本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域的一種呼吸道通氣治療時使用的抑菌濕化液，主要用于氧療、呼吸機通氣以及氣道濕潤等使用，屬于臨床藥品與醫(yī)療器械范疇。
背景技術(shù)：
：在吸氧治療、呼吸機通氣、氣管濕潤等呼吸道通氣護理操作中，均需要醫(yī)用濕化液。臨床護理使用的濕化液一般要求為滅菌水或蒸餾水，因其本身不具有抑菌功能，在長時間臨床護理過程中，濕化液極易被細菌污染，給患者帶來院內(nèi)感染風險。石蘭萍等的《氧氣濕化液的污染狀況分析及對策》（護理研究，2005年第5期第19卷第5期）、徐丹等的《大連市氧氣濕化液細菌污染程度的監(jiān)測》（中國感染控制雜志，2004年4月第3卷第2期）以及童建華的《氧氣濕化液的細菌培養(yǎng)調(diào)查》（中華醫(yī)院感染雜志，2006年第16卷第7期）等幾十篇文章都對現(xiàn)有的氧氣濕化液引起的細菌感染與院內(nèi)感染問題進行了系統(tǒng)的論述。盡管有不少學者已經(jīng)提出了在濕化液中添加抑菌劑的技術(shù)方案，比如《復方黃連氧氣濕化液的臨床研究》（中國優(yōu)秀碩士論文電子期刊網(wǎng)，2006年第12期，第1頁）、專利號ZL200910135422.9等，主要側(cè)重于濕化液的抑菌性能研究，但由于醫(yī)用濕化液具有一定的特殊性，這些技術(shù)方案在實踐中并不能有效實施應用。所述的醫(yī)用濕化液的特殊性在于：1、應無異味：濕化液應沒有病人長時間使用時不能耐受的異味、刺激性；2、應無泡沫：用于吸氧時，水溶液在氧氣氣泡作用下不能產(chǎn)生泡沫，避免泡沫蓄積后不斷升高，使?jié)窕簺_出濕化瓶并沿鼻氧管管路進入患者鼻腔，造成患者嗆水。專利號ZL200910135422.9采用了聚賴氨酸作為抑菌劑，但是聚賴氨酸單獨使用在低濃度溶液中抑菌效果一般，特別是對于真菌效果很不理想，而高濃度溶液又會在通氣時產(chǎn)生大量泡沫，引發(fā)患者嗆水風險，存在缺憾。3、在氧氣長時間作用下，抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性好，抑菌物質(zhì)不易氧化、分解失活。4、氣管切開患者呼吸道天然防御屏障消失，濕化液采用的抑菌劑不當可能使正常菌群失調(diào)，而耐藥菌易于繁殖，因此抑菌劑應不會引起耐藥性或菌群紊亂。5、不會影響肺泡張力，不會增加痰液粘滯程度，影響痰液正?？瘸觯?、濕化液適用人群廣泛，對新生兒、老年人等應當均沒有禁忌，呼吸道吸入后對人體安全可靠，無毒副作用。由此可見，篩選一種具有抑菌性能的濕化液絕對不是簡單選用一種或者幾種抑菌成分，制備成溶液就能夠?qū)崿F(xiàn)，必須要滿足濕化液的特殊性要求。為此，本發(fā)明提出一種呼吸道通氣治療時使用的抑菌濕化液，滿足臨床需求。技術(shù)實現(xiàn)要素：一種呼吸道通氣治療時使用的抑菌濕化液，主要有效成分為ε-聚賴氨酸、乳酸鏈球菌素，與醫(yī)用水配伍制備成復方濕化液，其中ε-聚賴氨酸在復方濕化液中的濃度為5mg/L～3g/L、乳酸鏈球菌素在復方濕化液中的濃度為4mg/L～2.4g/L，采用pH值調(diào)節(jié)劑將復方濕化液pH值調(diào)整為5.0～7.0之間，優(yōu)選的技術(shù)方案是，ε-聚賴氨酸在濕化液中的濃度為250mg/L、乳酸鏈球菌素在濕化液中的濃度為200mg/L，濕化液pH值為5.5～6.5之間。所述的醫(yī)用水指醫(yī)用純化水、滅菌水、蒸餾水等。所述的pH值調(diào)節(jié)劑可以是氫氧化鈉、鹽酸、醋酸、磷酸等常用食用級添加劑中的任意一種或者幾種。ε-聚賴氨酸(ε-PL)在80年代就首次應用于食品防腐。ε-聚賴氨酸具有安全性能高、在水中的溶解性極強、熱穩(wěn)定性好、使用范圍廣等優(yōu)點,在中性和微酸性環(huán)境條件均有較強的抑菌性具有強烈的抑菌能力。ε-聚賴氨酸作用機理是破壞微生物的細胞膜結(jié)構(gòu)，引起細胞的物質(zhì)、能量及信息傳遞中斷，最終導致細胞死亡。它對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌有很好的抑菌效果，ε-聚賴氨酸在pH值為5.0～8.0時穩(wěn)定性最好、抑菌能力最佳。但是單獨使用時ε-聚賴氨酸時對枯草芽孢桿菌、黑曲霉、真菌抑制作用并不明顯，加大濕化液中ε-聚賴氨酸的濃度則容易引起異味和泡沫產(chǎn)生。