專利名稱：還含有α-羥酸或β-二酮的溶液中葡萄糖的檢測的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可能還含有潛在干擾化合物如α-羥酸或β-二酮的樣品中葡萄糖的檢測。
2.背景技術(shù)包括葡萄糖在內(nèi)的糖類與苯基硼酸的絡(luò)合已知已久，且該相互作用的可逆性用作糖的色譜分離的基礎(chǔ)。具體而言，在1959年，Lorand和Edwards報道苯基硼酸與許多不飽和多元醇的水締合的締合常數(shù)；結(jié)合相互作用的范圍從極弱(例如乙二醇，Kd＝360mM)至中等強度(例如葡萄糖，Kd＝9.1mM)。參見J.Yoon等人，Bioorganic and MedicinalChemistry 1(4)267-71(1993)。據(jù)信結(jié)合機理是通過葡萄糖上的相鄰羥基與硼酸根部分的羥基的結(jié)合而發(fā)生。
美國專利5,503,770(James等人)描述了一種含有硼酸的熒光化合物，該化合物與糖類，包括葡萄糖結(jié)合即發(fā)射高強度熒光。該熒光化合物的分子結(jié)構(gòu)包括熒光團，至少一個苯基硼酸部分和至少一個提供氨的氮原子，其中該氮原子位于苯基硼酸部分的鄰位，從而與硼酸發(fā)生分子內(nèi)相互作用。因此這種相互作用導(dǎo)致化合物與糖結(jié)合即發(fā)射熒光。參見T.James等人，J.Am.Chem.Soc.117(35)8982-87(1995)。
此外，使用含蒽基硼酸的化合物檢測血糖的熒光傳感器在本領(lǐng)域中已知。例如，J.Yoon等人，J.Am.Chem.Soc.1145874-5875(1992)描述蒽基硼酸可以用作糖類結(jié)合，包括葡萄糖和果糖結(jié)合的信號的熒光化學(xué)傳感器。
不幸的是，以上述方式與葡萄糖相互作用的化合物還有與其它具有羥基的化合物相互作用的趨勢，從而降低了葡萄糖分析的特異性，特別是在分析可能含有干擾量的乳酸鹽、乙酰乙酸鹽等的生理樣品的時候。例如，某些糖尿病患者還產(chǎn)生乳酸酸中毒，其中血液乳酸鹽水平高于5mmol/升。因此，非常需要對可能的干擾羥基化合物，如乳酸鹽相對不敏感的葡萄糖分析。

發(fā)明內(nèi)容
一方面，本發(fā)明涉及一種用于檢測可能還含有α-羥酸或β-二酮的樣品中葡萄糖的存在或濃度的方法，所述方法包括a)使樣品與具有至少兩個葡萄糖的識別成分的化合物接觸，該識別成分的取向使該化合物與葡萄糖之間的相互作用比該化合物與α-羥酸或β-二酮之間的相互作用更為穩(wěn)定，所述化合物還含有具有可檢測性質(zhì)的可檢測部分，該性質(zhì)在所述化合物與所述樣品中的葡萄糖接觸時以濃度依賴性方式變化；和b)測量所述可檢測性質(zhì)的任何變化，以測定所述樣品中葡萄糖的存在或濃度，其中α-羥酸或β-二酮的存在基本上不干擾所述測定。
另一方面，本發(fā)明涉及具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中-R1和R2相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R3為氫或能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R4和R5相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個Z獨立地為碳或氮；-R6和R7相同或不同，并且為i)具有0～10個相鄰或分枝的碳和/或雜原子的連接基團，或ii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R選自以下i)含有1～10個相鄰的選自碳、氧、氮、硫和磷的原子的脂肪和/或芳香間隔基，ii)可檢測部分，或iii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個R8相同或不同，且是于未保護時能夠與葡萄糖中存在的連位二醇基團相互作用的任選地被保護的部分；和
-R9和R10相同或不同，并且是i)氫，ii)可檢測部分，iii)以下基團a)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分，和/或b)包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)的官能團的基團；附帶條件是該指示劑化合物含有至少一個與其締合的可檢測部分，所述部分與該指示劑化合物直接締合或者作為固體載體或聚合物基質(zhì)的一部分與該化合物締合。
另一方面，本發(fā)明涉及包含上述化合物的檢測系統(tǒng)。


圖1例示實施例1所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在420nm下)。
圖2例示實施例2所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在428nm下)。
圖3例示實施例3所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在428nm下)。
圖4例示實施例4所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在427nm下)。
圖5例示實施例5所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在540nm下)。
