本申請是2014年01月09日遞交的申請?zhí)枮?01480004403.1，發(fā)明名稱為“多步分離方法”的分案申請。

本發(fā)明涉及純化多不飽和脂肪酸(pufa)及其衍生物的改進的色譜分離方法。特別是，本發(fā)明涉及采用混合溶劑系統(tǒng)的改進的色譜分離方法。

背景技術：

脂肪酸(特別是pufa)及其衍生物是生物學上重要分子的前體，它們在調節(jié)諸如血小板聚集、炎癥和免疫反應等生物學功能中起著重要作用。因此，pufa及其衍生物可在治療上可用于治療廣泛的病理病癥，這病理病癥包括cns病癥、包括糖尿病性神經病變的神經病變、心血管疾病、包括炎性皮膚疾病的全身免疫系統(tǒng)和炎癥病癥。

在諸如蔬菜油和海洋油等天然進料中發(fā)現pufa。然而，這些pufa經常以飽和脂肪酸和許多其他雜質的共混物存在于這些油中。因此，在營養(yǎng)性應用或藥物性應用之前，應該對pufa進行所需純化。

不幸的是，pufa極易被破壞。因此，當在氧存在下加熱時，它們易于發(fā)生異構化反應、過氧化反應和低聚反應。因此，難以通過pufa產物的分離和純化來制備純脂肪酸。即使在真空條件下蒸餾也可能導致不可接受的產物降解。

色譜分離技術為本領域技術人員所眾所周知。涉及固定床系統(tǒng)和模擬或真實的移動床系統(tǒng)的色譜分離技術均為本領域技術人員所熟悉。

在常規(guī)的固定床色譜系統(tǒng)中，其組分待分離的混合物滲透通過容器。該容器一般是圓柱形的，并且通常被稱為柱。該柱含有對流體表現出高滲透率的多孔材料的填料(一般稱為固定相)?；旌衔镏懈鹘M分的滲透速度取決于該組分的物理性質，從而使得組分選擇性地依次從柱中出來。因此，一些組分趨向于牢固地固定到固定相，并且因此將緩慢地滲出，然而其他組分趨向于薄弱地固定并更快速地從柱中出來。已經提出許多不同的固定床色譜系統(tǒng)，并且這些固定床色譜系統(tǒng)均被用于分析目的和工業(yè)生產目的。

模擬和真實的移動床色譜是本領域技術人員所熟悉的已知技術。操作原理涉及液體洗脫劑相和固體吸附劑相的逆流移動。該操作允許溶劑的最小用量，從而使得該方法經濟可行。已經發(fā)現這種分離技術在不同領域中的若干應用，這些領域包括碳氫化合物、工業(yè)化學品、油、糖和api。

因此，模擬移動床系統(tǒng)由串聯連接在一起的含有吸附劑的若干獨立的柱組成。洗脫劑沿第一方向通過這些柱。在系統(tǒng)中原料和洗脫劑的注入點和已分離組分的收集點依靠一系列閥門而周期性地切換。整體效應將模擬含有固體吸附劑的移動床的單個柱的操作，固體吸附劑沿洗脫劑流向的逆流方向移動。因此，如常規(guī)的固定床系統(tǒng)中的，模擬移動床系統(tǒng)由含有洗脫劑從中通過的固體吸附劑的固定床的柱組成；但在模擬移動床系統(tǒng)中，該操作達到模擬連續(xù)逆流移動床的程度。

參照圖1，示出了典型的模擬移動床色譜設備。通過考慮被分成多段(section)(更精確地說，從柱的底部到頂部被分成四個重疊的子區(qū)域i、ii、iii和iv)的含有固定相s的豎直的色譜柱來解釋模擬或真實移動床色譜分離方法的概念。借助于泵p在底部的ie處引入洗脫劑。在子區(qū)域ii和子區(qū)域iii之間的ia+b處引入待分離的組分a和b的混合物。在子區(qū)域i和子區(qū)域ii之間的sb處收集主要含有b的提取物，并且在子區(qū)域iii和子區(qū)域iv之間的sa處收集主要含有a的提余物。

在模擬移動床系統(tǒng)的情況下，通過引入點和收集點相對于固體相的移動來引起固定相s的模擬向下移動。在真實移動床系統(tǒng)的情況下，通過多個色譜柱相對于引入點和收集點的移動來引起固定相s的模擬向下移動。在圖1中，洗脫劑向上流動，并且混合物a+b注入到子區(qū)域ii和子區(qū)域iii之間。組分將根據它們與固定相的色譜相互作用(例如在多孔介質上的吸附)而移動。對固定相表現出較強的親和力的組分b(運動較慢的組分)將會較慢地被洗脫劑夾帶并且將會由延遲地跟隨著洗脫劑。對固定相表現出較弱的親和力的組分a(運動較快的組分)將會容易地被洗脫劑夾帶。如果恰當地估計和控制參數的合適設置(特別是在每個子區(qū)域中的流速)，那么將在子區(qū)域iii和子區(qū)域iv之間收集對固定相展示較弱親合性的組分a作為提余物，并且在子區(qū)域i和子區(qū)域ii之間收集對固定相展示較強親合性的組分b作為提取物。

因此，應當理解的是，示意性示出在圖1中的常規(guī)的移動床系統(tǒng)僅限于二元分級。

在下列若干專利中描述了用于模擬移動床色譜的方法和裝置，這些專利包括：us2985589、us3696107、us3706812、us3761533、fr-a-2103302、fr-a-2651148和fr-a-2651149，通過引用將這些專利的全文并入本文中。該主題還在ganetsos和barker編輯的“preparativeandproductionscalechromatography”，marceldekkerinc,newyork,1993中得以充分論述，通過引用將其全文并入本文中。

真實移動床系統(tǒng)在操作上類似于模擬移動床系統(tǒng)。然而，不是借助于閥門系統(tǒng)來變換進料混合物和洗脫劑的注入點以及被分離的組分的收集點，而是使一系列吸附單元(即，柱)相對于進料點和排出點進行物理移動。再者，操作達到模擬連續(xù)的逆流的移動床的程度。

在以下若干專利中描述了真實移動床色譜的方法和裝置，這些專利包括：us6979402、us5069883和us4764276，通過引用將這些專利并入本文中。

pufa產物的純化特別有挑戰(zhàn)性。因此，用于制備pufa產物的許多合適的原料是極其復雜的混合物，該極其復雜的混合物含有大量在色譜設備中具有非常相似的保留時間的不同組分。因此，非常難以將某些pufa與這些原料分離。然而，特別是對于藥物應用和營養(yǎng)食品應用來講，需要高純度的pufa產物。因此，當需要高純度pufa產物時，歷史上已經使用了蒸餾。然而，如上所討論，使用蒸餾作為用于難以處理的pufa的分離技術具有顯著的缺點。

已公布的國際專利申請wo-a-2011/080503，其全部內容通過引用而被并入本文，公開了一種從進料混合物有效地且以非常高純度的方式回收pufa產物的smb分離方法。然而，已經發(fā)現，難以在不使用大體積的含水醇溶劑的情況下從進料混合物有效地移出c18脂肪酸，特別是α-亞麻酸(ala)和/或γ-亞麻酸(gla)。因為許多藥物和食用油的規(guī)格需要這些脂肪酸的含量低，所以有效地除去c18脂肪酸是有利的。例如，在日本使用的某些油規(guī)格需要小于1wt％的ala含量。

于是，需要一種可以從進料混合物高效地回收pufa產物，同時最小化所得產物中存在的c18脂肪酸(例如ala和/或gla)的色譜分離方法。

技術實現要素：

現已驚奇地發(fā)現，可以通過使用混合溶劑體系由可商購的原料(諸如魚油)有效地純化具有低含量的c18脂肪酸的pufa產物(例如ala和/或gla)。

因此，本發(fā)明提供了一種從進料混合物回收多不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，包括：

(a)在第一色譜分離步驟中，使用水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述進料混合物，以獲得中間產物；以及

(b)在第二色譜分離步驟中，使用水和第二有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述中間產物，以獲得所述pufa產物，

其中，所述第二有機溶劑與所述第一有機溶劑不同，并且具有與所述第一有機溶劑的極性指數相差介于0.1和2.0之間的極性指數，

其中，所述pufa產物不是α-亞麻酸(ala)，γ-亞麻酸(gla)，亞油酸，ala甘油單酯、二酯或三酯，gla甘油單酯、二酯或三酯，亞油酸甘油單酯、二酯或三酯，alac1～c4烷基酯、glac1～c4烷基酯或者亞油酸c1～c4烷基酯，或者它們的混合物。

還提供了一種由本發(fā)明的方法獲得的pufa產物。

還提供了一種包含能由本發(fā)明的方法獲得的pufa產物的組合物。

附圖說明

圖1示出用于分離二元混合物的模擬或真實的移動床方法的基本原理。

圖2示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖3示出將dha與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖4示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖5示出將dha與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖6示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖7示出將dha與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖8示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖9示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的包括兩個模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟。

圖10示出可以執(zhí)行包括兩種模擬或真實的移動床方法的色譜分離步驟的三種方式。

圖11示出將epa與運動較快的雜質和運動較慢的雜質(即，極性較大的雜質和極性較小的雜質)分開的色譜分離步驟。

圖12示出由使用甲醇作為第一有機溶劑的本發(fā)明的方法的第一分離步驟所產生的中間產物的gc-fames跡線(trace)。

圖13示出由使用乙腈作為第二有機溶劑的本發(fā)明的方法的第二分離步驟所產生的pufa產物的gc-fames跡線。

圖14示出由使用乙腈作為第一有機溶劑的本發(fā)明的方法的第一分離步驟所產生的中間產物的gc-fames跡線。

圖15示出由使用甲醇作為第二有機溶劑的本發(fā)明的方法的第二分離步驟所產生的pufa產物的gc-fames跡線。

圖16示出含有55wt％epa乙酯的常規(guī)進料混合物的gc-fames跡線。

具體實施方式

在本發(fā)明最一般的意義上，本發(fā)明提供了一種從進料混合物回收多不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，包括：

(a)在第一色譜分離步驟中，使用水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述進料混合物，以獲得中間產物；以及

(b)在第二色譜分離步驟中，使用水和第二有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述中間產物，以獲得所述pufa產物，

其中，所述第二有機溶劑與所述第一有機溶劑不同，并且具有與所述第一有機溶劑的極性指數相差介于0.1和2.0之間的極性指數。

如本文所用的，術語“pufa產物”是指包含通常具有營養(yǎng)或藥物重要性的一種或多種多不飽和脂肪酸(pufa)和/或其衍生物的產物。通常，pufa產物是單種pufa或其衍生物?；蛘撸琾ufa產物是兩種或更多種pufa或其衍生物的混合物。

術語“多不飽和脂肪酸”(pufa)是指含有多于一個雙鍵的脂肪酸。這種pufa為本領域技術人員所周知。如本文所用的，pufa衍生物是甘油單酯、二酯或三酯，酯，磷脂，酰胺，內酯或鹽的形式的pufa。優(yōu)選甘油單酯、二酯和三酯以及酯。更優(yōu)選甘油三酯和酯。進一步更優(yōu)選酯。酯通常為烷基酯，優(yōu)選c1～c6的烷基酯，更優(yōu)選c1～c4的烷基酯。酯的實例包括甲酯和乙酯。最優(yōu)選乙酯。

