專利名稱：活性藥劑控制釋放的多泡脂質(zhì)體的制備的制作方法
發(fā)明的背景1.發(fā)明的所屬領(lǐng)域本發(fā)明涉及包裹生物活性物質(zhì)之脂質(zhì)體的多泡脂質(zhì)體組合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及生產(chǎn)和使用被包裹物質(zhì)具有可控制之釋放速率的多泡脂質(zhì)體的方法。
2.相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)用許多藥物進(jìn)引最佳治療時(shí)常常要求長(zhǎng)時(shí)間地保持藥物水平。例如，用細(xì)胞周期特異性抗代謝物進(jìn)行最佳抗腫瘤治療時(shí)需要長(zhǎng)時(shí)間地維持細(xì)胞毒性藥物的水平。阿糖胞苷是一種高療程依賴性抗腫瘤藥物。因?yàn)檫@種藥物只在細(xì)胞合成DNA時(shí)才殺傷之，所以為獲得最佳細(xì)胞殺傷效果，需要使細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間暴露于治療濃度的藥物中。又鑒于這類藥劑在靜脈內(nèi)或皮下給藥后的半壽期可能短至幾個(gè)小時(shí)，所以它們的治療效果也就很成問(wèn)題。為了使象阿糖胞苷這樣的細(xì)胞周期特異性藥物達(dá)到最佳腫瘤細(xì)胞殺傷效果。有兩個(gè)主要要求首先，必須使腫瘤細(xì)胞接觸到對(duì)宿主沒(méi)有明顯不可逆損害的高濃度藥物；其次，必須使腫瘤長(zhǎng)時(shí)間接觸到藥物，以保證有最大數(shù)目的腫瘤細(xì)胞處于細(xì)胞增殖的敏感性DNA合成期。
另一類療程依賴性藥物的實(shí)例是氨基糖苷類抗生素。例如，丁胺卡那霉素是一種對(duì)革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌菌株有顯著臨床抑制活性的氨基糖苷類抗生素。按照現(xiàn)有治療程序，該藥物的給藥方法是每天靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥一次或兩次。最常用的臨床使用劑量是15mg/kg/天，此相當(dāng)于每天1克的最大推薦劑量。然而，這種給藥方法將導(dǎo)致病人對(duì)藥物的依賴，增加全身用藥的毒付作用。因此，用于治療感染的局部貯存慢釋放制劑，例如局限于軟組織或骨骼局部區(qū)域的藥物制劑，與全身治療用藥相比，在增加局部組織藥物水平，同時(shí)降低或避免游離藥物的全身毒性方面應(yīng)是有其優(yōu)點(diǎn)的。
特別有用的是受控制的釋放制劑，它可用于在幾小時(shí)，幾天、甚至幾周時(shí)間內(nèi)釋放治療量的藥物。
已被用于提供控制藥物釋放之組合物的一個(gè)手段是脂質(zhì)體包裹。在幾種主要類型的脂質(zhì)體中，多泡脂質(zhì)體(Kim，等，Biochim，Biophys.Acta；728339-348，1983)完全不同于單層脂質(zhì)體(Huang，Biochemistry，8334-352，1969；Kim，等，Biochim，Biophys.Acta；6461-10，1981)、多層脂質(zhì)體(Bangham，等J.Mol.Biol.，13238-252，1965)和穩(wěn)定的多層脂質(zhì)體(美國(guó)專利No.4,522,803)。與單層脂質(zhì)體相反，多泡脂質(zhì)體含有多個(gè)水性內(nèi)腔。與多層脂質(zhì)體不同，多泡脂質(zhì)體的多個(gè)水性腔是不同心的?，F(xiàn)有技術(shù)中描述了許多生產(chǎn)各種類型單層和多層脂質(zhì)體的技術(shù)；例如，美國(guó)專利No.4,522,803(Lenk)；4,310,506(Baldeschwieler)；4,235,871(Papahadjopoulos)；4,224,179(Schneider)；4,078,052(Papahadjopoulos)；4,394,372(Taylor)；4,308,166(Marchetti)；4,485,054(Mezei)和4,508,703(Redziniak)；Szoka，等，1980，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，2465-508；Liposomes，Marc J.Ostro，Ed.，Marcel-Dekker，Inc.，New York.1983，第一章；Poznansky和Juliano.Pharmacol.Rev.，36277-236，1984?，F(xiàn)有技術(shù)也描述了生產(chǎn)多泡脂質(zhì)體的方法(Kim等，Biochim，Biophys.Acta；728339-348，1983)。
在Kim等人(Biochim，Biophys.Acta；728339-348，1983)的方法中，某些小分子例如阿糖胞苷(也簡(jiǎn)寫(xiě)為Ara-C)的包裹率相對(duì)較低，并且被包入囊泡內(nèi)的分子在生物體液中的釋放速率較高。因此，發(fā)展了一種使用鹽酸化物來(lái)減慢被包裹分子在生物體液中之釋放速率的組合物(Kim的于1993年2月21日提交的申請(qǐng)序號(hào)為No.08/020,483的美國(guó)專利部分后讀申請(qǐng))。
進(jìn)一步的研究顯示，可以在制成多泡脂質(zhì)體之前，借助改變?nèi)芙庥斜环庋b物質(zhì)之酸性溶液的性質(zhì)來(lái)控制這些物質(zhì)在人血漿中從多泡脂質(zhì)體內(nèi)釋放的速率(Sankavam和Kim的1993年11月1 6日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)No.08/153,657)。在這些研究工作中，發(fā)現(xiàn)某些無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、硝酸和高氯酸產(chǎn)生了最慢的釋放速率，而其他一些酸例如乙酸、三氟乙酸和三氯乙酸則產(chǎn)生中等程度的釋放速率。使用二元和三元酸例如硫酸和磷酸可獲得最快的釋放速率。以這種方法產(chǎn)生的脂質(zhì)體組合物具有必須使用酸來(lái)產(chǎn)生有預(yù)期之藥物釋放動(dòng)力性質(zhì)的多泡脂質(zhì)體的缺點(diǎn)。此外，某些可能提供多泡脂質(zhì)體中的預(yù)期藥物釋放速率的酸也存在有藥物加工方面的問(wèn)題，例如腐蝕金屬容器和生產(chǎn)中所使用的部件。另外，如果不使用酸即可產(chǎn)生在體內(nèi)環(huán)境下實(shí)際應(yīng)用的多泡脂質(zhì)體，將可能避免潛在的對(duì)酸不穩(wěn)定物質(zhì)之穩(wěn)定性方面的問(wèn)題。