圖6例示實施例6所述的指示劑的吸收光譜。
圖7～8例示實施例6所述的指示劑的吸光比(450nm/530nm)。
圖9例示實施例6所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在550nm下)。
圖10例示在不存在葡萄糖和存在100mM葡萄糖的情況下，實施例6所述的指示劑的熒光光譜。
圖11例示在存在葡萄糖和乳酸鹽的情況下，實施例6所述的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在550nm下)。
圖12例示實施例10所述的與葡萄糖接觸的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在525nm下)。
圖13例示實施例10所述的與乳酸鹽接觸的指示劑的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，在530nm下)發(fā)明詳述一方面，本發(fā)明提供一種檢測可能還含有干擾化合物，如α-羥酸或β-二酮的樣品中葡萄糖的存在或濃度的方法。這種可能的干擾化合物包括乳酸鹽、乙酰乙酸鹽，β-羥基丁酸等。
使用能夠識別樣品中的葡萄糖但對樣品中干擾化合物的識別可能性較小的指示劑化合物完成本發(fā)明。該指示劑化合物具有至少兩個葡萄糖識別成分，該識別成分的取向使該指示劑化合物與葡萄糖之間的相互作用比該指示劑化合物與干擾化合物之間的相互作用更為穩(wěn)定。
適宜的識別成分包括能夠優(yōu)選與葡萄糖，特別是葡萄糖中存在的二醇基團發(fā)生可逆相互作用的部分。已知幾種這樣的識別成分，優(yōu)選包括硼酸、硼酸根離子、亞砷酸、亞砷酸根離子、碲酸、碲酸根離子、鍺酸、鍺酸根離子等。最優(yōu)選含硼識別成分。可以理解，在使用前可以用保護基封閉識別成分。這些基團是已知的，其包括新戊二醇、頻那醇等。在某些實施方案中，在該化合物將要使用的介質(zhì)中將封閉的識別成分去封閉(參加，例如實施例5)。
優(yōu)選識別成分在指示劑化合物上彼此間隔適宜的距離以使至少兩種識別成分與葡萄糖分子相互作用，導(dǎo)致特異性增大。一般而言，識別成分之間可以具有達約30個原子的間隔基。優(yōu)選該識別成分的取向使它們在與葡萄糖相互作用時能夠相隔大約6_。
本發(fā)明的指示劑化合物具有可檢測性質(zhì)，該性質(zhì)在該化合物與含有葡萄糖的樣品接觸時以濃度依賴性方式變化。許多這種性質(zhì)是已知的，并可以用于本發(fā)明。例如，該指示劑化合物可以包括發(fā)光(熒光或磷光)或化學(xué)發(fā)光部分、吸光基礎(chǔ)部分等等。該指示劑化合物可以包括能量供體部分和能量受體部分，每個部分間隔使該指示劑化合物與葡萄糖相互作用時發(fā)生可檢測的變化。該指示劑化合物可以包括熒光團和猝滅劑，可以將熒光團和猝滅劑構(gòu)型為使該熒光團在不存在葡萄糖的情況下被該猝滅劑猝滅。在這種情況下，當(dāng)存在葡萄糖時，指示劑經(jīng)歷構(gòu)型變化，該構(gòu)型變化導(dǎo)致猝滅劑移動離熒光團充分遠的距離，從而發(fā)射熒光。相反，可以將熒光團和猝滅劑構(gòu)型為使它們在不存在葡萄糖的情況下充分分離并使熒光團發(fā)射熒光；在與葡萄糖相互作用時，熒光團和猝滅劑移動至足夠接近以導(dǎo)致猝滅。在我們于2001年1月5日提交的，提為“Detection of Analytes(分析物的檢測)”的共同在審申請09/754,219中更為詳細地描述了構(gòu)型變化概念，本文引用該申請作為參考。
或者，該指示劑可以包括能夠與識別成分或相對于該識別成分空間放置的另一部分相互作用諸如熒光團的部分，使得熒光團在不存在葡萄糖的情況下發(fā)射熒光。在加入葡萄糖時，葡萄糖競爭熒光團和識別成分之間的相互作用，或熒光團和相對于識別成分空間放置的另一部分之間的相互作用，導(dǎo)致熒光減少。實施例6例示了這個概念的一個實例。還將認(rèn)識到可以選擇指示劑，以在不存在葡萄糖的情況下，當(dāng)熒光團與識別成分或相對于識別成分空間放置的另一部分相互作用時，該熒光團不發(fā)射熒光，或者發(fā)射相對低水平的熒光。在加入葡萄糖時，葡萄糖競爭熒光團和識別成分之間的相互作用，或熒光團和相對于識別成分空間放置的另一部分之間的相互作用，導(dǎo)致熒光增加。
其它可檢測部分包括通過光致電子轉(zhuǎn)移或誘導(dǎo)效應(yīng)而使葡萄糖相互作用影響其熒光的部分。這些包括在本文引用作為參考的1999年3月11日提交的共同在審美國申請09/265,979(在1999年12月16日公開為PCT國際申請WO 99/46600)中公開的鑭系元素螯合物、聚芳烴和它們的衍生物、香豆素、BoDiPy、丹磺酰、兒茶酚等。另一類部分包括在該指示劑化合物與葡萄糖相互作用時其吸收光譜發(fā)生變化的部分，包括茜素紅等。另一類部分包括其熒光受鄰近效應(yīng)調(diào)節(jié)的部分，例如能量供體/受體對如丹磺酰/dabsyl等。
優(yōu)選該可檢測性質(zhì)為可檢測的光譜變化，如吸收特征(例如吸光系數(shù)和/或光譜移動)、熒光衰減時間(通過時域或頻域測定而確定)、熒光強度、熒光各向異性或偏振的變化；發(fā)射光譜的光譜移動；時間分辯各向異性衰減的(通過時域或頻域測定而確定)變化等。
