本發(fā)明提供一種基于磺酸基高親水性功能化納米纖維膜高效萃取動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)藥物殘留的樣品預(yù)處理方法，屬于分析化學(xué)中樣品預(yù)處理技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
獸藥在防治動(dòng)物疾病、提高生產(chǎn)效率、改善畜產(chǎn)品質(zhì)量等方面起著十分重要的作用。然而，濫用獸藥極易造成動(dòng)物源食品中有害物質(zhì)的殘留，這不僅對(duì)人體健康造成直接危害，而且對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展和生態(tài)環(huán)境也造成極大危害。隨著人們對(duì)動(dòng)物源食品由需求型向質(zhì)量型的轉(zhuǎn)變，動(dòng)物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為食品安全問(wèn)題的重要焦點(diǎn)。磺胺類(lèi)藥物(SAs)是目前廣泛應(yīng)用于禽畜抗感染治療的重要藥物之一，具有性質(zhì)穩(wěn)定、抗菌譜廣、便于儲(chǔ)存、使用簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)。但是在近15～20年，豬、禽、牛等動(dòng)物源食品中磺胺類(lèi)藥物殘留量超標(biāo)現(xiàn)象十分嚴(yán)重，世界各國(guó)均有相應(yīng)的法律法規(guī)限定磺胺類(lèi)獸藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)。中國(guó)也在2013年頒布新的法規(guī)并開(kāi)始對(duì)其進(jìn)行監(jiān)管(GB29694-2013《動(dòng)物性食品中13種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定》)?；前奉?lèi)化合物(SAs)是一類(lèi)人工合成的抗菌藥，在獸醫(yī)臨床上已有幾十年的歷史，其母核結(jié)構(gòu)具有磺酰胺基和芳伯氨基，其中磺酰胺基具有弱酸性，芳伯氨基具有弱堿性，因此磺胺有酸堿兩性。磺酰胺基上的氫原子可以被不同雜環(huán)取代基取代，形成各種各樣的磺胺藥物?；前奉?lèi)藥物在水中幾乎不溶，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷和二氯甲烷等極性有機(jī)溶劑，難溶于非極性有機(jī)溶劑。但是，由于磺胺類(lèi)藥物具有酸堿兩性，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH，可以使磺胺類(lèi)藥物呈不同狀態(tài)，即中性分子或離子分子，從而改變水相和有機(jī)相的分配系數(shù)。固相萃取(SolidPhaseExtraction，簡(jiǎn)稱(chēng)SPE)是動(dòng)物源食品中獸藥殘留的主要樣品前處理技術(shù)，在近年來(lái)頒布實(shí)施的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中，有很多將固相萃取作為樣品前處理的手段。目前GB29694-2013《動(dòng)物性食品中13種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定》采用MCX(Mixed-modeCationeXchange)固相萃取小柱對(duì)動(dòng)物源性食品中的磺胺類(lèi)獸藥殘留進(jìn)行富集和凈化。反應(yīng)的原理是在合適的pH下，固相萃取材料上的磺酸根陰離子可與磺胺類(lèi)化合物發(fā)生可逆性的離子交換反應(yīng)，從而選擇性捕獲此類(lèi)化合物，達(dá)到選擇性分離和富集的目的。但是現(xiàn)有樣品前處理步驟仍舊繁瑣，而且由于動(dòng)物源性食品基質(zhì)中富含脂肪，常需采用正己烷脫脂，此步驟極易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，使得樣品的回收率偏低。靜電紡絲納米纖維(簡(jiǎn)稱(chēng)靜電紡納米纖維)是一種借助高壓靜電作用對(duì)聚合物溶液或熔體進(jìn)行紡絲的方法，利用該方法可以簡(jiǎn)便、快速地制備直徑范圍在10～1000nm之間的高分子聚合物納米纖維。靜電紡絲納米纖維具有比表面積大、易于成膜、通透性好等優(yōu)點(diǎn)，而且有多種高分子聚合物材料可供選擇，結(jié)合膜表面處理和修飾技術(shù)，有望獲得高性能的功能化納米纖維膜，滿(mǎn)足不同性質(zhì)化合物選擇性富集的要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供了基于磺酸基高親水性功能化納米纖維膜高效萃取動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法。