專利名稱：一種油菜硫甙的速測(cè)方法及其測(cè)試板的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于對(duì)油菜籽中硫甙含量進(jìn)行速測(cè)的方法及其測(cè)定所用的測(cè)試板，它的應(yīng)用能有效促進(jìn)雙低油菜的推廣和發(fā)展，以提高油菜的內(nèi)在品質(zhì)。
背景技術(shù)：
油菜是我國(guó)第一大油料作物，菜籽油占我國(guó)食用植物油總量的60％，而菜籽餅粕則是飼料業(yè)的優(yōu)質(zhì)蛋白源。雙低油菜即低芥酸低硫甙油菜，它對(duì)油菜籽中芥酸和硫甙兩項(xiàng)內(nèi)在化學(xué)品質(zhì)指標(biāo)有明確的限量，其中菜籽油芥酸含量應(yīng)低于2％，這樣的菜籽油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，有益于人體健康；菜籽餅粕中硫甙的含量應(yīng)低于30μmol/g，這樣的餅粕毒性低，蛋白含量高，氨基酸組成平衡，是優(yōu)質(zhì)的飼料蛋白源。而普通油菜中其芥酸和硫甙的含量可分別高達(dá)40％和100μmol/g以上，造成普通菜籽油芥酸含量高，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低，餅粕因硫甙降解產(chǎn)物對(duì)畜禽有毒而難于用作飼料。因此雙低油菜是目前油料發(fā)展的方向。然而，要發(fā)展雙低油菜，能否快速有效地進(jìn)行芥酸硫甙含量的測(cè)定是一項(xiàng)急需解決的配套措施，否則就無(wú)法將雙低油菜與普通油菜分開(kāi)收購(gòu)、單獨(dú)加工，難以實(shí)現(xiàn)雙低油菜的優(yōu)質(zhì)優(yōu)用。就硫甙的測(cè)定來(lái)說(shuō)，目前已存在有硫甙的液相色譜測(cè)定方法，但該方法不僅程序復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，費(fèi)用高，而且需要在實(shí)驗(yàn)室借助昂貴的儀器設(shè)備來(lái)進(jìn)行，這顯然不適于在分布面廣、檢測(cè)量大的種植和收購(gòu)現(xiàn)場(chǎng)使用；也存在有氯化鈀法測(cè)定硫甙的方法，雖測(cè)試方法較為簡(jiǎn)便，但因測(cè)量誤差大、不穩(wěn)定而不能實(shí)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題而提供一種簡(jiǎn)便有效的油菜硫甙速測(cè)方法及其測(cè)試板，以促進(jìn)雙低油菜的推廣和發(fā)展。
本發(fā)明油菜硫甙速測(cè)方法的技術(shù)方案為取1-5g菜籽樣品粉碎后，稱取0.20-0.80g置于具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，反應(yīng)數(shù)分鐘后過(guò)濾，取20-80μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后，形成有色產(chǎn)物，由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān)，采用分光光度法并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線用測(cè)量?jī)x即可測(cè)定硫甙含量。
上述方案中，菜籽樣品粉碎后的細(xì)度為30-50目；磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L，制取方法為室溫下取分析純磷酸二氫鉀6.80g溶解后，定溶至1000ml，紫外線滅菌后，用瓶分裝；硫甙的測(cè)試結(jié)果用μmol/g表示。
本發(fā)明的硫甙測(cè)試板由下述方法制作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無(wú)水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于測(cè)試板每孔，真空干燥1-2小時(shí)后待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測(cè)試酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為80-180U/ml，取10-50μl置于上述測(cè)試板每孔，冷凍真空干燥2小時(shí)后即成。
本發(fā)明的測(cè)定硫甙的機(jī)理在于利用酶的專一性，使菜籽中硫甙與內(nèi)源酶和特異性外源酶產(chǎn)生反應(yīng)，反應(yīng)后生成產(chǎn)物再與顯色劑反應(yīng)形成有特征吸收峰的有色產(chǎn)物，由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān)，采用分光光度法用一定波長(zhǎng)單色光根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線用測(cè)量?jī)x即可測(cè)定硫甙的含量。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、測(cè)試方法簡(jiǎn)便，測(cè)試速度快，可適于各種油菜籽品種的測(cè)試；2、測(cè)試費(fèi)用低，速測(cè)儀的價(jià)格低，體積小，有助于該項(xiàng)技術(shù)的普及推廣；3、測(cè)定精度較高，誤差為±4μmol/g，達(dá)到了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)；4、對(duì)環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，便于在現(xiàn)場(chǎng)使用，實(shí)用性強(qiáng)，能有效促進(jìn)雙低油菜的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。


圖1為本發(fā)明速測(cè)方法的流程框圖。
具體實(shí)施例方式
以下詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例。
實(shí)施例1稱取2g華雙3號(hào)油菜菜籽樣品粉碎，細(xì)度40目，取0.50g于具塞試管，加入3.0ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)3-10分鐘后過(guò)濾，取50μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應(yīng)5-15分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測(cè)量?jī)x測(cè)出硫甙含量為27.5μmol/g。
