本發(fā)明涉及填料制備，具體涉及一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、糖化血紅蛋白(alc)是血紅蛋白的一種，其可反映過去1至2個(gè)月血液中的平均糖濃度，因此可以用作糖尿病的篩查測試，廣泛用作評(píng)估糖尿病患者血糖控制狀況的檢測項(xiàng)目。hplc法因?yàn)槠渚攘己们铱稍诙虝r(shí)間內(nèi)測定而被廣泛使用為血紅蛋白alc的測定方法。在檢測中，要求填料基質(zhì)具有一定的疏水性以降低在水中的溶脹，但疏水性過高會(huì)導(dǎo)致填料分散性差，引起非特異性吸附的問題。一般的用于提高填料親水性的方法為在基球合成中引入大量親水性單體，但會(huì)導(dǎo)致填料機(jī)械強(qiáng)度下降，在水中溶脹從而使精度下降的問題。

2、另外，以往的用于測定血紅蛋白alc的填料，多采用懸浮聚合法合成，存在粒度分布不均勻的問題，為了使粒度分布均勻，一般采用分級(jí)操作等方法。但分級(jí)操作復(fù)雜，產(chǎn)物損失很大，且目前的分級(jí)操作在調(diào)整粒度分布寬度方面存在局限性，無法充分抑制由于粒度分布不均勻引起的樣品擴(kuò)散而導(dǎo)致的峰展寬的問題。

3、因此，本技術(shù)提供一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料的制備方法以克服上述問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本技術(shù)提供一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料及其制備方法，該分析填料耐久性高、能夠高精度地測定糖化血紅蛋白，并能實(shí)現(xiàn)對(duì)血紅蛋白的良好分離。

2、為了解決上述問題，本技術(shù)所采用的技術(shù)方案如下：

3、一方面，本技術(shù)提供了一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)將單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑和聚乙烯醇水溶液混合乳化，加熱攪拌，用95％乙醇浸泡并震搖以除去致孔劑，得到polymer種球；

5、(2)將步驟(1)所得的polymer種球與強(qiáng)酸性溶液或強(qiáng)堿性溶液或氯甲基化試劑在加熱條件下反應(yīng)，得到polymer基球；

6、(3)將步驟(2)所得的polymer基球、烯丙基縮水甘油醚和na2so4溶液混合攪拌，后加入強(qiáng)堿性溶液反應(yīng)，得到polymer-vinyl微球；

7、(4)將步驟(3)所得的polymer-vinyl微球與配基單體在氧氣條件下加熱反應(yīng)，得polymer-cooh或polymer-so3微球，即5μm陽離子交換填料。

8、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述單體為甲基丙烯酸甲酯類單體、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸環(huán)己酯、乙烯基縮水甘油醚甲、基丙烯酸縮水甘油酯類單體、苯乙烯類單體中的一種或多種。所述單體為疏水性單體，其作用可使填料在水性介質(zhì)中不溶脹或幾乎不溶脹。所述單體可合成疏水性交聯(lián)聚合物。

9、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述交聯(lián)劑為二乙烯基苯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、鄰苯二甲酸三乙二醇二甲基丙烯酸酯、季戊四醇四甲基丙烯酸酯中的一種或多種。更進(jìn)一步的，所述交聯(lián)劑為二乙烯基苯。

10、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈、偶氮二異丁酸二甲酯、過氧化苯甲酰、過氧化二酰中的一種或多種。更進(jìn)一步的，所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈。

11、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述穩(wěn)定劑選自聚乙烯醇、聚氧乙烯、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基丙基纖維素、聚天冬酸氨鈉中的一種或多種。更進(jìn)一步的，所述穩(wěn)定劑為聚乙烯醇。

12、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述加熱攪拌的溫度為70-90℃，時(shí)間為10-13h。更進(jìn)一步地，所述時(shí)間為12h。

13、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述震搖的時(shí)間為6h。

14、進(jìn)一步的，步驟(1)中，所述的polymer種球?yàn)榱?μm，表面無孔的polymer種球。

15、進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述強(qiáng)酸性溶液選自硫酸，鹽酸，硝酸的一種或多種。更進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述強(qiáng)酸性溶液為硫酸。

16、進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述強(qiáng)堿性溶液選自naoh、koh或lioh中的一種或多種。更進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述強(qiáng)堿性溶液為naoh。

17、進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述氯甲基化試劑選自氯甲基甲醚或氯甲基乙醚中的一種或多種。

