本發(fā)明涉及血液凈化領(lǐng)域，具體涉及碳化樹脂DNA免疫吸附劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupuserythematosus,以下簡稱SLE)是一種常見的累及多系統(tǒng)多器官的自身免疫性疾病。由于患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)障礙及自身免疫耐受狀態(tài)被打破，產(chǎn)生多種針對自身組織的抗體，導(dǎo)致組織和器官的損傷，這些抗體主要是抗Sm抗體、抗核抗體以及抗DNA抗體。其中抗DNA抗體可分為抗單鏈DNA抗體(抗ss-DNA抗體)和抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)。
根據(jù)國內(nèi)外臨床及基礎(chǔ)研究表明，抗ds-DNA抗體的滴度與疾病嚴(yán)重程度及活動性呈正相關(guān)。最近幾年，激素及免疫抑制劑的應(yīng)用使SLE患者的愈后效果得到明顯改善，但依舊存在很多患者藥物療效不顯著的現(xiàn)象，過度的免疫抑制治療所引起的感染是引起SLE患者死亡的主要原因。另外，多方面研究證實(shí)，抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)與DNA結(jié)合成為免疫復(fù)合物在腎小球基底膜沉積，或ds-DNA抗體直接作用于腎小球抗原，從而造成SLE患者的腎損傷。
使用DNA免疫吸附(IA)對患者進(jìn)行血液灌流，是近二、三十年發(fā)展起來的新型療法。Jones,Frank R(EP0272792A1,1987)對這種方法作了詳細(xì)說明。DNA免疫吸附劑的吸附作用是依靠DNA對致病性抗ds-DNA抗體的特異識別作用，清除患者血液中的致病物質(zhì)，緩解病情，改善患者的免疫功能，從而逐漸恢復(fù)健康。
美國的TermanDS等人(Lancet,1979,2(8147):824-7)首次使用活性炭為載體材料，采用火棉膠包膜固定DNA，得到DNA免疫吸附劑用于血液灌流治療一名重度SLE患者，使患者生命延長，從此開辟了DNA吸附劑治療SLE的先河。
使用火棉膠的包膜，使DNA免疫吸附劑的安全有效性得到了保證。但是該方法得到的包膜DNA免疫吸附劑中DNA系通過物理包埋作用固載在樹脂上，DNA的有效固載率和固載穩(wěn)定性并不十分理想吸附劑的吸附率僅能達(dá)到50％左右。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種吸附率高的包膜DNA免疫吸附劑。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：包膜DNA免疫吸附劑，包括作為吸附劑載體的碳化樹脂和固載在碳化樹脂上的DNA,包膜DNA免疫吸附劑還包括聚乙烯醇縮丁醛膜層，聚乙烯醇縮丁醛膜層對吸附劑載體形成包膜作用。
聚乙烯醇縮丁醛(以下簡稱PVB)是由聚乙烯醇與正丁醛在酸催化下的縮合產(chǎn)物，其分子鏈中含有羥基、丁醛基和乙酸酯基三種不同的官能團(tuán)。其中，PVB結(jié)構(gòu)中含有的縮丁醛獨(dú)特的六元環(huán)結(jié)構(gòu)提高了分子鏈的強(qiáng)度及耐熱性，結(jié)構(gòu)中含有的大量的羥基，使得膜層具備優(yōu)良的親水性和生物相容性。PVB結(jié)構(gòu)中羥基可提高吸附劑的環(huán)氧功能化效果。具有聚乙烯醇縮丁醛膜層的包膜DNA包膜吸附劑，由于該膜層表面含有大量的親水性的羥基，大大提高了免疫吸附劑的生物相容性，另一方面，膜層表面的羥基通過與帶有環(huán)氧基團(tuán)的分子如環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)將環(huán)氧基團(tuán)引入膜層表面，DNA通過與環(huán)氧基團(tuán)的開環(huán)反應(yīng)固載于膜層表面，一方面有效防止了DNA的脫落，另一方面DNA完全裸露于膜層表面，大大提高了免疫吸附劑的吸附性能。
本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是提供一種新的包膜DNA免疫吸附劑的制備方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：用聚乙烯醇縮丁醛與有機(jī)溶劑的混合溶液作為包膜溶液，對碳化樹脂進(jìn)行包膜處理制得包膜吸附劑；
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理；
步驟三：將環(huán)氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合，進(jìn)行DNA接枝反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后將所得產(chǎn)物烘干、冷卻，最后制得所述包膜DNA免疫吸附劑。
聚乙烯醇縮丁醛(以下簡稱PVB)是由聚乙烯醇與正丁醛在酸催化下的縮合產(chǎn)物，其分子鏈中含有羥基、丁醛基和乙酸酯基三種不同的官能團(tuán)。其中，PVB結(jié)構(gòu)中含有的縮丁醛獨(dú)特的六元環(huán)結(jié)構(gòu)提高了分子鏈的強(qiáng)度及耐熱性，結(jié)構(gòu)中含有的大量的羥基，使得膜層具備優(yōu)良的親水性和生物相容性。此外，PVB結(jié)構(gòu)中羥基可提高吸附劑的環(huán)氧功能化效果。具有聚乙烯醇縮丁醛膜層的包膜DNA包膜吸附劑，不但可提高吸附劑的強(qiáng)度，也可有效提高吸附劑的吸附效率。
較好的方案為聚乙烯醇縮丁醛的羥基含量為15％-30％。
PVB的羥基含量的增加可提高環(huán)氧活化效果，進(jìn)而可以提高DNA的固載量，但PVB中羥基占比過高，將導(dǎo)致PVB的親水性增大，膜層的機(jī)械性能、耐磨強(qiáng)度將會減小。優(yōu)選的，PVB中羥基占比為15％-30％，即可保證膜層的機(jī)械性能和耐磨強(qiáng)度，又可獲得較高的DNA固載量，使吸附劑的吸附效率得到保障。
更好的方案為步驟一中所述包膜溶液中聚乙烯醇縮丁醛的質(zhì)量濃度為0.5％-1％。
更好的方案為步驟一中所述包膜溶液與所述碳化樹脂的體積比為(2-3)：1，所述包膜溶液中聚乙烯醇縮丁醛的質(zhì)量濃度為0.5％-1％。