通常，pufa產物是至少一種ω-3或ω-6pufa或者其衍生物，優(yōu)選至少一種ω-3pufa或者其衍生物。

ω-3pufa的實例包括二十碳三烯酸(ete)、二十碳四烯酸(eta)、二十碳五烯酸(epa)、二十二碳五烯酸(dpa)和二十二碳六烯酸(dha)。優(yōu)選epa、dpa和dha。最優(yōu)選epa和dha。

ω-6pufa的實例包括二十碳二烯酸、二高-γ-亞麻酸(dgla)、花生四烯酸(ara)、二十二碳二烯酸、腎上腺酸以及二十二碳五(ω-6)烯酸。優(yōu)選ara和dgla。

優(yōu)選地，pufa產物是epa、dha、它們的衍生物或它們的混合物。典型的衍生物包括epa和dha的甘油單酯、二酯和三酯；以及epa和dha的酯，優(yōu)選烷基酯，諸如c1～c4烷基酯。

更優(yōu)選地，pufa產物是epa、dha或它們的衍生物。典型的衍生物包括epa和dha的甘油單酯、二酯和三酯；以及epa和dha的酯，優(yōu)選烷基酯，諸如c1～c4烷基酯。

更優(yōu)選地，pufa產物是二十碳五烯酸(epa)、二十二碳六烯酸(dha)、epa甘油三酯、dha甘油三酯、epa乙酯或者dha乙酯。

特別優(yōu)選地，pufa產物是epa、dha、epa乙酯或dha乙酯。

在一個實施方式中，pufa產物是epa和/或epa乙酯(ee)。

在另一個實施方式中，pufa產物是dha和/或dha乙酯(ee)。

在又一個實施方式中，pufa產物是epa和dha和/或epaee和dhaee的混合物。

在最優(yōu)選的實施方式中，第二分離步驟中獲得的pufa產物是epa或epa衍生物，例如epa乙酯；并且所獲得的純度大于90wt％，優(yōu)選大于95wt％，更優(yōu)選大于97wt％，更加優(yōu)選大于98wt％，仍更優(yōu)選大于98.4wt％。優(yōu)選地，第二步驟中獲得的pufa產物是epa或epa衍生物，例如epa乙酯，并且所獲得的純度介于98wt％和99.5wt％之間。

通常，除了所述pufa產物，在本發(fā)明的色譜分離方法中收集另外的次要pufa產物。優(yōu)選地，pufa產物是epa或其衍生物，并且另外的次要pufa產物是dha或其衍生物。

在本發(fā)明的進一步的實施方式中，該方法配置為收集pufa產物，該pufa產物是epa和dha或它們的衍生物的濃縮混合物。因此，使用含有epa、dha、比epa和dha極性更大的組分以及比epa和dha極性更小的組分的進料混合物。

通常，pufa產物含有小于1wt％的α-亞麻酸(ala)、ala甘油單酯、二酯和三酯以及alac1～c4烷基酯雜質。更通常，pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是ala及其衍生物。典型的ala衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物含有小于1wt％的γ-亞麻酸(gla)，gla甘油單酯、二酯和三酯以及glac1～c4烷基酯雜質。更通常，pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是gla及其衍生物。典型的gla衍生物如上文關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物含有小于1wt％的c18脂肪酸雜質，c18脂肪酸甘油單酯、二酯和三酯雜質以及c18脂肪酸烷基酯雜質。更通常，pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是c18脂肪酸及其衍生物。典型的c18脂肪酸衍生物是如上文關于pufa衍生物所定義的。如本文所使用的，c18脂肪酸是具有直烴鏈或支烴鏈的c18脂肪族單羧酸。典型的c18脂肪酸包括：硬脂酸(c18:0)，油酸(c18:1n9)、異油酸(c18:1n7)、亞油酸(c18:2n6)、γ-亞麻酸/gla(c18:3n6)、α-亞麻酸/ala(c18:3n3)和十八碳四烯酸/sda(c18:4n3)。

為了避免疑惑，在這些實施方式中，所有指定雜質的最大量為1wt％。

如上所述，pufa產物中上述雜質的量通常小于1wt％。優(yōu)選地，上述雜質的量小于0.5wt％，更優(yōu)選小于0.25wt％，更加優(yōu)選小于0.1wt％，仍更優(yōu)選小于0.05wt％，仍更優(yōu)選小于0.01wt％，仍更優(yōu)選小于0.001wt％，仍更優(yōu)選小于0.0001wt％，仍更優(yōu)選小于0.00001wt％。

在某些優(yōu)選的實施方式中，pufa產物基本上不含有上述雜質。

pufa產物不是ala，gla，亞油酸，ala甘油單酯、二酯或三酯，gla甘油單酯、二酯或三酯，亞油酸甘油單酯、二酯或三酯，alac1～c4烷基酯，glac1～c4烷基酯或者亞油酸c1～c4烷基酯，或者它們的混合物。通常，pufa產物不是ala、gla、亞油酸，或者它們的衍生物或混合物。典型的ala、gla和亞油酸衍生物是如上文關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物不是c18pufa，c18pufa甘油單酯、二酯或三酯，或者c18pufa烷基酯。因而，本發(fā)明提供了一種從進料混合物回收多不飽和脂肪酸(pufa)產物的色譜分離方法，包括：

(a)在第一色譜分離步驟中，使用水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述進料混合物，以獲得中間產物；以及

(b)在第二色譜分離步驟中，使用水和第二有機溶劑的混合物作為洗脫劑來純化所述中間產物，以獲得所述pufa產物，

其中，所述第二有機溶劑與所述第一有機溶劑不同，并且具有與所述第一有機溶劑的極性指數相差介于0.1和2.0之間的極性指數，

其中，所述pufa產物不是c18pufa，c18pufa甘油單酯、二酯或三酯，或者c18pufa烷基酯。

更通常，pufa產物不是c18pufa或c18pufa衍生物。典型的c18pufa包括亞油酸(c18:2n6)、gla(c18:3n6)和ala(c18:3n3)。

適用于通過本發(fā)明的方法分離的進料混合物可以由天然來源和合成來源獲得，該天然來源包括植物油和動物油和脂肪，該合成來源包括從經基因修飾的植物、動物和包括酵母的微生物獲得的油。實例包括魚油、藻油和微藻油以及植物油，例如琉璃苣油，藍薊油和月見草油。在一個實施方式中，進料混合物是魚油。在另一個實施方式中，進料混合物是藻油。當期望的pufa產物是epa和/或dha時，藻油特別合適。當期望的pufa產物是epa時，經基因修飾的酵母特別合適。

在特別優(yōu)選的實施方式中，進料混合物是魚油或魚油衍生的原料。已經有利地發(fā)現，當使用魚油或魚油衍生的原料時，通過本發(fā)明的方法能夠以大于90％的純度，優(yōu)選為大于95％的純度，更優(yōu)選為大于97％的純度，甚至更優(yōu)選為大于98％的純度，更加優(yōu)選為大于98.4％的純度，例如介于98％和99.5％之間的純度生產epa或epa乙酯pufa產物。

在通過本發(fā)明的方法分離之前，進料混合物可以經歷化學處理。例如，它可以經歷甘油酯酯交換或甘油酯水解，在某些情況下，接著經歷選擇性過程，諸如結晶、分子蒸餾、尿素分離、硝酸銀或其他金屬鹽溶液的萃取、碘內酯化反應或超臨界流體分離?；蛘?，進料混合物可以直接使用而沒有初始處理步驟。

進料混合物通常含有pufa產物以及至少一種極性較大的組分和至少一種極性較小的組分。極性較小的組分與pufa產物相比對本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有更強的附著力。在操作期間，這種極性較小的組分通常優(yōu)先于液體洗脫劑相而隨著固體吸附劑相移動。極性較大的組分與pufa產物相比對本發(fā)明的方法中使用的吸附劑具有更弱的附著力。在操作期間，這種極性較大的組分通常優(yōu)先于固體吸附劑相而隨著液體洗脫劑相移動。一般而言，極性較大的組分將分離進入提余物流，而極性較小的組分將分離進入提取物流。

進料混合物通常含有pufa產物和如上定義的至少一種c18脂肪酸雜質。因而，更通常，進料混合物包含pufa產物和至少一種c18脂肪酸和/或其衍生物。典型的c18脂肪酸衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。優(yōu)選地，進料混合物含有pufa產物和至少一種c18脂肪酸雜質，該c18脂肪酸雜質選自：硬脂酸(c18:0)，油酸(c18:1n9)、異油酸(c18:1n7)、亞油酸(c18:2n6)、γ-亞麻酸/gla(c18:3n6)、α-亞麻酸(c18:3n3)和十八碳四烯酸/sda(c18:4n3)，以及它們的衍生物。

優(yōu)選地，進料混合物包含(i)所述pufa產物，和/或所述pufa產物的甘油單酯、二酯或三酯，和/或所述pufa產物的c1～c4烷基酯，以及

(ii)ala和/或ala的甘油單酯、二酯或三酯，和/或ala的c1～c4烷基酯。

優(yōu)選地，進料混合物包含(i)所述pufa產物，和/或所述pufa產物的甘油單酯、二酯或三酯，和/或所述pufa產物的c1～c4烷基酯，以及

(ii)gla和/或gla的甘油單酯、二酯或三酯，和/或gla的c1～c4烷基酯。

更優(yōu)選地，進料混合物包含(i)所述pufa產物，和/或所述pufa產物的甘油單酯、二酯或三酯，和/或所述pufa產物的c1～c4烷基酯，以及

(ii)ala和/或gla，和/或ala的甘油單酯、二酯或三酯，和/或gla的甘油單酯、二酯或三酯，和/或ala的c1～c4烷基酯，和/或gla的c1～c4烷基酯。

在pufa產物含有小于1wt％的上文列舉的c18脂肪酸雜質的實施方式中，進料混合物通常含有所列舉的c18脂肪酸雜質。因而，本發(fā)明的特別優(yōu)點是可以通過本發(fā)明的方法將進料混合物中存在的c18脂肪酸雜質的量降低到低水平。例如，當pufa產物含有小于1wt％的ala，ala甘油單酯、二酯和三酯以及alac1～c4烷基酯時，進料混合物通常含有ala，ala甘油單酯、二酯和三酯和/或alac1～c4烷基酯。當pufa產物含有小于1wt％的gla，gla甘油單酯、二酯和三酯以及glac1～c4烷基酯時，進料混合物通常含有gla，gla甘油單酯、二酯和三酯和/或glac1～c4烷基酯。當pufa產物含有小于1wt％的c18脂肪酸，c18脂肪酸甘油單酯、二酯和三酯以及c18脂肪酸烷基酯時，進料混合物通常含有c18脂肪酸，c18脂肪酸甘油單酯、二酯和三酯和/或c18脂肪酸烷基酯。

極性較大和極性較小的組分的實例包括(1)存在于天然油(例如，海洋油或植物油)中的其他組分，(2)貯藏、精煉和預先濃縮步驟期間形成的副產物，以及(3)來自預先濃縮或純化步驟期間利用的溶劑或試劑的污染物。

(1)的實例包括其他不需要的pufa；飽和脂肪酸；固醇，例如膽固醇；維生素；以及環(huán)境致污物，諸如多氯聯苯(pcb)、多環(huán)芳烴(pah)殺蟲劑、有機氯殺蟲劑、二噁英和重金屬。pcb、pah、二噁英和有機氯殺蟲劑都是高度非極性的組分。

(2)的實例包括來自pufa產物的同分異構體以及氧化或分解產物，例如，脂肪酸及其衍生物的自氧化聚合產物。

(3)的實例包括尿素，其可以加入用于從進料混合物中去除飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸。

