專利名稱：用于酶標(biāo)斑點(diǎn)法定量檢測(cè)抗體的梳狀固相物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及檢測(cè)技術(shù)，是一種用于酶標(biāo)斑點(diǎn)法(Dot-ELISA)進(jìn)行抗體定量檢測(cè)的固相物。屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域類。
目前，國(guó)內(nèi)尚缺一種能簡(jiǎn)便、可定量檢測(cè)抗體且有理想的特異性和敏感性結(jié)果的商品化試劑盒產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)外采用酶聯(lián)吸附技術(shù)進(jìn)行抗體檢測(cè)有二種類型，一種是以聚苯乙烯塑料板孔作為載體來(lái)測(cè)定抗體。由于聚苯乙烯板孔吸附抗原的能力不強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果不理想，而且需要先在試管中將受檢標(biāo)本進(jìn)行系列稀釋后再將不同稀釋度的標(biāo)本移入塑料板孔內(nèi)，操作繁瑣。另一種是以硝酸纖維素濾膜(NC)為載體，采用滲濾技術(shù)以測(cè)定抗體，雖然快速，但僅限于定性測(cè)定，只有一個(gè)稀釋度，難于區(qū)分既往感染抑活動(dòng)性感染，且在檢測(cè)結(jié)果的特異性和敏感性上亦有一定的局限性。。
本實(shí)用新型的目的在于研制一種“在NC膜上采用Dot-ELISA法進(jìn)行抗體定量檢測(cè)，并使操作簡(jiǎn)化、節(jié)省原料而又實(shí)用的特別固相物，且易于轉(zhuǎn)化為商品試劑盒”的產(chǎn)品。
實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型目的的技術(shù)方案是這樣的塑料板上有若干排每排各有若干等距離的等樣小孔。小孔可供進(jìn)行待檢標(biāo)本的系列稀釋、盛置酶標(biāo)抗體和底物溶液，起到微型試管的作用。帶有抗原的梳狀NC膜的梳齒插入小孔中，使抗原和抗體于微量情況下進(jìn)行反應(yīng)。
本實(shí)用新型具體結(jié)構(gòu)由以下實(shí)例及附圖給出附

圖1為本實(shí)用新型組合圖。
附圖2為本實(shí)用新型梳狀薄膜結(jié)構(gòu)圖。
附圖3為本實(shí)用新型塑料板結(jié)構(gòu)圖。
圖中1.梳狀薄膜、2.梳齒、3.抗原、4.塑料板、5.小孔。
現(xiàn)結(jié)合附圖詳述本實(shí)用新型的具體結(jié)構(gòu)及工作情況以硝酸纖維素(NC)濾膜為載體。將NC膜切割成若干個(gè)梳狀等寬梳齒(2)的梳狀薄膜(1)，在梳齒(2)頂端包被供檢測(cè)樣品中抗體的已知抗原(3)。塑料板(4)有若干排且每排有同孔徑同孔距的若干個(gè)小孔(5)，小孔起著微型試管的作用。梳齒(2)的齒距應(yīng)與小孔(5)的孔距相同。梳齒(2)的齒寬應(yīng)略小于小孔(5)的孔徑，以便于將梳齒(2)插入小孔(5)內(nèi)。
使用本實(shí)用新型固相物的同時(shí)還需配備以酶標(biāo)的抗人IgG單克隆抗體和底物溶液，以間接法進(jìn)行抗體檢測(cè)。
本敘述以塑料板孔設(shè)為三排，每排各為10個(gè)小孔，用以檢測(cè)結(jié)核桿菌所致的活動(dòng)性感染為例。
以生理鹽水將待檢血清按對(duì)倍稀釋法稀釋為1∶100到1∶25600的九個(gè)稀釋度分別置于塑料板(4)的第一排的九個(gè)小孔中，第十孔中只加生理鹽水，作為空白對(duì)照，每孔液量均為100μl。
把梳齒(2)頂端包被有檢測(cè)受檢樣品中抗體用的已知特異抗原(結(jié)核菌特異抗原)的梳狀薄膜(1)插入到含有不同稀釋度血清的小孔中，令抗原(3)與受檢樣品中的抗體進(jìn)行反應(yīng)，置37℃溫箱中，40分鐘后取出梳狀薄膜(1)，置梳齒(2)于洗滌液中漂洗并在濾紙上吸去多余的洗滌液。