因此，篩選一種與ε-聚賴氨酸具有協(xié)同作用的抑菌劑在濕化制備時復方組合是一種有效的技術(shù)方案。本經(jīng)過與幾十種抑菌劑復方組合后安全性能評價、穩(wěn)定性實驗、體外抑菌實驗以及濕化液的特殊性能測試，發(fā)現(xiàn)ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素組合效果最佳，各項性能均能滿足。乳酸鏈球菌素（Nisin）是一種乳酸菌代謝所產(chǎn)生的具有很強殺菌作用的天然代謝產(chǎn)物，被認為是一種高效、天然、綠色食品防腐劑。乳酸鏈球菌素屬于窄譜抗生素，對許多革蘭氏陽性菌尤其是能產(chǎn)生芽孢的菌具有抑制作用，如肉毒梭菌、金黃色葡萄球菌、溶血鏈球菌、利斯特氏菌、以及嗜熱脂肪芽抱桿菌的生長和繁殖，尤其對產(chǎn)生孢子的革蘭氏陽性細菌有特效。乳酸鏈球菌素的抗菌作用機理是通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡。乳酸鏈球菌素進入人體后不會改變?nèi)梭w正常菌群以及產(chǎn)生如其它抗菌素所出現(xiàn)的抗性問題，更不會與其它抗菌素出現(xiàn)交叉抗性，是一種高效、無毒、安全、無副作用的天然食品防腐劑。1、復方濕化液安全性研究ε-聚賴氨酸是一種靠肽鍵連接羧基與氨基基團的多聚L-賴氨酸，是一種具有抑菌功效的多肽物質(zhì)。ε-聚賴氨酸具有極高的安全性，進入人體后可分解為人體必需的營養(yǎng)氨基酸——賴氨酸，而賴氨酸是人體必須的八種氨基酸，因此它被譽為“營養(yǎng)型防腐劑”。ε-聚賴氨酸于80年代初日本率先在食品保鮮中應用，2003年通過了美國食品和醫(yī)藥管理(FDA)的許可，目前日本、美國、歐洲以及我國（2014年）均也已列入食品添加劑范圍。乳酸鏈球菌素亦稱乳酸鏈球菌肽，是乳酸鏈球菌產(chǎn)生的一種多肽物質(zhì)，由34個氨基酸殘基組成，由多種氨基酸組成的多肽類化合物，可作為營養(yǎng)物質(zhì)被人體吸收利用。1969年聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織/世界衛(wèi)生組織(FAL/WHO)食品添加劑聯(lián)合專家委員會確認乳酸鏈球菌素可作為食品防腐劑。1992年3月中國衛(wèi)生部批準實施的文件指出：“可以科學地認為乳酸鏈球菌作為食品保藏劑是安全的”。由此可見，ε-聚賴氨酸、乳酸鏈球菌素均屬于非常安全的抑菌劑，而且在穩(wěn)定性研究中發(fā)現(xiàn)，兩種抑菌劑復方組合沒有產(chǎn)生其他新的化合物，因此用于濕化液是絕對安全的。2、復方濕化液體外抑菌性能研究本發(fā)明人選擇呼吸道感染中最常見的金黃色葡萄球菌，通過對ε-聚賴氨酸溶液單獨使用、以及ε-聚賴氨與乳酸鏈球菌素復方濕化液使用進行體外抑菌實驗比較，發(fā)現(xiàn)復方濕化液體外抑菌效果明顯好于ε-聚賴氨酸溶液單獨使用（實驗結(jié)果見實施例2），說明采用ε-聚賴氨與乳酸鏈球菌素復方濕化液具有臨床意義。3、復方濕化液穩(wěn)定性研究由于濕化液制備過程中涉及溶液的濕熱滅菌，因此必須研究ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合的熱穩(wěn)定性；由于乳酸鏈球菌素的抑菌性能與pH值相關(guān)，制備復方濕化液時需要調(diào)整溶液的pH值，因此必須研究ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合的酸堿穩(wěn)定性；濕化液產(chǎn)品需要長時間儲運保存，因此必須研究ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合的長期穩(wěn)定性；濕化液在高濃度富氧環(huán)境下長時間使用，必須研究ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合的抗氧化性能。本發(fā)明人在對ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合的以上項目穩(wěn)定性研究后發(fā)現(xiàn)，ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合穩(wěn)定性好，體外協(xié)同抑菌作用也沒有改變（實驗結(jié)果見實施例3）。