磺胺類(lèi)藥物具有兩性，可利用磺酸根離子在酸性條件下與其發(fā)生離子交換反應(yīng)達(dá)到選擇性富集的目的。另外現(xiàn)有國(guó)標(biāo)方法規(guī)定的固相萃取材料(MCX)在富集富脂基質(zhì)中的磺胺類(lèi)藥物殘留時(shí)操作步驟復(fù)雜，且仍需要通過(guò)正己烷脫脂，這一步經(jīng)常會(huì)造成樣品液乳化，損失部分樣品信息。本發(fā)明將合成的苯磺酸聚苯乙烯高分子聚合物通過(guò)靜電紡技術(shù)制備成納米纖維膜，并采用等離子體照射技術(shù)，將膜表面處理成親水性，建立了無(wú)需采用正己烷除脂步驟即可選擇性富集富脂基質(zhì)中磺胺類(lèi)化合物的高性能磺酸基親水納米纖維膜，有望應(yīng)用于選擇性富集富脂的動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)獸藥殘留等樣品前處理領(lǐng)域。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種高效萃取動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法，其特征在于，包含以下步驟：1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：將苯乙烯單體、4-乙烯基苯磺酸鈉和碳酸鈉置于三角反應(yīng)瓶，加入超純水，磁子攪拌至溶液達(dá)到聚合反應(yīng)溫度后，加入過(guò)硫酸鹽引發(fā)劑并繼續(xù)磁子攪拌反應(yīng)；聚合反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，將乳白色懸濁液冷卻至室溫后加入有機(jī)酸破乳，充分混勻后放置一段時(shí)間，離心沉降，棄去上層清液，取下層沉淀置入燒杯，水洗后放入真空干燥箱中烘干，研磨成粉狀，再重復(fù)水洗-烘干-研磨步驟，即得；2)高分子納米纖維膜制備：將步驟1)合成的高分子聚合物溶解于有機(jī)溶劑中，配置成一定濃度的聚合物溶液，在陰極收集鋁箔上放置圓形蓋玻片，通過(guò)靜電紡絲技術(shù)制備納米纖維膜；3)等離子體處理納米纖維膜表面：將步驟2)制備的納米纖維膜放置在等離子體發(fā)生器中，在一定強(qiáng)度下照射處理，得到表面親水性的磺酸基納米纖維膜；4)動(dòng)物源性食品樣品制備：取勻質(zhì)動(dòng)物源性食品置于離心管中，精密稱(chēng)定，加入磺胺類(lèi)質(zhì)控藥物，加入乙酸乙酯后搖床震蕩、低溫離心后，吸取上清液，殘?jiān)儆靡宜嵋阴ブ貜?fù)提取一次；合并上清液，水浴氮?dú)獯蹈桑尤隢a2EDTA溶液，渦旋混合得到樣品溶液；5)SPE樣品凈化與提取：步驟3)制備的親水性磺酸基納米纖維膜置于市售可拆卸過(guò)濾器中，分別用甲醇和Na2EDTA溶液活化后，將步驟4)制備的樣品溶液以恒定速度通過(guò)纖維膜，之后用Na2EDTA溶液淋洗纖維膜；再加入含有機(jī)酸的甲醇溶液洗脫吸附的目標(biāo)化合物，洗脫液水浴氮?dú)獯蹈?，用液相色譜分析用流動(dòng)相定容。步驟1)所述的反應(yīng)原料苯乙烯單體、4-乙烯基苯磺酸鈉、碳酸鈉、超純水、過(guò)硫酸鹽和有機(jī)酸分別的用量為2～10mL、0.5～1.5g、0.10～0.60g、10～40mL、0.10～0.30g和1～4mL；過(guò)硫酸鹽為過(guò)硫酸銨、過(guò)硫酸鈉、過(guò)硫酸鉀中的一種或幾種；有機(jī)酸是甲酸、乙酸中的一種；步驟1)所述的聚合反應(yīng)溫度維持在50～80℃，聚合反應(yīng)時(shí)間為12～24h；離心沉降的轉(zhuǎn)速在12000～20000r/min，沉降時(shí)間控制在30～40min，水洗-烘干步驟重復(fù)2-4次，真空干燥溫度設(shè)定在50～60℃。步驟2)所述的有機(jī)溶劑為四氫呋喃(THF)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、六氟異丙醇(HFP)、三氯甲烷(CH3Cl)的一種或者幾種；聚合物溶液濃度為聚合物質(zhì)量占有機(jī)溶劑體積的質(zhì)量/體積百分比，其范圍在8～20％；圓形蓋玻片規(guī)格為市售直徑14mm蓋玻片；靜電紡絲條件為電壓10～30kV，紡絲接收距離10～20cm，聚合物溶液流量控制在0.5～1.0mL/h。步驟3)所述的等離子體發(fā)生器的照射強(qiáng)度為10～30W，時(shí)間為10～60s。步驟4)所述的磺胺類(lèi)藥物包括磺胺醋酰(SA，CAS6209-17-2)、磺胺吡啶(SP，CAS144-83-2)、磺胺甲基嘧啶(SM1，CAS127-79-7)、磺胺噁唑(SX，CAS729-99-7)、磺胺二甲基嘧啶(SM2，CAS57-68-1)、磺胺甲氧嗪(SMP，CAS80-35-3)、磺胺間甲氧嘧啶(SMM，CAS38006-08-5)、磺胺氯噠嗪(SCP，CAS80-32-0)、磺胺甲噁唑(SMZ，CAS723-46-6)、磺胺異噁唑(SIZ，CAS127-69-5)、磺胺苯酰(SML，CAS127-71-9)、磺胺地索辛(SDM，CAS122-11-2)和磺胺苯吡唑(SPP，CAS526-08-9)中的一種或者幾種，其濃度范圍50～200μg/kg。