研究已經(jīng)表明，可以在脂質(zhì)體中引入質(zhì)子載體或離子載體以產(chǎn)生膜電位，以調(diào)節(jié)被包裹之生物學(xué)物質(zhì)從脂質(zhì)體中向水性環(huán)境中釋放的速率(美國(guó)專利No.5,077,056)。另外，歐洲專利申請(qǐng)EP 0126580中公開(kāi)了控制藥物從囊泡組合物中釋放的速率的方法。在后一種方法中，所提供的組合物包括封裝在囊泡中的治療劑的溶液，囊泡則懸浮于含有足夠溶質(zhì)以提供一定克分子滲壓濃度的溶液內(nèi)。這一克分子滲壓濃度至少是基本上與囊泡內(nèi)溶液的克分子滲壓濃度呈等滲的，其中溶液的克分子滲壓濃度大于生理鹽水。囊泡內(nèi)溶液的克分子滲壓濃度保持恒定，而用來(lái)懸浮囊泡的溶液的克分子滲壓濃度則是可變的。在這些條件下，釋放速率隨著懸浮介質(zhì)接近等滲，或者就囊泡內(nèi)溶液來(lái)說(shuō)仍處于高滲時(shí)即逐漸降低。但這種方法的缺點(diǎn)是為了控制釋放的速率必須改變向其中釋放治療劑之介質(zhì)的克分子滲壓濃度。這樣，就使得這些組合物在實(shí)際應(yīng)用中(例如在醫(yī)藥應(yīng)用中)受到很大限制，因?yàn)樵谕队盟幬镝尫朋w系的部位，生物體液的克分子滲壓濃度實(shí)質(zhì)上是固定的，并且是不能改變的。例如，生物體液如血漿的克分子滲壓濃度幾乎是與生理鹽水(0.9 wt％NaCl水溶液)等滲的，后者克分子滲壓濃度為310mOsm。因此，懸浮介質(zhì)的克分子滲壓濃度在理論上應(yīng)接近于310mOsm。
鑒于已有脂質(zhì)體組合物及生產(chǎn)方法學(xué)的上述限制，有必要發(fā)展不依賴于使用酸即可生產(chǎn)穩(wěn)定的多泡脂質(zhì)體的技術(shù)。本發(fā)明旨在實(shí)現(xiàn)這一目的。
發(fā)明概要本發(fā)明提供生物活性物質(zhì)控制釋放的多泡脂質(zhì)體(MVL)。通過(guò)改變包裹在脂質(zhì)體內(nèi)之第一水性組分的克分子滲壓濃度來(lái)控制生物活性物質(zhì)向生理環(huán)境例如人體內(nèi)組織中釋放的速率。在這種情況下，本發(fā)明的MVL因當(dāng)其被導(dǎo)入體內(nèi)部位時(shí)能提供延遲的治療藥物釋放，從而可達(dá)到更好的治療效果。出乎意料的是，隨著包裹在脂質(zhì)體內(nèi)之第一水性組分的克分子滲壓濃度增加，其釋放速率則降低。
可通過(guò)增加生物學(xué)活性物質(zhì)的濃度，或加入滲透間隔團(tuán)(osmoticspacer)來(lái)增加第一水性組分的克分子滲壓濃度。
本發(fā)明還提供制造有控制釋放特征之多泡脂質(zhì)體的非酸性方法，從而延長(zhǎng)了體內(nèi)治療方面的應(yīng)用。本發(fā)明的多泡脂質(zhì)體具有很高的包裹效率，被包裹物質(zhì)的受控制的釋放速率、明確限定的可再現(xiàn)的大小分布、球形形狀、易于調(diào)整的平均大小和可調(diào)整的內(nèi)腔大小及數(shù)目。
本發(fā)明生產(chǎn)多泡脂質(zhì)囊泡或多泡脂質(zhì)體的方法包括(a)將至少含有一種兩親性脂質(zhì)和一種中性脂質(zhì)的脂質(zhì)組分溶解在一種或多種有機(jī)溶劑中，(b)使脂質(zhì)組分與含有將被包裹之一種或多種生物學(xué)活性物質(zhì)的不混溶性第一水性組分相混合，(c)由兩種不混溶性組分形成油包水型乳劑，(d)將此油包水型乳劑轉(zhuǎn)移并浸沒(méi)在第二不混溶性水性組分中形成溶劑小球體，以及(e)例如借助蒸發(fā)從溶劑小球中除去有機(jī)溶劑?？蓮膸в袃糌?fù)電荷的兩親性脂質(zhì)、甾醇、和兩性離子脂質(zhì)中選擇兩親性脂質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)增加生物學(xué)活性物質(zhì)的濃度、使用滲透間隔團(tuán)或聯(lián)合使用這種兩種辦法來(lái)降低向生物體液中和體內(nèi)釋放被包裹分子的速率。優(yōu)選實(shí)施方案的描述本發(fā)明涉及可允許在生物體液中受控制地釋放治療活性物質(zhì)的多泡脂質(zhì)體(MVL)組合物。在這些組合物中，以新的方式控制被包裹之水相的克分子滲壓濃度，以在沒(méi)有氫氯化物或酸存在的情況下實(shí)現(xiàn)被包裹之治療活性物質(zhì)的延遲釋放。通過(guò)利用本發(fā)明的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇性地產(chǎn)生有寬范圍治療活性物質(zhì)釋放速率的MVL。
術(shù)語(yǔ)“多泡脂質(zhì)體”是指人造的，包含多個(gè)非同心水性內(nèi)腔的細(xì)微脂質(zhì)囊泡。相反，以前描述的其他一些脂質(zhì)體例如單層脂質(zhì)體只有單一水性腔，而多層脂質(zhì)體則有多個(gè)同心的“洋蔥皮”樣膜，膜之間是含有水性組分的空隙。
術(shù)語(yǔ)“溶劑小球”是指有機(jī)溶劑的細(xì)微球狀小滴，在這些小滴內(nèi)是多個(gè)含有生物學(xué)活性藥劑之水性組分的更小的小滴。溶劑小球被懸浮并總體上浸沒(méi)在第二水性組分中。
術(shù)語(yǔ)“中性脂質(zhì)”是指本身沒(méi)有形成囊泡能力的，并且缺少帶電荷的或親水的“頭部”基團(tuán)的油或脂肪。中性脂質(zhì)的例子包括但不只限于缺少帶電荷的或親水的“頭部”基團(tuán)的甘油酯、二醇酯、生育酚酯、固醇酯，以及烷和鯊?fù)椤?br> 術(shù)語(yǔ)“兩親性脂質(zhì)”是指那些具有親水“頭部”基團(tuán)和疏水“尾部”基團(tuán)，并可能具有膜形成能力的分子。本發(fā)明使用的兩親性脂質(zhì)包括帶有凈的負(fù)電荷、凈的正電荷的兩親性脂質(zhì)、兩性離子脂質(zhì)及固醇。
