專利名稱：基于抗原－抗體反應(yīng)原理的固相免疫檢測(cè)用試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及的是一種固相免疫檢測(cè)用的試紙，具體講是一種基于抗原-抗體反應(yīng)原理的固相免疫檢測(cè)用的試紙，尤其是可同時(shí)對(duì)多種抗體或抗原進(jìn)行快速定性和/或定量檢測(cè)的固相免疫檢測(cè)用試紙。目前特別具有現(xiàn)實(shí)意義的，是可用于同時(shí)對(duì)Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒-丙型肝炎病毒(HIV1/2-HCV)抗體進(jìn)行雙檢測(cè)的快速診斷檢測(cè)用試紙。
目前對(duì)包括如艾滋病毒、丙型肝炎病毒等多種蛋白性物質(zhì)感染的血清學(xué)診斷，可有包括常用的酶聯(lián)免疫法和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)在內(nèi)的免疫學(xué)方法，以及以聚合酶鏈?zhǔn)椒糯蠓磻?yīng)(PCR)為基礎(chǔ)的核酸檢測(cè)方法兩大類檢測(cè)分析手段。以目前為人們所關(guān)注的艾滋病毒和丙型肝炎病毒兩種病毒為例，現(xiàn)有的上述免疫學(xué)方法對(duì)這兩類病毒都尚難以通過(guò)檢測(cè)其相應(yīng)的抗原而作為感染與否的判斷，臨床和血站等醫(yī)療、防疫單位采用的均是抗體檢測(cè)方式，對(duì)大規(guī)模的待檢標(biāo)本進(jìn)行判斷。其中的酶聯(lián)免疫法因其費(fèi)用較低、一次可檢測(cè)多達(dá)近百個(gè)樣本和可進(jìn)行機(jī)械化操作，以及其靈敏度和特異性，已被各國(guó)藥政當(dāng)局選為鑒定其相應(yīng)診斷試劑的標(biāo)準(zhǔn)量化指標(biāo)，成為目前最廣為使用的一種方法，但其檢測(cè)所需時(shí)間為4-8小時(shí)，不能滿足如海關(guān)、防疫部門(mén)和血站等對(duì)受染者或獻(xiàn)血員等進(jìn)行快速鑒別檢測(cè)的特殊要求，對(duì)缺乏成套臨床檢驗(yàn)設(shè)備和能力的醫(yī)療單位及時(shí)做出診斷也造成困難。免疫學(xué)方法中的蛋白質(zhì)印跡技術(shù)雖可用于確診，但其檢測(cè)費(fèi)用昂貴，且檢測(cè)所用時(shí)間更長(zhǎng)，要超過(guò)一天。上述的核酸檢測(cè)方法，是目前對(duì)艾滋病和丙型肝炎病兩種病毒最常用的確認(rèn)手段，但其同樣存在檢測(cè)費(fèi)用高和檢測(cè)耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題，且進(jìn)行檢測(cè)時(shí)常需有大規(guī)模樣本時(shí)才能開(kāi)機(jī)進(jìn)行一次，同樣也無(wú)法滿足海關(guān)、防疫和血站等單位或部門(mén)對(duì)快速鑒別檢測(cè)的特殊要求，以及中、小醫(yī)療單位對(duì)檢測(cè)工作的開(kāi)展，并且其結(jié)果還常會(huì)因?qū)嶒?yàn)室器械的污染而造成假陽(yáng)性。
此外，由于除病原體外，其它多種能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體或細(xì)胞學(xué)免疫反應(yīng)的大分子，如蛋白質(zhì)、脂類、多糖等多種物質(zhì)均可成為抗原，另一方面，從本質(zhì)上講，任何抗體又都屬于蛋白質(zhì)，因此，其均可通過(guò)基于抗原-抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。
鑒于此，本實(shí)用新型的目的是提供基于抗原-抗體反應(yīng)原理的固相免疫學(xué)檢測(cè)用的試紙，并且是一種可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)多種抗原和/或抗體形式的蛋白性物質(zhì)進(jìn)行快速定性和/或定量檢測(cè)用的試紙。在當(dāng)前其特別具有現(xiàn)實(shí)意義的是可用于同時(shí)對(duì)Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒-丙型肝炎病毒(HIV1/2-HCV)抗體進(jìn)行雙檢測(cè)的快速定量診斷，而且特別是可以滿足如海關(guān)、防疫和血站等單位或部門(mén)進(jìn)行快速鑒別檢測(cè)的特殊需要，以及在中、小醫(yī)療單位開(kāi)展相應(yīng)檢測(cè)工作的使用要求。