在塑料板(4)的第二排十個(gè)小孔中各加入100μl的酶標(biāo)記抗人IgG溶液。將洗滌過(guò)的梳齒(2)插入，置37℃溫箱中，30分鐘后取出再洗滌并在濾紙上吸去多余的洗滌液。
在塑料板(4)的第三排十個(gè)小孔中各加入100μl的底物溶液，將洗滌過(guò)的梳齒(2)插入，置37℃溫箱中，10分鐘后取出再進(jìn)行洗滌。將梳齒(2)置于濾紙上觀察結(jié)果。
如各梳齒(2)頂端均無(wú)紫蘭色圓斑出現(xiàn)者為陰性。如呈現(xiàn)有深淺不同梯度的紫蘭色圓斑者為陽(yáng)性。根據(jù)血清的稀釋倍數(shù)和反應(yīng)后顯色斑點(diǎn)深淺，以可見(jiàn)最淺斑點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的血清稀釋倍數(shù)作為血清測(cè)定抗體陽(yáng)性的定量標(biāo)準(zhǔn)。即以血清稀釋倍數(shù)來(lái)表示所測(cè)到的抗體量。如檢測(cè)結(jié)果為在第6個(gè)梳齒(2)頂端(即第6孔，血清稀釋倍數(shù)1∶3200)尚可見(jiàn)明顯斑點(diǎn)，即以1∶3200表示該血清中結(jié)核抗體IgG的量。據(jù)此，可確診患者為活動(dòng)性結(jié)核。
遇單份血清檢測(cè)結(jié)果與正常人的抗體效價(jià)水平相近者，可將前后期(如結(jié)核可間隔兩周)分別測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，如第二次血清中的抗體量比第一次有明顯升高，可據(jù)此確定為活動(dòng)性感染。
本實(shí)用新型具有以下優(yōu)點(diǎn)1.檢測(cè)結(jié)果的特異性，敏感性都很高，可將存在于正常人體液(血清)中的抗體和活動(dòng)性感染者所產(chǎn)生的抗體明確區(qū)分，為臨床上確診某種疾病創(chuàng)造了良好的條件。
2.操作簡(jiǎn)便、節(jié)省原料。
權(quán)利要求1.酶標(biāo)斑點(diǎn)法定量檢測(cè)抗體的梳狀固相物包括梳狀薄膜(1)、梳齒(2)、抗原(3)、塑料板(4)、小孔(5)，其特征在于將NC膜切割成若干個(gè)等寬梳齒(2)的梳狀薄膜(1)，在梳齒(2)頂端包被有供檢測(cè)樣本中抗體用的已知抗原(3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于酶標(biāo)斑點(diǎn)法定量檢測(cè)抗體的梳狀固相物，其特征在于塑料板(4)有安排同孔徑、同孔距的若干個(gè)小孔(5)，共有若干排。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于酶標(biāo)斑點(diǎn)法定量檢測(cè)抗體的梳狀固相物，其特征在于梳齒(2)的齒距應(yīng)與小孔(5)的孔距相同，梳齒(2)的齒寬應(yīng)略小于小孔(5)的孔徑。
專利摘要一種可用于酶標(biāo)斑點(diǎn)法進(jìn)行抗體定量測(cè)定的特制固相物,是將硝酸纖維素濾膜(NC)切割成帶梳齒的梳狀薄膜作為載體,在梳齒頂端包被有較高濃度的供定量檢測(cè)樣本中抗體用的已知特異抗原,檢測(cè)時(shí)配用帶有若干排每排有若干小孔的塑料板和酶標(biāo)記的抗人IgG抗體以及顯色用的底物溶液等而得以定量測(cè)定樣本中的抗體。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)結(jié)果的特異性和敏感性都很高,為酶標(biāo)斑點(diǎn)法用于抗體定量且易于制成商品化試劑盒創(chuàng)造了條件。
文檔編號(hào)G01N33/535GK2507014SQ00247109
公開(kāi)日2002年8月21日 申請(qǐng)日期2000年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月21日
發(fā)明者戴金 申請(qǐng)人:福建三強(qiáng)生物化工有限公司, 戴金