術(shù)語(yǔ)“兩性離子脂質(zhì)”是指處于其等電點(diǎn)時(shí)帶凈零電荷的兩親性脂質(zhì)。
本文中使用的術(shù)語(yǔ)“生物學(xué)活性”，當(dāng)用于描述存在于多泡脂質(zhì)體之內(nèi)腔中的物質(zhì)時(shí)，包括如呈現(xiàn)于囊泡中這種形式的具有生物學(xué)活性的物質(zhì)，以及當(dāng)從囊泡腔中釋放后變?yōu)橛谢钚缘奈镔|(zhì)(即具有“靜止”生物學(xué)活性)，例如在與酶相互作用后轉(zhuǎn)變成有治療活性之活性部分的前體藥物。
另外，可被摻入的生物學(xué)活性物質(zhì)包括發(fā)揮間接作用的物質(zhì)。這類物質(zhì)也可以作為如本文中所述的滲透間隔團(tuán)。例如，可以存在各種賦形劑和穩(wěn)定劑。這類物質(zhì)例如可用于增加特定藥物的貯存期限或生物利用度。有許多通常分為賦形劑一類的物質(zhì)實(shí)際上可能具有從很小到相當(dāng)明顯的直接生物學(xué)活性。例如，常用的賦形劑甘露糖醇也可以有利尿劑的生物學(xué)作用，甚至水也可發(fā)揮影響脫水的生物學(xué)作用。這些間接活性物質(zhì)包括水性或非水性溶液、懸浮液及乳液。非水性溶液的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油，以及可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。水性載體包括水、醇的水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。胃腸道外載體包括氯化鈉溶液；林格氏葡萄糖溶液、右旋糖溶液以及乳酸化的林格氏溶液。靜脈內(nèi)載體包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。電解質(zhì)補(bǔ)充劑(例如基于林格氏葡萄糖溶液的補(bǔ)充劑)等。也可以存在防腐劑和抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑等其他添加劑，以及惰性氣體等(參見(jiàn)RemingtonsPharmaceutical Sciences，16th Ed.，A.Oslo，ed.，Mark，Easton，PA.1980)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以在不經(jīng)過(guò)過(guò)多實(shí)驗(yàn)的情況下，能很容易地確定和預(yù)計(jì)可用于本發(fā)明囊泡中的化合物的各種組合。
克分子滲壓濃度定義為存在于水溶液中之溶質(zhì)摩爾濃度的總和。如果溶質(zhì)以解離的、離子化的或聚集的形式存在，則克分子滲壓濃度定義為這些解離的、離子化的或聚集形式的物質(zhì)之摩爾濃度的總和。溶質(zhì)包括但不只限于生物學(xué)活性物質(zhì)和滲透間隔團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“滲透間隔團(tuán)”是指水溶液中的，不是生物學(xué)活性物質(zhì)的，生物學(xué)上相容的溶質(zhì)分子。電解質(zhì)和非電解質(zhì)均可發(fā)揮滲透間隔團(tuán)功能。在確定某種特定的分子是有作為滲透間隔團(tuán)的功能時(shí)，或者在確定包裹在多泡脂質(zhì)體內(nèi)之滲透間隔團(tuán)的濃度時(shí)，必須考慮在多泡脂質(zhì)體所處于條件(例如pH)下，分子是否完全或部分地離子化，以及是否這些離子會(huì)透過(guò)脂質(zhì)膜(參見(jiàn)The Bimolecular Lipid Bilayer Membrane，MahendraK.Jain van Nostrand Reinhold Co.，1972，pp 470)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解到，為了能夠用于本發(fā)明，必須選擇適當(dāng)?shù)臐B透間隔團(tuán)以避免使用證明對(duì)使用本發(fā)明的MVL進(jìn)行治療的病人有毒性或有損害的那些物質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員不須借助過(guò)多的實(shí)驗(yàn)即可很容易地估計(jì)用于本發(fā)明的給定之滲透間隔團(tuán)的適用性。
術(shù)語(yǔ)“第一水性組分”是指用于制備多囊泡脂質(zhì)體之方法中的含有生物學(xué)活性物質(zhì)的水相，其中可存在有滲透間隔團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“第一水性組分的克分子滲壓濃度”是指用于制備多囊泡脂質(zhì)體的含生物學(xué)活性物質(zhì)之水性組分的克分子滲壓濃度。
術(shù)語(yǔ)“生理上相關(guān)的水性環(huán)境”是指血漿、血清、腦脊髓液、肌肉內(nèi)液、皮下液、腹腔液、眼內(nèi)液或滑液等生物體液，以及與生物體液幾乎等滲的0.9％(重量)的鹽水或緩沖鹽水等儲(chǔ)存介質(zhì)。
控制被包裹之生物學(xué)物質(zhì)向水性環(huán)境中釋放速率的現(xiàn)有方法均依賴于1)脂質(zhì)體內(nèi)酸性溶液的性質(zhì)，或2)相對(duì)于脂質(zhì)體內(nèi)水性組分的克分子滲壓濃度而言，增加導(dǎo)入了脂質(zhì)體之外界水性環(huán)境的克分子滲壓濃度。對(duì)后一種方法的邏輯推論是，被包裹物質(zhì)的釋放速率應(yīng)隨著第一水性組分之滲壓濃度的增加而增加，同時(shí)保持其中導(dǎo)入了脂質(zhì)體之水性介質(zhì)克分子滲壓濃度的恒定。然而，本發(fā)明的令人驚奇地發(fā)現(xiàn)卻正好與基于現(xiàn)有技術(shù)所預(yù)期的情況相反，即盡管外部水性介質(zhì)的克分子滲壓濃度仍保持恒定，但實(shí)際上被包裹物質(zhì)的釋放速率隨著MVL內(nèi)的內(nèi)部水性組分之克分子滲壓濃度增加而降低。因此，本發(fā)明的方法利用被包裹在多囊泡脂質(zhì)體內(nèi)第一水性組分的克分子滲壓濃度來(lái)控制釋放速率，其中外部介質(zhì)的滲透強(qiáng)度接近于生理狀態(tài)。