本實(shí)用新型基于抗原-抗體反應(yīng)原理的固相免疫學(xué)檢測(cè)用試紙的結(jié)構(gòu)是，在條狀支承基體材料層的表面設(shè)置有與其同樣形式的用于被覆檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)及顯示檢測(cè)結(jié)果的硝基纖維素膜層。在其表面處沿長(zhǎng)度方向保持有足夠間距的相對(duì)位置處分別固定被覆有一用于點(diǎn)加和吸存待測(cè)樣品的加樣材料層和一用于吸存內(nèi)標(biāo)及顯示試劑的第一輔助材料層，在其間的硝基纖維素膜層表面區(qū)域中有檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)被覆區(qū)。其中所說(shuō)的被覆于硝基纖維素膜層表面區(qū)域中的檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)，可以是為檢測(cè)目的所需的抗原、抗體、血紅蛋白、激素、激素受體、細(xì)菌菌體蛋白等多種蛋白性物質(zhì)。
上述結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的固定被覆在硝基纖維素膜層上的加樣材料層和第一輔助材料層，可以采用目前的常規(guī)方式，以保持有毛細(xì)滲透作用的粘結(jié)形式與硝基纖維素膜層表面相互結(jié)合。結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的第一輔助材料層可以為用包被或其它適當(dāng)方式處理過(guò)的酶聯(lián)偶合物的材料層，或是其它適當(dāng)形式的材料層。其中所說(shuō)的顯示試劑可以根據(jù)檢測(cè)需要及實(shí)際情況選用，如目前較普遍使用的膠體金等形式的顯示試劑。
在上述結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，還可以在第一輔助材料層的表面設(shè)置有用于滴加和吸存緩沖試劑的第三輔助材料層，以及在所說(shuō)硝基纖維素膜層上加樣材料層端的外側(cè)端方向處，以與該加樣材料層保持有空間間隔設(shè)置有具有毛細(xì)吸貯作用的第二輔助材料層。其設(shè)置方式可以采用目前常規(guī)的直接置放，或其它適當(dāng)?shù)男问健?br> 為便于本實(shí)用新型的上述試紙?jiān)谑褂脮r(shí)與檢測(cè)盒等適當(dāng)形式的試紙置放裝置相互定位和固定，還可以在上述結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的條狀支承基體材料層與被覆該硝基纖維素膜層向背的另一側(cè)表面設(shè)置有用于與試紙置放裝置相互結(jié)合定位的連接結(jié)構(gòu)。其中，較為簡(jiǎn)便的方式是使所說(shuō)的該連接結(jié)構(gòu)為粘合結(jié)構(gòu)層，例如目前已有使用的在表面涂覆或被覆有粘結(jié)材料的多種形式的粘結(jié)帶等具有粘結(jié)作用的結(jié)構(gòu)層。
同樣，上述結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的以被覆方式結(jié)合的條狀支承基體材料層與硝基纖維素膜層間也可以采用如帶有粘結(jié)材料的結(jié)構(gòu)層等粘結(jié)結(jié)構(gòu)相互結(jié)合；在上述結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的被覆檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)及顯示檢測(cè)結(jié)果的硝基纖維素膜層表面的加樣材料層與第一輔助材料層之間的區(qū)域內(nèi)，可以根據(jù)待測(cè)抗原和/或抗體等蛋白性物質(zhì)的不同，以及基于抗原抗體反應(yīng)原理的檢測(cè)需要，以包被方式或其它所需和適當(dāng)?shù)谋桓卜绞剑桓灿兄辽僖环N供檢測(cè)用的抗體和/或抗原等相應(yīng)的蛋白性物質(zhì)品種。