專利名稱：帶有過濾結構的抗原－抗體反應型檢測試紙的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及的是一種醫(yī)療診斷檢驗中使用的基于抗原—抗體反應原理的檢測試紙，特別是在對多種病原抗體或抗原進行快速定性和/或定量檢測時，可以以采集的全血為被測標本，使對全血的分離和檢測能一步完成的檢測試紙。
背景技術：
利用硝基纖維素膜、聚苯乙烯膜、聚乙烯膜、尼龍膜、纖維素膜、醋酸纖維素膜、玻璃纖維膜等固相載體作為檢測反應膜，將檢測所用的抗原、抗體或其它蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、核酸等生物大分子物質(zhì)包被于其表面部位，用于對生物標本中的待檢物，如腫瘤抗原、人體激素、病原微生物等相關因子的檢測，已見于各種快速血清檢測試紙。如，用于人免疫缺陷病毒抗體(HIV)、人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、巨細胞病毒(CMV)、前列腺癌相關抗原(PSA)、下丘腦促甲狀腺激素(TSH)等診斷的試紙條，以及本發(fā)明人此前已在ZL 00245278.2專利中所提出的可用于對多種病原抗體或抗原進行快速定性和/或定量檢測用的試紙。但這些檢測試紙在使用中的一個局限是，均要求以血漿或血清作為檢測所用的被檢測標本。這就需要對所采集的全血標本先經(jīng)特殊的設備進行分離處理后，所得到血漿或血清后再用于檢測。這種對全血的分離處理至少要耗時1小時，因此在滿足快速檢測，以及在簡陋或惡劣條件下檢測的廣泛適應性方面尚存在有進一步改進和完善的需要。
此外，Oudhensden和Roesink(Primecare BV)曾報到過一種用單層全血過濾膜與檢測反應膜結合而用于血漿膽固醇檢測的方法，避免了離心分離血漿的操作。但該方法要求在分離血漿后將反應膜與全血過濾膜分離，并轉(zhuǎn)移至另一個測定容器中完成檢測，不能實現(xiàn)和達到一步完成的快速檢測診斷目的。
實用新型內(nèi)容針對上述情況，本實用新型將提供一種能一步完成對血漿和/或血清的過濾及進行抗原——抗體反應的檢測過程，從而實現(xiàn)能以全血為被測標本，快速完成所需的定性和/或定量生物學檢測的帶有過濾結構的檢測試紙。
本實用新型的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，是在沿長度方向延伸的片狀支承結構體的一側(cè)表面經(jīng)連接材料設置有可用于包被檢測用生物大分子的檢測反應膜。在其長度方向的一端表面處設置有包被有化學偶合物的墊片材料結構層，并至少在檢測反應膜長度方向的另一端表面處以能與其保持液體滲透接觸方式設置有至少一層疏水性的血液細胞過濾結構層。
此處所稱的血液細胞，是根據(jù)檢測需要希望從所采集的被檢全血標本中濾除的各種血液細胞。一般情況下，檢測使用的標本多為不含紅細胞的血漿和/或血清，因此上述的血液細胞過濾結構大多數(shù)情況下可以是指濾除紅細胞的過濾結構。由于紅細胞的直徑一般均≥6微米，因此使所說的血液細胞過濾結構層的過濾孔徑＜6微米，即可以達到使紅細胞不能通過而被濾除的目的。例如，經(jīng)試驗證明，采用加拿大Spectral Diagnostic生產(chǎn)的S/G全血分離膜是具有能滿意濾除紅細胞的推薦方式之一。由于此類分離用的濾膜材料多具有高疏水性，因此血漿和/或血清等水性或水溶性液體成分可以以損失量極低的方式順利和迅速地通過。
在上述檢測試紙結構中所說的包被有化學偶合物的墊片材料結構層中的化學偶合物，根據(jù)檢測的需要，可以采用DNP(鄰苯二甲酸二壬酯)等能以肉眼進行觀察和判別，或者是不能由肉眼直接觀察而需借助相應儀器配合進行分析判讀的各類示蹤標記物質(zhì)或顯色性物質(zhì)。這些示蹤標記物質(zhì)或顯色性物質(zhì)可以包括如膠體金顆粒、銀顆粒、有機分子、脂質(zhì)體或有機聚合物膠體顆粒等多種形式顆粒顯色劑，還可以為發(fā)光標記物、比色標記物、熒光標記物、化學標記物、酶、放射性標記物、或射頻標記物、金屬膠體、化學發(fā)光標記物等多種類型。