此外，當(dāng)以給定的生物學(xué)活性物質(zhì)濃度生產(chǎn)包含滲透間隔團(tuán)的MVL時(shí)，增加滲透間隔團(tuán)的濃度將出乎預(yù)料地降低所述物質(zhì)的釋放速率。釋放速率隨著第一水性組分克分子滲壓濃度的增加而降低提高了用于各種治療之多泡脂質(zhì)體的實(shí)用性，并因延長(zhǎng)了治療劑的釋放而獲得治療益處。
為了降低被包裹的治療劑或其他活性藥劑從本發(fā)明多囊泡脂質(zhì)體中釋放的速率，可通過(guò)增加活性物質(zhì)的濃度或使用滲透間隔團(tuán)，使MVL內(nèi)第一水性組分的克分子滲壓濃度相對(duì)于儲(chǔ)存MVL之生理相關(guān)水性環(huán)境(如0.9％(重量)鹽水)或其中導(dǎo)入了MVL之水性環(huán)境(體內(nèi)和體外)的克分子滲壓濃度有所增加。相反，可通過(guò)降低活性物質(zhì)的濃度，或者降低滲透間隔團(tuán)的濃度，甚或不使用滲透間隔團(tuán)來(lái)提高釋放速率。第一水性組分的克分子滲壓濃度相對(duì)于生理相關(guān)水性環(huán)境也可以是高滲的，這樣可達(dá)到最適宜地降低脂質(zhì)體中生物學(xué)活性物質(zhì)之釋放速率，同時(shí)脂質(zhì)體包裹方法比在等滲條件下有更大產(chǎn)率。因此，在本發(fā)明范圍內(nèi)，就生物學(xué)活性劑將被釋放入的儲(chǔ)存介質(zhì)或水性環(huán)境來(lái)說(shuō)，第一水性組分可以是低滲壓、等滲壓的或高滲壓的。從而本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)生產(chǎn)出具有預(yù)選擇的最適于特定治療目的的生物學(xué)活性物質(zhì)釋放速率的MVL。
因?yàn)樯睇}水的克分子滲壓濃度相似于人血漿或其他體內(nèi)環(huán)境，例如腦脊液、滑液及皮下和肌肉內(nèi)間隙的，所以可使用鹽水作為MVL藥物在這樣的環(huán)境中釋放的預(yù)測(cè)模型。本發(fā)明的MVL的優(yōu)選使用方法是體內(nèi)注射或植入組織或體腔內(nèi)(例如作為藥物貯庫(kù))，并且最好是將其貯存于生理鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水等介質(zhì)或其他克分子滲壓濃度相似的介質(zhì)中。
在本發(fā)明的方法中，為了生產(chǎn)MVL，首先將兩親性脂質(zhì)或中性脂質(zhì)溶解在用于脂質(zhì)組分的可揮發(fā)性有機(jī)溶劑中，向脂質(zhì)組分中加入含有將被包裹之生物學(xué)活性物質(zhì)的不混溶性第一水性組分，然后例如通過(guò)由混合、振蕩、聲處理、超聲波、噴嘴霧化或者合用這些方法所造成的渦流乳化該混合物。然后將整個(gè)乳液浸入第二水性組分中并進(jìn)行機(jī)械攪拌，以形成懸浮于第二水性組分中的溶劑小球。所得到的溶劑小球由多個(gè)含有生物學(xué)活性物質(zhì)的水性液滴組成(水包油包水型雙層乳劑(water-in-oil-water-double emulsion))。
例如使氣流通過(guò)懸浮液蒸發(fā)溶劑，以從小球中除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑。當(dāng)溶劑被完全蒸發(fā)時(shí)，即形成多泡脂質(zhì)體。適用于蒸發(fā)溶劑的有代表性的氣體包括氮、氦、氬、氧、氫及二氧化碳。另外，也可以利用常用的溶劑排除系統(tǒng)除去有機(jī)溶劑，例如用上述氣體噴射、于減壓下蒸發(fā)及噴霧干燥等。
可以使用包括但不只限于葡萄糖、蔗糖、海藻糖、琥珀酸鹽、環(huán)糊精、精氨酸、半乳糖、甘露糖、麥芽糖、甘露糖醇、甘氨酸、賴氨酸、檸檬酸鹽、山梨醇、葡聚糖和其組合在內(nèi)的滲透間隔團(tuán)制成多泡脂質(zhì)體，以控制被包裹之物質(zhì)從多泡脂質(zhì)體中釋放的速率。被包裹之生物學(xué)活性物質(zhì)的濃度可以從大約幾個(gè)微微摩爾到大約幾百個(gè)毫摩爾。生物學(xué)活性物質(zhì)的濃度將依據(jù)被治療的疾病、病人的年齡和一般狀況，以及物質(zhì)的特定性質(zhì)而不同。在活性物質(zhì)與其毒性等付作用相關(guān)的情況下，生產(chǎn)有較低濃度活性物質(zhì)的MVL，并利用較高濃度的滲透間隔團(tuán)可能是合乎需要的。在選擇和生產(chǎn)特定的MVL組合物時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)須進(jìn)行過(guò)多實(shí)驗(yàn)即可很容易地判定這些不同參數(shù)間的相互關(guān)系。
可以使用許多不同類型揮發(fā)性疏水溶劑，例如醚、烴、鹵代烴、包括但不只限于CO2、NH3及氟利昂在內(nèi)的超臨界液體作為脂質(zhì)相溶劑。例如乙醚、異丙醚及其他醚、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、鹵化醚、酯及其組合均為適用的溶劑。
各種類型的脂質(zhì)均可用于制造多泡脂質(zhì)體，條件是至少包括一種中性脂質(zhì)和至少一種兩親性脂質(zhì)?？梢詮?1)帶有凈的負(fù)電荷的兩親性脂質(zhì)，和(2)固醇，以及(3)兩性離子脂質(zhì)中選擇兩親性脂質(zhì)。例如，脂質(zhì)組分可包括中性脂質(zhì)和帶有凈的負(fù)電荷的兩親性脂質(zhì)。在一個(gè)可替代的實(shí)施方案中，脂質(zhì)組分還包括固醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，脂質(zhì)還包括固醇和兩性離子脂類。
兩性離子脂類的例子是磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂及其組合。中性脂質(zhì)的例子是甘油三酯例如三油精、三辛精，植物油例如大豆油、豬脂、牛脂肪、生育酚、角鯊烯和其組合。帶凈負(fù)電荷兩親性脂質(zhì)的例子是心磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酸。帶凈正電荷兩親性脂的例子是二?；卒@丙烷、二?；卒@丙烷和硬脂酰胺(stearylamine)。