步驟4)和步驟5)所述的Na2EDTA溶液的濃度0.010～0.030mol/L，pH3～5；水浴氮?dú)獯蹈蓽囟瓤刂圃?0～70℃。步驟4)所述的搖床以轉(zhuǎn)速200～300r/min震蕩20～30min，在低溫3～5℃和8000～12000r/min轉(zhuǎn)速離心3～7min。步驟5)所述的可拆卸過(guò)濾器是指市售聚丙烯(PP)材質(zhì)、規(guī)格為13mm直徑的可拆卸過(guò)濾器，樣品溶液的上樣速率為0.5～1.5mL/min；甲醇溶液中的有機(jī)酸是甲酸、乙酸中的一種，其濃度0.1％為有機(jī)酸體積占甲醇溶液(指純甲醇)體積比，其用量為2.0～3.0mL；液相色譜分析用流動(dòng)相定容體積為1.0～2.0mL。相對(duì)于國(guó)標(biāo)方法(GB29694-2013《動(dòng)物性食品中13種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定》)，本發(fā)明所建立的基于磺酸基高親水性功能化納米纖維膜高效萃取動(dòng)物源性食品中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法具有如下特點(diǎn)：所制備的磺酸基聚苯乙烯納米纖維膜穩(wěn)定性好、耐沖洗，可以在酸性條件下與13種典型的磺胺類(lèi)藥物發(fā)生離子交換反應(yīng)，選擇性富集動(dòng)物源性食品基質(zhì)中的磺胺類(lèi)獸藥殘留。根據(jù)磺胺類(lèi)藥物具有酸堿兩性的特性，通過(guò)控制提取溶液酸度范圍(pH3～5)，利用固相萃取材料上磺酸根陰離子可與磺胺類(lèi)化合物發(fā)生可逆性的離子交換反應(yīng)的原理，選擇性捕獲此類(lèi)化合物，達(dá)到高效富集和凈化的目的。采用乳液聚合法制備的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)溫和且聚合物產(chǎn)率高。以靜電紡絲納米纖維所制備的納米纖維膜，具有高比表面積；通過(guò)等離子體修飾處理，使膜表面由疏水狀態(tài)轉(zhuǎn)為親水狀態(tài)，提高了富脂基質(zhì)中離子狀態(tài)磺胺類(lèi)藥物的固相萃取效果。通過(guò)靜電紡絲技術(shù)制備納米纖維膜和等離子體照射技術(shù)對(duì)膜表面改性的過(guò)程簡(jiǎn)便易行，適合大批量生產(chǎn)。市售標(biāo)準(zhǔn)24孔培養(yǎng)板(直徑為15.6mm)配套的圓形蓋玻片直徑為14mm，因此通過(guò)靜電紡絲技術(shù)在這種圓形蓋玻片上制備的納米纖維膜直徑也是14mm，剛好可以放置于市售的直徑13mmPP材質(zhì)的分體式液體過(guò)濾器中，便于后期應(yīng)用納米纖維膜作為選擇性富集材料。所選取的富集過(guò)濾裝置簡(jiǎn)單易得、后期使用方便、匹配性良好。此方法不需要采用正己烷脫脂，減少了操作步驟，避免了乳化現(xiàn)象，從而顯著提高了萃取回收率，具有快速、簡(jiǎn)便、高效、重復(fù)性好的特點(diǎn)。附圖說(shuō)明圖1是按照實(shí)施例1所制備的磺酸基親水性聚苯乙烯納米纖維膜的場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡(FE-SEM)圖；圖2是按照實(shí)施例1所制備的磺酸基親水性聚苯乙烯納米纖維膜的傅里葉變換-紅外光譜(FT-IR)圖；圖3是按照實(shí)施例1所制備的磺酸基親水性聚苯乙烯納米纖維膜的水接觸角(WaterContactAngle)圖；圖4比較不同固相萃取(SPE)材料(等離子體處理的聚苯乙烯plasma-PS納米纖維膜、聚苯乙烯PS納米纖維膜和MCX小柱)對(duì)豬肉中13種磺胺類(lèi)藥物殘留的回收率結(jié)果(各磺胺類(lèi)藥物添加量均為100μg/kg)。具體實(shí)施方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明。實(shí)施例1(豬肉樣品中13種磺胺藥物殘留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：將5.0mL苯乙烯單體、1.0g的4-乙烯基苯磺酸鈉和0.30g碳酸鈉置于三角反應(yīng)瓶，加入20mL超純水，于65℃磁子攪拌反應(yīng)10min，再加入0.20g過(guò)硫酸銨引發(fā)劑，繼續(xù)65℃磁子攪拌反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，將乳白色懸濁液冷卻至室溫，加入2mL甲酸破乳，充分混勻后放置一段時(shí)間，離心沉降(16000r/min，30min)，棄去上層清液，取下層沉淀置入燒杯，水洗后放入真空干燥箱中55℃烘干，研磨成粉狀，再重復(fù)上述水洗-烘干-研磨步驟2次，即得。