但為實(shí)現(xiàn)對(duì)多種病原抗體同時(shí)進(jìn)行快速定量檢測(cè)，建議采用的一種方式是在上述結(jié)構(gòu)中所說(shuō)的硝基纖維素膜層表面加樣材料層與第一輔助材料層之間的區(qū)域內(nèi)，以保持有間隔區(qū)間的條帶方式設(shè)置有兩種或兩種以上檢測(cè)用的蛋白性物質(zhì)包被帶。例如，對(duì)用于上述Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒-丙型肝炎病毒(HIV1/2-HCV)抗體同時(shí)進(jìn)行雙檢測(cè)的快速診斷用試紙，可以采用在由加樣材料層向第一輔助材料層的區(qū)間內(nèi)，各包被條帶按照高濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶、第一檢測(cè)用抗原型蛋白物質(zhì)帶、低濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶和第二檢測(cè)用抗原型蛋白物質(zhì)帶的方式依次排布的形式。其中所說(shuō)的第一檢測(cè)用抗原型蛋白物質(zhì)帶可以為Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒抗原帶，第二檢測(cè)用抗原型蛋白物質(zhì)帶可以為丙型肝炎病毒抗原帶，高濃度和低濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶則分別為定量包被的二硝基苯(DNP)內(nèi)部對(duì)照樣品帶。用于對(duì)其它抗原和/或抗體，或者是對(duì)其它病原體或生物組織細(xì)胞蛋白質(zhì)檢測(cè)時(shí)，各檢測(cè)用的蛋白性物質(zhì)的種類和/或其被覆區(qū)帶的定位位置，可根據(jù)具體的檢測(cè)需要確定。對(duì)檢測(cè)用的蛋白性物質(zhì)和/或其它相應(yīng)試劑，也可以同樣采用上述的條帶包被方式進(jìn)行被覆，或是其它適當(dāng)形式的被覆方式，使其結(jié)合于硝基纖維素膜層的表面。
本實(shí)用新型上述檢測(cè)試紙實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的工作原理和過(guò)程是將血清、血漿、全血或其它體液等待測(cè)標(biāo)本點(diǎn)加在位于上述檢測(cè)試紙一端的加樣材料層上后，通過(guò)毛細(xì)管作用其即可經(jīng)被覆有檢測(cè)用抗原的區(qū)帶擴(kuò)散至試紙的另一端。若樣本中存在有需被檢測(cè)的抗體性(或抗原性)物質(zhì)，如上述的HIV和HCV抗體，則該抗體(或抗原)將會(huì)被已包被在硝基纖維素膜上的相應(yīng)抗原型(或抗體型)蛋白性檢測(cè)物質(zhì)捕獲而形成抗原-抗體復(fù)合物沉積下來(lái)。然后，將緩沖液加到試紙另一端，如加到位于試紙另一端的第三輔助材料層上后，緩沖液將迅速溶解同樣位于該端部位處的第一輔助材料層中的內(nèi)標(biāo)及顯示試劑，并推動(dòng)其和經(jīng)毛細(xì)作用吸收的待測(cè)樣本向加樣材料層的所在端作逆向移動(dòng)。其逆向移動(dòng)過(guò)程中在流經(jīng)包被有檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)檢測(cè)帶和對(duì)照帶時(shí)，樣本中剩余的被檢測(cè)抗體型(或抗原型)再次與相應(yīng)的抗原型(或抗體型)檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)接觸后，可繼續(xù)發(fā)生上述的抗原-抗體反應(yīng)，從而增加了沉積的抗原-抗體復(fù)合物的含量；同時(shí)，內(nèi)標(biāo)物及顯示試劑(如上述的膠體金等)也將與不同濃度的對(duì)照帶發(fā)生結(jié)合反應(yīng)及相應(yīng)的顯色反應(yīng)。將經(jīng)過(guò)此雙向展開(kāi)并顯示有檢測(cè)結(jié)果的試紙經(jīng)相應(yīng)配合使用的掃描儀、分光光度儀或其它適當(dāng)?shù)膬x器處理后，即可快速定量地提供出檢測(cè)顯示為陰形或陽(yáng)性的結(jié)果報(bào)告，其檢測(cè)時(shí)間一般只需幾分鐘或十幾分鐘，且無(wú)需有過(guò)多要求的復(fù)雜設(shè)備。因而本實(shí)用新型上述檢測(cè)試紙不僅可用于定性和定量的檢測(cè)，而且特別可以滿足如海關(guān)、防疫和血站等單位或部門(mén)對(duì)快速鑒別檢測(cè)的特殊需要，以及在中、小醫(yī)療單位開(kāi)展相應(yīng)檢測(cè)工作的使用要求。