經(jīng)囊泡包裹將各種生物學(xué)活性物質(zhì)摻入多泡脂質(zhì)體內(nèi)。這些物質(zhì)包括藥物、以及其他類型的醫(yī)藥材料例如DNA、RNA、各種類型蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)激素例如胰島素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞活素、單核因子、淋巴因子，以及作為疫苗接種之免疫原的蛋白質(zhì)和碳水化合物。
也可以通過(guò)囊泡包裹將化妝品應(yīng)用上有效的生物活性物質(zhì)摻入到多泡脂質(zhì)體中。這些活性物質(zhì)包括潤(rùn)濕劑、維生素、酶及香精。另外，也可以將除草劑、農(nóng)藥、殺真菌劑等農(nóng)業(yè)上應(yīng)用的生物學(xué)活性物質(zhì)包裹到多泡脂質(zhì)體中。
表1中給出了可包裹在本發(fā)明多泡脂質(zhì)體中的有代表性的幾類生物學(xué)活性物質(zhì)。
表1抗心絞痛藥 抗心律不齊劑 抗哮喘劑抗生素 抗糖尿病劑抗真菌劑抗組胺劑抗高血壓藥抗寄生蟲(chóng)劑抗腫瘤劑抗病毒劑 強(qiáng)心苷除草劑 激素 免疫調(diào)節(jié)劑單克隆抗體 神經(jīng)遞質(zhì) 核酸及類似物農(nóng)藥蛋白質(zhì)和糖蛋白放射對(duì)比劑放射性核酸金屬化物 鎮(zhèn)靜劑和鎮(zhèn)痛劑類固醇安神藥 疫苗 血管加壓劑香料化妝品潤(rùn)濕劑殺真菌劑在本發(fā)明的多泡脂質(zhì)體中，適于人體內(nèi)使用的生物學(xué)活性物質(zhì)的劑量范圍包括每平方米體表面積0.001-6,000mg這一范圍。當(dāng)劑量范圍超出所給定的范圍時(shí)，這一范圍包括所有生物學(xué)活性物質(zhì)的實(shí)際上使用寬度。但對(duì)于特定治療劑來(lái)說(shuō)，可按照前述的易確定其優(yōu)選濃度。
可按任何一種所期望的途徑投用多泡脂質(zhì)體，例如腫瘤內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、肌肉內(nèi)、鞘膜內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、淋巴內(nèi)、口腔和粘膜下?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的方法對(duì)多泡脂質(zhì)體進(jìn)行修飾，例如借助間隔團(tuán)分子或肽、靶特異性配體例如抗體和其他受體特異性蛋白質(zhì)配體直接地或間接地與之連接，以賦予器官或細(xì)胞靶特異性(Malone，等，Proc.Nat’l.Acad.Sci，USA，866077，1989；Gregoriadis，Immunology Today，11(3)89，1990；兩文獻(xiàn)均列為本文參考文獻(xiàn))。
下列實(shí)施例舉例說(shuō)明可實(shí)踐本發(fā)明的方式。但應(yīng)明確的是，這些實(shí)施例旨在舉例說(shuō)明本發(fā)明，而不是將本發(fā)明限制到任何特定材料和其中所用的條件上。
實(shí)施例1A.多泡脂質(zhì)體的制備步驟1在干凈的玻璃量筒(內(nèi)徑2.5cm×高10.0cm)中加入5mL含有溶于氯仿的46.5微摩爾二油酰磷脂酰膽堿(Avanti Polar Lipids，Birmingham，AL)、10.5微摩爾二棕櫚酰磷脂酰甘油(Avanti Polar Lipids，Birmingham，AL)、75微摩爾膽固醇(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo)、9.0微摩爾三油精((Avanti Polar Lipids，Birmingham，AL)的溶液。該溶液稱為脂質(zhì)組分。
步驟2將溶解于水中的5mL第一水性組分，阿糖胞苷(Upjohn，Kalamazoo，MI)，或硫酸丁胺卡那霉素(Bristol Myers Squibb，Syracuse，NY)加入上述含有脂質(zhì)組分的玻璃量筒中。所加入的阿糖胞苷濃度為41mM、82mM、164mM、246mM、369mM和410mM。就硫酸丁胺卡那霉素來(lái)說(shuō)，所用的濃度為13mM、26mM、52mM和88mM。硫酸丁胺卡那霉素中，每個(gè)丁胺卡那霉素分子相當(dāng)于含1.8個(gè)硫酸根離子。因此，濃度乘上2.8即得到克分子滲壓濃度。
步驟3為了制得油包水型乳劑，用勻漿器(AutoHomoMixer，ModelM，Tokushu Kika，Osaka，Japan)將步驟2的混合物以9000rpm的速度攪拌8分鐘。
步驟4為了制得懸浮于水中的氯仿小球，將20mL含有4％右旋糖和40mM賴氨酸的溶液鋪敷在油包水乳液的頂層上，然后以4000rpm的速度混合60秒鐘，以形成氯仿小球。
步驟5為了得到多泡脂質(zhì)體，將玻璃量筒中的氯仿小球混懸液倒入含有30mL水，葡萄糖(3.5g/100mL)和游離堿賴氨酸(40mM)的1000mL Erlenmeyer燒瓶中。使氮?dú)饬饕?L/分鐘的速度通過(guò)燒瓶中的懸液，以于37℃下用20分鐘緩慢蒸發(fā)氯仿。向燒瓶?jī)?nèi)加入60mL生理鹽水(0.9％氯化鈉)。然后以600×g離心10分鐘分離脂質(zhì)體，棄去上清，并將沉淀物再懸浮于50mL生理鹽水中。以600×g離心10分鐘分離脂質(zhì)體。棄去上清液，并將沉淀物重新懸浮在鹽水中。B.多泡脂質(zhì)體平均直徑的檢測(cè)使用Horiba公司(Irvine，CA)的LA-500型粒度大小分析儀，以激光衍射法檢測(cè)按上述方法制備的多泡脂質(zhì)體的平均直徑。所得脂質(zhì)體的平均直徑為5至20μm。C.阿糖胞苷的血漿釋放檢測(cè)法本實(shí)施例證明隨著第一水性組分中藥物濃度的增加，37℃人血漿中阿糖胞苷和丁胺卡那霉素的釋放速率降低。