2)高分子納米纖維膜制備：將步驟1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有機(jī)溶劑中，配置成濃度為15％的聚合物溶液，采用靜電紡絲技術(shù)，在紡絲接收距離15cm的陰極收集鋁箔上放置直徑14mm圓形蓋玻片，施加15kV電壓，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制備納米纖維膜。3)等離子體處理納米纖維膜表面：將步驟2)制備的納米纖維膜放置在等離子體發(fā)生器中，于30W強(qiáng)度下照射40s，得到表面親水性的納米纖維膜。4)空白豬肉樣品中磺胺藥物加標(biāo)樣品的制備：取5.00±0.05g無(wú)磺胺獸藥殘留勻質(zhì)豬肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑?qū)φ掌坊旌先芤?5～100μL，制備成含上述各磺胺類(lèi)藥物濃度在50～200μg/kg(指每種磺胺類(lèi)藥物質(zhì)量/勻質(zhì)豬肉質(zhì)量的質(zhì)量濃度)的系列加標(biāo)樣品溶液，加入10mL乙酸乙酯，搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，加?.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，渦旋混合1min。5)市售豬肉樣品的制備：取5.00±0.05g市售待檢測(cè)勻質(zhì)豬肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入10mL乙酸乙酯后搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，加?.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，渦旋混合1min。6)SPE樣品凈化與提?。簩⒉襟E3)制備的親水性磺酸基納米纖維膜置于市售13mm直徑的PP可拆卸過(guò)濾器中，分別用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)活化纖維膜后，將步驟4)和5)制備的系列加標(biāo)溶液和待測(cè)樣品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重復(fù)通過(guò)固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脫吸附的目標(biāo)化合物，洗脫液于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，用液相色譜分析用流動(dòng)相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根據(jù)步驟4)制備的系列加標(biāo)溶液通過(guò)固相萃取、液相色譜分析后得到的數(shù)據(jù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(見(jiàn)表1)，將步驟5)得到的液相色譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行對(duì)比，得到步驟5)制備的實(shí)際市售豬肉樣品的磺胺類(lèi)藥物殘留的種類(lèi)及其殘留量。將實(shí)施例1中所制備的材料(plasma-PSSA)及固相萃取方法與普通的聚苯乙烯(PS)納米纖維膜和國(guó)標(biāo)規(guī)定方法(MCX小柱)等進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見(jiàn)圖4。同時(shí)將實(shí)施例1所得結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道方法進(jìn)行對(duì)比(表2)。通過(guò)上述對(duì)比可見(jiàn)，該方法對(duì)高脂肪含量的豬肉中的磺胺類(lèi)藥物殘留具有較好的富集凈化效果，且方法快速、簡(jiǎn)便。表1空白豬肉樣品中13種磺胺類(lèi)藥物殘留(SAs)的線(xiàn)性、回收率(高、中、低)測(cè)定結(jié)果表2豬肉中磺胺類(lèi)藥物殘留的測(cè)定與文獻(xiàn)比較結(jié)果注：[1]GambaV,TerzanoC,FioroniL,MorettiS,DusiG,GalariniR.Developmentandvalidationofaconfirmatorymethodforthedeterminationofsulphonamidesinmilkbyliquidchromatographywithdiodearraydetection.Analyticachimicaacta.2009；637(1-2):18-23.