本發(fā)明的指示劑化合物如果是可溶的話，如果需要可以直接用于溶液中。另一方面，如果期望的應(yīng)用這樣要求，該指示劑化合物可以固定(如通過機械夾帶或共價或離子結(jié)合)到不溶性表面或基質(zhì)如玻璃、塑料、聚合材料等上或其內(nèi)部。當(dāng)在例如另一種聚合物中夾帶該指示劑化合物時，該夾帶材料優(yōu)選應(yīng)該對葡萄糖具有充分的滲透性，以使葡萄糖和該指示劑化合物之間發(fā)生適宜的相互作用。
如果該指示劑化合物在水中的溶解不足或不溶，但仍期望進行含水介質(zhì)中的檢測，則該指示劑化合物可以與親水性單體共聚形成親水性大分子，如在2000年8月4日提交的共同在審美國申請09/632,624中所述，本文引用該申請的內(nèi)容作為參考。
優(yōu)選的指示劑化合物具有以下結(jié)構(gòu) 其中-R1和R2相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R3為氫或能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R4和R5相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個Z獨立地為碳或氮；-R6和R7相同或不同，并且為i)具有0～10個相鄰或分枝的碳和/或雜原子的連接基團，或ii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R選自以下i)含有1～10個相鄰的選自碳、氧、氮、硫和磷的原子的脂肪和/或芳香間隔基，ii)可檢測部分，或iii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個R8相同或不同，且是于未保護時能夠與葡萄糖中存在的連位二醇基團相互作用的任選地被保護的部分；和-R9和R10相同或不同，并且是i)氫，ii)可檢測部分，iii)以下基團a)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分，和/或b)包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)的官能團的基團；附帶條件是該指示劑化合物含有至少一個與其締合的可檢測部分，所述部分與該指示劑化合物直接締合或者作為固體載體或聚合物基質(zhì)的一部分與該化合物締合。
用于改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的適宜的基團對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，且包括基團如鹵素、硝基、氨基、鹵素取代的烷基、任選地取代的羧基、?；?、酮、腈、酰胺、酯、烷氧基等。
任何取代基的適宜的連接基團可以包括約1至約20個相鄰原子的基團，所述基團可以是分枝或被取代的，且其可以包括一個或多個雜原子，其終止于能夠與聚合物或載體進一步反應(yīng)或結(jié)合的官能團。適宜的連接基團的實例包括烷基、芳基、?；?、聚酰胺、聚醚，及它們的組合，所有這些基團任選地被取代。
R9和R10還可以包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)，如溶解度、pKa等的官能團。例如，這些官能團包括任選地取代的羧化物、氨基、季銨基、磺酸酯、PEG等。
可以理解，當(dāng)任何取代基是可檢測部分時，它還可以包括適宜的連接可檢測部分與該指示劑化合物的其余部分的連接基團。適宜的連接基團包括上述的連接基團。適宜的可檢測部分包括上述的可檢測部分。
R8優(yōu)選選自硼酸、硼酸根離子、亞砷酸、亞砷酸根離子、碲酸、碲酸根離子、鍺酸、鍺酸根離子及它們的組合。
還可以由以上定義理解，本發(fā)明的化合物和檢測系統(tǒng)可以是聚合物形式。因此，完整化合物(含有識別成分和可檢測部分)可以與現(xiàn)有聚合物連接，或者單體形式的完整化合物可以聚合或與另一種適宜的單體共聚，形成聚合物?；蛘撸瑑煞N單獨的單體組分(例如一種含有識別成分，而一種含有可檢測部分)可以共聚，從而使所得的聚合物含有所有必需的系統(tǒng)成分(參見實施例6)。
本發(fā)明的指示劑化合物有多種用途，包括用作能源、醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的指示劑。例如，該指示劑化合物可以用于檢測生理緩沖液或液體如血液、血漿、血清、間隙液、腦脊髓液、尿液、唾液、眼內(nèi)液、淋巴液、淚液或汗液中的亞水平或超水平的葡萄糖，從而提供用于診斷或監(jiān)測諸如糖尿病和腎上腺功能不全的疾病的有價值的信息。
用于人治療應(yīng)用的葡萄糖的醫(yī)學(xué)/藥物生產(chǎn)需要監(jiān)測和控制。
本發(fā)明在農(nóng)業(yè)中的用途包括檢測大豆和其它農(nóng)產(chǎn)品中葡萄糖的水平。對于高價值產(chǎn)品如葡萄酒葡萄而言，在重要的收割決定中必須小心地監(jiān)測葡萄糖。由于葡萄糖是發(fā)酵方法中最昂貴的碳原和原料，用于最佳反應(yīng)器進料速度控制的葡萄糖監(jiān)測在動力醇生產(chǎn)中是重要的。反應(yīng)器混合和控制葡萄糖濃度對軟飲料和發(fā)酵飲料的生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制也是重要的，所述生產(chǎn)在國際上消耗最大量的葡萄糖和可發(fā)酵的(連位二醇)糖。