將500μL含有阿糖胞苷的多泡脂質(zhì)體懸液加到1.2mL經(jīng)過(guò)篩選的O型人血漿中，將混合物于37℃保溫。以預(yù)定的時(shí)間間隔取出等分樣品，以600×g離心分離作為沉淀物的多泡脂質(zhì)體，將沉淀物溶解在異丙醇中，并以高壓液相層析法檢測(cè)沉淀部分中阿糖胞苷的量(例如參見(jiàn)U.S.Pharmacopeia XXII，p.376，1 990)。D.丁胺卡那霉素的血漿釋放檢測(cè)法將500μL含有丁胺卡那霉素的多泡脂質(zhì)體懸液加到1.2mL篩選的O型人血漿中。37℃保溫該混合物并以預(yù)期的間隔時(shí)間取樣。以600×g離心分離作為沉淀物的多泡脂質(zhì)體。將沉淀物溶解在異丙醇中，并以聚苯乙烯球基熒光免疫檢測(cè)法(Varma-Nelson，等，Therapeutic DrugMonitoning 13260-262，1991)檢測(cè)沉淀部分中的丁胺卡那霉素量。根據(jù)按此方法測(cè)量的量計(jì)算余留的丁胺卡那霉素百分含量。
如可從表2中看到的，以用于第一水性組分中之總藥物的百分比表示的包裹率，對(duì)藥物從在人血漿中保溫的多泡脂質(zhì)體中釋放的速率(以半衰期表示)具有顯著的影響。采用簡(jiǎn)單指數(shù)衰變模型計(jì)算藥物釋放的半衰期。表2中所示的數(shù)據(jù)是三次實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。相對(duì)于等滲條件來(lái)說(shuō)，在高滲條件下阿糖胞苷向人血漿中釋放的半衰期基本上沒(méi)有改變。數(shù)據(jù)還表明，在生產(chǎn)過(guò)程中約高達(dá)246mOsm的情況下，隨著包裹在多泡脂質(zhì)體中的生物學(xué)活性物質(zhì)濃度(以mOsm表示)的增加，阿糖胞苷和丁胺卡那霉素的半衰期也在增加。隨著包裹在多泡囊泡內(nèi)的第一水性組分之克分子滲壓濃度的增高，不可預(yù)見(jiàn)地生產(chǎn)出可在人血漿中長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)緩慢釋放藥物的，提高了實(shí)用性的脂質(zhì)體。
表2藥物克分子滲平均直徑包裹產(chǎn)率半衰期壓濃度 (μm) (天)(mOsm)阿糖胞苷419.1±0.718±31.0±0.382 10.9±1.137±21.8±0.3164 13.3±1.651±44.6±1.9246 14.7±1.861±5 14.1±1.5369 16.1±2.462±3 12.1±2.7410 l3.4±2.357±2 13.0±3.6硫酸丁胺367.0±1.235±56.4±2.7卡那霉素737.1±1.242±523.9±1.4146 7.6±1.150±639.6±2.9246 8.3±1.766±647.3±4.0實(shí)施例2本實(shí)施例證明在一個(gè)固定的生物學(xué)活性物質(zhì)濃度下，阿糖胞苷在血漿中的釋放速率隨著第一水性組分克分子滲壓濃度的增加而降低。按照實(shí)施例1步驟1至步驟5中所述的方法制備多泡脂質(zhì)體，但其中步驟2作了如下改動(dòng)。
步驟2將5ml水性組分，即以82mM的濃度溶解于水、或3％(重量)葡萄糖或5％(重量)葡萄糖中的阿糖胞苷加到上述含有脂質(zhì)組分的玻璃量筒中。計(jì)算的所得溶液的克分子滲壓濃度分別為82、220和335mOsm。
于37℃在人血漿中保溫后，檢測(cè)在不同葡萄糖濃度下，作為保溫時(shí)間之函數(shù)的仍保留在多泡脂質(zhì)體中的阿糖胞苷百分比。表3中顯示含有0、3和5％(重量)葡萄糖的組合物的平均直徑、阿糖胞苷的包裹率及在37℃血漿中釋放的半衰期。所示數(shù)據(jù)均為三次實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。在生物學(xué)活性物質(zhì)保持固定混度時(shí)混入不同濃度的滲透間隔團(tuán)，葡萄糖，對(duì)在人血漿中保溫的多泡脂質(zhì)體釋放活性物質(zhì)的速率產(chǎn)生顯著地影響。從表3中所示數(shù)據(jù)可以看出，阿糖胞苷從多泡脂質(zhì)體中向人血漿中釋放的半衰期隨著第一水性組分之克分子滲壓濃度的增加而增加。隨著第一水性組分的克分子滲壓濃度增加到高達(dá)約248mOsm，包裹率也得以增加。
表3[葡萄糖] 克分子滲壓 平均直徑包裹率半衰期(wt％)濃度a(μm)(天)(mOsm)0 82 10.9±1.137±2 1.8±0.33 24816.5±1.655±318.6±5.75 35917.9±1.157±417.9±4.3a克分子滲壓濃度包括阿糖胞苷和葡萄糖兩者。
實(shí)施例3本實(shí)施例證明可在使用生理鹽水溶液作為第二水性組分時(shí)制備多泡脂質(zhì)體。按下述步驟制備多泡脂質(zhì)體。
步驟1在潔凈的玻璃量筒(內(nèi)徑2.5cm×高10.0cm)中放入5mL含有溶于氯仿之46.5微摩爾二油?；字Ｄ憠A(Avanti Polar Lipids，Birmingham，AL)、10.5微摩爾二棕櫚酰基磷脂酰甘油(Avanti PolarLipids，Birmingham，AL)、75微摩爾膽固醇(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo)、9.0微摩爾三油精(Avanti Polar Lipids，Birmningham，AL)的溶液。該溶液稱為標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)組分。
步驟2將5mL第一水性組分，以246mM的濃度溶解于水中的阿糖胞苷(Upjohn，Kalamazoo，MI)加入到上述含有標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)組分的玻璃量筒中。
步驟3為了制取油包水型乳液，使用勻漿器(AutoHomoMixer，Model M，Tokushu Kika，Osaka，Japan)將上述混合物以9000rpm的速度混合8分鐘。
步驟4為了制得懸浮于水中的氯仿小球，將20mL生理鹽水(0.9％氯化鈉)鋪敷在油包水乳液的頂層上，然后以4000rpm的速度混合60秒鐘，以形成氯仿小球。如此構(gòu)成水包油包水型雙層乳劑。
步驟5將玻璃量筒中的氯仿小球混懸液倒入含有30mL生理鹽水(0.9％氯化鈉)的1000mL Erlenmeyer燒瓶中。使氮?dú)饬饕?L/分鐘的速度通過(guò)燒瓶中的懸液，以于37℃下經(jīng)20分鐘蒸發(fā)掉氯仿。通過(guò)50μm濾器過(guò)濾脂質(zhì)體。以600×g離心10分鐘從懸浮液中分離脂質(zhì)體，棄去上清液，將沉淀物重新懸浮在鹽水中。
