專利名稱：一種檢測前哨淋巴結轉移的方法
技術領域：
本發(fā)明屬生物材料檢測領域，具體涉及一種提高前哨淋巴結病理檢查準確性的方法。
術中SLN的病理檢查是乳腺癌前哨淋巴結活檢中的關鍵步驟，其意義在于能指導進一步手術方案。如果術中SLN病理檢查為陰性，而術后石蠟切片發(fā)現(xiàn)淋巴結中有癌轉移，則患者需接受第二次手術，這對于身心已受到沉重打擊的乳腺癌患者來說，無疑是雪上加霜，而且兩次手術也增加了醫(yī)療費用。如果術中SLN病理為陽性而行腋淋巴結清掃，術后石蠟切片卻未發(fā)現(xiàn)淋巴結中有癌轉移，則增加了術后上肢水腫、肩關節(jié)運動受限等并發(fā)癥。
前哨淋巴結術中病理檢查的方法有多種。Veronesi等報道術中SLN冰凍檢查的準確率為83.2％，假陰性率為24％。Turner等術中聯(lián)合應用冰凍切片及印片的方法對SLN進行病理診斷，準確率為93.2％，假陰性率為8.4％。當對SLN的石蠟標本行連續(xù)切片進行轉移灶檢測后，此術中聯(lián)合診斷方法的假陰性率可上升到25.8％。Viale等術中對SLN行連續(xù)切片及快速免疫組化染色，雖然提高了SLN轉移的檢出率，但其缺點為損失了大量的淋巴結組織，而無法進行石蠟切片的最終診斷，且延長了術中的等候時間，費用昂貴，無法在我國普及。國內蘇逢錫等報告術中單一使用冰凍切片進行SLN病理檢查，與石蠟病理相符率僅為91.3％。
本發(fā)明方法按下述步驟進行1.注射示蹤劑本發(fā)明使用的放射性示蹤劑為99mTc標記的硫膠體(99mTc-Sulphur colloid，99mTc-SC)，標記率＞95％。使用的γ探測儀為Capintec Gammed IV，配備CdTe半導體探頭(Capentic，Inc.，美國)。使用單光子發(fā)射斷層掃描儀(SPECT)行術前淋巴顯像，型號ELSCINTAPEX-409AG，配備低能高分辨率平行孔準直器。術前10～16個小時將注射在患者腫瘤周圍的3，6，9，12點的乳腺組織中。每一點的注射量為0.5～1.0ml，放射活度為1.0～2.5mCi。2.術前淋巴顯像注射99mTc-SC后，于5、30、60、120，240分鐘以及11-16小時應用SPECT進行前位及前斜位淋巴顯像。3.熱點探測術前采用γ探測儀由注射點向腋窩、內乳區(qū)、鎖骨上區(qū)及鎖骨下區(qū)反復探測放射性藥物熱點的分布情況。熱點(Hot spot)的定義為腋窩或內乳區(qū)注射點以外的放射性計數(shù)最高的點，其10秒鐘γ-計數(shù)至少高出25點。找出熱點后在皮膚上做標記。4.前哨淋巴結活檢連續(xù)硬膜外麻醉成功后，先切取腫塊送冰凍檢查證實診斷。而后在皮膚標記的熱點附近選取前哨淋巴結活檢的切口，方向與行腋窩清掃的切口一致。術中在γ-探測儀上顯示的計數(shù)、聲音頻度的導引下調整方向，逐層切開，找到放射性核素濃聚的淋巴結即前哨淋巴結，予以摘除。切取淋巴結的部位以及體外放射計數(shù)均分別記錄。5.病理檢查對前哨淋巴結進行細針穿刺后做細胞學檢查。然后其中一半淋巴結仍可進行冰凍切片檢查，另一半可用于后續(xù)分子生物學檢測。手術結束后，所有標本立即浸泡于福爾馬林溶液中固定，24小時內做石蠟包埋，行常規(guī)病理檢查。
所述細針穿刺細胞學檢查的具體步驟為用一手固定前哨淋巴結，另一手持套有7號針頭的10ml一次性針筒，取前哨淋巴結上、前、左三個穿刺點進行細針穿刺，每個穿刺點各取淺、中、深三個平面，(以1/4為界)吸取細胞，反復抽吸數(shù)次。如抽吸后針頭內有少量血液或組織液，則可拔針；如未見液體，則出針前將針頭與針筒分離，排出筒中氣體，除去負壓后針筒與針頭相連出針，送檢，制成均勻涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止細胞自溶。所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，醫(yī)用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。固定10分鐘后，用水洗去固定液，浸入蘇木素染液5分鐘，水沖洗，在顯微鏡下觀察所取細胞，其中核大、核染色深、核漿比例失調的細胞為陽性。
