專(zhuān)利名稱(chēng)：一種萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
萊克多巴胺是一種醫(yī)藥原料，具有廣泛的生理效應(yīng)，可用治療充血性心力衰竭癥的強(qiáng)心藥，且常用于支氣管哮喘、支氣管痙攣和產(chǎn)科疾病的治療。當(dāng)其用量增加到臨床用量的5-10倍時(shí)，可增加肌肉生長(zhǎng)，減少脂肪蓄積，是良好的營(yíng)養(yǎng)分配劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑。美國(guó)FDA在2000年批準(zhǔn)，可以用于動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重新配劑，廣泛地用于畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)?？梢酝瑫r(shí)提聞動(dòng)物的日增重，提聞詞料利用率，提聞動(dòng)物的蛋白質(zhì)含量。但是其在動(dòng)物體內(nèi)的殘留一旦經(jīng)食物鏈進(jìn)入人體，會(huì)對(duì)食用者產(chǎn)生巨大危害，特別對(duì)心臟病、糖尿病、高血壓、甲亢、青光目艮、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精(萊克多巴胺是“瘦肉精藥物”中的一種)在上海曾經(jīng)引發(fā)幾百人的中毒事件；在臺(tái)灣由于從美國(guó)進(jìn)口的豬肉里含有瘦肉精，幾乎挑起一場(chǎng)政治爭(zhēng)端。目前我國(guó)禁止將β_激動(dòng)劑等藥物動(dòng)物促生長(zhǎng)劑使用。但長(zhǎng)期以來(lái)，各種因非法使用β_激動(dòng)劑而造成的中毒事件時(shí)有發(fā)生。為打擊非法用藥，保護(hù)消費(fèi)者的健康與安全，迫切需要健全相關(guān)的檢測(cè)方法。目前，獸藥殘留檢測(cè)常用的方法有氣相色譜、高效液相色譜以及氣質(zhì)聯(lián)用等理化分析方法。雖然這些方法特異性強(qiáng)、靈敏度高，但是樣品前處理操作步驟繁瑣，成本較高，也不適用于大批量樣品的篩選檢測(cè)。免疫化學(xué)分析鑒于在抗原抗體的定性定量方面獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和操作簡(jiǎn)便快速、成本低、靈敏度較高、分析樣本量大的優(yōu)點(diǎn)彌補(bǔ)了理化分析的不足，在萊克多巴胺的殘留檢測(cè)中起著越來(lái)越重要的作用，而抗血清或腹水的成分非常復(fù)雜，一些雜蛋白可能會(huì)影響抗體與抗原的反應(yīng)，因此萊克多巴胺抗體的純化就顯得尤為重要。目前抗體純化方法主要是鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、各種原理的層析法以及親和純化法(通常是Protein A或Protein G)等，這些都不能得到很純的特異性抗體，即使是親和純化法，也只能得到特異性抗體和非特異性抗體的混合物，而不能將兩者分離而得到特異性的抗體。因此研究一種能夠有效分離純化特異性抗體的純化方法，具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了一種萊克多巴胺抗體免疫親和吸附劑。本發(fā)明所提供的萊克多巴胺抗體的免疫親和吸附劑，是由萊克多巴胺半抗原與固相載體交聯(lián)而成；所述萊克多巴胺半抗原的結(jié)構(gòu)如式I所示；所述固相載體為瓊脂糖凝膠、纖維素、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃或聚丙烯酰胺-瓊脂糖凝膠。
權(quán)利要求
1.一種萊克多巴胺抗體的免疫親和吸附劑，由萊克多巴胺半抗原與固相載體交聯(lián)而成；所述萊克多巴胺半抗原的結(jié)構(gòu)如式I所示；所述固相載體為瓊脂糖凝膠、纖維素、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃或聚丙烯酰胺-瓊脂糖凝膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫親和吸附劑，其特征在于:所述萊克多巴胺半抗原按照包括如下步驟的方法制備:將萊克多巴胺、N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺、水合肼按照摩爾比為1:1:5的比例進(jìn)行反應(yīng)，獲得所述萊克多巴胺半抗原。
3.一種萊克多巴胺抗體的免疫親和層析柱，其特征在于:所述免疫親和層析柱以權(quán)利要求I或2所述的免疫親和吸附劑為填料。
4.含有權(quán)利要求1或2所述免疫親和吸附劑的試劑盒。
5.含有權(quán)利要求3所述免疫親和層析柱的試劑盒。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括洗脫液；所述洗脫液為PH3.0的0.1M甘氨酸水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括洗滌液；所述洗滌液為PH7.2的含有0.14M NaCl的0.0lM磷酸鹽緩沖液；或 所述試劑盒還包括中和液；所述中和液為IM pH8.8Tris-HCl緩沖液。
8.制備權(quán)利要求6或7所述試劑盒的方法，包括如下步驟:將所述免疫親和吸附劑或所述免疫親和層析柱，與下述中的至少一種分別單獨(dú)包裝:所述洗脫液、所述洗滌液和所述中和液。
9.權(quán)利要求1或2所述免疫親和吸附劑，或權(quán)利要求3所述免疫親和層析柱，或權(quán)利要求4-7中任一所述試劑盒在萊克多巴胺抗體純化中的應(yīng)用。
10.利用權(quán)利要求3所述免疫親和層析柱，或權(quán)利要求4、6和7中任一所述試劑盒純化萊克多巴胺抗體的方法，包括如下步驟:將待純化樣品加入到所述免疫親和層析柱，以權(quán)利要求7中所述的洗滌液洗滌，再利用權(quán)利要求6中所述的洗脫液進(jìn)行洗脫，接著用權(quán)利要求7中所述的中和液中和，得到純化后的萊克多巴胺抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱的填料由萊克多巴胺半抗原與固相載體交聯(lián)而成；所述萊克多巴胺半抗原的結(jié)構(gòu)如式I所示；所述固相載體為瓊脂糖凝膠、纖維素、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃或聚丙烯酰胺-瓊脂糖凝膠。本發(fā)明與現(xiàn)有鹽析、傳統(tǒng)層析等抗體的純化技術(shù)相比較，主要優(yōu)點(diǎn)在于(1)利用對(duì)萊克多巴胺引入氨基的處理，可以使半抗原萊克多巴胺與固相載體結(jié)合；(2)利用抗原與抗體的特異性親和，有效的去除了非特異性抗體及其他雜蛋白，提高萊克多巴胺抗體的純化效率，且操作簡(jiǎn)單。式I。
文檔編號(hào)B01D15/38GK103170309SQ20131007776
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月12日
發(fā)明者沈建忠, 王戰(zhàn)輝, 梁琦, 史為民, 張素霞, 江海洋, 丁雙陽(yáng), 曹興元, 李建成 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)