優(yōu)選地，進料混合物是含pufa的海洋油(例如，魚油)，更優(yōu)選的是包含epa和/或dha的海洋油(例如，魚油)。

通過本發(fā)明的方法制備濃縮的epa(ee)的典型的進料混合物包含50～75％的epa(ee)、0～10％的dha(ee)以及包括其他必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其他組分。

通過本發(fā)明的方法制備濃縮epa(ee)的優(yōu)選的進料混合物包括：55％的epa(ee)、5％的dha(ee)以及包括其他必要的ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸的其他組分。dha(ee)比epa(ee)極性更小。

通過本發(fā)明的方法制備濃縮的dha(ee)的典型的進料混合物包含50～75％的dha(ee)、0～10％的epa(ee)以及包括其他必要的ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸的其他組分。

通過本發(fā)明的方法制備濃縮dha(ee)的優(yōu)選的進料混合物包括：75％的dha(ee)、7％的epa(ee)以及包括其他必要的ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸的其他組分。epa(ee)比dha(ee)極性更大。

通過本發(fā)明的方法制備epa(ee)和dha(ee)的濃縮混合物的典型的進料混合物包括：大于33％的epa(ee)和大于22％的dha(ee)。

本發(fā)明的方法涉及至少兩個色譜分離步驟，其中，在每個步驟中使用水和不同有機溶劑的混合物作為洗脫劑。分別使用水與第一有機溶劑和第二有機溶劑的混合物來執(zhí)行第一分離步驟和第二分離步驟。

通常，洗脫劑均不處于超臨界狀態(tài)。通常，兩種洗脫劑都為液體。

第一有機溶劑和第二有機溶劑通常選自醇、醚、酯、酮和腈。優(yōu)選醇和腈。

醇溶劑為本領域技術人員所眾所周知。醇通常為短鏈醇。醇的化學式通常為roh，其中，r是直鏈或支鏈的c1～c6烷基。該c1～c6烷基優(yōu)選為未取代的。醇的實例包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇和叔丁醇。優(yōu)選甲醇和乙醇。更優(yōu)選甲醇。

醚溶劑為本領域技術人員所眾所周知。醚通常為短鏈醚。醚通常具有化學式r-o-r’，其中r和r’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。該c1～c6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的醚包括二乙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚(mtbe)。

酯溶劑為本領域技術人員所眾所周知。酯通常為短鏈酯。酯通常具有化學式r-(c＝o)-o-r’，其中r和r’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。優(yōu)選的酯包括乙酸甲酯和乙酸乙酯。

酮溶劑為本領域技術人員所眾所周知。酮通常為短鏈酮。酮通常具有化學式r-(c＝o)-r’，其中r和r’相同或不同，并且代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。該c1～c6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的酮包括丙酮、甲乙酮和甲基異丁基酮(mibk)。

腈溶劑為本領域技術人員所眾所周知。腈通常為短鏈腈。腈通常具有化學式r-cn，其中，r代表直鏈或支鏈的c1～c6烷基。該c1～c6烷基優(yōu)選為未取代的。優(yōu)選的腈包括乙腈。

第二有機溶劑與第一有機溶劑不同。

溶劑的極性指數(p’)是溶劑極性如何的已知計量標準。極性指數數值越大表示溶劑的極性較高。通常通過測量溶劑與各種測試溶質的相互作用的能力來確定極性指數。更通常，溶劑的極性指數(p’)是如burdick和jackson的溶劑指南(alliedsignal,1997)所定義，其全部內容通過引入而并入本文。參考根據它們的不同極性對溶劑進行分級的數值指數，burdick和jackson對溶劑進行分級。burdick和jackson指數基于溶劑的結構。

按照burdick和jackson，各種常用溶劑的極性指數(p’)列于下表。

第二有機溶劑具有與第一有機溶劑的極性指數相差介于0.1和2.0之間的極性指數。因而，當第一有機溶劑的極性指數為p1，第二有機溶劑的極性指數為p2時，|p1-p2|是0.1～2.0。

通常，第二有機溶劑的極性指數與第一有機溶劑的極性指數相差至少0.2，優(yōu)選至少0.3，更優(yōu)選至少0.4，更加優(yōu)選至少0.5，并且還更優(yōu)選至少0.6。

通常，第二有機溶劑的極性指數與第一有機溶劑的極性指數相差至多1.8，優(yōu)選至多1.5，更優(yōu)選至多1.3，更加優(yōu)選至多1.0，并且仍更優(yōu)選至多0.8。

優(yōu)選地，第二有機溶劑的極性指數與第一有機溶劑的極性指數相差介于0.2和1.8之間，更優(yōu)選介于0.3和1.5之間，更加優(yōu)選介于0.4和1.3之間，仍更優(yōu)選介于0.5和1.0之間，并且最優(yōu)選介于0.6和0.8之間。

通常，第一有機溶劑和第二有機溶劑與水混溶。更通常，第一有機溶劑和第二有機溶劑具有3.9或更大的極性指數。優(yōu)選地，第一有機溶劑和第二有機溶劑選自四氫呋喃、異丙醇、正丙醇、甲醇、乙醇、乙腈、1,4-二噁烷、n,n-二甲基甲酰胺和二甲基亞砜。

通常，第一有機溶劑與水的比例為以體積份計99.9:0.1～75:25，優(yōu)選為以體積份計99.5:0.5～80:20。如果第一有機溶劑是甲醇，則甲醇與水的比例通常為以體積份計99.9:0.1～85:15，優(yōu)選為以體積份計99.5:0.5～88:12。如果第一有機溶劑是乙腈，則乙腈與水的比例通常為以體積份計99:1～75:25，優(yōu)選為以體積份計96:4～80:20。

通常，第二有機溶劑與水的比例為以體積份計99.9:0.1～75:25，優(yōu)選為以體積份計93:7～85:15。如果第二有機溶劑是甲醇，則甲醇與水的比例通常為以體積份計95:5～85:15，優(yōu)選為以體積份計93:7～90:10。如果第二有機溶劑是乙腈，則乙腈與水的比例通常為以體積份計90:10～80:20，優(yōu)選為以體積份計88:12～85:15。

通常，第一有機溶劑和第二有機溶劑中的一個是乙腈。

通常，第一有機溶劑和第二有機溶劑中的一個是甲醇。

優(yōu)選地，第一有機溶劑和第二有機溶劑選自乙腈和甲醇。因而，優(yōu)選的是，(i)第一有機溶劑是甲醇而第二有機溶劑是乙腈，或者(ii)第一有機溶劑是乙腈而第二有機溶劑是甲醇。

更優(yōu)選地，第一有機溶劑是甲醇而所述第二有機溶劑是乙腈，并且，(a)甲醇與水的比例為以體積份計99.9:0.1～85:15，優(yōu)選為99.5:0.5～88:12，和/或(b)乙腈與水的比例為以體積份計90:10～80:20，優(yōu)選為以體積份計88:12～85:15。在某些實施方式中，優(yōu)選的是，(a)甲醇與水的比例為以體積份計91:9～93:7，和/或(b)乙腈與水的比例為體積份計86:14～88:12。

或者，第一有機溶劑是乙腈而所述第二有機溶劑是甲醇，并且，(a)乙腈與水的比例為以體積份計99:1～75:25，優(yōu)選為以體積份計96:4～80:20，和/或(b)甲醇與水的比例為以體積份計95:5～85:15，優(yōu)選為以體積份計93:7～90:10。在某些實施方式中，優(yōu)選的是，(a)乙腈與水的比例為以體積份計86:14～88:12，和/或(b)甲醇與水的比例為體積份計87:13～89:11。

每個色譜分離步驟通常涉及使進料混合物通過一個或多個色譜柱。因而，第一色譜分離步驟通常包括使進料混合物通過一個或多個含有水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑的色譜柱。通常，第二色譜分離步驟包括使中間產物通過一個或多個含有水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑的色譜柱。優(yōu)選地，第一色譜分離步驟包括使進料混合物通過一個或多個含有水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑的色譜柱，并且第二色譜分離步驟包括使中間產物通過一個或多個含有作為水和第一有機溶劑的混合物洗脫劑的色譜柱。任何已知的色譜柱可以用于所要求保護的方法。

一個或多個色譜柱通常含有吸附劑。色譜分離技術領域中已知的常規(guī)吸附劑可以用于本發(fā)明的方法。當使用多于一個色譜柱時，每個色譜柱可以含有相同的或不同的吸附劑。通常，當使用多于一個色譜柱時，每個柱含有相同的吸附劑。這種通常使用的材料實例是聚合物珠粒，優(yōu)選用dvb(二乙烯基苯)成網的聚苯乙烯；和硅膠，優(yōu)選具有c8或c18烷烴的反相鍵合的硅膠，特別是c18烷烴的反相鍵合的硅膠。優(yōu)選c18鍵合的反相硅膠。本發(fā)明的方法中使用的吸附劑優(yōu)選是非極性的。

吸附劑固定相材料的形狀可以是例如球形或非球形的珠粒，優(yōu)選為基本上球形的珠粒。這種珠粒的直徑通常為5～500微米，優(yōu)選為10～500微米，更優(yōu)選為15～500微米，更優(yōu)選為40～500微米，更優(yōu)選為100～500微米，更優(yōu)選為250～500微米，更加優(yōu)選為250～400微米，最優(yōu)選為250～350微米。在一些實施方式中，可以使用的珠粒的直徑為5～35微米，通常為10～30微米，優(yōu)選為15～25微米。一些優(yōu)選的粒徑多少比過去的模擬和真實移動床方法中使用的珠粒的粒徑更大。使用較大的顆粒能夠使較低壓力的洗脫劑用于該系統(tǒng)。依次地，這在設備的成本節(jié)約、效率和壽命方面上具有優(yōu)勢。已驚奇地發(fā)現，大粒徑的吸附劑珠粒可以用于本發(fā)明的方法(具有它們的相關優(yōu)勢)，而在分辨率上沒有任何損失。

使用的柱的尺寸沒有特別受限制，并將在一定程度上取決于待純化的進料混合物的體積。技術人員將能夠易于確定適當大小的柱以應用。每個柱的直徑通常為10～1000mm，優(yōu)選為10～500mm，更優(yōu)選為25～250mm，甚至更優(yōu)選50～100mm，并最優(yōu)選為70～80mm。每個柱的長度通常為10～300cm，優(yōu)選為10～200cm，更優(yōu)選為25～150cm，甚至更優(yōu)選為70～110cm，并更優(yōu)選為80～100cm。

任何已知的色譜設備均可以用于每個分離步驟的目的。每個分離步驟中使用的色譜柱數沒有特別限制。

通常，在室溫或高于室溫的溫度下執(zhí)行本發(fā)明的方法。優(yōu)選地，在高于室溫的溫度下執(zhí)行該方法?？梢栽谙嗤臏囟然虿煌臏囟认?，優(yōu)選在相同的溫度下執(zhí)行第一分離步驟和第二分離步驟。

通常，進料混合物通過的色譜柱中的至少一個的溫度高于室溫。更通常，所使用的所有色譜柱的溫度高于室溫。

因而，每個色譜分離步驟通常涉及使進料混合物通過一個或多個色譜柱，并且那些色譜柱中的至少一個的溫度高于室溫。更通常，所使用的所有色譜柱的溫度高于室溫。

如所將要理解的，如果至少一個色譜柱處于高于室溫的溫度下，則對分離方法重要的是柱的內部。因而，通常，色譜柱內的洗脫劑和吸附劑可以處于高于室溫的溫度下。當然，可以通過內部機構(例如通過加熱洗脫劑和/或進料混合物)和/或外部機構(例如通過用任何已知常規(guī)機構加熱色譜柱的外面)在至少一個色譜柱里面獲取所需的溫度。