2、復方濕化液的的物理性能實驗用于濕化液的抑菌劑必須滿足無異味、不易產(chǎn)生泡沫等物理特征，本發(fā)明人分別采用高、中、低三種濃度配比，對ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方濕化液的物理性狀進行研究。其中，高濃度組濕化液中ε-聚賴氨酸含量1g/L、乳酸鏈球菌素含量0.8g/L；中濃度組濕化液中ε-聚賴氨酸含量0.5g/L、乳酸鏈球菌素含量0.4g/L；低濃度組濕化液中ε-聚賴氨酸含量0.25g/L、乳酸鏈球菌素含量0.2g/L。研究發(fā)現(xiàn)，低濃度組復方濕化液物理性能完全滿足濕化液的物理性能要求，實驗結(jié)果見表1。表1：濕化液物理性能實驗結(jié)果實驗組性狀氣泡判斷結(jié)果高濃度微黃色液體，有特異性酸味。泡沫豐富，低于6L/min流量通氣時，未發(fā)現(xiàn)濕化液從潮化杯溢出。不適宜高流量吸氧或氣味敏感患者使用中濃度無色液體，有輕微酸味，長時間使用無不適感。泡沫較豐富，低于8L/min流量通氣時，未發(fā)現(xiàn)濕化液從潮化杯溢出。不適宜氣味敏感患者使用低濃度無色澄明液體，無異味。無泡沫，10L/min流量通氣時，未發(fā)現(xiàn)濕化液從潮化杯溢出。適用于所有患者本發(fā)明的優(yōu)點和臨床意義是：提供一種新型的醫(yī)用氧氣濕化液組方，不僅能夠在長時間使用過程中有效抑制細菌滋生，同時能滿足濕化液的特殊性要求，滿足臨床需要。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例2中的實驗結(jié)果示意圖具體實施方式下面結(jié)合附圖和實施例具體地說明本發(fā)明。實施例1：本發(fā)明的產(chǎn)品制備舉例，采用本發(fā)明組方，制備10000ml醫(yī)用濕化液的制備，用于常規(guī)患者的氧氣濕化用，根據(jù)《醫(yī)院消毒規(guī)范》要求，濕化液為滅菌水，細菌菌落總數(shù)應≤100cfu/ml，致病菌不得檢出。處方：藥用純化水10000mlε-聚賴氨酸2.5g乳酸鏈球菌素3.75g醋酸適量制成10000ml混合溶液制備方法:1、按以上處方比例精密稱取ε-聚賴氨酸原料2.5g、乳酸鏈球菌素3.75g。2、量取9000ml純化水，將ε-聚賴氨酸原料2.5g、乳酸鏈球菌素3.75g投入到純化水中,攪拌至完全溶解，繼續(xù)加入剩余純化水，定容至10000ml溶液，備用。3、用精密酸度計測量溶液pH值，并用醋酸調(diào)節(jié)PH值至5.5～6.0之間。4、用0.25um～0.3um微孔濾膜過濾除菌。5、按照每瓶100ml灌裝，密封，檢測合格后存放備用。實施例2濕化液的體外抑菌性能研究實驗目的：選擇引發(fā)呼吸道感染常見的金黃色葡萄球菌作為實驗菌種，將濃度為含ε-聚賴氨酸0.25g/L的單方氧氣濕化液與實施例1制備的濕化液進行體外抑菌效果比較。1、材料與方法ε-聚賴氨酸(浙江銀象生物工程有限公司)；乳酸鏈球菌素(洛陽奇泓生物科技有限公司)；牛肉膏、蛋白胨(北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司)。1.1培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨：牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaCl0.5％、瓊脂2％、蒸餾水（pH值7.0～7.2）；肉湯培養(yǎng)基：牛肉粉0.3％、蛋白胨l％、NaC10.5％、蒸餾水。1.2單方ε-聚賴氨酸濕化液的配制精密稱取ε-聚賴氨酸0.025g溶于100ml無菌水中，配制成濃度為0.25g/L的ε-聚賴氨酸溶液；用酸度計測量溶液pH值，并用醋酸調(diào)節(jié)PH值至5.5～6.0之間，備用。1.3菌懸液的制備將保藏的金黃色葡萄球菌菌接種到牛肉膏、蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中37℃培養(yǎng)24小時進行活化，再將活化后的菌種劃線接種到牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基上，使其形成單菌落。