實(shí)施例2取4g中雙5號(hào)油菜菜籽樣品粉碎，細(xì)度50目，取0.60g于具塞試管，加入3.6ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)8分鐘后過(guò)濾，取60μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應(yīng)9分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測(cè)量?jī)x測(cè)定硫甙含量為25.6μmol/g。
實(shí)施例3為本發(fā)明硫甙測(cè)試板的實(shí)施例稱取6.2mg顯色劑(Chrom G)用無(wú)水乙醇溶解后定溶10ml，取10μl置于測(cè)試板每孔，真空干燥1-2小時(shí)后待用，稱取22.8g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測(cè)試酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為100U/ml，取20μl置于上述測(cè)試板每孔，冷凍真空干燥2小時(shí)后即成。
權(quán)利要求
1.一種油菜硫甙的速測(cè)方法，其特征在于取1-5g菜籽樣品粉碎后，稱取0.20-0.80g置于具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，反應(yīng)數(shù)分鐘后過(guò)濾，取20-80μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后，形成有色產(chǎn)物，采用分光光度法并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線用測(cè)量?jī)x即可測(cè)定硫甙含量。
2.按權(quán)利要求1所述的油菜硫甙的速測(cè)方法，其特征在于菜籽樣品粉碎后的細(xì)度為30-50目。
3.按權(quán)利要求1或2所述的油菜硫甙的速測(cè)方法，其特征在于磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L。
4.按權(quán)利要求3所述的油菜芥酸的速測(cè)方法，其特征在于稱取2g菜籽樣品粉碎，細(xì)度40目，取0.50g于具塞試管，加入3.0ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)3-10分鐘后過(guò)濾，取50μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應(yīng)5-15分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測(cè)量?jī)x測(cè)出硫甙含量。
5.按權(quán)利要求3所述的油菜芥酸的速測(cè)方法，其特征在于取4g菜籽樣品粉碎，細(xì)度50目，取0.60g于具塞試管，加入3.6ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)8分鐘后過(guò)濾，取60μl濾液置于硫甙測(cè)試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應(yīng)9分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測(cè)量?jī)x測(cè)出硫甙含量。
6.一種油菜硫甙的速測(cè)測(cè)試板，其特征在于它由下述方法制作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無(wú)水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于測(cè)試板每孔，真空干燥1-2小時(shí)后待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測(cè)試酶(GlnMEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為80-180U/ml，取10-50μl置于上述測(cè)試板每孔，冷凍真空干燥2小時(shí)后即成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于對(duì)油菜籽中硫甙含量進(jìn)行速測(cè)的方法及其測(cè)定所用的測(cè)試板,它的應(yīng)用能有效促進(jìn)雙低油菜的推廣和發(fā)展,以提高油菜有內(nèi)在品質(zhì)。本發(fā)明油菜硫甙速測(cè)方法的技術(shù)方案為:取1－5g菜籽樣品粉碎后,稱取0.20－0.80g置于具塞試管中,加入1.0－5.0ml蒸餾水,搖勻,發(fā)生硫甙降解反應(yīng),反應(yīng)數(shù)分鐘后過(guò)濾,取20－80μl濾液置于硫甙測(cè)試板,加入磷酸二氫鉀水溶液60－240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后,形成有色產(chǎn)物,由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān),采用分光光度法并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線用測(cè)量?jī)x即可測(cè)定硫甙含量。本發(fā)明測(cè)試方法簡(jiǎn)便,測(cè)試速度快,費(fèi)用低,可適于各種油菜籽品種的測(cè)試;測(cè)定精度較高,對(duì)環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng),便于在現(xiàn)場(chǎng)使用,實(shí)用性強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N21/77GK1341851SQ0113350
公開(kāi)日2002年3月27日 申請(qǐng)日期2001年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月28日
發(fā)明者李培武, 張文, 周霞, 李光明, 楊湄, 吳渝, 汪雪芳, 吳宣誠(chéng), 仝乘風(fēng), 胡樂(lè)華, 甘東生, 孟子園, 陳小媚, 丁小霞, 陳洪, 謝立華 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所