通常，通過加熱洗脫劑和/或進料混合物來獲取高溫。這具有內部加熱柱的效果。

因此，進料混合物通過的色譜柱中的至少一個的溫度也可被測量為洗脫劑的溫度。因此，通常，第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟中使用的洗脫劑的溫度高于室溫。

或者，通過加熱柱來獲取色譜柱中的至少一個的所需溫度。使用例如電加熱罩、熱水套或盤管(coil)或者通過熱輻射燈來進行加熱。通常，可以加熱一個或多個色譜柱的內部和/或外部。

色譜柱中的至少一個的所需溫度可以通過加熱該柱和/或含水有機溶劑洗脫劑和/或進料混合物來實現。

通常，高于室溫的溫度大于30℃，優(yōu)選大于35℃，更優(yōu)選大于40℃，甚至更優(yōu)選大于45℃，甚至更優(yōu)選大于50℃，甚至更優(yōu)選大于55℃，并且甚至更優(yōu)選大于57℃。在某些實施方式中，56℃的溫度是有利的。

通常，高于室溫的溫度為至多100℃，優(yōu)選至多95℃，更優(yōu)選至多90℃，甚至更優(yōu)選至多85℃，甚至更優(yōu)選至多80℃，甚至更優(yōu)選至多75℃，并且甚至更優(yōu)選至多70℃。

因此，典型的溫度范圍為30～100℃、35～95℃、40～90℃、45～85℃、50～80℃、55～75℃或者57～70℃。

優(yōu)選的溫度范圍為40～70℃，優(yōu)選為50～67℃，更優(yōu)選56～65℃，并且甚至更優(yōu)選57～63℃。

在某些實施方式中，可以使用單個色譜柱，優(yōu)選單個固定色譜柱。通常使用已知的固定床色譜設備執(zhí)行這種方式的分離。這種方式的分離可被稱為“固定床”色譜。通常，第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟中的至少一個涉及至少一個，例如一個“固定床”色譜步驟。

在其他實施方式中，使用多于一個色譜柱。這可以涉及使進料混合物通過兩個或更多個串聯或并聯布置的可相同或不同的色譜柱。在此實施方式中使用的柱數沒有特別限制，但是通常不超過三十個柱。

使用多個色譜柱的一個具體實施方式是模擬或真實的移動床色譜。

模擬和真實的移動床色譜是本領域技術人員所熟知的。任何已知的模擬或真實移動床色譜設備均可以用于本發(fā)明的方法的目的，只要設備按照本發(fā)明的方法使用。如果依照本發(fā)明的方法進行配置，us2985589、us3696107、us3706812、us3761533、fr-a-2103302、fr-a-2651148、fr-a-2651149、us6979402、us5069883和us4764276中描述的這些設備都可以使用。也可以采用例如wo-a-2011/080503中公開的smb方法。

可以使用固定床色譜設備或者如本文所討論的一個或多個模擬或真實的移動床色譜設備來執(zhí)行第一分離步驟和第二分離步驟。

通常，第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到固定床色譜設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到固定床色譜設備中。因而，通常，使用固定床色譜設備執(zhí)行第一色譜分離步驟，并且使用固定床色譜設備執(zhí)行第二色譜分離步驟。

或者，第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到固定床設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中。因而，通常，使用固定床設備執(zhí)行第一色譜分離步驟，并且使用模擬或真實的移動床色譜設備執(zhí)行第二色譜分離步驟。

或者，第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到固定床色譜設備中。因而，通常，使用模擬或真實的移動床色譜設備執(zhí)行第一色譜分離步驟，并且使用固定床色譜設備執(zhí)行第二色譜分離步驟。

或者，第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中。因而，通常，使用模擬或真實移動的床色譜設備執(zhí)行第一色譜分離步驟，并且使用模擬或真實移動床色譜設備執(zhí)行第二色譜分離步驟。

上述第一色譜分離步驟可以由單次色譜分離或者兩次或更多次色譜分離組成，其前提是每次分離使用水和第一有機溶劑的混合物作為洗脫劑。

上述第二色譜分離步驟可以由單次色譜分離或者兩次或更多次色譜分離組成，其前提是每次分離使用水和第二有機溶劑的混合物作為洗脫劑。

通常，第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟能夠涉及使用例如圖1中描繪的常規(guī)設備的單個smb分離步驟的應用。這種方式的分離可被稱為“單次通過”smb。通常，第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟中的至少一個涉及至少一個，例如一個“單次通過”smb步驟。

或者，第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟可以涉及多次smb分離的應用。

在一個實施方式中，可以按照wo-a-2011/080503和pct/gb2012/051591(通過引用將其全部并入本文)的描述來執(zhí)行第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟。wo-a-2011/080503和pct/gb2012/051591中指定的優(yōu)選方法條件是此實施方式的優(yōu)選方法條件，并且可以由wo-a-2011/080503和pct/gb2012/051591而被并入。

wo-a-2011/080503和pct/gb2012/051591中公開的方法涉及將輸入流引入到具有多個連接的色譜柱的模擬或真實移動床色譜設備，這些色譜柱含有含水有機溶劑作為洗脫劑，其中，該設備具有包含至少第一區(qū)域和第二區(qū)域的多個區(qū)域，每個區(qū)域具有從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提取物流和提余物流，并且其中，(a)從第一區(qū)域中的柱中收集含有pufa產物和極性較大的組分的提余物流，并且將其引入到第二區(qū)域中的不相鄰的柱中，和/或(b)從第二區(qū)域中的柱中收集含有pufa產物和極性較小的組分的提取物流并且將其引入到第一區(qū)域中的不相鄰的柱中，在每個區(qū)域中將所述pufa產物與輸入流的不同組分分離。這種方式的分離可被稱為“二次通過”smb方法。

在此“二次通過”smb方法中，術語“區(qū)域”是指多個連接的色譜柱，該多個連接的色譜柱含有含水有機溶劑作為洗脫劑，并且具有注入流的一個或多個注入點，水和/或有機溶劑、從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提余物取出流，以及從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提取物取出流的一個或多個注入點。通常，每個區(qū)域僅具有輸入流的一個注入點。在一個實施方式中，每個區(qū)域僅具有含水有機溶劑洗脫劑的一個注入點。在另一個實施方式中，每個區(qū)域具有水和/或有機溶劑的兩個或更多個注入點。

在此“二次通過”smb方法中，術語“輸入流”是指在上述smb方法用于第一色譜分離步驟時的進料混合物，并且是指在上述smb方法用于第二色譜分離步驟時的中間產物。

在此“二次通過”smb方法中，術語“含水有機溶劑”在上述smb方法用于第一色譜分離步驟時是指水和第一有機溶劑的混合物，并且在上述smb方法用于第二色譜分離步驟時是指水和第二有機溶劑的混合物。

術語“提余物”為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬的移動床色譜的上下文中，它是指與固體吸附劑相相比，隨液體洗脫劑相移動更迅速的組分的流。因此，與輸入流相比，提余物流通常富含極性較大的組分，并缺乏極性較小的組分。

術語“提取物”為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬的移動床色譜的上下文中，它是指與液體洗脫劑相相比隨固體吸附劑相移動更迅速的組分的流。因此，與輸入流相比，提取物流通常富含極性較小的組分，并缺乏極性較大的組分。

如本文所使用的，術語“不相鄰的”是指在例如相同設備中，由一個或多個柱，優(yōu)選3個或更多個柱，更優(yōu)選5個或更多個柱，最優(yōu)選約5個柱分開的柱。

“二次通過”smb方法示于圖11中。將包含pufa產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的輸入流f引入到第一區(qū)域中的柱5的頂部。含水有機溶劑解吸劑引入到第一區(qū)域中的柱1的頂部。在第一區(qū)域中，從柱2的底部移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出pufa產物(b)和極性較大的組分(c)作為提余物流r1。然后在柱12的頂部將提余物流r1引入到第二區(qū)域。含水有機溶劑解吸劑被引入到第二區(qū)域中的柱9的頂部。在第二區(qū)域中，在柱14的底部處，移出極性較大的組分(c)作為提余物流r2。在柱10的底部處，收集pufa產物(b)作為提取物流e2。

在此“二次通過”smb方法中，含水有機溶劑通常被引入到第一區(qū)域中的柱1的頂部。

在此“二次通過”smb方法中，含水有機溶劑通常被引入到第二區(qū)域中的柱9的頂部。

在此“二次通過”smb方法中，輸入流通常被引入到第一區(qū)域中的柱5的頂部。

在此“二次通過”smb方法中，通常從第一區(qū)域中的柱7的底部收集第一提余物流并且將其引入到第二區(qū)域中的柱12的頂部。在引入到柱12之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。

在此“二次通過”smb方法中，通常從第一區(qū)域中的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中，并且部分再次被引入到第一區(qū)域中的柱3的頂部。經由來自第一區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一區(qū)域中的速率是將液體從此容器泵送到柱3的頂部的速率。

在此“二次通過”smb方法中，通常從第二區(qū)域中的柱14的底部移出第二提余物流。

在此“二次通過”smb方法中，通常從第二區(qū)域中的柱10的底部收集第二提取物流。此第二提取物流通常含有pufa產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中，并且部分再次被引入到第二區(qū)域中的柱11的頂部。經由來自第二區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二區(qū)域中的速率是將液體從此容器泵送到柱11的頂部的速率。

在此“二次通過”smb方法中，經由來自第一區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一區(qū)域的速率通常比經由來自第二區(qū)域的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二區(qū)域的速率更快。在此“二次通過”smb方法中，洗脫劑通常在每個區(qū)域中基本上相同。

通常，第一色譜分離步驟和第二色譜分離步驟中的至少一個涉及至少一個，例如一個上述“二次通過”smb方法過程。

在備選的實施方式中，可以按照國際專利申請pct/gb2012/051596或pct/gb2012/051597(通過引用將其全部并入本文)的描述來執(zhí)行第一色譜分離步驟和/或第二色譜分離步驟。這些實施方式涉及：

(i)在具有含有含水有機溶劑作為洗脫劑的多個連接的色譜柱的模擬或真實的移動床色譜設備中，在第一smb步驟中純化輸入流以獲得第一產物；以及

(ii)在使用具有含有含水有機溶劑作為洗脫劑的多個連接的色譜柱的模擬或真實的移動床色譜設備中，在第二smb步驟中純化(i)中獲得的第一產物以獲得第二產物；

其中，

(a)在同一色譜設備上依次進行第一smb步驟和第二smb步驟，在第一smb步驟和第二smb步驟之間回收第一產物并且在第一smb步驟和第二smb步驟之間調節(jié)色譜設備中的方法條件，使得在每個smb步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離；或者

(b)在單獨的第一色譜設備和第二色譜設備上分別進行第一smb步驟和第二smb步驟，將從第一smb步驟中所獲得的第一產物引入到第二色譜柱中，并且在每個smb步驟中將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。這種方式的分離可被稱為“背對背(back-to-back)”smb。

為了避免疑惑，如果第一色譜分離步驟是上述“背對背”smb方法，則每個smb步驟中的洗脫劑是水和第一有機溶劑的混合物。如果第二色譜分離步驟是“背對背”smb方法，則每個smb步驟中的洗脫劑是水和第二有機溶劑的混合物。