[2]KishidaK,FurusawaN.Matrixsolid-phasedispersionextractionandhigh-performanceliquidchromatographicdeterminationofresidualsulfonamidesinchicken,JournalofchromatographyA,2001；937:49-55.[3]FangGZ,HeJX,WangS.Multiwalledcarbonnanotubesassorbentforon-linecouplingofsolid-phaseextractiontohigh-performanceliquidchromatographyforsimultaneousdeterminationof10sulfonamidesineggsandpork.JournalofchromatographyA.2006；1127(1-2):12-7.[4]GaoR,ZhangJ,HeX,ChenL,ZhangY.Selectiveextractionofsulfonamidesfromfoodbyuseofsilica-coatedmolecularlyimprintedpolymernanospheres.AnalyticalandBioanalyticalChemistry.2010；398(1):451-61.[5]HeJ,TangH,YouL,ZhanH,ZhuJ,LuK.Fragment-imprintedmicrospheresfortheextractionofsulfonamides.MicrochimicaActa.2013；180(9-10):903-10.[6]KarimiM,AboufazeliF,ZhadHRLZ,SadeghiO,NajafiE.DeterminationofSulfonamidesinChickenMeatbyMagneticMolecularlyImprintedPolymerCoupledtoHPLC-UV.FoodAnalyticalMethods.2014；7(1):73-80.實(shí)施例2(雞肉樣品中13種磺胺藥物殘留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：將2.5mL苯乙烯單體、0.5g的4-乙烯基苯磺酸鈉和0.15g碳酸鈉置于三角反應(yīng)瓶，加入10mL超純水，于75℃磁子攪拌反應(yīng)10min，再加入0.20g過(guò)硫酸鈉引發(fā)劑，繼續(xù)75℃磁子攪拌反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，將乳白色懸濁液冷卻至室溫，加入1mL乙酸破乳，充分混勻后放置一段時(shí)間，離心沉降(14000r/min，30min)，棄去上層清液，取下層沉淀置入燒杯，水洗后放入真空干燥箱中60℃烘干，研磨成粉狀，再重復(fù)上述水洗-烘干-研磨步驟2次，即得。2)高分子納米纖維膜制備：將步驟1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(2/2，v/v)有機(jī)溶劑中，配置成濃度為12％的聚合物溶液，采用靜電紡絲技術(shù)，在紡絲接收距離15cm的陰極收集鋁箔上放置直徑14mm圓形蓋玻片，施加12kV電壓，聚合物溶液流量控制在0.8mL/h，收集制備納米纖維膜。3)等離子體處理納米纖維膜表面：將步驟2)制備的納米纖維膜放置在等離子體發(fā)生器中，于30W強(qiáng)度下照射40s，得到表面親水性的納米纖維膜。4)空白雞肉樣品中磺胺藥物加標(biāo)樣品的制備：取5.00±0.05g無(wú)磺胺獸藥殘留勻質(zhì)雞肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑?qū)φ掌坊旌先芤?5～100μL，制備成含上述各磺胺類(lèi)藥物50～200μg/kg(指每種磺胺類(lèi)藥物質(zhì)量/勻質(zhì)雞肉質(zhì)量的質(zhì)量濃度)的系列加標(biāo)樣品溶液，加入10mL乙酸乙酯，搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈桑尤?.5mL的0.010mol/L的Na2EDTA溶液(pH3.5)，渦旋混合1min。5)市售雞肉樣品的制備：取5.00±0.05g市售待檢測(cè)雞肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入10mL乙酸乙酯后搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈桑尤?.0mL的0.010mol/L的Na2EDTA溶液(pH3.5)，渦旋混合1min。6)SPE樣品凈化與提取：將步驟3)制備的親水性磺酸基納米纖維膜置于市售13mm直徑的PP可拆卸過(guò)濾器中，分別用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.010mol/L，pH3.5)活化纖維膜后，將步驟4)和5)制備的系列加標(biāo)溶液和待測(cè)樣品溶液各2mL以0.6mL/min的恒定速度重復(fù)通過(guò)固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.010mol/L，pH3.5)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脫吸附的目標(biāo)化合物，洗脫液于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，用液相色譜分析用流動(dòng)相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至2.0mL，即得。