挑取金黃色葡萄球菌單菌落一環(huán)接種到肉湯培養(yǎng)基中，在37℃下?lián)u床培養(yǎng)5h～7h，使菌體生長到對數(shù)期，形成菌體數(shù)為106～l07個／ml的菌懸液，備用。1.4濾紙片的制備1.4.1用直徑9～10mm的打孔器將濾紙打孔制成圓濾紙片備用。1.4.2將ε-聚賴氨酸溶液、實施例1制備的復方溶液分別制備為0.35g／L、0.30g／L、0.25g／L、0.20g／L、0.15g／L、0.10g／L不同濃度的供試液。1.4.2將圓濾紙片分別浸入不同濃度的供試液中，取出烘干，并在紫外線下滅菌15min后備用。然后分別取0.1ml菌懸液于牛肉膏、蛋白胨平板上，用滅菌棉棒涂布均勻，待菌液被完全吸收后，將不同濃度圓濾紙片貼于平板上，置于37℃培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈的生成情況，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，記錄結(jié)果。每個梯度做3個平行。2、統(tǒng)計分析各數(shù)據(jù)均取相同濃度平行實驗均值進行比較，并分別進行標準偏差分析。3、實驗結(jié)果從下表2可以看出，隨著ε-聚賴氨酸濃度的增大，抑菌圈也逐漸增大，說明抑菌作用也逐漸增強。表2：ε-聚賴氨酸體外抑菌效果兩組濕化液比較，實施例1制備的ε-聚賴氨酸與乳酸鏈球菌素復方組合，對金黃色葡萄球菌的協(xié)同增效作用較顯，且抑菌效果顯著高于單方的ε-聚賴氨酸溶液，結(jié)果見圖1。實施例3本發(fā)明制備的濕化液穩(wěn)定性研究取實施例1制備的復方濕化液30瓶，每瓶100ml，備用。1、熱穩(wěn)定性試驗將復方濕化液9瓶，分為3個批次，每批次各3瓶；分別于45℃、65℃、95℃不同溫度在恒溫水浴鍋中處理1h后，測其抑菌效果變化。以實施例2中濃度為0.25g／L的未經(jīng)熱處理的濕化液抑菌圈結(jié)果作為對照。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復方濕化液具有很好的熱穩(wěn)定性，經(jīng)過三個不同溫度點的熱處理后，其抑菌性能幾乎沒有變化。2、酸堿穩(wěn)定性試驗取復方濕化液5瓶，分別用1mol/LNaOH和1mol/LHC1將濕化液的pH值調(diào)至為2、4、6、8、10，分別測其抑菌效果變化，以實施例2中濃度為0.25g／L的濕化液抑菌圈結(jié)果作為對照。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復方濕化液在pH值為6時抑菌性能與對照品無差異，而在pH值為2、4的酸性條件以及pH值為8、10的堿性條件下，其抑菌性均明顯下降，提示復方濕化液的在弱酸及中性條件下抑菌效果較好，而在酸性、堿性增強時抑菌效果下降。3、穩(wěn)定性試驗將復方濕化液6瓶，選擇40℃±2℃、RH75％±5％條件下，進行6個月試驗。在試驗期間第0、1、2、3、6個月末取樣檢測，測其抑菌效果變化，以實施例2中濃度為0.25g／L的濕化液抑菌圈結(jié)果作為對照；并根據(jù)復方濕化液顏色、氣味、產(chǎn)生泡沫等物理性能變化。實驗結(jié)果表明，經(jīng)過6個月的加速實驗，復方濕化液抑菌性能沒有顯著變化，顏色、氣味、產(chǎn)生泡沫等物理性能沒有明顯變化，提示復方濕化液的穩(wěn)定性較好。4、抗氧化性能將復方濕化液4瓶，鋼瓶20L裝醫(yī)用氧氣3瓶，浮標式氧氣吸入器3個。按照3L/min流量，分別在復方濕化液中連續(xù)通入純氧氣6h、12h、24h，與未通入純氧氣復方濕化液對照，觀察濕化液微生物限度以及顏色、氣味物理性狀變化。實驗結(jié)果見表3。表3抗氧化性能實驗結(jié)果從表2可見，復方濕化液連續(xù)24小時通入純氧后，顏色、氣味等物理性狀顯著改變，說明產(chǎn)品抗氧化性能好。通氣24小時后復方濕化液的總菌落數(shù)盡管比初始狀態(tài)有所增加，但仍滿足醫(yī)用濕化液要求的總菌落數(shù)低于100cfu/ml的微生物限度要求，相比文獻報道的濕化液通氣24小時陽性污染率超過50%有顯著改善，說明復方濕化液具有抑菌作用。上述附圖及實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中，對本發(fā)明的保護范圍不構(gòu)成任何限制。當前第1頁1 2 3