籍此獲得的包膜DNA免疫吸附劑的包膜層厚度適中，吸附效率高。
更好的方案為步驟三中，環(huán)氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液的體積比為1：(2.5-5)，其中所述DNA緩沖溶液中DNA的濃度為1-2mg/ml。
借此獲得的包膜DNA免疫吸附劑DNA固載量高，吸附效率高。
另一更好的方案為步驟三中，接枝反應(yīng)溫度為70℃-85℃，反應(yīng)時(shí)間為12-24h。
在接枝反應(yīng)溫度在70-85℃之間時(shí)包膜DNA免疫吸附劑的吸附性能均達(dá)到了90％以上，吸附性能優(yōu)。
另一更好的方案為步驟三中，烘干溫度為50℃-60℃。
另一更好的方案為步驟二中進(jìn)行環(huán)氧活化處理所用的環(huán)氧活化物選自乙二醇雙縮水甘油醚、1,4-丁二醇雙縮水甘油醚、1,6-己二醇雙縮水甘油醚和環(huán)氧氯丙烷中的任一一種。
包膜吸附劑通過其膜層上的羥基與單環(huán)或雙環(huán)氧基團(tuán)物質(zhì)上的環(huán)氧基團(tuán)(氯基)的開環(huán)反應(yīng)(取代反應(yīng))可以實(shí)現(xiàn)包膜吸附劑的環(huán)氧化，DNA分子通過其堿基對與環(huán)氧基團(tuán)的開環(huán)反應(yīng)固定于包膜吸附劑上。
另一更好的方案為步驟二中進(jìn)行所述環(huán)氧活化處理的方法為：
將步驟一制成的包膜吸附劑加入到環(huán)氧活化物和NaOH溶液中，其中包膜吸附劑、環(huán)氧活化物和NaOH溶液的體積比為1:(0.5-2):1，在40-50℃下反應(yīng)1-2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水洗滌，獲得環(huán)氧活化后的包膜吸附劑。
本發(fā)明環(huán)氧活化處理的方法還可以是現(xiàn)有技術(shù)中的其它方法，對此沒有嚴(yán)格的限制。在環(huán)氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合前，還可以先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌。
本發(fā)明對包膜溶液中有機(jī)溶劑的選擇沒有嚴(yán)格的限制，可使用醇類溶劑，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等，亦可以使用酮類溶劑，如丙酮、環(huán)己酮等，還可以使用酯類溶劑或醚類溶劑，如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、丙醚等。優(yōu)選乙醇。
本發(fā)明對作為吸附劑載體的碳化樹脂的選擇沒有嚴(yán)格的限制，可以通過商業(yè)途徑購買，可以通過任何公知的方法制備，亦可以通過以下方法制得：
以苯乙烯和二乙烯苯為單體，二乙烯苯占混合單體總質(zhì)量的0.5％，以三倍于單體(重量比)的甲苯為致孔劑，以過氧化苯甲酰為引發(fā)劑，用量為混合單體總質(zhì)量的1％，以1％明膠水溶液為分散介質(zhì)，進(jìn)行懸浮聚合，在80℃下反應(yīng)5小時(shí)，獲得大孔樹脂；
將上述制備的樹脂放入電阻爐中，在惰性氣體保護(hù)下，在300℃的溫度下燒灼10小時(shí)，然后升溫至800℃，即獲得碳化樹脂。
本發(fā)明對DNA緩沖溶液亦沒有嚴(yán)格的要求，可通過公知技術(shù)手段制備，如通過以下的方法制備：
將高純度小牛胸腺DNA(DNA含量85％以上)溶解于0.2mol/L Tris-HCL(pH＝7.9)緩沖溶液中，配制DNA濃度為1-2mg/ml的DNA緩沖溶液，備用。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
用聚乙烯醇縮丁醛與有機(jī)溶劑的混合溶液作為包膜溶液，對碳化樹脂進(jìn)行包膜處理制得包膜吸附劑。具體地，將羥基占比為10％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為0.5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌5min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。具體地，將10ml包膜吸附劑加入到10ml環(huán)氧氯丙烷和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，獲得環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
將環(huán)氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合，進(jìn)行DNA接枝反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后將所得產(chǎn)物烘干、冷卻，最后制得所述包膜DNA免疫吸附劑。具體地，取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)，再冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例2 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為15％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為150ml的包膜溶液中，攪拌5min后過濾，再在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml環(huán)氧氯丙烷和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在45℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾，然后與10ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例3 