當(dāng)該指示劑化合物引入熒光指示劑取代基時，各種檢測技術(shù)在本領(lǐng)域中也是已知的。例如，本發(fā)明的化合物可以用于熒光傳感裝置(例如美國專利5,517,313)或者可以與聚合物材料如試紙結(jié)合用于目測。例如，后一技術(shù)允許類似于用石蕊試紙條測定pH的方式測定葡萄糖。本文所述的化合物還可以作為簡單的試劑與標(biāo)準(zhǔn)臺式(benchtop)分析裝置如由Shimadzu、Hitachi、Jasco、Beckman等制造的分光熒光光度計或臨床分析儀一起使用。這些分子還提供用于由Ocean Optics(Dunedin，F(xiàn)lorida)或Oriel Optics制造的基于光纖的傳感器和分析熒光計的分析物特異性化學(xué)/光學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
美國專利5,517,313，其內(nèi)容被本文引用作為參考，描述了一種熒光傳感裝置，其中本發(fā)明的化合物可以用于測定液體介質(zhì)中葡萄糖的存在或濃度。該傳感裝置包括含熒光指示劑分子的基質(zhì)(下文稱為“熒光基質(zhì)”)，高通透的濾光器和光檢測器的分層排列。在此裝置中，光源，優(yōu)選為發(fā)光二極管(“LED”)，至少部分位于該指示劑材料內(nèi)或該指示劑基質(zhì)所處的波導(dǎo)管內(nèi)，從而使來自光源的入射光導(dǎo)致該指示劑分子發(fā)熒光。高通透濾光器允許發(fā)射的光到達光檢測器，同時濾掉來自光源的散射入射光。在美國專利5,517,313所述的裝置中采用的指示劑分子的熒光由局部存在的葡萄糖調(diào)節(jié)，例如削弱或增強。
在美國專利5,517,313所述的傳感器中，含有指示劑分子的材料對分析物而言是可滲透的。因此，分析物可以從周圍試驗介質(zhì)中擴散到該材料中，從而影響由指示劑化合物發(fā)射的熒光。光源、含指示劑化合物的材料、高通透濾光器和光檢測器的結(jié)構(gòu)使至少一部分由指示劑化合物發(fā)射的熒光影響光檢測器，產(chǎn)生代表周圍介質(zhì)中葡萄糖濃度的電信號。
根據(jù)使用本發(fā)明的指示劑化合物的其它可能的實施方案，傳感器還在美國專利5,910,661、5,917,605和5,894,351中描述，本文引用這些文獻作為參考。
本發(fā)明的化合物還可以用于可植入的裝置，例如用于連續(xù)體內(nèi)監(jiān)測血糖水平。例如，適宜的裝置在于1999年8月26日提交的共同在審美國專利申請09/383,148和美國專利5,833,603、6,002,954和6,011,984中描述，本文引用這些文獻作為參考。
本發(fā)明的化合物可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不用進行過度量實驗的情況下，使用已知的反應(yīng)機理和試劑，例如包括與下述的一般過程一致的反應(yīng)機理制備。
實施例1蒽衍生物和MAPTAC的水溶性共聚物I.在水溶性聚合物中共聚的單硼酸鹽-蒽指示劑的合成A.9-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽0℃下，在20分鐘內(nèi)，向在250mL CHCl3中的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(11.82g，66.0mmol，3.0當(dāng)量)和DBMP(10mg，作為抑制劑)的懸浮液中滴加DIEA(18.5g，25.0mL，144mmol，6.5當(dāng)量)。將混合物暖至25℃，然后再冷卻至0℃。在1小時內(nèi)，向該冷卻的混合物中滴加在CHCl3(100mL)中的9-氯甲基蒽(5.0g，22mmol)的溶液。然后在25℃下將混合物攪拌1小時，在50℃下攪拌12小時，然后在70℃下攪拌2小時。此時，用4×60mL部分水洗滌該混合物，用CH2Cl2萃取合并的水層。用無水Na2SO4干燥合并的有機萃取物，傾析并真空濃縮。用硅膠色譜法(閃蒸硅膠，2～5％CH3OH/CH2Cl2)純化粗產(chǎn)物，得到2.44g(33％)固體產(chǎn)物。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.39，使用90/10 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)，茚三酮染色觀察。
B.9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷(borinan)-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽在0℃下，在10分鐘內(nèi)，向在200mL CHCl3中的9-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-甲基蒽(2.44g，7.34mmol)和DBMP(10mg，作為抑制劑)的溶液中分批加入DIEA(2.85g，3.84mL，22.0mmol，3.0當(dāng)量)，然后在30分鐘內(nèi)滴加(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(2.49g，8.81mmol，1.2當(dāng)量)的溶液。隨后在25℃下將該混合物攪拌20小時。此時，用水洗滌該混合物，并用CH2Cl2萃取合并的水層。用無水Na2SO4干燥合并的有機萃取物，傾析并真空濃縮。用硅膠色譜法(閃蒸硅膠，2～5％CH3OH/CH2Cl2)純化粗產(chǎn)物，得到2.50g(76％)淺黃色結(jié)晶固體。