在此“背對背”smb方法中，術語“模擬或真實的移動床色譜設備”通常是指多個連接的色譜柱，該多個連接的色譜柱含有含水有機溶劑作為洗脫劑，并且具有注入流的一個或多個注入點，水和/或有機溶劑、從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提余物取出流，以及從所述多個連接的色譜柱中能夠收集液體的提取物取出流的一個或多個注入點。

在此“背對背”smb方法中使用的色譜設備具有含有含水有機溶劑作為洗脫劑的單列的串聯連接的色譜柱。通常，每個色譜柱連接到設備中與該柱相鄰的兩個柱。因此，來自該列中的給定柱的輸出連接到該列中的相鄰的柱的輸入，相對于該列中的洗脫劑的流動是下游。因此，洗脫劑可以繞著連接的色譜柱的列流動。通常，沒有色譜柱連接到該設備中的不相鄰的柱。

在此“背對背”smb方法中，“輸入流”是指在上述smb方法用于第一色譜分離步驟時的進料混合物，并且是指在上述smb方法用于第二色譜分離步驟時的中間產物。

在此“背對背”smb方法中，“含水有機溶劑”在上述“背對背”smb方法用于第一色譜分離步驟時是指水和第一有機溶劑的混合物，并且在上述“背對背”smb方法用于第二色譜分離步驟時是指水和第二有機溶劑的混合物。第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的有機溶劑相同。第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的有機溶劑與水的比例可以相同或不同。

在此“背對背”smb方法中，“第二產物”在上述smb方法用于第一色譜分離步驟時是指中間產物，并且在上述smb方法用于第二色譜分離步驟時是指pufa產物。

通常，在此“背對背”smb方法中，每個設備僅具有輸入流的一個注入點。在一個實施方式中，每個設備僅具有含水有機溶劑洗脫劑的一個注入點。在另一個實施方式中，每個設備具有水和/或有機溶劑的兩個或更多個注入點。

術語“提余物”為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬的移動床色譜的上下文中，它是指與固體吸附劑相相比隨液體洗脫劑相移動更迅速的組分的流。因此，與進料流相比，提余物流通常富含極性較大的組分，并缺乏極性較小的組分。

術語“提取物”為本領域技術人員所眾所周知。在真實和模擬的移動床色譜的上下文中，它是指與液體洗脫劑相相比隨固體吸附劑相移動更迅速的組分的流。因此，與進料流相比，提取物流通常富含極性較小的組分，并缺乏極性較大的組分。

在此“背對背”smb方法中，每個設備中使用的柱數沒有特別限制。技術人員將能夠易于確定適當的柱數以使用。柱數通常為4個或更多個，優(yōu)選為6個或更多個，更優(yōu)選為8個或更多個，例如4、5、6、7、8、9或10個柱。在優(yōu)選的實施方式中，使用5個或6個柱，更優(yōu)選6個柱。在另一個優(yōu)選的實施方式中，使用7個或8個柱，更優(yōu)選8個柱。通常，有不多于25個柱，優(yōu)選不多于20個柱，更優(yōu)選不多于15個柱。

在此“背對背”smb方法中，第一分離步驟和第二分離步驟中使用的色譜設備通常含有相同的柱數。對于某些應用，它們可以具有不同的柱數。

在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱通常具有相同的尺寸，但對于某些應用，可以具有不同的尺寸。

柱的流速受限于一系列柱中的最大壓力并且取決于柱的尺寸和固體相的粒徑。本領域技術人員將能夠易于建立每個柱尺寸的所需流速以確保充分解吸。直徑較大的柱一般將需要較高的流速以保持穿過柱的線性流動。

在此“背對背”smb方法中，對于上面所概述的典型的柱大小，通常，洗脫劑流入第一smb分離步驟中使用的色譜設備的流速為1～4.5l/min，優(yōu)選為1.5～2.5l/min。通常，來自第一smb分離步驟中使用的色譜設備的提取物的流速為0.1～2.5l/min，優(yōu)選為0.5～2.25l/min。在來自第一smb分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環(huán)的流速通常為0.7～1.4l/min，優(yōu)選為約1l/min。通常，來自第一smb分離步驟中使用的色譜設備的提余物的流速為0.2～2.5l/min，優(yōu)選為0.3～2.0l/min。在來自第一smb分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環(huán)的流速通常為0.3～1.0l/min，優(yōu)選為約0.5l/min。通常，輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的流速為5～150ml/min，優(yōu)選為10～100ml/min，更優(yōu)選為20～60ml/min。

在此“背對背”smb方法中，對于上面所概述的典型的柱大小，通常，洗脫劑流入第二smb分離步驟中使用的色譜設備的流速為1～4l/min，優(yōu)選為1.5～3.5l/min。通常，來自第二smb分離步驟中使用的色譜設備的提取物的流速為0.5～2l/min，優(yōu)選為0.7～1.9l/min。在來自第二smb分離步驟的提取物的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環(huán)的流速通常為0.6～1.4l/min，優(yōu)選為0.7～1.1l/min，更優(yōu)選為約0.9l/min。通常，來自第二smb分離步驟中使用的色譜設備的提余物的流速為0.5～2.5l/min，優(yōu)選為0.7～1.8l/min，更優(yōu)選為約1.4l/min。在來自第二smb分離步驟的提余物的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備的實施方式中，循環(huán)的流速通常為0.3～1.0l/min，優(yōu)選為約0.5l/min。

如技術人員將理解的，經由各種提取物流和提余物流收集或移出液體的速率是指一段時間中移出的液體體積，通常為l/min。相似地，液體循環(huán)回到設備，通常回到設備中的相鄰的柱的速率是指一段時間中循環(huán)的液體體積，通常為l/min。

在此“背對背”smb方法中，優(yōu)選真實的移動床色譜。

步進時間(steptime)，即切換輸入流和洗脫劑的注入點與所收集的餾分的各種取出點之間的時間，沒有特別限制，并且將取決于所使用的柱數和尺寸以及通過設備的流速。技術人員將能夠易于確定合適的步進時間以用于本發(fā)明的方法。上述步進時間通常為100～1000秒，優(yōu)選為200～800秒，更優(yōu)選為250～750秒。在一些實施方式中，合適的步進時間為100～400秒，優(yōu)選為200～300秒，更有優(yōu)選為約250秒。在其他實施方式中，合適的步進時間為600～900秒，優(yōu)選為700～800秒，更優(yōu)選為約750秒。

“背對背”smb方法包括第一smb分離步驟和第二smb分離步驟。

這兩個步驟可以易于在單個色譜設備上進行。因此，在一個實施方式中，(a)在同一色譜設備上依次進行第一smb分離步驟和第二smb分離步驟，在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間回收第一產物，并且在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間調節(jié)色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。此“背對背”smb方法的優(yōu)選實施方式如圖10a所示。因此，第一smb分離步驟(左手側)在具有8個柱的smb設備上進行。在第一分離smb步驟和第二分離smb步驟之間，第一產物回收到例如容器中，調節(jié)色譜設備中的方法條件，使得在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。然后，第二smb分離步驟(右手側)在具有8個柱的同一smb設備上進行。

在實施方式(a)中，調節(jié)方法步驟通常是指整體上調節(jié)設備中的方法條件，即物理調節(jié)設備使得各條件不同。它不是指簡單地將第一產物再次引入回到方法條件可能碰巧不同的相同設備的不同部分中。

或者，第一分離色譜設備和第二分離色譜設備可以用于第一smb分離步驟和第二smb分離步驟。因此，在另一個實施方式中，(b)第一smb分離步驟和第二smb分離步驟分別在單獨的第一色譜設備和第二色譜設備上進行，由第一smb分離步驟獲得的第一產物被引入到第二色譜設備中，并且在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。

在實施方式(b)中，兩個smb分離步驟可以依次進行或同時進行。

因此，在兩個smb分離步驟依次進行的情況下的實施方式(b)中，第一smb分離步驟和第二smb分離步驟依次分別在單獨的第一色譜設備和第二色譜設備上進行，在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間回收第一產物，并且調節(jié)第一smb色譜設備和第二smb色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。此“背對背”smb分離方法的優(yōu)選實施方式如圖10b所示。因此，第一smb分離步驟(左手側)在具有8個柱，一至八，的smb設備上進行。在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間，第一產物回收到例如容器中，然后引入到第二分離smb設備中。第二smb分離步驟(右手側)在具有8個柱，九至十六，的第二分離smb設備上進行。調節(jié)兩個色譜設備中的方法條件，使得在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。

在兩個smb分離步驟同時進行的情況下的實施方式(b)中，第一分離步驟和第二smb分離步驟同時在單獨的第一色譜設備和第二色譜設備上進行，在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間將第一產物引入到第二分離步驟中使用的色譜設備中，并且調節(jié)第一色譜設備和第二色譜設備中的方法條件，使得在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。此“背對背”smb分離方法的優(yōu)選實施方式如圖10c所示。因此，第一smb分離步驟(左手側)在具有8個柱，一至八，的smb設備上進行。然后，第一smb分離步驟中獲得的第一產物引入到第二smb分離步驟中使用的第二分離色譜設備中。第一產物可以直接地或例如經由容器而間接地從第一smb分離步驟送到第二smb分離步驟。第二smb分離步驟(右手側)在具有8個柱，九至十六，的第二分離smb設備上進行。調節(jié)兩個色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。

在兩個smb分離步驟同時進行的情況下的實施方式(b)中，洗脫劑單獨地在兩個單獨的色譜設備中循環(huán)。因此，除了在第二smb分離步驟中純化并引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的第一產物中可作為溶劑存在的洗脫劑，在兩個單獨的色譜設備之間不共用洗脫劑。在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的兩個單獨的色譜設備之間不共用色譜柱。

在此“背對背”smb方法中，在第一smb分離步驟中獲得第一產物之后，在第二smb分離步驟中純化第一產物之前，可以部分地或全部地移出含水有機溶劑洗脫劑?；蛘?，可以在第二smb分離步驟中純化第一產物，而不移出任何存在的溶劑。

如上所提及的，在此“背對背”smb方法中，在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。在實施方式(a)中，在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟之間調節(jié)兩個smb分離步驟中使用的單個smb設備的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。在實施方式(b)中，設置第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的兩個單獨的色譜設備中的方法條件，使得在每個分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。

因此，在此“背對背”smb方法中，改變第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中的方法條件。改變的方法條件可以包括：例如，使用的柱的大小、使用的柱數、柱中使用的填料、smb設備的步進時間、設備的溫度、分離步驟中使用的洗脫劑的水與有機溶劑的比例，或設備中使用的流速，特別是經由提取物流或提余物流所收集的液體的循環(huán)速率。

優(yōu)選地，在此“背對背”smb方法中，可以改變的方法條件是smb分離步驟中使用的洗脫劑的水與有機溶劑的比例和/或經由smb分離步驟中的提取物流或提余物流所收集的液體的循環(huán)速率。這兩個選項在下面進行更詳細的討論。

在此“背對背”smb方法中，與輸入流相比，第一smb分離步驟中獲得的第一產物通常富含pufa產物。

在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中獲得的第一產物然后引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備。

在此“背對背”smb方法中，第一產物通常被收集為來自第一smb分離方法中使用的色譜設備的提余物流或提取物流。

通常，在此“背對背”smb方法中，第一產物被收集為第一smb分離步驟中的提余物流，并且第二產物被收集為第二smb分離步驟中的提取物流。因此，第一smb分離步驟中收集的提余物流用作第二smb分離步驟中的輸入流。第一smb分離步驟中收集的提余物流通常含有第二產物和極性較大的組分。