7)根據(jù)步驟4)制備的系列加標(biāo)溶液通過(guò)固相萃取、液相色譜分析后得到的數(shù)據(jù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將步驟5)得到的液相色譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行對(duì)比，得到步驟5)制備的實(shí)際市售雞肉樣品中的磺胺類(lèi)藥物殘留的種類(lèi)及其其殘留量。實(shí)施例3(牛肉樣品中13種磺胺藥物殘留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：將5.0mL苯乙烯單體、1.0g的4-乙烯基苯磺酸鈉和0.30g碳酸鈉置于三角反應(yīng)瓶，加入20mL超純水，于65℃磁子攪拌反應(yīng)10min，再加入0.20g過(guò)硫酸銨引發(fā)劑，繼續(xù)65℃磁子攪拌反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，將乳白色懸濁液冷卻至室溫，加入2mL甲酸破乳，充分混勻后放置一段時(shí)間，離心沉降(18000r/min，30min)，棄去上層清液，取下層沉淀置入燒杯，水洗后放入真空干燥箱中55℃烘干，研磨成粉狀，再重復(fù)上述水洗-烘干-研磨步驟2次，即得。2)高分子納米纖維膜制備：將步驟1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有機(jī)溶劑中，配置成濃度為15％的聚合物溶液，采用靜電紡絲技術(shù)，在紡絲接收距離15cm的陰極收集鋁箔上放置直徑14mm圓形蓋玻片，施加15kV電壓，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制備納米纖維膜。3)等離子體處理納米纖維膜表面：將步驟2)制備的納米纖維膜放置在等離子體發(fā)生器中，于30W強(qiáng)度下照射50s，得到表面親水性的納米纖維膜。4)空白牛肉樣品中磺胺藥物加標(biāo)樣品的制備：取5.00±0.05g無(wú)磺胺獸藥殘留勻質(zhì)牛肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑?qū)φ掌坊旌先芤?5～100μL，制備成含上述各磺胺類(lèi)藥物50～200μg/kg(指每種磺胺類(lèi)藥物質(zhì)量/勻質(zhì)牛肉質(zhì)量的質(zhì)量濃度)的系列加標(biāo)樣品溶液，加入10mL乙酸乙酯，搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，加?.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4.5)，渦旋混合1min。5)市售牛肉樣品的制備：取5.00±0.05g市售待檢測(cè)勻質(zhì)牛肉置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入10mL乙酸乙酯后搖床震蕩20min(300r/min)后，8000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈桑尤?.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4.5)，渦旋混合1min。6)SPE樣品凈化與提?。簩⒉襟E3)制備的親水性磺酸基納米纖維膜置于市售13mm直徑的PP可拆卸過(guò)濾器中，分別用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4.5)活化纖維膜后，將步驟4)和5)制備的系列加標(biāo)溶液和待測(cè)樣品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重復(fù)通過(guò)固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4.5)淋洗固相萃取柱。再加入2.0mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脫吸附的目標(biāo)化合物，洗脫液于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，用液相色譜分析用流動(dòng)相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根據(jù)步驟4)制備的系列加標(biāo)溶液通過(guò)固相萃取、液相色譜分析后得到的數(shù)據(jù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將步驟5)得到的液相色譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行對(duì)比，得到步驟5)制備的實(shí)際市售牛肉樣品的磺胺類(lèi)藥物殘留的種類(lèi)及其殘留量。