阿糖胞苷從使用246mOsm阿糖胞苷水溶液和用生理鹽水作為第二水性組分制備的多泡脂質(zhì)體中釋放的半衰期為15.7±4.8天。這一數(shù)值相似于從使用246mOsm阿糖胞苷水溶液和以葡萄糖-賴氨酸溶液作為第二水性組分制備的多泡脂質(zhì)體中釋放的半衰期(14.1±1.5天，參見(jiàn)表2)。
實(shí)施例4用小鼠進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)研究，以試驗(yàn)本發(fā)明多泡脂質(zhì)體的體內(nèi)慢釋放性能。
按實(shí)施例1所述方法制備多泡脂質(zhì)體。使用濃度為82mM或246mM的阿糖胞苷水溶液作為第一水性組分。用生理鹽水將所得到的多泡脂質(zhì)體洗兩次，以600×g離心l0分鐘，并以每mL懸浮液10mg阿糖胞苷的濃度將脂質(zhì)體貯存于生理鹽水中。
小鼠(CDlICR，遠(yuǎn)親交配，雌性)腹腔內(nèi)注射含有2.55±0.25mg阿糖胞苷的多泡脂質(zhì)體。注射前，取準(zhǔn)備注射的含有同樣量阿糖胞苷的多泡脂質(zhì)體懸液等分樣品作為0時(shí)間樣品。
注射后，在長(zhǎng)達(dá)108小時(shí)的不同時(shí)間點(diǎn)上斷頸處死動(dòng)物。從腹腔內(nèi)收集20μL未稀釋的腹腔液，加入含有200μL生理鹽水的樣品試管中。在Eppendorf微量離心機(jī)(Brinkman Instruments Westbury，NY)中以最大速度將樣品試管離心1分鐘。分離上清液和沉淀物。在按上述方法回收20μL腹腔液后，用2～3mL 0.9％NaCl溶液徹底清洗腹腔。所有樣品均貯存于-20℃下以備分析用。
用異丙醇溶解沉淀物和上清液部分，以及洗出部分。用高壓液相層析法檢測(cè)各溶解的部分中的阿糖胞苷量(例如參見(jiàn)U.S.Pharmacopeia，XXII376，1990)。表4中給出沉淀部分中的阿糖胞苷濃度(μg/mL)。將沉淀物和20μL未稀釋腹腔液樣品之上清液部分中的量，以及腹腔洗出部分中的量加在一起，得到腹腔中阿糖胞苷的總量(μg)，這一數(shù)值也在表4中給出。
使用單間格模型和零稱重，以RSTRIP程序(MicroMath ScientificSoftware，Salt Lake City，Utah)分析藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，即沉淀部分和上清液部分中阿糖胞苷濃度及總量的時(shí)間依賴性降低。表4中給出了衰變半衰期。
將表4中所示的82mM(初始阿糖胞苷濃度)制劑與246mM(初始阿糖胞苷濃度)制劑的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，表明82mM制劑的阿糖胞苷總量降低比246mM制劑更加迅速。82mM制劑的沉淀部分中的濃度降低也比246mM制劑的更為迅速。因此，這一研究顯示，阿糖胞苷釋放速率不僅在生理相關(guān)環(huán)境即如實(shí)施例1中所示的人血漿中，而且也在體內(nèi)隨著第一水性組分的克分子滲壓濃度增加降低。
表4在腹腔注射使用含有82mM阿糖胞苷或246mM阿糖胞苷的溶液制備的制劑后不同時(shí)間腹腔液的沉淀物部分中阿糖胞苷的濃度，以及腹腔中阿糖胞苷的總量。每組3只動(dòng)物。腹腔內(nèi)沉淀部分中的濃度 總量注射后 (μg/mL) (μg)小時(shí)數(shù) 82mM 246mM82mM246mM制劑 制劑 制劑制劑0 9,380 9,685 2,3722,7910.5 9,925±3716,896±1,0831，108±67 1,202±484 1,115±1,108 13,360±761 150±14 1,493±132151,015±92211,493 76±58 790±41964ND1,493±132 ND 388±191108 ND634±518ND 58±34t1/2(r2)1.7(0.974) 29.6(0.904) 0.64(0.989) 13.6(0.892)ND，未測(cè)；t1/2，衰變半衰期(小時(shí))。
雖然為了描述目的給出了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但可以作出屬于本發(fā)明待批權(quán)利要求范圍內(nèi)的各種改動(dòng)。
權(quán)利要求
1.生產(chǎn)多泡脂質(zhì)體的方法，該方法包括以下步驟(a)從兩種不相混溶的組分，即包含至少一種有機(jī)溶劑，至少一種兩親性脂質(zhì)和中性脂質(zhì)的脂質(zhì)組分，和包含至少一種生物學(xué)活性物質(zhì)的第一水性組分，形成油包水型乳液；(b)使此油包水型乳液分散到第二水性組分中以形成溶劑小球；(c)從溶劑小球中除去有機(jī)溶劑，以形成多泡脂質(zhì)體；其中選擇第一水性組分的克分子滲壓濃度以調(diào)節(jié)從多泡脂質(zhì)體向生理相關(guān)水性環(huán)境中釋放的速率。
2.權(quán)利要求1的方法，其中兩親性脂質(zhì)是帶有凈的負(fù)電荷的兩親性脂質(zhì)。
3.權(quán)利要求2的方法，其中兩親性脂質(zhì)選自心磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酸。
4.權(quán)利要求2的方法，其中脂質(zhì)組分還包含固醇。
5.權(quán)利要求4的方法，其中脂質(zhì)組分還包含兩性離子脂質(zhì)。
6.權(quán)利要求1的方法，其中兩親性脂質(zhì)是兩性離子脂質(zhì)。
7.權(quán)利要求5的方法，其中兩性離子脂質(zhì)選自磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂及溶血磷脂酰膽堿。
8.權(quán)利要求1的方法，其中兩親性脂質(zhì)帶有凈正電荷。
9.權(quán)利要求8的方法，其中兩親性脂質(zhì)選自二酰基三甲銨丙烷、二酰基二甲銨丙烷和硬脂酰胺。
10.權(quán)利要求1、2、4、6或8的方法，其中第一水性組分還包含滲透間隔團(tuán)，借以提高第一水性組分的克分子滲壓濃度。
11.權(quán)利要求1、2、4、6或8的方法，其中脂質(zhì)組分選自磷脂和磷脂的混合物。
12.權(quán)利要求1或6的方法，其中生理上相關(guān)的水性環(huán)境是貯存介質(zhì)。
