專利名稱:大網(wǎng)格聚合物吸附劑分離相模霉素的工藝的制作方法
本發(fā)明涉及抗生素的分離工藝，更進(jìn)一步說涉及用大網(wǎng)格聚合物吸附劑分離抗生素相模霉素(sagamicin)的工藝。
1974年日本協(xié)和發(fā)酵公司首次報道xk-62-2，即相模霉素是一種腎毒和耳毒都低于艮他霉素(Gentamicin，GM)的抗生素，并具有幾乎和艮他霉素相等的抗菌活性。江蘇微生物研究所從GM生產(chǎn)菌種中經(jīng)誘變得到一株產(chǎn)生相模霉素的突變株J IM-401。該突變株主要產(chǎn)生相模霉素與GMC1a的抗生素的復(fù)合物。從該突變菌株分離得到的復(fù)合抗生素須進(jìn)一步對其中的相模霉素進(jìn)行分離。在本發(fā)明之前是用以下的現(xiàn)有技術(shù)對含有相模霉素的混合物進(jìn)行分離的一，利用硅膠柱層析法進(jìn)行分離，參見文獻(xiàn)(1)日本特開昭49-47590 p642 (2)日本特開昭49-13391 p462(3)J.Antibiotic Volxxvil N10 (1974)p793-794及(4)J.AntibioticVolxxv Ⅲ N01(1975)p40等，例如采用硅膠G，采用氯仿異丙醇17%氨水(2∶1∶1)為展開劑進(jìn)行展層和解析，將相模霉素與GMca分開。
二.利用硅藻土柱層析法進(jìn)行分離，參見文獻(xiàn)offengungsschrift 2326781 p31，采用硅藻土柱，利用氯仿∶異丙醇∶17%氨水(2∶1∶1v/v)展層和解析，可將相模霉素和GMC1a分開。
三.利用纖維素柱層析法進(jìn)行分離，參見文獻(xiàn)offengungsschrift 2326781 p34。
四.利用離子交換柱層析法進(jìn)行分離，參見文獻(xiàn)，日本特開昭49-133590其中介紹了幾種離交換樹脂來分離相模霉素的具體處理過程。
原有技術(shù)的缺點在于一、二、三所采用的柱層析要用大量的有毒的有機(jī)溶媒且成本高，無法工業(yè)化生產(chǎn)。
四法雖能工業(yè)化，但分離效果差，設(shè)備要求高(柱H∶D大)，由于相模霉素與GMC1a非常相似，僅差一個甲基，故而難以分離。此外，還需大量的酸堿來處理和再生樹脂，且分離周期長，一般為一周以上，造成成本非常昂貴。
本發(fā)明的目的在于，提供一種周期大大縮短了的，高收率的經(jīng)濟(jì)且安全的用于工業(yè)規(guī)模分離相模霉素的工藝方法。
本發(fā)明的目的是通過以下的方式實現(xiàn)的。
采用大網(wǎng)格聚合物吸附劑對含有相模霉素的復(fù)合物進(jìn)行層析分離。該分離工藝包括以下步驟(1)將含有待分離的相模霉素的復(fù)合物對大網(wǎng)格聚合物吸附劑進(jìn)行上樣的步驟。
(2)用洗脫液對吸附于大網(wǎng)格聚合物吸附劑上的相模霉素進(jìn)行洗脫的步驟。
(3)將上述步驟中得到的含相模霉素的洗脫液進(jìn)行濃縮的步驟。
本發(fā)明的優(yōu)點在于，采用大網(wǎng)格聚合物吸附劑分離相模霉素工藝的過程操作簡便，分離周期短，且收率高，在本發(fā)明申請中的實施例1及2中的收率分別為17.4%及25%，而根據(jù)日本公開特許公報特開昭49-133590關(guān)于相模霉素(xk-62-2)的精制法例1中的結(jié)果推算，其收率僅為4～8%。
發(fā)明的另一個優(yōu)點在于，無需大量的酸堿，采用氨水及乙醇(或甲醇或丙酮)等試劑，不使用氯仿等毒性劇烈的溶媒用量不大，因而安全、經(jīng)濟(jì)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
而且，本發(fā)明采用的大網(wǎng)格聚合物吸附劑國內(nèi)可以生產(chǎn)且價格低廉。
以下通過實施例對本發(fā)明的過程作進(jìn)一步的，具體地描述，以期能更清楚地說明本發(fā)明，而并不對本發(fā)明的范圍作任何限制。
實施例1采用玻璃制的層析柱(直徑為16mm高度為316mm)，大網(wǎng)格聚合物吸附劑60ml。
1)吸附劑的預(yù)處理新買來的吸附劑里由于尚殘有未處理凈的致孔劑，故須用丙酮浸泡24小時，再用乙醇處理后用去離子水將乙醇洗去備用。
2)裝柱用一般離子交換樹脂所采用的濕法裝柱，用小燒杯將吸附劑一杯杯地加入層析柱內(nèi)，與此同時柱下端緩緩將柱內(nèi)的去離子水放出，待吸附劑和液面下沉?xí)r再加吸附劑，注意使液面始終保持在吸附劑之上。待加至310mm高時為止。這時吸附劑應(yīng)完全壓緊，再通0.5N氨水待流水液PH≥10為止，流速為1/200樹脂體積·分。
3)上樣將1.7克復(fù)合物(內(nèi)含相模霉素及GMCa)用8ml左右0.5N氨水溶解后緩緩滴加到柱的吸附劑上端，待樣品滴加完后，再打開柱下端開關(guān)，緩緩將柱內(nèi)0.5N氨水一滴滴放出，直至上端復(fù)合物溶液到吸附劑平面為止。