本發(fā)明所述的冰凍切片檢查，使用恒溫冷凍切片，切片過程在恒溫箱內進行。所用儀器包括組織托盤和切片刀冷凍溫度穩(wěn)定在-20℃，使用自動貼片裝置，切片厚度為5um，組織塊大于1×1cm。
本發(fā)明聯(lián)合檢測方法的優(yōu)點為1.冰凍切片為組織學檢查，細針穿刺為細胞學檢查，它能不同角度、不同層面地吸取細胞，可檢測到位于其它層面的轉移灶。所述兩種檢查方法的結合，能保證有足夠的淋巴組織用于石蠟切片的檢查。2.冰凍切片與石蠟切片只能對一半SLN進行檢查(一半用于分子生物學檢測)，而細針穿刺能吸取另一半SLN的細胞而不影響其后續(xù)分子生物學的檢測。3.術中等侯時間短，冰凍切片約需20分鐘，細針穿刺約需15分鐘，兩種檢查能同時進行。4.醫(yī)療成本低。
權利要求
1.一種檢測前哨淋巴結轉移的方法，采用放射性核素作為示蹤劑，術前進行淋巴顯像，術中在γ探測儀引導下進行前哨淋巴結活檢，其特征在于術中病理檢查是聯(lián)合使用冰凍切片檢查與細針穿刺檢查的方法，
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測前哨淋巴結轉移的方法，其特征在于所述的細針穿刺檢查方法中，對前哨淋巴結進行多角度多層面的細針穿刺后做細胞學檢查，然后，其中一半淋巴結進行冰凍切片檢查，另一半用于后續(xù)分子生物學檢測。
3.根據(jù)權利要求1和2所述的檢測前哨淋巴結轉移的方法，其特征在于所述的細針穿刺檢查方法中，取前哨淋巴結上、前、左三個穿刺點進行細針穿刺，每個穿刺點以1/4為界，各取淺、中、深三個平面吸取細胞。
4.根據(jù)權利要求1和2所述的檢測前哨淋巴結轉移的方法，其特征在于所述的細針穿刺檢查方法中，采用套有7號針頭的10ml一次性針筒。
5.據(jù)權利要求1所述的檢測前哨淋巴結轉移的方法，其特征在于所述的細針穿刺檢查方法中，吸取細胞后制成均勻涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止細胞自溶，所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，醫(yī)用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。
6.根據(jù)權利要求1所述的檢測前哨淋巴結轉移的方法，其特征在于所述的冰凍切片檢查，使用恒溫冷凍切片，切片過程在恒溫箱內進行，所用儀器冷凍溫度穩(wěn)定在-20℃。
全文摘要
本發(fā)明屬生物材料檢測領域，具體涉及一種提高前哨淋巴結病理檢查準確性的方法。本發(fā)明采用放射性核素作為示蹤劑，術前進行淋巴顯像，術中在γ探測儀引導下進行前哨淋巴結活檢，聯(lián)合使用冰凍切片與細針穿刺的方法，可從不同角度、不同層面地吸取細胞，檢測其它層面的轉移灶，并保證有足夠的淋巴組織用于后續(xù)石蠟切片和分子生物學的檢測。本方法可明顯提高術中前哨淋巴結病理檢查的準確性。具有不損傷前哨淋巴結細胞結構和術中等候時間短、醫(yī)療成本低等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/60GK1412561SQ0213650
公開日2003年4月23日 申請日期2002年8月14日 優(yōu)先權日2002年8月14日
發(fā)明者張 杰, 沈坤煒, 尼爾馬, 沈鎮(zhèn)宙, 邵志敏, 韓企夏, 劉邦令, 莊傳經, 吳炅, 陸勁松, 柳光宇, 張家新 申請人:復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院