本實用新型上述結構形式檢測試紙的使用方法與本發(fā)明人此前曾在ZL00245278.2專利中提出的檢測試紙相同。將被檢測的抗凝或非抗凝的全血標本按檢測需要量滴加在該血液細胞過濾結構層處，標本中的紅細胞或其它希望被濾除的血液細胞即可被過濾結構截留，而標本中的血漿和/或血清則通過過濾結構滲透至包被有檢測用生物大分子的檢測反應膜表面，進而在毛細作用和液體水平側(cè)流作用下在該檢測反應膜表面進行正向和逆向的兩次擴散和遷移運動，進行并完成所需的檢測。分別用100微升抗凝全血和100微升非抗凝血，按此方式進行了檢測操作全過程的試驗結果表明，在檢測試紙的觀察部位處除顯示出有正常的對照和檢測標記外，均未顯示出有紅細胞濾過及溶血現(xiàn)象，表明了本實用新型上述結構的檢測試紙對血液細胞過濾的有效性是符合檢測需要的。
上述結構中所說的使血液細胞過濾結構層與檢測反應膜間能保持液體滲透的接觸方式，既可以采取使所說的血液細胞過濾結構層與檢測反應膜以直接接觸的被覆結合方式設置，也可以采取在所說的血液細胞過濾結構層與檢測反應膜之間還設置有親水性的液體吸收滲透材料結構，即，使所說的血液細胞過濾結構層被覆結合在與檢測反應膜直接接觸的該液體吸收滲透材料結構的設置形式。同樣以100微升抗凝全血進行了上述檢測操作的試驗結果同樣顯示，采用使血液細胞過濾結構層經(jīng)該液體吸收滲透材料結構與檢測反應膜接觸的結構形式，其血漿的過濾時間、浸潤擴散速度與使血液細胞過濾結構層被覆于檢測反應膜的直接接觸形式間無顯著差異，也未出現(xiàn)紅細胞濾過及溶血現(xiàn)象。
上述結構中所說的血液細胞過濾結構層，根據(jù)使用需要可以采用為一層濾膜的結構形式，也可以為由兩層甚至更多層濾膜共同組成的形式。試驗結果顯示，增加濾膜的層數(shù)，會對血漿和/或血清的過濾及浸潤擴散速度造成影響。如，采用兩層紅細胞濾膜時，其血漿和/或血清的過濾及浸潤擴散速度比單層濾膜時可降低50％。當采用兩層或多層過濾結構時，根據(jù)檢測需要，其各層過濾結構可以為相同的或是不同種類的濾膜材料。
進一步的試驗結果顯示，上述檢測試紙中血液細胞過濾結構層面積大小的改變，可引起血漿和/或血清過濾時間相應改變。即，有效過濾面積增大，過濾時間則可相應縮短。因此，一般以使該血液細胞過濾結構層面積大小與其所在的檢測試紙部位面積相適應即可。
同時進行的試驗還顯示，分別以肝素、枸櫞酸三鈉和EDTA等不同的抗凝劑對所說的血液細胞過濾結構層進行預處理后，同樣加入100微升不抗凝的全血標本后，在檢測試紙的觀察部位處會表現(xiàn)出有紅細胞膜的濾過現(xiàn)象，表明所使用的血液細胞過濾結構層以不作抗凝處理為宜。
進一步，與上述結構方式類似，在所說的包被有化學偶合物的墊片材料層表面處也可以采取以能與其保持液體滲透接觸方式設置有至少一層疏水性的第二血液細胞過濾結構。采用此結構后，可以使檢測操作的適用范圍進一步擴大，即在該處使用的既可以使用化學緩沖液，也可以是血液中濾除了適當血液細胞后的剩余液體成分。例如，當使所說的第二血液細胞過濾結構的過濾孔徑＜6微米時，在該包被有化學偶合物的墊片材料層部位除可使用緩沖液對化學偶合物進行溶解和進行逆向的擴散和遷移外，還可以根據(jù)需要也采用全血并經(jīng)該第二血液細胞過濾結構濾除紅細胞后的血漿和/或血清。分別用100微升抗凝全血和100微升非抗凝，按同樣方式進行的檢測操作全過程試驗結果表明，以全血并經(jīng)該第二血液細胞過濾結構過濾后的血漿和/或血清代替緩沖液后，在檢測試紙的觀察部位處除顯示出有正常的對照和檢測標記外，也均未顯示出有紅細胞濾過及溶血現(xiàn)象。此外，在采用此種結構形式的檢測試紙時，除可單獨使用緩沖液或全血外，也可以將其聯(lián)合使用，即，加入全血后再加入適當?shù)木彌_液。試驗結果顯示，在加入100微升抗凝全血加后立即加入50微升緩沖液(含1％小牛血清白蛋白，1％TritonX-100，3％聚乙烯吡咯烷酮，1.5％蔗糖，2毫克/毫升兔丙種球蛋白的pH7.0磷酸鹽緩沖液)，其血漿的浸潤和擴散時間縮短了1/4，不僅未出現(xiàn)紅細胞濾過及溶血現(xiàn)象，而且可以使檢測結果中的顯示條帶更尖銳整齊，背景也更為清晰。
