具有高柱效、高選擇性和穩(wěn)定性，適用于分離各種強(qiáng)極性化合物，如單糖、寡糖、糖醇、核苷和氨基酸等，具有很廣泛的應(yīng)用前景。目前常見(jiàn)的多糖色譜固定相有利用點(diǎn)擊化學(xué)所制備的鍵合多糖親水色譜材料，如鍵合￠-環(huán)糊精[X.Liang, et al, Chem.commun, 2007,2491]和鍵合麥芽糖[X.Liang，et al，Anal.Methods，2010，2，217]，對(duì)極性化合物及寡糖樣品都有很好的保留及很強(qiáng)的分離選擇性。雖然改制備方法非常高效，但也存在它的缺陷，如步驟繁瑣影響產(chǎn)率，還有反應(yīng)過(guò)程中使用了大量有機(jī)試劑。基于以上的研究背景，發(fā)明人開(kāi)發(fā)出了ー種新型的親水色譜固定相及其制備方法，利用離子相互作用原理，將帶不同電荷硅膠與陽(yáng)離子多糖結(jié)合，以制備附聚型的多糖色譜固定相。此方法優(yōu)勢(shì)在于反應(yīng)簡(jiǎn)單易控，穩(wěn)定性高，在水系中涂覆更為環(huán)保安全。同時(shí)在糖生物學(xué)和糖蛋白組學(xué)中都取得了很好的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:—種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖8所示:其中Silica Gel為娃膠,帶負(fù)電荷，saccharide為季銨化的多糖,帶正電荷。一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其具體步驟為:(I)硅膠預(yù)處理硅膠加入質(zhì)量濃度為I 40%的鹽酸或硝酸溶液中，加熱回流攪拌I 48小時(shí)，過(guò)濾，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重；(2)硅膠表面修飾將步驟(I)所得的活化硅膠 置于玻璃或者聚四氟こ烯反應(yīng)容器中，在氮?dú)夥諊录尤胗袡C(jī)溶劑，攪拌均勻，滴加硅烷試劑，保持溫度為20 200°C條件下攪拌2 48小吋。待反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓過(guò)濾并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗滌，固體產(chǎn)品在60 100°C條件下干燥12 36小時(shí)；所述的有機(jī)溶劑為與水不互溶的有機(jī)溶劑，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、環(huán)己烷等苯系物和烷烴；所述的有機(jī)溶劑的使用量為每克活化硅膠使用2 IOOmL有機(jī)溶劑；硅烷試劑結(jié)
構(gòu)式為:
權(quán)利要求
1.一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相，其特征在于，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
2.一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，其具體步驟為: (1)硅膠預(yù)處理 硅膠加入質(zhì)量濃度為I 40%的鹽酸或硝酸溶液中，加熱回流攪拌I 48小時(shí)，過(guò)濾，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重； (2)娃膠表面修飾 將步驟(I)所得的活化硅膠置于玻璃或者聚四氟こ烯反應(yīng)容器中，在氮?dú)夥諊录尤胗袡C(jī)溶劑，攪拌均勻，滴加硅烷試劑，保持溫度為20 200°C條件下攪拌2 48小吋。待反應(yīng)體系冷卻至室溫，減壓過(guò)濾并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗滌，固體產(chǎn)品在60 100°C條件下干燥12 36小時(shí)； (3)磺化過(guò)程 將步驟(2)所得產(chǎn)品加入到含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%過(guò)氧化氫溶液和含濃硫酸的甲醇溶液的混合溶液中，攪拌均勻，保持溫度為10 40°C條件下攪拌2 48小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后減壓過(guò)濾并用水、甲醇洗滌，固體產(chǎn)品在60 100°C條件下干燥12 36小時(shí)； (4)涂覆過(guò)程 將步驟(3)所得產(chǎn)品與陽(yáng)離子多糖水溶液混合，攪拌均勻，保持溫度為10 40°C條件下攪拌I 60分鐘；反應(yīng)結(jié)束后減壓過(guò)濾并用水、甲醇洗滌，固體產(chǎn)品在60 100°C條件下干燥12 36小時(shí)。
3.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑵中，所述的有機(jī)溶劑為與水不互溶的有機(jī)溶劑，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、環(huán)己烷等苯系物和烷烴。
4.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的有機(jī)溶劑的使用量為每克活化硅膠使用2 IOOmL有機(jī)溶齊U。
5.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，硅烷試劑結(jié)構(gòu)式為:X3Si"9^A 其中，X為-OCH3,-OCH2CH3或-Cl，m= I 12，A為SH;硅烷試劑的使用量為每克活化娃膠使用0.5 5mmol。
6.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的混合溶液的使用量為每克硅膠使用2 IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%過(guò)氧化氫溶液，1 1OmL甲醇溶液及0.01 ImL濃硫酸溶液。
7.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的陽(yáng)離子多糖包括陽(yáng)離子纖維素，陽(yáng)離子淀粉等等，分子量范圍在100 200萬(wàn)之間。
8.如權(quán)利要求2所述的ー種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的陽(yáng)離子 多糖的使用量為每克硅膠使用0.01 lg，所配置的水溶液濃度為0.1 % 10%。
9.一種陽(yáng)離子多糖涂覆型親水色譜固定相在糖生物學(xué)和糖蛋白組學(xué)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種陽(yáng)離子多糖涂覆型色譜固定相的制備方法及應(yīng)用，其中Silica Gel為硅膠，帶負(fù)電荷，saccharide為季銨化的多糖，帶正電荷。本發(fā)明提供了上述固定相材料的制備方法，利用離子相互作用，將表面磺化的硅膠與帶正電荷的陽(yáng)離子多糖在水溶液體系中結(jié)合，以制備附聚型的色譜固定相。該固定相得制備方法對(duì)比于傳統(tǒng)的鍵合糖型固定相更為高效，方便，環(huán)保。同時(shí)具有很好的分離選擇性，重復(fù)性和穩(wěn)定性。對(duì)于分離其他類(lèi)型的極性化合物有很大的應(yīng)用潛在性，在糖生物學(xué)和糖蛋白組學(xué)都將有很廣泛的應(yīng)用。
文檔編號(hào)B01J20/286GK103120932SQ201310066189
公開(kāi)日2013年5月29日 申請(qǐng)日期2013年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月1日
發(fā)明者梁鑫淼, 柯燕雄, 盛騫瑩 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)