或者，在此“背對背”smb方法中，第一產物被收集為第一smb分離步驟中的提取物流，并且第二產物被收集為第二smb分離步驟中的提余物流。因此，第一smb分離步驟中收集的提取物流用作第二smb分離步驟中的輸入流。第一smb分離步驟中收集的提取物流通常含有第二產物和極性較小的組分。

在此“背對背”smb方法中，在每個smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的不同組分分離。通常，本發(fā)明的方法的每個smb分離步驟中分離的組分具有不同的極性。

優(yōu)選地，在此“背對背”smb方法中，在第一smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的極性較小的組分分離，并且在第二smb分離步驟中將pufa產物與輸入流的極性較大的組分分離。

通常，在此“背對背”smb方法中，(a)來自第一smb分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備中；和/或

(b)來自第一smb分離步驟中使用的設備的提余物流的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備中；和/或

(c)來自第二smb分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備中；和/或

(d)來自第二smb分離步驟中使用的設備的提余物流的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備中。

優(yōu)選地，在此“背對背”smb方法中，(a)來自第一smb分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備中；和

(b)來自第一smb分離步驟中使用的設備的提余物流的一部分循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的設備中；和

(c)來自第二smb分離步驟中使用的設備的提取物流的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備中；和

(d)來自第二smb分離步驟中使用的設備的提余物流的一部分循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的設備中。

在此“背對背”smb方法中的循環(huán)涉及將從第一smb分離步驟或第二smb分離步驟中使用的色譜設備取出的提取物流或提余物流的一部分進料回到該smb步驟中使用的設備中，通常進料到相鄰的柱中。此相鄰的柱在系統(tǒng)中相對于洗脫劑的流向為下游的相鄰的柱。

在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟或第二smb分離步驟中的提取物流或提余物流循環(huán)回到該smb步驟中使用的色譜設備收集液體的速率是經由將該流收集的液體進料回到該smb步驟中使用的設備中，通常回到相鄰的柱中，即在系統(tǒng)中相對于洗脫劑流向的下游柱中的速率。

這可以參照圖9看出。第一smb分離步驟中的提取物流的循環(huán)速率是從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部所收集的提取物進料到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部的速率，即液體流入第一smb分離步驟中的色譜設備的柱3的頂部的流速。

在此“背對背”smb方法中，第二smb分離步驟中的提取物的循環(huán)速率是在第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部所收集的提取物進料到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部的速率，即液體流入第二smb分離步驟中的色譜設備的柱3的頂部的流速。

在此“背對背”smb方法中，通常通過將該smb分離步驟中的該流所收集的液體進料到容器中并且然后將一定量的該液體從容器泵回到該smb分離步驟中使用的設備中，通常到相鄰的柱中來完成第一smb分離步驟和/或第二smb分離步驟中的提取物流和/或提余物流的循環(huán)。在這種情況下，在第一smb分離步驟和/或第二smb分離步驟中經由特定的提取物流或提余物流所收集的液體循環(huán)速率，通常循環(huán)回到相鄰的柱中的速率是將液體從容器泵出返回到色譜設備中的速率，通常返回到相鄰的柱中的速率。

正如技術人員將理解的是，在此“背對背”smb方法中，經由洗脫劑流和輸入流引入到色譜設備的液體的量與從該設備中移出并循環(huán)回到該設備中的液體的量平衡。

因此，在此參照圖9的“背對背”smb方法中，對于提取物流，洗脫劑(解吸劑)流入在第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的色譜設備的流速(d)等于在該smb分離步驟中經由提取物流所收集的液體積聚到容器中的速率(e1和e2)加上將提取物循環(huán)回到該具體smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率(d-e1和d-e2)。

在此“背對背”smb方法中，對于來自smb分離步驟的提余物流，將提取物循環(huán)回到該具體smb分離步驟中使用的色譜設備的速率(d-e1和d-e2)加上原料引入到該具體smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率(f和r1)等于經由該具體smb分離步驟中的提余物流所收集的液體積聚到容器中的速率(r1和r2)加上提余物循環(huán)回到該具體smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率(d+f-e1-r1和d+r1-e2-r2)。

在此“背對背”smb方法中，從來自色譜設備的具體提取物流或提余物流所收集的液體積聚到容器中的速率也可以被認為是從該色譜設備移出該提取物流或提余物流的凈速率。

通常，在此“背對背”smb方法中，調節(jié)經由第一smb分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個smb分離步驟中pufa產物可以與輸入流的不同組分分離。

通常，在此“背對背”smb方法中，調節(jié)經由第二smb分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該smb分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個smb分離步驟中pufa產物可以與輸入流的不同組分分離。

優(yōu)選地，在此“背對背”smb方法中，調節(jié)經由每個smb分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該smb分離步驟中使用的設備中的速率，使得在每個smb分離步驟中pufa產物可以與輸入流的不同組分分離。

通常，在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率不同于經由第二smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率，和/或經由第一smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率不同于經由第二smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率。

改變經由第一smb分離步驟或第二smb分離步驟中的提取物流和/或提取物流所收集的液體循環(huán)回到該具體smb分離步驟中使用的設備中的速率具有改變存在于提取物流和提余物流中的極性較大的組分和極性較小的組分的量的作用。因此，例如，較低的提取物循環(huán)速率導致該smb分離步驟中的較少的極性較小的組分被攜帶至提余物流。較高的提取物循環(huán)速率導致該smb分離步驟中的較多的極性較小的組分被攜帶至提余物流。

這個可以從例如圖6中看出。經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到該smb分離步驟中使用的色譜設備的速率(d-e1)將影響在第一smb分離步驟中的提余物流攜帶任何組分a的程度(r1)。

通常，在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。優(yōu)選地，從第一smb分離步驟中收集含有第二產物和極性較大的組分的提余物流并在第二smb分離步驟中純化，并且經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。

或者，在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更慢。

通常，在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。優(yōu)選地，從第一smb分離步驟中收集含有第二產物和極性較小的組分的提取物流并在第二smb分離步驟中純化，并且經由第一smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜裝置中的速率比經由第二smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜裝置中的速率更快。

或者，在此“背對背”smb方法中，經由第一smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二smb分離步驟中的提余物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更慢。

在此“背對背”smb方法中，當調節(jié)循環(huán)速率使得在每個smb分離步驟中pufa產物可以與輸入流的不同組分分離時，每個smb分離步驟中使用的洗脫劑的水與有機溶劑的比例可以相同或不同。通常，每個分離步驟中使用的洗脫劑的水與有機溶劑的比例如上定義。

通常，在此“背對背”smb方法中，每個smb分離步驟中使用的含水有機溶劑洗脫劑具有不同的水與有機溶劑的比例。每個smb分離步驟中使用的有機溶劑相同。優(yōu)選地調節(jié)每個smb分離步驟中使用的水與有機溶劑的比例，使得在每個smb分離步驟中pufa產物可以與輸入流的不同組分分離。

在此“背對背”smb方法中，每個smb分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力通常不同。優(yōu)選地，第一smb分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力大于第二smb分離步驟中使用的洗脫劑的洗脫能力。在實踐中，這通過改變每個smb分離步驟中使用的水和有機溶劑的相對量來實現。

取決于有機溶劑的選擇，它們可以是比水更強的解吸劑?；蛘撸鼈兛梢允潜人醯慕馕鼊?。例如，乙腈和醇是比水更強的解吸劑。因此，當含水有機溶劑是含水的醇或乙腈時，第一smb分離步驟中使用的洗脫劑中的醇或乙腈的量大于第二smb分離步驟中使用的洗脫劑中的醇或乙腈的量。

通常，在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中的洗脫劑的水與有機溶劑的比例比第二smb分離步驟中的洗脫劑的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一smb分離步驟中的洗脫劑比第二smb分離步驟中的洗脫劑通常含有更多的有機溶劑。

將理解的是，上面所指的每個smb分離步驟中的水和有機溶劑的比例是全部的色譜設備中的平均比例。

通常，在此“背對背”smb方法中，通過將水和/或有機溶劑引入到smb分離步驟中使用的色譜設備中的一個或多個柱中來控制在每個smb分離步驟中的洗脫劑的水與有機溶劑的比例。因此，例如，為了在第一smb分離步驟中獲取比第二smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例更低的水與有機溶劑的比例，通常，與第二smb分離步驟中相比，水更緩慢地引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在此“背對背”smb方法中，在每個smb分離步驟中使用的色譜設備中的不同的點處引入基本上純的有機溶劑和基本上純的水。這兩個流的相對流速將確定色譜設備中的整體溶劑曲線(profile)?；蛘?，在此“背對背”smb方法中，在每個smb分離步驟中使用的每個色譜設備中的不同的點處可引入不同的有機溶劑和水的混合物。那個將涉及有機溶劑和水的兩種或更多種不同的混合物引入到具體smb分離步驟中使用的色譜設備中，每種有機溶劑/水的混合物具有不同的有機溶劑/水的比例。此“背對背”smb方法中的有機溶劑/水比例的相對流速和相對濃度將確定該smb分離步驟中使用的色譜設備中的整體溶劑曲線。

優(yōu)選地，在此“背對背”smb方法中，(1)將含有第二產物與極性較大的組分的第一產物收集為第一smb分離步驟中的提余物流，并且將第二產物收集為第二smb分離步驟中的提取物流；或者

(2)將含有第二產物和極性較小的組分的第一產物收集為第一smb分離步驟中的提取物流，并且將第二產物收集為第二smb分離步驟中的提余物流。

選項(1)適合于從輸入流中純化epa。

選項(1)示于圖2。在第一smb分離步驟中純化包含第二產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的輸入流f。在第一smb分離步驟中，移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。收集第二產物(b)和極性較大的組分(c)作為提余物流r1。提余物流r1是隨后在第二smb分離步驟中純化的第一產物。在第二smb分離步驟中，移出極性較大的組分(c)作為提余物流r2。收集第二產物(b)作為提取物流e2。

選項(1)更詳細地示于圖4。除了示出有機溶劑解吸劑(d)和水(w)引入到每個色譜設備的點，圖4和圖2相同。有機溶劑解吸劑(d)和水(w)一起組成洗脫劑。(d)相通常是基本上純的有機溶劑；但在某些實施方式中，它可以是主要包含有機溶劑的有機溶劑/水的混合物。(w)相通常是基本上純的水；但在某些實施方式中，它可以是主要包含水的有機溶劑/水的混合物，例如98％的水/2％的甲醇的混合物。

選項(1)的進一步圖解示于圖6。這里沒有分離的水注入點，而代替地，在(d)處注入含水有機溶劑解吸劑。

在選項(1)中，通過改變每個色譜設備中的洗脫劑的解吸能力可以輔助分離為提余物流和提取物流。這個可以通過在每個色譜設備中的不同的點處引入洗脫劑的有機溶劑(或富含有機溶劑的)組分和水(或富含水的)組分來實現。因此，通常，相對于系統(tǒng)中洗脫劑的流向，在提取物輸出點的上游處引入有機溶劑，并且在提取物輸出點和引入原料到該區(qū)域的點之間引入水。這個示于圖4。

通常，在選項(1)中，第一smb分離步驟中使用的含水有機溶劑洗脫劑比第二smb分離步驟中使用的洗脫劑含有更多的有機溶劑，即第一smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例比第二smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例更低。