Mp72～73℃。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.36，使用90/10 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)，茚三酮染色觀察。
C.9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽和MAPTAC(1∶20摩爾比)的水溶性共聚物向在1.5mL乙二醇中的9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽(0.0490g，0.105mmol)和[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]三甲基氯化銨(MAPTAC，50wt％水溶液，0.48g，0.90mL，2.1mmol，20當(dāng)量)的溶液中加入4，4′-偶氮雙(氰基戊酸)(0.008g，0.03mmol，1.4摩爾％總單體)。用氬氣將溶液凈化5分鐘，然后于暗處加熱到60℃，持續(xù)18小時。此時，將粘性溶液冷卻至25℃，用5mL水稀釋，并通過醋酸纖維素膜(MWCO 3500)對3×4L水進行透析。將透析物濃縮至干，得到0.339g(68％)黃色玻璃狀固體。
II.用葡萄糖和乳酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定葡萄糖和乳酸鹽對此實施例中制備的共聚物(它含有單一識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。圖1顯示在含有a)0～20mM葡萄糖；b)0～20mM乳酸鹽的PBS中的0.5mg/mL共聚物(1∶20摩爾比)的溶液的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，420nm)。用Shimadzu RF-5301分光熒光光度計記錄光譜，其中在365nm激發(fā)，激發(fā)狹縫為1.5nm，發(fā)射狹縫為5nm，室溫。誤差棒為每個數(shù)據(jù)點的兩個平行值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。該共聚物的熒光受葡萄和乳酸鹽存在的影響。
實施例2通過葡萄糖和可能的生理性干擾物調(diào)節(jié)與水溶性聚合物共價連接的雙硼酸鹽指示劑I.雙硼酸鹽蒽指示劑的單甲基丙烯酸酯單體的合成 A.9，10-雙[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽在23℃下，向在40mL CHCl3中的2-(2-氨基乙氧基)乙醇(31.4g，30.0mL，299mmol，20.9當(dāng)量)的溶液中加入9，10-雙(氯甲基)蒽(3.94g，14.3mmol)。將溶液于暗處攪拌67小時。此時，加入100mL CH2Cl2，并用1×50mL和2×100mL部分NaHCO3(飽和水溶液)洗滌。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到4.67g(79％)黃色粉末。產(chǎn)物(RP-HPLC純度為～85％)不進一步處理而使用。
HPLC條件HP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間15.6分鐘。
B.9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽將23℃的在125mL CHCl3中的9，10-雙[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(4.02g，9.75mmol)、DIEA(12.6g，17.0mL，97.5mmol，10.0當(dāng)量)和(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(13.7g，48mmol，4.9當(dāng)量)的溶液于暗處攪拌46小時。此時，首先通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮反應(yīng)混合物，然后用真空泵除去DIEA。用氧化鋁柱色譜法(150g活化的中性氧化鋁，0～3％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到5.67g(70％)粘性油，此油在靜置時固化。產(chǎn)物(RP-HPLC純度為～85％)不經(jīng)進一步純化而使用。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.33，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLC條件HP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間18.8分鐘。