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml環(huán)氧氯丙烷和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為2mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)24h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例4 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為30％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為125ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml環(huán)氧氯丙烷和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例5 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為35％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌5min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到15ml環(huán)氧氯丙烷和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與6ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)24h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例6 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌5min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于70℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例7 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為2mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于60℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例8 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于75℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例9 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于80℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例10 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌5min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA濃度為1mg/ml的DNA緩沖溶液混合，于85℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
實(shí)施例11 制備包膜DNA免疫吸附劑
步驟一 制備包膜吸附劑
將羥基占比為20％的PVB溶解于乙醇溶液中，配制質(zhì)量濃度為5％的PVB乙醇溶液作為包膜溶液；量取50ml的干燥碳化樹脂，倒入到體積為100ml的包膜溶液中，攪拌10min后過濾，在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即為包膜吸附劑。
步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進(jìn)行環(huán)氧活化處理。
將10ml包膜吸附劑加入到5ml 1,4-丁二醇雙縮水甘油醚和10ml 0.6mol/L NaOH溶液中，在40℃下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后使用純化水充分洗滌，制備環(huán)氧活化包膜吸附劑。
步驟三：DNA接枝反應(yīng)
取2ml環(huán)氧活化包膜吸附劑，先用0.1mol/L Tris-HCl緩沖液洗滌，抽濾后與5ml DNA緩沖溶液混合，于90℃反應(yīng)12h。結(jié)束后將吸附劑在60℃烘干2小時(shí)后冷卻，即得到包膜DNA免疫吸附劑。
性能測試：
取各DNA免疫吸附劑樣品2ml，分別加入至20ml SLE患者血漿中，于37℃下震蕩吸附2小時(shí)，取吸附前后的SLE患者血漿檢測抗ds-DNA抗體濃度。檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒為上?？菩律a(chǎn)，儀器為深圳愛康Uranus AE120。
DNA免疫吸附劑樣品制備方式匯總?cè)缦卤?所示，性能檢測結(jié)果如下表2所示：
表1 DNA免疫吸附劑樣品制備方式匯總表
表2 吸附性能檢測結(jié)果
根據(jù)表2的數(shù)據(jù)，我們可以得出：
從實(shí)施例1-5的結(jié)果來看，隨著PVB中羥基占比的增加，DNA免疫吸附劑的性能亦逐步提高，在PVB中羥基占比為15％-30％時(shí)吸附性能最優(yōu)。
對比實(shí)施例3和6的結(jié)果可知，與采用環(huán)氧氯丙烷相比，采用1,4-丁二醇雙縮水甘油醚作為活化物質(zhì)可以大幅度提高吸附劑的吸附性能，達(dá)到了92.1％，這與1,4-丁二醇雙縮水甘油醚提供了一個(gè)較長碳鏈的手臂作用有關(guān)。
對比實(shí)施例6-11的結(jié)果可知，DNA接枝溫度對DNA免疫吸附劑的性能有一定影響，隨著接枝溫度的提高吸附劑的性能逐步升高，在接枝溫度為70-85℃之間時(shí)吸附劑的吸附性能均達(dá)到了90％以上，因此優(yōu)選的DNA接枝溫度為70-85℃。
以上對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。