在選項(1)中，可以通過改變經由第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中的提取物流和提余物流所收集的液體循環(huán)回到該smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率來輔助smb分離。

通常，在選項(1)中，經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的速率比經由第二smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。

在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的下游處移出第一smb分離步驟中的第一提余物流。

在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的上游處移出第一smb分離步驟中的第一提取物流。

在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將第一產物引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的下游處移出第二smb分離步驟中的第二提余物流。

在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將第一產物引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的上游處收集第二smb分離步驟中的第二提取物流。

通常，在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，在移出第一提取物流的點的上游處將有機溶劑或含水有機溶劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(1)中，當將水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中時，相對于洗脫劑的流向，在引入輸入流的點的上游處但在移出第一提取物流的點的下游處將水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(1)中，相對于洗脫劑的流向，在移出第二提取物流的點的上游處將有機溶劑或含水有機溶劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(1)中，當將水引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中時，相對于洗脫劑的流向，在引入第一產物的點的上游處但在移出第二提取物流的點的下游處將水引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中。

選項(2)適合于純化來自輸入流的dha。

選項(2)示于圖3。在第一smb分離步驟中純化包含第二產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的輸入流f。在第一smb分離步驟中，移出極性較大的組分(c)作為提余物流r1。收集第二產物(b)和極性較小的組分(a)作為提取物流e1。提取物流e1是隨后在第二smb分離步驟中純化的第一產物。在第二smb分離步驟中，移出極性較小的組分(a)作為提取物流e2。收集第二產物(b)作為提余物流r2。

選項(2)更詳細地示于圖5。除了示出有機溶劑解吸劑(d)和水(w)引入到每個色譜設備的點，圖5和圖3相同。如上,(d)相通常是基本上純的有機溶劑；但在某些實施方式中，它可以是主要包含有機溶劑的有機溶劑/水的混合物。(w)相通常是基本上純的水；但在某些實施方式中，它可以是主要包含水的有機溶劑/水的混合物，例如98％的水/2％的甲醇的混合物。

選項(2)的進一步圖解示于圖7。這里沒有單獨的水注入點，而代替地，在(d)處注入含水有機溶劑解吸劑。

通常，在選項(2)中，經由第一smb分離步驟中的提余物流所收集的液體再次引入至第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率比經由第二smb分離步驟中的提余物流所收集的液體再次引入至第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率更快。

通常，在選項(2)中，第一smb分離步驟中使用的含水有機溶劑洗脫劑比第二smb分離步驟中使用的洗脫劑含有更少的有機溶劑，即第一smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例比第二smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例更高。

在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將輸入流引入到第一分離步驟中使用的色譜設備中的點的下游處移出第一smb分離步驟中的第一提余物流。

在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的上游處移出第一smb分離步驟中的第一提取物流。

在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將第一產物引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的下游處移出第二smb分離步驟中的第二提余物流。

在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，通常在將第一產物引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的點的上游處收集第二smb分離步驟中的第二提取物流。

通常，在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，在移出第一提取物流的點的上游處將有機溶劑或含水有機溶劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(2)中，當水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中時，相對于洗脫劑的流向，在引入輸入流的點的上游處但在移出第一提取物流的點的下游處將水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(2)中，相對于洗脫劑的流向，在移出第二提取物流的點的上游處將有機溶劑或含水有機溶劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中。

通常，在選項(2)中，當水引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中時，相對于洗脫劑的流向，在引入第一產物的點的上游處但在移出第二提取物流的點的下游處將水引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中。

在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟和第二smb分離步驟中使用的每個模擬或真實的移動床色譜設備優(yōu)選由八個色譜柱組成。這些被稱為柱1～柱8。在每個設備中，八個柱串聯設置，使得柱1的底部連接到柱2的頂部，柱2的底部連接到柱3的頂部…等等…并且柱8的底部連接到柱1頂部。這些連接可以可選地經由保持容器(holdingcontainer)，隨著循環(huán)流進入下一個柱中。洗脫劑通過系統(tǒng)的流向為從柱1到柱2，到柱3，等等。吸附劑通過系統(tǒng)的有效流向為從柱8到柱7，到柱6，等等。

這個示于圖8。將包含第二產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的輸入流f引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。有機溶劑解吸劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。在第一smb分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出第二產物(b)和極性較大的組分(c)作為提余物流r1。提余物流r1是第一產物，該第一產物隨后在第二smb分離步驟中，通過在柱5的頂部處引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中進行純化。有機溶劑解吸劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。水引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱4的頂部。在第二smb分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大的組分(c)作為提余物流r2。在柱2的底部處，收集第二產物(b)作為提取物流e2。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常將有機溶劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常將水引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常將有機溶劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱1的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常將有機溶劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常將輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部收集第一提余物流作為第一產物。然后在第二smb分離步驟中純化此第一產物并且通常將其引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。在第二smb分離步驟中純化之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中并且再次引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常從第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部移出第二提余物流。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，通常從第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流通常含有第二產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中并且再次引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。

在圖8所示的“背對背”smb方法中，所使用的洗脫劑通常定義如上。

通常，在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例比第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一smb分離步驟中的洗脫劑比第二smb分離步驟中使用的洗脫劑通常含有更多的有機溶劑。

在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例通常為以體積份計0.5:99.5～1.5:98.5。第二smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例通常為以體積份計2:98～6:94。

在此“背對背”smb方法中，雖然圖8的設備如圖10a所示配置，但也可以使用圖10b和10c所示的配置。

此“背對背”smb方法也示于圖9。將包含第二產物(b)和極性較大的組分(c)和極性較小的組分(a)的輸入流f引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。含水有機溶劑解吸劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。在第一smb分離步驟中，從柱2的底部移出極性較小的組分(a)作為提取物流e1。從柱7的底部移出第二產物(b)和極性較大的組分(c)作為提余物流r1。提余物流r1是第一產物，該第一產物在第二smb分離步驟中通過引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱4的頂部進行純化。含水有機溶劑解吸劑引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。在第二smb分離步驟中，在柱7的底部處，移出極性較大的組分(c)作為提余物流r2。在柱2的底部處，收集第二產物(b)作為提取物流e2。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常將含水有機溶劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱1的頂部。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常將含水有機溶劑引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱9的頂部。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常將輸入流引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的柱5的頂部。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部收集第一提余物流作為第一產物。然后在第二smb分離步驟中純化此第一產物并且通常將其引入到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的柱5的頂部。在第二smb分離步驟中純化之前，第一提余物流可以可選地收集到容器中。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可選地收集到容器中，并且一部分再次引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。經由第一smb分離步驟中的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率是將液體從此容器泵送到柱3的頂部的速率。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱7的底部移出第二提余物流。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，通常從第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱2的底部收集第二提取物流。此第二提取物流通常含有第二產物。第二提取物流可以可選地收集到容器中，并且一部分再次引入到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的柱3的頂部。經由來自第二smb分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的速率是將液體從此容器泵送到柱3的頂部的速率。

在圖9所示的“背對背”smb方法中，所使用的洗脫劑定義如上。

通常，在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例比第二smb分離步驟中使用的色譜設備中的水與有機溶劑的比例更低。因此，第一smb分離步驟中使用的洗脫劑比第二smb分離步驟中使用的洗脫劑通常含有更多的有機溶劑。

在此“背對背”smb方法中，第一smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例通常為以體積份計0.5:99.5～1.5:98.5。第二smb分離步驟中的水與有機溶劑的比例通常為以體積份計2:98～6:94。

在此“背對背”smb方法中，經由來自第一smb分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第一smb分離步驟中使用的色譜設備的速率通常比經由來自第二smb分離步驟的提取物流所收集的液體循環(huán)回到第二smb分離步驟中使用的色譜設備的速率更快。在這種情況下，在每個smb分離步驟中，含水有機溶劑洗脫劑通常基本上相同。

在此“背對背”smb方法中，雖然圖9的設備如圖10a所示配置，但也可以使用圖10b和10c所示的配置。

通常，第一色譜分離步驟和第二色譜分離步驟中的至少一個涉及至少一個，例如一個上述“背對背”smb方法過程。

通常，在每個色譜分離步驟中，將pufa產物與進料混合物的不同組分分離。

通常，在第一分離步驟和/或第二分離步驟中，將pufa產物與上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種分離。通常，僅在第一分離步驟和/或第二分離步驟中的一個步驟中，將pufa產物與上述c18脂肪酸雜質中的一種或多種分離。

更通常，在第一分離步驟和/或第二分離步驟中，將pufa產物與ala，ala甘油單酯、二酯和三酯以及alac1～c4烷基酯分離。

更通常，在第一分離步驟和/或第二分離步驟中，將pufa產物與gla，gla甘油單酯、二酯和三酯以及glac1～c4烷基酯分離。

優(yōu)選地，在第一分離步驟和/或第二分離步驟中，將pufa產物與c18脂肪酸，c18脂肪酸甘油單酯、二酯和三酯以及c18脂肪酸烷基酯分離。

通常，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種；和/或第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。

更通常，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的雜質，該雜質選自ala，ala的甘油單酯、二酯和三酯以及ala的c1～c4烷基酯；和/或第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的所述雜質。

更通常，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的雜質，該雜質選自gla，gla的甘油單酯、二酯和三酯以及gla的c1～c4烷基酯；和/或第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的所述雜質。

優(yōu)選地，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的c18脂肪酸或c18脂肪酸衍生物；或第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的c18脂肪酸或c18脂肪酸衍生物。在某些實施方式中，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的c18脂肪酸或c18脂肪酸衍生物；并且第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的c18脂肪酸或c18脂肪酸衍生物。

較低的濃度通常指的是低出5wt％或更多，更通常10wt％或更多，優(yōu)選20wt％或更多，更優(yōu)選30wt％或更多，更加優(yōu)選40wt％或更多，仍更優(yōu)選50wt％或更多，仍更優(yōu)選60wt％或更多，仍更優(yōu)選70wt％或更多，仍更優(yōu)選80wt％或更多，仍更優(yōu)選90wt％或更多的量的濃度。因而，當中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種時，中間產物中c18脂肪酸雜質的濃度比進料混合物中c18脂肪酸雜質的濃度通常低出10wt％或更多，優(yōu)選低出20wt％或更多等。當第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種時，pufa產物中c18脂肪酸雜質的濃度比中間產物中c18脂肪酸雜質的濃度通常低出10wt％或更多，優(yōu)選低出20wt％或更多等。

通常，第一有機溶劑是乙腈，并且中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。或者，第二有機溶劑是乙腈，并且第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。

優(yōu)選地，pufa產物是epa乙酯，并且(i)第一有機溶劑是乙腈，并且中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種；或(ii)第二有機溶劑是乙腈，并且第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。

更優(yōu)選地，上述pufa產物是epa乙酯，并且(i)第一有機溶劑是乙腈，第二有機溶劑是甲醇，并且中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種；或(ii)第一有機溶劑是甲醇，第二有機溶劑是乙腈，并且第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。

更優(yōu)選地，pufa產物是epa乙酯，并且(i)第一有機溶劑是乙腈，第二有機溶劑是甲醇，并且第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到固定床設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產品引入到模擬或真實的移動床色譜設備中；或者

(ii)第一有機溶劑是甲醇，而第二有機溶劑是乙腈，第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到固定床色譜設備中。

更加優(yōu)選地，上述pufa產物是epa乙酯，并且(i)第一有機溶劑是乙腈，第二有機溶劑是甲醇，中間產物具有與進料混合物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種，并且第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到固定床設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產品引入到模擬或真實的移動床色譜設備中；或者