13.權(quán)利要求1或6的方法，其中生理上相關(guān)的水性環(huán)境選自包括但不只限于生理鹽水、緩沖鹽水、人血漿、血清、腦脊液、皮下液、滑液、眼內(nèi)液、腹腔內(nèi)液、肌肉內(nèi)液，或其組合的物組。
14.權(quán)利要求1的方法，其中至少一種兩親性脂質(zhì)帶有凈負(fù)電荷。
15.權(quán)利要求1的方法，其中兩親性脂質(zhì)是以與膽固醇的混合物的形式提供的。
16.權(quán)利要求1的方法，其中親脂性生物學(xué)活性材料是以與脂質(zhì)組分的混合物的形式提供的。
17.權(quán)利要求11的方法，其中中性脂質(zhì)選自三油精、三辛精、大豆油、豬脂、牛油、生育酚、角鯊烯，及其組合。
18.權(quán)利要求1的方法，其中有機(jī)溶劑選自醚、烴、鹵代烴、鹵代醚、酯、CO2、NH3、氟利昂及其組合。
19.權(quán)利要求1的方法，其中生物學(xué)活性材料是親水的。
20.權(quán)利要求1的方法，其中使用選自機(jī)械攪拌，超聲供能和噴嘴霧化的方法進(jìn)行兩種所述組分的乳化。
21.權(quán)利要求20的方法，其中在選用的乳化方法的不同時(shí)間和期間測(cè)定囊泡內(nèi)水性腔的平均大小和數(shù)目。
22.權(quán)利要求1的方法，其中第一水性組分基本上是由水和生物學(xué)活性物質(zhì)組成的。
23.權(quán)利要求1的方法，其中第二水性組分包含選自游離堿賴氨酸、游離堿甘氨酸、及游離堿組氨酸和其組合的物質(zhì)；以及選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、琥珀酸鹽、環(huán)糊精、精氨酸、半乳糖、甘露糖、麥芽糖、甘露糖醇、甘氨酸、賴氨酸、檸檬酸鹽、山梨醇、葡聚糖、氯化鈉及其組合物的物質(zhì)。
24.權(quán)利要求1的方法，其中第二水性組分包含選自單糖、二糖、多糖及其他聚合物的物質(zhì)。
25.權(quán)利要求1的方法，其中使用選自噴射、蒸發(fā)、使氣體通過(guò)溶劑小球、噴霧干燥及其組合的溶劑去除系統(tǒng)除去有機(jī)溶劑。
26.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)選自抗心絞痛藥、抗生素、抗組胺劑、抗腫瘤劑、單克隆抗體、放射性核酸金屬化物、安神劑、抗心律不齊劑、抗糖尿病藥、抗高血壓藥、抗病毒劑、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、抗哮喘劑、抗真菌劑、抗寄生蟲(chóng)劑、強(qiáng)心苷、免疫調(diào)節(jié)劑、核酸及類似物、放射對(duì)比劑、類固醇、血管加壓劑、疫苗、鎮(zhèn)靜劑和鎮(zhèn)痛劑，及其組合的治療類物質(zhì)。
27.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)是阿糖胞苷。
28. 權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)是丁胺卡那霉素。
29.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)選自治療用蛋白質(zhì)和肽。
30.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)選自除草劑、農(nóng)藥、殺真菌劑、殺昆蟲(chóng)劑及其組合。
31.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)選自核酸。
32.權(quán)利要求1或6的方法，其中生物學(xué)活性物質(zhì)選自化妝品、香料、潤(rùn)濕劑及其組合。
33.帶有連接的靶特異性配體或親水涂層的權(quán)利要求1或6的多泡脂質(zhì)體。
34.用生物學(xué)活性化合物治療病人的方法，該方法包括給病人投用包裹在權(quán)利要求1或2的多泡脂質(zhì)體中的所說(shuō)的化合物。
35.用生物學(xué)活性化合物治療病人的方法，該方法包括給病人投用權(quán)利要求25、26、29或30的多泡脂質(zhì)體。
36.具有第一水性組分的多泡脂質(zhì)體，其包含為遲延釋放而包裹在其中的生物學(xué)活性物質(zhì)，其中多泡脂質(zhì)體是在生理上相關(guān)的水性環(huán)境中，并且其中增加第一水性組分的克分子滲壓濃度以降低活性物質(zhì)向生理上相關(guān)的水性環(huán)境中釋放的速率，或者其中降低第一水性組分的克分子滲壓濃度以增加所說(shuō)的釋放速率。
37.權(quán)利要求34的多泡脂質(zhì)體，其中第一水性組分包含足夠的生物學(xué)活性物質(zhì)以達(dá)到所需的克分子滲壓濃度。
38.權(quán)利要求35的多泡脂質(zhì)體，其中第一水性組分進(jìn)一步包含足夠的滲透間隔團(tuán)以達(dá)到所需的克分子滲壓濃度。
39.控制活性劑從多泡脂質(zhì)體中向生理上相關(guān)的水性環(huán)境中釋放之速率的方法，其包括調(diào)整第一水性組分的克分子滲壓濃度，以便降低活性劑從脂質(zhì)體中釋放的速率，隨著克分子滲壓濃度的增加，釋放速率降低。
40.權(quán)利要求39的方法，其中將滲透間隔團(tuán)導(dǎo)入第一水性組分中以提高其克分子滲壓濃度。
全文摘要
公開(kāi)了含有生物學(xué)活性物質(zhì)的多泡脂質(zhì)體(MVL)，該多泡脂質(zhì)體具有限定的大小分布，可調(diào)整的平均大小、可調(diào)整的內(nèi)腔大小和數(shù)目，以及受控制的和可變的生物學(xué)活性物質(zhì)的釋放速率。制備方法包括將至少一種生物學(xué)活性物質(zhì)封裝入囊泡內(nèi)，并且可以任選地將第一水性組分中的滲透間隔團(tuán)包入脂質(zhì)體內(nèi)?；钚晕镔|(zhì)向引入了脂質(zhì)體的周圍環(huán)境中釋放的速率可隨著第一水性組分之克分子滲壓濃度的增加而降低，或隨其克分子滲壓濃度的降低而增加。
文檔編號(hào)B01J13/12GK1166136SQ95196186
公開(kāi)日1997年11月26日 申請(qǐng)日期1995年9月13日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月13日
發(fā)明者M·沙卡蘭姆, S·金 申請(qǐng)人:迪普技術(shù)公司