C.9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(單甲基丙烯酸酯單體)將23℃的在15mL CH2Cl2中的9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(0.298g，0.359mmol)、甲基丙烯酸(0.304g，0.300mL，3.53mmol，9.84當(dāng)量)、DCC(0.965g，4.68mmol，13.0當(dāng)量)和N，N-二甲基氨基吡啶(0.020g，0.16mmol，0.46當(dāng)量)的溶液于暗處攪拌4小時。此時，將反應(yīng)混合物過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。用氧化鋁柱色譜法(50g活化的中性氧化鋁，0～4％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.150g(47％)黃色固體。
FAB MSC52H66B2N2O9計算值[M]+885；實測值[M+1]+886。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.45，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間21分鐘。
D.9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽和TMAMA(1∶50摩爾比)的水溶性共聚物向在0.600mL水中的[2-(甲基丙烯氧基)乙基]三甲基氯化銨(TMAMA，70wt％水溶液，0.344g單體，1.66mmol，50當(dāng)量)的溶液中加入在3.00mL MeOH中的9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(0.0024g，0.0033mmol)的溶液。向此混合物加入4，4′-偶氮雙(4-氰基戊酸)(0.0075g，0.027mmol，1.6摩爾％總單體)。用0.45μ膜濾器過濾該溶液，用氮氣凈化，然后于暗處在55℃下加熱16小時。此時，將粘性溶液冷卻至25℃并真空濃縮。用20mL水稀釋殘余物，并用0.2μ膜濾器過濾。將聚合物溶液通過醋酸纖維素膜(MWCO 3500)對2×4L水透析。由透析得到38.5mL聚合物溶液。將此溶液的一部分濃縮至干，表明0.0075g聚合物/1.0mL溶液?？偣驳玫?.289g(77％)聚合物。
II.用葡萄糖、乳酸鹽和乙酰乙酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定葡萄糖、乳酸鹽和乙酰乙酸鹽對此實施例中制備的共聚物(它含有兩種識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。圖2顯示在含有a)0～20mM葡萄糖；b)0～20mM乳酸鹽；c)0～20mM乙酰乙酸鋰的PBS中的1.5mg/mL蒽雙硼酸鹽-TMAMA(1∶50摩爾比)共聚物的溶液的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，428nm)。用Shimadzu RF-5301分光熒光光度計記錄光譜，其中在365nm激發(fā)，激發(fā)狹縫為1.5nm，發(fā)射狹縫為1.5nm，室溫。共聚物的熒光受葡萄糖的存在影響，但不受乳酸鹽或乙酰乙酸鹽的存在影響。
實施例3溶液中的乳酸鹽對葡萄糖對雙硼酸鹽蒽指示劑的熒光的劑量反應(yīng)影響的影響 A.9，10-雙[[2-(叔丁氧羰基)乙胺基]甲基]蒽將23℃的在75mL CHCl3中的β-丙胺酸叔丁酯鹽酸鹽(3.06g，16.8mmol，5.09當(dāng)量)、DIEA(4.27g，5.75mL，33.0mmol，10.00當(dāng)量)和9，10-雙(氯甲基)蒽(0.910g，3.31mmol)的溶液于暗處攪拌93小時。此時，過濾溶液，并用1×40mL和2×60mL部分的NaHCO3(飽和水溶液)洗滌。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到粗黃色固體。用硅膠柱色譜法(30g重力級凝膠，0～3％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到1.06g(65％)粘性黃-橙色產(chǎn)物。產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化而使用。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.33，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
B.9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(叔丁氧羰基)乙胺基]甲基]蒽將23℃的在30mL CHCl3中的9，10-雙[[2-(叔丁氧羰基)乙胺基]甲基]蒽(1.60g，3.25mmol)、DIEA(4.45g，6.00mL，34.4mmol，10.6當(dāng)量)和(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(4.80g，17.0mmol，5.22當(dāng)量)的溶液于暗處攪拌4.5天。此時，將45mL CHCl3加入該混合物中，并用2×25mL部分NaHCO3(飽和水溶液)洗滌該混合物。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到粗微紅色油。用氧化鋁柱色譜法(100g活化的中性氧化鋁，0～3％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到～3.5g橙色固體。將產(chǎn)物溶解，然后形成白色沉淀(DIEA-HBr鹽)。過濾溶液，并濃縮濾液，得到2.72g(93％)橙色固體。產(chǎn)物(RP-HPLC純度為＞80％)不經(jīng)進一步純化而使用。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.66，使用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLC條件HP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間23.9分鐘。
