專利名稱：幽門螺桿菌納米金免疫滲濾法快速診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種快速診斷試劑盒，尤其是涉及一種采用免疫滲濾法檢測幽門螺桿菌的試劑盒。
背景技術(shù)：
許多資料證實，幽門螺桿菌(HP)與慢性胃炎及消化性潰瘍密切相關(guān)，目前診斷幽門螺桿菌感染的常用方法有胃粘膜活檢涂片，組織學檢查，細菌培養(yǎng)，尿素酶試驗和14C呼吸試驗等。前幾種方法均需作內(nèi)鏡檢查，采取活檢標本，臨床推廣和多次重復有一定難度，后一種方法使用同位素，不僅價格較貴，病人排泄物中的同位素易污染環(huán)境，而且需要特殊設備，應用范圍受到限制。血清學檢測，方法簡便、易行，又非創(chuàng)傷性，倍受人們關(guān)注。近年來國內(nèi)外對此研究較多，但普采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和斑點免疫吸附試驗(Dot-ELISA)，但因其操作比較繁瑣，而且需要一定儀器，目前多在有條件的實驗室中進行，尚不能推廣至基層單位。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是解決現(xiàn)有檢測方法所存在的操作比較繁瑣，需要一定儀器，而且不能推廣到基層等技術(shù)問題。
本發(fā)明的上述技術(shù)問題主要是通過下述技術(shù)方案得以解決的檢測盒包含反應板、抗原固相膜、納米金標探針、緩沖系統(tǒng)。其固相膜采用幽門螺桿菌抗原點樣；金顆粒采用檸檬酸納還原法制備；緩沖系統(tǒng)為tris與皂素混合液。
作為優(yōu)選，幽門螺桿菌抗原采用全菌粗制抗原；金顆粒直徑為15-20納米，金標記物采用兔抗人免疫球蛋白，其球蛋白效價為雙擴散試驗在1∶64以上；tris與皂素混合液采用PH8.2、0.02mol tris鹽酸緩沖液與0.2-0.5克/升皂素組成。
因此，本發(fā)明具有檢測快速、方便、敏感、特異、準確，運送方便，性能穩(wěn)定，適宜于基層醫(yī)療單位使用等特點。
具體實施例方式
下面通過實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步具體的說明。
試劑盒包括反應板、金標探針(A液)、tris鹽酸緩沖液加皂素(B液)。反應板包括小盒，吸水填料和硝酸纖維膜；A液，按檸檬酸還原法制備，包括膠體金顆粒的制備和金標免疫球蛋白結(jié)合物的制備。膠體金顆粒的制備取0.01％氯金酸(HauCl4)水溶液加到100ml水中，加熱至沸騰，劇烈攪拌后加入1％檸檬酸三鈉溶液即成；金標免疫球蛋白結(jié)合物的制備首先確定1ml膠體金溶液所需最小球蛋白用量，蛋白濃度一般不能低于5mg/ml，PH值8.2左右，按膠體金總?cè)莘e計算所需球蛋白用量，兩者按比例混合，高速離心即成。B液為PH8.2，0.02mol/Ltris加0.2-0.5g/L皂素混合而成。
本發(fā)明的幽門螺桿菌抗原采用全菌粗制抗原，其優(yōu)點是來原容易，制作簡便，無需昂貴儀器，而且敏感性、特異性與幽門螺桿菌純化尿素酶抗原無明顯差異。
納米金免疫滲濾法檢測是通過將含有靶物質(zhì)的人血清加于固相膜上來進行的，然后借助于血清在膜上的滲透現(xiàn)象，使膜上的抗原和血清中的抗體起反應，該反應結(jié)果通過金免疫標記物顯色，陽性反應顯示紅色斑點，陰性結(jié)果僅留粉色背景。所以背景清晰度對判斷結(jié)果至關(guān)重要，因為人血清中除了有靶物質(zhì)，尚有其它非特異性成份常常造成背景顏色較深，為確保背景與斑點呈鮮明對比色，有利于結(jié)果判斷，發(fā)明者進行了多種探索性試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在緩沖液中加入皂素能提高斑點色澤清晰度，其試驗結(jié)果見下表
緩沖液中皂素含量與斑點色澤清晰度比較

金顆粒大小與金標記物保存時間密切相關(guān)，發(fā)明者分別用直徑10-15納米、20-25納米、30-35納米的顆粒標記免疫球蛋白探針，將幽門螺桿菌抗原和金標記物配對置于4℃冰箱保存，然后取10份臨床證實為HP陽性的血清和10份HP陰性血清進行檢測，每隔一個月取出每組配對物檢測一次，其中10-15納米組從第1個月開始到12個月止，10份陽性血清全部陽性，10份陰性血清全部陰性；20-25納米組從第1個月開始到第6個月，10份陽性血清全部陽性，10份陰性血清全部陰性，但從第7個月開始，10份陽性血清50％以上呈陰性，至12個月全部呈陰性；30-35納米組從3個月開始，陽性檢出率逐漸減低。由此說明10-15納米金標記探針可在4℃環(huán)境下保存一年時間，故本發(fā)明采用直徑10-15納米顆粒標記免疫球蛋白探針。
權(quán)利要求
1.一種幽門螺桿菌納米金免疫滲濾法快速診斷試劑盒，包含反應板、抗原固相膜、納米金標記探針、緩沖系統(tǒng)，其特征在于a.抗原固相膜采用幽門螺桿菌抗原點樣；b.金顆粒采用檸檬酸納還原法制備；c.緩沖系統(tǒng)為tris與皂素混合液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌納米金免疫滲濾法快速診斷試劑盒，其特征在于a.幽門螺桿菌抗原采用全菌粗制抗原；b.金顆粒直徑為15-20納米，金標記物采用兔抗人免疫球蛋白，其球蛋白效價為雙擴散試驗在1∶64以上；c.tris與皂素混合液采用PH8.2、0.02mol tris鹽酸緩沖液與0.2-0.5克/升皂素組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速診斷試劑盒，試劑盒包含反應板、抗原固相膜、納米金標探針、緩沖系統(tǒng)。其固相膜采用幽門螺桿菌抗原點樣；金顆粒采用檸檬酸納還原法制備；緩沖系統(tǒng)為tris與皂素混合液。幽門螺桿菌抗原采用全菌粗制抗原；金顆粒直徑為15－20納米，金標記物采用兔抗人免疫球蛋白，其球蛋白效價為雙擴散試驗在1∶64以上；tris與皂素混合液采用pH8.2、0.02mol tris鹽酸緩沖液與0.2－0.5克/升皂素組成。本發(fā)明具有檢測快速、方便、敏感、特異、準確，運送方便，性能穩(wěn)定，適宜于基層醫(yī)療單位使用等特點。
文檔編號G01N33/569GK1465980SQ02160338
公開日2004年1月7日 申請日期2002年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月26日
發(fā)明者林怡, 林 怡 申請人:林怡, 林 怡