(ii)第一有機溶劑是甲醇，第二有機溶劑是乙腈，第二分離步驟中產生的pufa產物具有與中間產物相比濃度更低的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種，并且第一色譜分離步驟包括將進料混合物引入到模擬或真實的移動床色譜設備中，而第二色譜分離步驟包括將中間產物引入到固定床色譜設備中。

本發(fā)明還提供一種能由本發(fā)明的方法獲得的如上限定的pufa產物。

本發(fā)明還提供一種包含本發(fā)明的pufa產物的組合物。

這些組合物通常含有作為pufa產物的epa或epa乙酯。

上述pufa產物在組合物中的含量通常大于90wt％，優(yōu)選大于95wt％，更優(yōu)選大于97wt％，更加優(yōu)選大于98wt％，仍更優(yōu)選大于98.4wt％。

優(yōu)選地，該pufa產物是epa或epa乙酯，并且在組合物中的含量大于90wt％，優(yōu)選大于95wt％，更優(yōu)選大于97wt％，更加優(yōu)選大于98wt％，仍更優(yōu)選大于98.4wt％的量，例如以介于98wt％和99.5wt％之間。

通常，pufa產物含有小于1wt％的上面公開的c18脂肪酸雜質中的一種或多種。

通常，上述pufa產物含有小于1wt％的α-亞麻酸(ala)，ala甘油單酯、二酯和三酯以及alac1～c4烷基酯雜質。更通常，該pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是ala及其衍生物。典型的ala衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物含有小于1wt％的γ-亞麻酸(gla)、gla甘油單酯、二酯和三酯以及glac1～c4烷基酯雜質。更通常，pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是gla及其衍生物。典型的gla衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物含有小于1wt％的c18脂肪酸雜質，c18脂肪酸甘油單酯、二酯和三酯以及c18脂肪酸烷基酯雜質。更通常，pufa產物含有小于1wt％的雜質，該雜質是c18脂肪酸及其衍生物。為了避免疑惑，在此實施方式中，所有這些雜質的最大量為1wt％。典型的c18脂肪酸衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。如本文所使用的，c18脂肪酸是具有直烴鏈或支烴鏈的c18脂肪族單羧酸。典型的c18脂肪酸包括：硬脂酸(c18:0)，油酸(c18:1n9)、異油酸(c18:1n7)、亞油酸(c18:2n6)、γ-亞麻酸/gla(c18:3n6)、α-亞麻酸/ala(c18:3n3)和十八碳四烯酸/sda(c18:4n3)。

如上所述，pufa產物中上述雜質的量通常小于1wt％。優(yōu)選地，上述雜質的量小于0.5wt％，更優(yōu)選小于0.25wt％，更加優(yōu)選小于0.1wt％，仍更優(yōu)選小于0.05wt％，仍更優(yōu)選小于0.01wt％，仍更優(yōu)選小于0.001wt％，仍更優(yōu)選小于0.0001wt％，仍更優(yōu)選小于0.00001wt％。

在某些優(yōu)選的實施方式中，pufa產物基本上不含有上述雜質。

pufa產物不是ala，gla，亞油酸，ala甘油單酯、二酯或三酯、gla甘油單酯、二酯或三酯，油酸甘油單酯、二酯或三酯，alac1～c4烷基酯，glac1～c4烷基酯或者油酸c1～c4烷基酯，或者它們的混合物。通常，pufa產物不是ala、gla、亞油酸，或者它們的衍生物或混合物。典型的ala、gla和亞油酸衍生物是如上面關于pufa衍生物所定義的。

通常，pufa產物不是c18pufa，c18pufa甘油單酯、二酯或三酯，或者c18pufa烷基酯。更通常，pufa產物不是c18pufa或c18pufa衍生物。典型的c18pufa包括亞油酸(c18:2n6)、gla(c18:3n6)和ala(c18:3n3)。

通常，組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa或epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的ala乙酯。

通常，組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa或epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的gla乙酯。

優(yōu)選地，所述組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa或epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的ala，ala甘油單酯、二酯和三酯以及alac1～c4烷基酯。

優(yōu)選地，所述組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa或epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的gla，gla甘油單酯、二酯或三酯以及glac1～c4烷基酯。

更優(yōu)選地，所述組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的ala，ala甘油單酯、二酯或三酯以及alac1～c4烷基酯。

更優(yōu)選地，所述組合物包含含量介于98wt％和99.5wt％之間的epa乙酯作為pufa產物，該組合物含有小于1wt％的gla，gla甘油單酯、二酯或三酯以及glac1～c4烷基酯。

下列實施例解釋本發(fā)明。

實施例

實施例1

第一色譜分離步驟

通過由串聯連接的15個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)組成的“單次通過”smb設備，使用將鍵合c18硅膠(粒徑300μm，顆?？紫抖?50埃)用作固定相并將含水甲醇(通常0.5％～10％水)用作洗脫劑的真實移動床色譜系統(tǒng)來使具有圖16所示的脂肪酸譜的源自魚油的原料(55wt％epa乙酯(ee)，5wt％dhaee)進行分離。

操作參數和流速如下。

(依照圖8的典型流程方案)

步進時間：750s

循環(huán)時間：200min

進料混合物的進料速率(f1)：74ml/min

解吸劑的進料速率(d1)：6250ml/min

提取物的積累速率(e1)：1250ml/min

提取物的循環(huán)速率(d1-e1)：5000ml/min

提余物的積累速率(r1)：1688ml/min

循環(huán)時間：600s

由此方法產生的中間產物具有如圖12中所示的gc-fames跡線。含有96.5％純度的epaee。主要雜質是以0.9％存在的α-亞麻酸乙酯(ala-c18:3n3)。ala以0.65％存在于原料中。因此，可以看出使用甲醇/水作為流動相將ala與epa共洗脫。然而，甲醇/水非常有效地洗出了密切相關的組分二十二碳六烯酸乙酯(dha-c22:6n3)。

第二色譜分離步驟

通過使用乙腈/水流動相混合物的固定床中的制備性hplc，進一步純化第一色譜分離步驟中產生的中間產物。使用以重量計的87:13的比例的乙腈/水。使用填充有c18鍵合硅膠(20μm粒徑)的尺寸為600mm×900mm的hplc柱，進料混合物注入體積為1400ml，且解吸劑的流速為2200ml/min。

通過gcfames分析產生的最終的pufa產物，并且跡線示于圖13中。可以看到，已完全除去ala，并且epa的純度提高到98.5％。

可替代的第二色譜分離步驟

通過由串聯連接的8個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)組成的“單通”smb設備，使用將鍵合c18硅膠(粒徑300μm，孔隙度150埃)用作固定相并將含水乙腈(12％水)用作洗脫劑的真實移動床色譜系統(tǒng)來使第一色譜分離步驟中產生的中間產物分餾。

操作參數和流速如下。

(依照圖8的典型流程方案)

步進時間：780s

進料混合物的進料速率(f1)：90ml/min

解吸劑的進料速率(d1)：6500ml/min

提取物的積累速率(e1)：1400ml/min

提取物的循環(huán)速率(d1-e1)：5100ml/min

提余物的積累速率(r1)：1690ml/min

循環(huán)時間：600s

實施例2

第一色譜分離步驟

使具有如圖16中所示的脂肪酸譜的源自魚油的原料(55wt％epaee，5wt％dhaee)經歷使用乙腈/水洗脫劑的制備性hplc分離。所使用的流動相是87:13的乙腈:水。使用填充有c18鍵合硅膠(20μm粒徑)的尺寸為600mm×900mm的hplc柱，進料混合物的注入體積為600ml，且解吸劑流速為2200ml/min。通過gcfame分析產生的中間產物，并且跡線示于圖14中。

可以看出，從進料混合物中完全除去了α-亞麻酸乙酯(ala-c18:3n3)。然而，由于高含量的二十二碳六烯酸乙酯(dha-c22:6n3)的存在，主要得到純度水平僅為92.5％的epaee。

可替代的第一色譜分離步驟

通過由串聯連接的15個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)組成的“單次通過”smb設備，使用將鍵合c18硅膠(粒徑300μm，顆?？紫抖?50埃)用作固定相，并將含水乙腈(通常4％～18％水)用作洗脫劑的真實移動床色譜系統(tǒng)來使具有圖16所示的脂肪酸譜的源自魚油的原料(55wt％epaee，5wt％dhaee)分離。

操作參數和流速如下。

(依照圖8的典型流程方案)

步進時間：600s

原料(f)的進料速率：105ml/min

解吸劑(d)的進料速率：4800ml/min

提取物速率：1250ml/min

提余物速率：1800ml/min

第二色譜分離步驟

使用將重量比為88:12的甲醇/水作為洗脫劑來使所產生的中間產物經歷進一步的純化。使用填充有c18鍵合硅膠(20μm粒徑)的尺寸為600mm×900mm的hplc柱，進料混合物的注入體積為1250ml且解吸劑流率為2200ml/min。

所產生的最終產物具有如圖15中所示的gc-fames跡線。所產生的產物含有純度為99％的epaee。

因而，可以看出，首先進行乙腈/水分離接著進行甲醇/水分離的結果基本上與首先進行甲醇/水分離接著進行乙腈/水分離的結果基本上相同。在每種情況下，結合涉及甲醇/水的步驟和涉及乙腈/水的另一步驟有利于制備具有低含量c18脂肪酸雜質(例如ala)的純度為～99％的高純化的epa(ee)濃縮物。

可替代的第二色譜分離步驟

通過由串聯連接的8個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)組成的“單次通過”smb，使用將鍵合c18硅膠(粒徑300μm，顆?？紫抖?50埃)用作固定相并將含水甲醇(7％水)用作洗脫劑的真實移動床色譜系統(tǒng)來使所產生的中間產物分離。

操作參數和流速如下。

(依照圖8的典型流程方案)

步進時間：960s

原料(f)的進料速率：45ml/min

解吸劑(d)的進料速率：3975ml/min

提取物速率：3655ml/min

提余物速率：2395ml/min

比較例1

在第一色譜分離步驟和第二色譜分離步驟中使用將鍵合c18硅膠(粒徑300μm，顆?？紫抖?50埃)用作固定相并將含水甲醇用作洗脫劑的真實移動床色譜系統(tǒng)來在第一色譜分離步驟和第二色譜分離步驟中使具有如圖16中所示的脂肪酸譜的源自魚油的原料(55wt％epaee，5wt％dhaee)分離。

在串聯連接的一系列的8個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)上進行第一分離步驟。

操作參數和流速如下。

(依照圖8的典型流程方案)

進料混合物的進料速率(f1)：34ml/min

解吸劑的進料速率(d1)：14438ml/min

提取物的積累速率(e1)：9313ml/min

提取物的循環(huán)速率(d1-e1)：5125ml/min

提余物的積累速率(r1)：1688ml/min

循環(huán)時間：1200s

在串聯連接的第二系列的7個柱(直徑：76.29mm，長度：914.40mm)上進行第二分離步驟。

第二中間產物的進料速率(f3)：40ml/min

解吸劑的進料速率(d3)：6189ml/min

提取物的積累速率(e3)：1438ml/min

提取物的循環(huán)速率(d3-e3)：4750ml/min

提余物的積累速率(r3)：1438ml/min

循環(huán)時間：1080s

該比較例制備了具有優(yōu)勢較小的雜質譜的epa濃縮物。可實現的純度上限特別受c18:3組分(gla和ala)的存在所限制。