C.9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(丙酰基)氨基]甲基]蒽將23℃的在5mL 20％TFA/CH2Cl2中的9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(叔丁氧羰基)乙胺基]甲基]蒽(0.556g，0.620mmol)的溶液于暗處攪拌25小時。此時，在N2氣流下濃縮該反應(yīng)混合物。用3×10mL部分乙醚研磨殘余物。真空干燥殘余的固體，得到0.351g(87％)絨毛狀黃色粉末。
FAB MS甘油基質(zhì)；C42H46B2N2O10(雙甘油加合物)計算值[M]+760；實測值[M]+760。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.025mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，360nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間16.7分鐘。
D.用葡萄糖和乳酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定葡萄糖和乳酸鹽對此實施例中制備的指示劑化合物(它含有兩種識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。圖3顯示在含有a)0～10mM葡萄糖、0mM乳酸鹽；b)0～10mM葡萄糖、2mM乳酸鹽；c)0～10mM葡萄糖、5mM乳酸鹽的PBS中的75μM雙羧酸酯雙硼酸鹽蒽指示劑的溶液的熒光(428nm下)。用Shimadzu RF-5301分光熒光光度計記錄光譜，其中在365nm激發(fā)，激發(fā)狹縫為1.5nm，發(fā)射狹縫為1.5nm，室溫。所有點平行三份測量，包括±1SD誤差棒。乳酸鹽的存在基本上不影響葡萄糖對指示劑的熒光調(diào)節(jié)。
實施例4當(dāng)指示劑共價固定在水凝膠中時，雙硼酸鹽葡萄糖指示劑對葡萄糖和乳酸鹽與乙酰乙酸鹽的選擇性I.雙甲基丙烯酰胺單體的制備 A.9，10-雙[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽在40℃下，將23℃的在200mL CHCl3中的9，10-雙(氯甲基)蒽(1.5g，5.45mmol)、DIEA(28.17g，38.00mL，218mmol，40當(dāng)量)、N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(9.76g，54.5mmol，10.0當(dāng)量)和～5mgBHT的懸浮液于暗處攪拌4天。此時，將溫度升高至4.5℃，并將混合物再攪拌3天。此時，已形成沉淀。過濾混合物，并將固體產(chǎn)物溶解在最小量的CH2Cl2。過夜形成黃色結(jié)晶固體，目的產(chǎn)物的雙鹽酸鹽(3.15g，定量)。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.31，用90/10 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.100mL注射，0.75mL/min，360nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間15.0分鐘。
B.9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽(雙甲基丙烯酰胺單體)將23℃的在20mL CHCl3中的9，10-雙[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽(0.0.650g，1.34mmol游離胺)、DIEA(0.612g，0.825mL，4.74mmol，3.55當(dāng)量)、(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(1.34g，4.74mmol，3.55當(dāng)量)和BHT(5mg，作為抑制劑)的溶液于暗處攪拌5天。此時，真空濃縮反應(yīng)混合物，并用氧化鋁色譜法(200g活化的中性氧化鋁，0～2％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.465g(39％)非常粘的黃色油。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.59，用90/10 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，360nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間16.9分鐘。