18、進(jìn)一步的，步驟(2)中，所述加熱溫度為25-70℃，時(shí)間為20-24h。

19、進(jìn)一步的，步驟(3)中，所述強(qiáng)堿性溶液為naoh。

20、進(jìn)一步的，步驟(3)中，所述攪拌條件為：轉(zhuǎn)速為160rpm，時(shí)間為2h。

21、進(jìn)一步的，步驟(3)中，所述反應(yīng)條件為：轉(zhuǎn)速為160rpm，溫度為25-30℃、時(shí)間為14-16h。

22、進(jìn)一步的，步驟(4)中，所述配基單體選自巰基丁二酸、巰基戊二酸、丙烯酸、丁烯酸、丁烯二酸、戊烯二酸、nahso3、na2so3中的一種或多種。更進(jìn)一步的，所述配基單體選自巰基丁二酸、nahso3中的一種或多種。

23、進(jìn)一步的，步驟(4)中，所述加熱的溫度為40-70℃，時(shí)間為10-12h。

24、本技術(shù)的作用機(jī)理如下：

25、1.疏水性單體分散聚合合成5μm的無孔polymer基球：

26、為使填料在水性介質(zhì)中不溶脹或幾乎不溶脹，選擇使用疏水性單體合成疏水性交聯(lián)聚合物作為基球，具體方法為：

27、使用疏水性單體，如甲基丙烯酸甲酯(mma)、甲基丙烯酸縮水甘油酯類單體(gma)、苯乙烯類單體(st)等通過分散聚合合成粒徑均勻地5μm無孔pmma微球、pgma微球、psdvb微球，統(tǒng)稱為polymer種球；

28、pmma微球通過酯鍵在堿性條件下水解生成pmma-cooh微球，或pgma微球通過環(huán)氧基在酸性條件下水解生成pgma-oh微球，或psdvb通過氯甲基化取代苯環(huán)上的h合成psdvb-cl微球，以上三種微球統(tǒng)稱為polymer基球，即得到了疏水性交聯(lián)聚合物基球。

29、2.將polymer基球進(jìn)行親水化處理：

30、將疏水性交聯(lián)聚合物基球表面進(jìn)行親水化處理，選用對(duì)基球功能化后，接入親水性嵌段進(jìn)行親水化處理，如對(duì)疏水性交聯(lián)聚合物基球進(jìn)行羧酸化、羥基化、氯甲基化等處理，選取烯丙基縮水甘油醚類具有烯丙基和環(huán)氧基雙重反應(yīng)活性官能團(tuán)的化合物，通過環(huán)氧基開環(huán)反應(yīng)與功能基團(tuán)反應(yīng)進(jìn)行基球表面的親水化處理。

31、通過使用烯丙基縮水甘油醚，使polymer基球的功能基團(tuán)與環(huán)氧基團(tuán)發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，得到表面含有親水基的pmma-vinyl或pgma-vinyl或psdvb-vinyl微球，統(tǒng)稱為polymer-vinyl微球。

32、3.將離子交換基團(tuán)引入polymer-vinyl微球：

33、將親水化處理的聚合物基球上引入離子交換基團(tuán)，如磺酸基、羧基等，可通過官能團(tuán)間的化學(xué)反應(yīng)引入，如雙鍵與巰基的反應(yīng)，或雙鍵的氧化反應(yīng)等，具體為：

34、將polymer-vinyl微球和含巰基的配基單體，如巰基丁二酸或巰基戊二酸，通過微球表面雙鍵與巰基的反應(yīng)生成polymer-cooh微球；

35、或者通過nahso3氧化微球表面的雙鍵，生成polymer-so3微球。

36、另一方面，本技術(shù)還提供了一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料，所述的分析填料采用上述的制備方法制備得到。

37、本技術(shù)的有益效果：

38、本技術(shù)提供的一種用于分離糖化血紅蛋白的分析填料，使用疏水性單體通過分散聚合的方法合成疏水性交聯(lián)聚合物即5μm的無孔微球作為基球，同時(shí)通過親水化處理增強(qiáng)基質(zhì)表面的親水性，降低非特異性吸附，不影響填料在水中的溶脹性，也不影響機(jī)械強(qiáng)度。親水化處理后的聚合物可提高耐鹽性能并降低非特異性吸附。非特異性吸附實(shí)際是一種非共價(jià)鍵作用力導(dǎo)致的吸附作用，可能由溶液中的待測化合物與固體表面之間的疏水作用引發(fā)，在分離填料的應(yīng)用中，這種非特異性吸附可能會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)分子與填料之間的非特異性結(jié)合，從而影響分離的效率和純度，相較于特異性吸附是填料與目標(biāo)分子之間的特有結(jié)合，基于分子間的特定相互作用。通過本技術(shù)的制備方法制備得到的分析填料其粒度均勻，分離效果良好且使用壽命長。