以下用附圖所示的可用于同時(shí)對(duì)Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒-丙型肝炎病毒(HIV1/2-HCV)抗體進(jìn)行雙檢測(cè)的基于抗原-抗體反應(yīng)原理的固相免疫學(xué)快速診斷檢測(cè)用的試紙為例，對(duì)本實(shí)用新型的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本實(shí)用新型上述主題的范圍僅限于下述的實(shí)例，凡基于本實(shí)用新型上述主題所實(shí)現(xiàn)的產(chǎn)品均應(yīng)屬于本實(shí)用新型的范圍。


圖1是本實(shí)用新型上述檢測(cè)試紙的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2是圖1中放大的側(cè)視狀態(tài)結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3是圖1中位于硝基纖維素膜上的各包被條帶排布形式示意圖。
如圖所示的固相免疫學(xué)快速診斷用檢測(cè)試紙中，在條狀支承基體材料層1的一側(cè)表面經(jīng)粘結(jié)帶13結(jié)合有與其呈同樣形式的用于包被檢測(cè)用的抗原型蛋白性物質(zhì)和顯示檢測(cè)結(jié)果的硝基纖維素膜層4，在與之向背的該條狀支承基體材料層1的另一側(cè)表面，還設(shè)置有用于使該試紙與試紙置放盒等裝置相互結(jié)合定位而便于使用的粘結(jié)帶形式的連接結(jié)構(gòu)3。在位于條狀試紙一端的該硝基纖維素膜層4的表面處沿長(zhǎng)度方向保持有足夠間距的相對(duì)位置處，分別以保持有毛細(xì)滲透作用的粘結(jié)結(jié)構(gòu)5固定被覆有一用于點(diǎn)加和吸存待測(cè)樣品的加樣材料層6，以及經(jīng)粘結(jié)結(jié)構(gòu)14固定被覆有一用于吸存內(nèi)標(biāo)及顯示試劑并包被有酶聯(lián)偶合物的第一輔助材料層7，其中含有作為標(biāo)記性物質(zhì)的膠體金-抗體復(fù)合物。在其表面還可以按常規(guī)直接置放方式設(shè)置一用于點(diǎn)加和吸存緩沖試劑的第三輔助材料層8。在該硝基纖維素膜層4上加樣材料層6端的外側(cè)端方向處，與該加樣材料層6保持有空間間隔且呈T形狀態(tài)地設(shè)置有具有毛細(xì)吸貯作用的第二輔助材料層2。在硝基纖維素膜層4表面的加樣材料層6與第一輔助材料層7之間的區(qū)域內(nèi)，由加樣材料層6至第一輔助材料層7以保持有分隔區(qū)間的條帶方式依次排布有高濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶9、Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒抗原物質(zhì)帶10、低濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶11和丙型肝炎病毒抗原物質(zhì)帶12等供檢測(cè)用的抗原包被條帶。
權(quán)利要求1．基于抗原-抗體反應(yīng)原理的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在條狀支承基體材料層(1)的表面設(shè)置有與其同樣形式的用于被覆檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)和顯示檢測(cè)結(jié)果的硝基纖維素膜層(4)，在其表面處沿長(zhǎng)度方向保持有足夠間距的相對(duì)位置處分別固定被覆有一用于點(diǎn)加和吸存待測(cè)樣品的加樣材料層(6)和一用于吸存內(nèi)標(biāo)及顯示試劑的第一輔助材料層(7)，在其間的硝基纖維素膜層(4)表面區(qū)域中有檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)被覆區(qū)。