此處所說的使血液細胞過濾結構層與包被有化學偶合物的墊片材料層間能保持液體滲透的接觸方式，同樣也是既可以采取將所說的第二血液細胞過濾結構以直接接觸被覆結合于所說的包被有化學偶合物的墊片材料層表面的形式，也可以采取在所說的第二血液細胞過濾結構與所說的包被有化學偶合物的墊片材料層之間還設置有親水性的第二液體吸收滲透材料結構的形式。試驗結果同樣顯示，此種結構的變化與否不存在顯著差異。所說的第二血液細胞過濾結構層，根據(jù)需要同樣可以采用為一層濾膜結構的形式，也可以為兩層甚至更多層濾膜結構的形式。當采用兩層或多層過濾結構時，根據(jù)檢測需要，其各層過濾結構同樣也可以為相同或是不同種類的濾膜材料。
在上述結構的基礎上，在前述所說的血液細胞過濾結構層所在位置的長度方向的外端處，以保持有間隔距離的方式還設置有液體吸儲材料結構，對于使檢測過程最后多余部分的液體被充分吸收是有利的。
對上述結構形式檢測試紙的具體使用方式，可以根據(jù)檢測需要決定。雖不特別排除直接使用的情況，但建議以采用與本發(fā)明人曾在ZL 00245153.0專利中所提出的檢測試紙盒配合使用的方式為佳。為此，在上述結構檢測試紙中所說的支承結構體的與檢測反應膜所在位置向背的另一側(cè)表面處可以設置有能與檢測用的試紙置放盒相互定位結合的連接結構，例如雙面膠帶等粘結結構形式的最簡單連接結構即可。
試驗結果已充分顯示，本實用新型上述結構形式的帶有過濾結構的檢測試紙可以即時有效地將所采集的抗凝或非抗凝的全血標本中為檢測所不希望存在的血液細胞濾除，并一步同時完成所需的檢測項目，不必再以專用設備對血液標本專門進行分離處理，從而可以顯著縮短檢測時間，對檢測條件的要求和操作也大為簡化，有利于真正滿足快速檢測和在簡陋、惡劣條件下進行檢測的需要。
以下結合由附圖所示實例的具體實施方式
再對本實用新型的上述內(nèi)容作進一步的說明，但不應將此理解為本實用新型上述主題的范圍僅限于下述的實例。凡基于本實用新型上述內(nèi)容實現(xiàn)的產(chǎn)品均屬于本實用新型的范圍。


圖1是本實用新型檢測試紙的一種結構示意圖。
圖2是本實用新型檢測試紙的另一種結構示意圖。
具體實施方式
實施例1在圖1所示的本實用新型檢測試紙中，在沿長度方向延伸的片狀支承結構體1的一側(cè)表面經(jīng)粘結連接材料9設置有可用于包被檢測用生物大分子的硝基纖維素膜等檢測反應膜5。該檢測反應膜5長度方向的一端表面處以直接接觸方式設置有包被有化學偶合物的墊片材料結構層2。在檢測反應膜5長度方向的另一端表面處直接被覆結合有一疏水性的第一紅細胞過濾結構層7；在該包被有化學偶合物的墊片材料層2的表面處也直接被覆方式結合有一疏水性的第二紅細胞過濾結構4。所說的該第一紅細胞過濾結構層7和第二紅細胞過濾結構層4可分別由一層或多層形式的濾膜構成，其過濾孔徑＜6微米，可以采用加拿大SpectralDiagnostic所生產(chǎn)的S/G全血分離膜。采用多層細胞過濾膜層時，其各層過濾結構可以為相同或是不同種類的濾膜材料。第一紅細胞過濾結構層7和第二紅細胞過濾結構層4所用面積的大小，可以視檢測需要而定。在檢測反應膜5上第一紅細胞過濾結構層7所在位置的長度方向的外側(cè)部位處還設置有具有液體吸儲功能的濾紙材料層8。在所說的支承結構體1的與檢測反應膜5所在位置向背的另一側(cè)表面處設置有可與檢測用試紙置放盒相互定位結合的雙面膠帶連接結構10。
實施例2圖2所示檢測試紙與上例檢測試紙結構上的差別在于，第一紅細胞過濾結構層7直接被覆方式結合在直接與檢測反應膜5接觸設置的一親水性第一液體吸收滲透材料結構6的表面；第二紅細胞過濾結構4也是直接被覆方式結合在直接與包被有化學偶合物的墊片材料層2接觸設置的另一親水性的第二液體吸收滲透材料結構3的表面。該第一液體吸收滲透材料結構6和第二液體吸收材料結構3均可以采用具有吸水和滲透功能的濾紙等材料。
以本例的檢測試紙分別對不同的待測標本進行了如下的實際診斷檢測試驗檢測試驗1對1例經(jīng)酶聯(lián)免疫法(ELISA)診斷為HIV抗體陽性的患者，采取抗凝全血5毫升。取其中的2毫升經(jīng)離心分離血漿，取該血漿50微升作為一檢測標本，另取100微升全血作為另一檢測標本，分別與本發(fā)明人已在ZL 00245153 0專利中所提供的檢測試紙盒配合使用，以同樣條件、儀器和操作方法進行檢測，結果兩者檢測標本均為陽性。用抗凝全血標本的檢測結果S/CO值與用血漿標本的S/CO值之間的差異為7.8％。