實(shí)施例4(牛奶樣品中13種磺胺藥物殘留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：將10.0mL苯乙烯單體、2.0g的4-乙烯基苯磺酸鈉和0.60g碳酸鈉置于三角反應(yīng)瓶，加入40mL超純水，于65℃磁子攪拌反應(yīng)10min，再加入0.20g過(guò)硫酸銨引發(fā)劑，繼續(xù)65℃磁子攪拌反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，將乳白色懸濁液冷卻至室溫，加入4mL乙酸破乳，充分混勻后放置一段時(shí)間，離心沉降(18000r/min，30min)，棄去上層清液，取下層沉淀置入燒杯，水洗后放入真空干燥箱中60℃烘干，研磨成粉狀，再重復(fù)上述水洗-烘干-研磨步驟2次，即得。2)高分子納米纖維膜制備：將步驟1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有機(jī)溶劑中，配置成濃度為10％的聚合物溶液，采用靜電紡絲技術(shù)，在紡絲接收距離10cm的陰極收集鋁箔上放置直徑14mm圓形蓋玻片，施加10kV電壓，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制備納米纖維膜。3)等離子體處理納米纖維膜表面：將步驟2)制備的納米纖維膜放置在等離子體發(fā)生器中，于30W強(qiáng)度下照射30s，得到表面親水性的納米纖維膜。4)空白牛奶樣品中磺胺藥物加標(biāo)樣品的制備：取5.00±0.05g無(wú)磺胺獸藥殘留的牛奶置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑?qū)φ掌坊旌先芤?5～100μL，制備成含上述各磺胺類(lèi)藥物50～200μg/kg(指每種磺胺類(lèi)藥物質(zhì)量/牛奶質(zhì)量的質(zhì)量濃度)的系列加標(biāo)樣品溶液，加入10mL乙酸乙酯，搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，加?.0mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，渦旋混合1min。5)市售牛奶樣品的制備：取5.00±0.05g市售待檢測(cè)牛奶置于50mL離心管中，精密稱(chēng)定，加入10mL乙酸乙酯后搖床震蕩20min(300r/min)后，10000r/min離心5min(4℃)，吸取上清液，殘?jiān)儆?0mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮?dú)獯蹈?，加?.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，渦旋混合1min。6)SPE樣品凈化與提?。簩⒉襟E3)制備的親水性磺酸基納米纖維膜置于市售13mm直徑的PP可拆卸過(guò)濾器中，分別用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)活化纖維膜后，將步驟4)和5)制備的系列加標(biāo)溶液和待測(cè)樣品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重復(fù)通過(guò)固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脫吸附的目標(biāo)化合物，洗脫液于60℃水浴氮?dú)獯蹈桑靡合嗌V分析用流動(dòng)相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根據(jù)步驟4)制備的系列加標(biāo)溶液通過(guò)固相萃取、液相色譜分析后得到的數(shù)據(jù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將步驟5)得到的液相色譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行對(duì)比，得到步驟5)制備的實(shí)際市售牛奶樣品的磺胺類(lèi)藥物殘留的種類(lèi)及其殘留量。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出：對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和等同形式的替換，這些改進(jìn)和等同替換得到的技術(shù)方案也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。