2．如權(quán)利要求1所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在第一輔助材料層(7)的表面設(shè)置有用于滴加和吸存緩沖試劑的第三輔助材料層(8)，在所說(shuō)硝基纖維素膜層(4)上加樣材料層(6)端的外側(cè)端方向處，以與該加樣材料層(6)保持有空間間隔設(shè)置有具有毛細(xì)吸貯作用的第二輔助材料層(2)。
3．如權(quán)利要求1所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于所說(shuō)的第一輔助材料層(7)為包被有酶聯(lián)偶合物的材料層。
4．如權(quán)利要求1所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在所說(shuō)的條狀支承基體材料層(1)上與被覆硝基纖維素膜層(4)向背的另一表面設(shè)置有用于與試紙置放裝置相互結(jié)合定位的連接結(jié)構(gòu)(3)。
5．如權(quán)利要求4所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于所說(shuō)的連接結(jié)構(gòu)(3)為具有粘結(jié)作用的結(jié)構(gòu)層。
6．如權(quán)利要求1至3之一所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在所說(shuō)的條狀支承基體材料層(1)與硝基纖維素膜層(4)間以粘結(jié)結(jié)構(gòu)相互結(jié)合。
7．如權(quán)利要求6所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于所說(shuō)的粘結(jié)結(jié)構(gòu)為帶有粘結(jié)材料的結(jié)構(gòu)層。
8．如權(quán)利要求1至3之一所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在所說(shuō)的加樣材料層(6)和第一輔助材料層(7)分別均以保持有毛細(xì)滲透作用的粘結(jié)方式與硝基纖維素膜層(4)表面相互結(jié)合。
9．如權(quán)利要求1至5之一所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在所說(shuō)的硝基纖維素膜層(4)表面的加樣材料層(6)與第一輔助材料層(7)之間的區(qū)域內(nèi)，以保持有間隔區(qū)間的條帶方式包被有兩種檢測(cè)用的抗原型蛋白性物質(zhì)帶，在由加樣材料層(6)向第一輔助材料層(7)的區(qū)間內(nèi)，各包被條帶按照高濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶(9)、第一檢測(cè)用抗原型蛋白性物質(zhì)帶(10)、低濃度內(nèi)標(biāo)物對(duì)照帶(11)和第二檢測(cè)用抗原型蛋白性物質(zhì)帶(12)的方式依次排布。
10．如權(quán)利要求9所述的固相免疫檢測(cè)用試紙，其特征在于在所說(shuō)的硝基纖維素膜層(4)表面上包被的第一檢測(cè)用抗原型蛋白性物質(zhì)帶(10)為Ⅰ型和Ⅱ型艾滋病毒抗原帶，第二檢測(cè)用抗原型蛋白性物質(zhì)帶(12)為丙型肝炎病毒抗原帶。
專利摘要本實(shí)用新型基于抗原－抗體反應(yīng)原理的固相免疫檢測(cè)用試紙,在條狀支承基體材料層的表面設(shè)置有與其同樣形式的用于被覆檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)和顯示檢測(cè)結(jié)果的硝基纖維素膜層。在其表面處沿長(zhǎng)度方向保持有足夠間距的相對(duì)位置處分別固定被覆有一用于點(diǎn)加和吸存待測(cè)樣品的加樣材料層和一用于吸存內(nèi)標(biāo)及顯示試劑的第一輔助材料層,在其間的硝基纖維素膜層表面區(qū)域中有檢測(cè)用蛋白性物質(zhì)被覆區(qū)。
文檔編號(hào)G01N33/53GK2453444SQ00245278
公開(kāi)日2001年10月10日 申請(qǐng)日期2000年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月11日
發(fā)明者周思亮 申請(qǐng)人:周思亮