4)洗脫相模霉素及GMCa先用5%乙酸0.5N氨水或0.5N氨水5%甲醇或丙酮溶液洗，流速為1/300～400樹脂體積·分，先采用1/400樹脂體積·分的流速，再用1/300樹脂體積·分的流速。用分部收集器洗脫液每20分鐘收集一管，每隔10管抽一個樣，用薄層層析法(硅膠G)TLC(展層溶劑為氯仿∶甲醇∶氨水＝2∶1∶1)檢驗流出液中的組份含量，直至GMC1a大部份流出為止，一般需12-18小時。(TLC檢驗發(fā)現(xiàn)GMC1a由淡到濃然后再到淡直到很微量為止)5)洗脫相模霉素利用10%乙醇0.5N氨水溶液洗相模霉素流速1/300樹脂體積·分，分部收集每20分鐘一管，約需8-12小時(每隔10管做TLC檢驗SGM)6)洗脫剩余的相模霉素利用20%乙醇溶液，流速為1/200樹脂體積·分部收集，每20分鐘收集一管，將吸附在吸附劑內(nèi)的相模霉素全部洗下，(這時相模霉素純度較高約95%左右)(TLC檢驗直到無相模霉素為止)7)將上述含相模霉素的洗脫液濃縮，脫色并沉淀相模霉素合并以上步驟得到的含相模霉素的洗脫液，減壓濃縮成小體積，然后用6NH2SO4將其PH調(diào)至4.5～5.0后加入1%重量/體積的活性炭進(jìn)行脫色，過濾除去活性炭所得濾液在分析級無水乙醇(或甲醇)中沉淀，然后抽濾。在真空下將相模霉素硫酸鹽抽干可得相模霉素SGM338mg，同樣可得GMC1a296mg，總分離收率為17.4%。
實施例2采用有機(jī)玻璃制成的層析柱，直徑為75mm高度為1300mm。
1)裝柱按上法(實施例1)用11搪瓷燒杯將吸附劑加入至上述層析柱內(nèi)，裝5.31的吸附劑，高度為1200mm左右。
2)上樣按實施例1的方法，緩緩將待分離的復(fù)合物加入到吸附劑上端。同時開啟柱下端閥門將里面液體緩緩放出流速為1/600樹脂體積·分待上述復(fù)合物全部加完為止。
3)洗脫GMCa用0.5N氨水5%乙醇為洗脫液將GMC1a洗下，流速為1/400樹脂體積·分。用51試制瓶收集并用薄層層析法檢驗其組份流出情況，每隔2小時取一次樣，共收集約25升～30升的GMC1a，共需18小時。
4)洗脫相模霉素用0.5N氨水10%乙醇為解析液將SGM洗下(流速為1/300樹脂體積·分)用51試劑瓶收集并用薄層層析法檢驗其組分流出情況共收集20升左右，約需19小時。
5)洗脫殘存的相模霉素用20%乙醇為洗脫液將殘存在吸附劑內(nèi)的相模霉素洗下，流速為1/200樹脂體積·分，其收集8升約5小時左右。
6)濃縮脫色及沉淀將上述相模霉素洗脫液合并濃縮(減壓)，用6NH2SO4(分析純)將上述濃縮液PH調(diào)至4.5～5.0然后加活性炭(按1.5g/100ml濃縮液的比例)脫色后抽濾，將活性炭除去可得18×106單位的相模霉素，總分離收率為25%。
7)大網(wǎng)格聚合物吸附劑的再生大網(wǎng)格聚合物吸附劑反復(fù)使用2-3次后，用乙醇洗，再用去離子水將乙醇洗去，便可再次使用。
以上所舉的僅是大網(wǎng)格聚合物吸附劑用柱層析分離相模霉素的例子。同樣地，將大網(wǎng)格聚合物吸附劑通過其它的層析方法諸如板層析法分離相模霉素的操作也與上述二例十分類似。
權(quán)利要求
1.一種用分離相模霉素(Sagamicin)的工藝，其特征在于，該分離相模霉素的工藝是采用大網(wǎng)格聚合物吸附劑對相模霉素進(jìn)行層析分離的，該工藝包括以下的步驟1)將含有待分離的相模霉素的復(fù)合物對大網(wǎng)格聚合物吸附劑進(jìn)行上樣，2)用洗脫液對吸附于大網(wǎng)格聚合物吸附劑上的相模霉素進(jìn)行洗脫，3)將上述步驟中得到的含相模霉素的洗脫液進(jìn)行濃縮。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的工藝，其特征在于所說的工藝中的步驟1)含有相模霉素的復(fù)合物是經(jīng)氨水溶液溶解后再上樣的。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的工藝，其特征在于所說的工藝中的步驟1)中所述的氨水濃度在0.5N左右。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的工藝，其特征在于所說的工藝中的步驟2)中所述的洗脫液為乙醇的氨水溶液或者是甲醇的氨水溶液或者是丙酮的氨水溶液，優(yōu)先采用乙醇的氨水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的工藝，其特征在于所說的工藝中的步驟2)中所述的洗脫液對應(yīng)于將相模霉素組分洗脫下來的濃度為10%-20%乙醇或甲醇或丙酮的0.5N氨水。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的工藝，其特征在于所說的工藝中的步驟3)中還包括脫色和/或沉淀的操作過程。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的工藝，其特征在于，采用柱層析，板層析或者其它類似層析方法進(jìn)行分離。
專利摘要
本發(fā)明涉及用大網(wǎng)格聚合物吸附劑分離抗生素相模霉素(Sagamicin；Micronomicin，Kw-1062；XK-62-2)的工藝。
文檔編號C07H1/06GK87100665SQ87100665
公開日1988年8月24日 申請日期1987年2月9日
發(fā)明者范瑾, 胡小玲, 趙敏 申請人:江蘇省微生物研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan