專利名稱：用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒及其測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測定鳥氨酸脫羧酶技術(shù)領(lǐng)域。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的A.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體包被的預(yù)包被板；(2)生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(3)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素；(4)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(5)樣品稀釋液；(6)洗滌液；(7)顯色劑A、B；(8)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于組織提取液、血漿、血清中鳥氨酸脫羧酶的測定，取抗鳥氨酸脫羧酶抗體，用PH9.6碳酸鹽緩沖液配制10-100ug/ml于微孔板微孔內(nèi)，每孔加100ul，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板5次后，常規(guī)封閉，干燥；取組織提取液或血清或血漿50ul加入各孔中，每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體50ul，同時(shí)做5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)孔和陰性對照孔；置37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
B.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
C.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，其特征在于對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的藥物，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得；或根據(jù)各孔OD值，直接判定試驗(yàn)細(xì)胞的藥敏結(jié)果。
D.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)熒光標(biāo)記的二抗；
(3)洗滌液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于組織切片或細(xì)胞涂片中鳥氨酸脫羧酶的測定，將組織切片或細(xì)胞涂片常規(guī)固定后，用5％脫脂奶粉封閉，然后加抗鳥氨酸脫羧酶抗體，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板后，加熒光標(biāo)記的二抗，37℃1小時(shí)，洗板后，于熒光顯微鏡下檢測結(jié)果。
E.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體包被的預(yù)包被板；(2)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(3)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(4)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(5)樣品稀釋液；(6)洗滌液；(7)顯色劑A、B；(8)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于組織提取液、血漿、血清中鳥氨酸脫羧酶的測定，取抗鳥氨酸脫羧酶抗體，用PH9.6碳酸鹽緩沖液配制10-100ug/ml于微孔板微孔內(nèi)，每孔加100ul，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板5次后，常規(guī)封閉，干燥；取組織提取液或血清或血漿50ul加入各孔中，每孔加抗鳥氨酸脫羧酶抗體50ul，同時(shí)做5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)孔和陰性對照孔；置37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
F.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
G.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的藥物，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得；或根據(jù)各孔OD值，直接判定試驗(yàn)細(xì)胞的藥敏結(jié)果。
H.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(3)洗滌液；
(4)顯色劑。
一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，對于組織切片或細(xì)胞涂片中鳥氨酸脫羧酶的測定，將組織切片或細(xì)胞涂片常規(guī)固定后，用5％脫脂奶粉封閉，然后加抗鳥氨酸脫羧酶抗體，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板后，加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，37℃1小時(shí)，洗板后，加顯色劑顯色，于顯微鏡下檢測結(jié)果。
本發(fā)明能夠產(chǎn)生的有益效果因本發(fā)明一改傳統(tǒng)的通過檢測14CO2或腐胺的量來反映鳥氨酸脫羧酶的活性而存在的操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、有放射性污染、靈敏度較低的缺點(diǎn)，它運(yùn)用了標(biāo)記免疫技術(shù)，并提供了相應(yīng)的試劑盒，使用該試劑盒測定標(biāo)本中鳥氨酸脫羧酶的量，它操作簡便、省時(shí)省力，無任何污染、靈敏度較高。
實(shí)施例2
細(xì)胞中的鳥氨酸脫羧酶測定(藥敏試驗(yàn))。取病人靜脈血4ml，肝素防凝，用淋巴細(xì)胞分離液，常規(guī)分離淋巴細(xì)胞，然后計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)至107/ml，每孔100ul，同時(shí)含有2ug/mlPHA及不同濃度的抗癌藥物如環(huán)磷酰胺0，10-3，10-7，10-9，長春新堿0，10-5，10-7，10-9，同時(shí)做對照孔，置5％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，離心，洗滌3次，然后常規(guī)固定、封閉后，每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃30-60分鐘，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃10-15分鐘，酶標(biāo)儀450nm測OD值，根據(jù)OD值的大小即可判斷被測病人對何種藥物、何濃度敏感。
權(quán)利要求
1.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體包被的預(yù)包被板；(2)生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(3)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素；(4)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(5)樣品稀釋液；(6)洗滌液；(7)顯色劑A、B；(8)終止液。
2.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
3.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)熒光標(biāo)記的二抗；(3)洗滌液。
4.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，其特征在于對于組織提取液、血漿、血清中鳥氨酸脫羧酶的測定，取抗鳥氨酸脫羧酶抗體，用PH9.6碳酸鹽緩沖液配制10-100ug/ml于微孔板微孔內(nèi)，每孔加100ul，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板5次后，常規(guī)封閉，干燥；取組織提取液或血清或血漿50ul加入各孔中，每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體50ul，同時(shí)做5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)孔和陰性對照孔；置37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
5.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，其特征在于對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。
6.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，其特征在于對于組織切片或細(xì)胞涂片中鳥氨酸脫羧酶的測定，將組織切片或細(xì)胞涂片常規(guī)固定后，用5％脫脂奶粉封閉，然后加抗鳥氨酸脫羧酶抗體，37℃1-2小時(shí)或2-8℃過夜，洗板后，加熒光標(biāo)記的二抗，37℃1小時(shí)，洗板后，于熒光顯微鏡下檢測結(jié)果。
7.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的方法，其特征在于對于細(xì)胞中鳥氨酸脫羧酶的測定，先將細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)至一定數(shù)量后，分配于微孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的藥物，然后置5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)，待細(xì)胞貼壁(不貼壁生長的細(xì)胞需離心)后，洗滌3次，常規(guī)固定，封閉，然后每孔加生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體100ul，37℃1-3小時(shí)后，洗滌5次，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素100ul，37℃1小時(shí)，洗滌5次，每孔加顯色劑A、B各50ul，37℃避光10分鐘，于酶標(biāo)儀450nm處測各孔OD值；同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)品，以各標(biāo)準(zhǔn)孔濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品的鳥氨酸脫羧酶含量即可根據(jù)其OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得；或根據(jù)各孔OD值，直接判定試驗(yàn)細(xì)胞的藥敏結(jié)果。
8.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體包被的預(yù)包被板；(2)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(3)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(4)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(5)樣品稀釋液；(6)洗滌液；(7)顯色劑A、B；(8)終止液。
9.一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(3)鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品；(4)洗滌液；(5)顯色劑A、B；(6)終止液。
10一種運(yùn)用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒，它有試劑盒，其特征在于試劑盒裝有下列各種試劑(1)抗鳥氨酸脫羧酶抗體；(2)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗；(3)洗滌液；(4)顯色劑。
全文摘要
一種用標(biāo)記免疫技術(shù)測定鳥氨酸脫羧酶的試劑盒及其測定方法,試劑盒裝有下列各種試劑:抗鳥氨酸脫羧酶抗體包被的預(yù)包被板;生物素標(biāo)記的抗鳥氨酸脫羧酶抗體;辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素;鳥氨酸脫羧酶標(biāo)準(zhǔn)品;樣品稀釋液;洗滌液;顯色劑A、B;終止液。它利用標(biāo)記免疫測定技術(shù)通過對鳥氨酸脫羧酶抗原含量的測定來間接反映鳥氨酸脫羧酶的活性,它解決了現(xiàn)有技術(shù)通過檢測
文檔編號G01N33/53GK1380550SQ0211034
公開日2002年11月20日 申請日期2002年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月9日
發(fā)明者朱有名, 韓金祥, 尤瑞·巴克拉克 申請人:山東省醫(yī)藥生物技術(shù)研究中心