檢測試驗2對1例經(jīng)ELISA診斷為HCV(丙型肝炎)抗體陽性的患者，采取抗凝全血5毫升。取其中的2毫升經(jīng)離心分離血漿，取該血漿50微升作為一檢測標本，另取100微升全血作為另一檢測標本，分別與ZL 00245153.0專利的檢測試紙盒配合使用，以同樣條件、儀器和操作方法進行檢測，結果兩者檢測標本均為HCV陽性。用抗凝全血標本的檢測結果S/CO值與用血漿標本的S/CO值之間的差異為6.6％。
檢測試驗3用正常女性抗凝全血2毫升，加入前列腺癌相關抗原(PSA)標準品10ng，使終濃度為5ng/ml。用ZL 00245153.0專利的檢測試紙盒配合使用，加入全血100微升。測試結果經(jīng)檢測儀掃描判斷光密度值，顯示被檢出濃度為5.31ng/ml，誤差為6.2％。(正常女性的PSA應為陰性。)上述實際檢測的試驗結果已充分顯示，本實用新型結構形式的檢測試紙對診斷性檢測結果無影響，仍保持有足夠滿意的靈敏度和準確度。
權利要求1.帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，在沿長度方向延伸的片狀支承結構體(1)的一側(cè)表面經(jīng)連接材料(9)設置有可用于包被檢測用生物大分子的檢測反應膜(5)，在其長度方向的一端表面處設置有包被有化學偶合物的墊片材料結構層(2)，其特征在于至少在檢測反應膜(5)長度方向的另一端表面處以能與其保持液體滲透接觸方式設置有至少一層疏水性的血液細胞過濾結構層(7)。
2.如權利要求1所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的血液細胞過濾結構層(7)的過濾孔徑＜6微米。
3.如權利要求1所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的血液細胞過濾結構層(7)與檢測反應膜(5)之間還設置有親水性的液體吸收滲透材料結構(6)。
4.如權利要求1所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的血液細胞過濾結構層(7)為由至少一種濾膜材料構成。
5.如權利要求1所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的包被有化學偶合物的墊片材料層(2)表面以能與其保持液體滲透接觸方式設置有至少一層疏水性的第二血液細胞過濾結構(4)。
6.如權利要求5所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的第二血液細胞過濾結構(4)的過濾孔徑＜6微米。
7.如權利要求5所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的第二血液細胞過濾結構(4)與所說的包被有化學偶合物的墊片材料層(2)之間還設置有親水性的第二液體吸收滲透材料結構(3)。
8.如權利要求5所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于所說的第二血液細胞過濾結構(4)為由至少一種濾膜材料構成。
9.如權利要求1至8之一所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于在所說的血液細胞過濾結構層(7)所在位置長度方向的外側(cè)還設置有液體吸儲材料結構(8)。
10.如權利要求1至8之一所述的帶有過濾結構的抗原—抗體反應型檢測試紙，其特征在于在所說的支承結構體(1)的與檢測反應膜(5)所在位置向背的另一側(cè)表面處設置有可與檢測用試紙置放盒相互定位結合的連接結構(10)。
專利摘要本實用新型涉及的是一種帶有過濾結構的抗原－抗體反應型檢測試紙。在沿長度方向延伸的片狀支承結構體的一側(cè)表面經(jīng)連接材料設置有可用于包被檢測用生物大分子的檢測反應膜,在其長度方向的一端表面處設置有包被有化學偶合物的墊片材料結構層。至少在檢測反應膜長度方向的另一端表面處以能與其保持液體滲透接觸方式設置有至少一層疏水性的血液細胞過濾結構層。
文檔編號G01N33/53GK2484568SQ01206818
公開日2002年4月3日 申請日期2001年7月13日 優(yōu)先權日2001年7月13日
發(fā)明者周思亮 申請人:周思亮