C.具有葡萄糖指示劑的N，N-二甲基丙烯酰胺水凝膠的制備制備在乙二醇中的N，N-二甲基丙烯酰胺(40％wt.)和N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺(0.8％wt.)的溶液。將9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽(17.8mg，2×10-5mol)和40μL過硫酸銨水溶液(5％wt)與1mL乙二醇單體溶液合并。將所得的溶液置于用氮凈化的手套箱內(nèi)。將N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(80μL，5％wt.)的水溶液加入單體配方中以加速聚合。將所得的配方傾入由顯微鏡載玻片和100微米不銹鋼間隔物構(gòu)成的模中。在氮氣氛下保持8小時后，將模置于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)(10mM PBS，pH＝7.4)中，分離顯微鏡載玻片，并移出水凝膠。用100mL含有1mM月桂基硫酸鈉鹽和1mM EDTA鈉鹽的PBS將水凝膠洗滌3天，溶液每天發(fā)生變化，然后用DMF/PBS(10/90體積，3×100mL)洗滌，最后用PBS(pH＝7.4，3×100mL)洗滌。將所得的水凝膠聚合物貯存在含有0.2％wt疊氮化鈉和1mM EDTA鈉鹽的PBS(10mM PBS，pH＝7.4)中。
II.用葡萄糖、乳酸鹽和乙酰乙酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定葡萄糖、乳酸鹽和乙酰乙酸鹽對此實施例中制備的指示劑化合物(它含有兩種識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。圖4顯示在10mM pH7.4的PBS中的含有此實施例的葡萄糖識別分子的水凝膠的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，427nm)，所述PBS含有0.2％NaN3和1mM EDTA，并含有不同量的L-乳酸鈉、乙酰乙酸鋰或α-D-葡萄糖。在37℃和低靈敏度下，使用溫控樣品固定器，用Shimadzu RF-5301分光熒光光度計記錄數(shù)據(jù)，其中在365nm激發(fā)(狹縫＝3nm)，在427nm發(fā)射(狹縫＝3nm)。測量前，在37℃下將含有3mL目的溶液的比色皿平衡15分鐘。每份水凝膠樣品以平行四份樣品進行測量。誤差棒為每個數(shù)據(jù)點的四個值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。如前所述制備含有葡萄糖識別分子的水凝膠。將水凝膠裝到玻璃載玻片上，并用在入射光45°處的PMMA比色皿中的聚酯篩覆蓋。在含有0.2％NaN3和1mM EDTA的10mM pH7.4的PBS中制備1、5、10和20mM L-乳酸鈉[Aldrich]，5、10和20mM乙酰乙酸鋰[Aldrich]，和1、2、4、5、10和20mMα-D-葡萄糖的溶液。共聚物的熒光受葡萄糖的存在影響，但不受乳酸鹽或乙酰乙酸鹽影響。
實施例5用雙硼酸鹽識別和相鄰鄰近猝滅終號產(chǎn)生而導(dǎo)致的葡萄糖對乳酸鹽的選擇性A.N-(2，2-二乙氧基乙基)-4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺在45℃下，將在45mL EtOH中的4-溴-1，8-萘二甲酸酐(10.0g，36.1mmol)和氨基乙醛二乙縮醛(4.81g，5.26mL，36.1mmol，1當(dāng)量)的懸浮液攪拌3天。此時，過濾所得的懸浮液，用EtOH洗滌，并干燥殘余物，得到13.3g(94％)淺褐色固體產(chǎn)物。
TLCMerck硅膠60板板，Rf0.17，用98/2 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，360nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間24.2分鐘。
B.N-(2，2-二乙氧基乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺在45℃下，將在8mL NMP中的N-(2，2-二乙氧基乙基)-4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺(0.797g，2.03mmol)和正丁胺(1.48g，2.00mL，20.2mmol，9.96當(dāng)量)的溶液加熱66小時。此時，將所得的懸浮液冷卻至25℃，然后過濾。用50mL乙醚溶解殘余物，并用3×50mL水萃取。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到粗黃色粉末。用硅膠色譜法(25g重力級凝膠，0～1％CH3OH/CH2Cl2)純化粗產(chǎn)物，得到0.639g(82％)黃色粉末。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.71，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，450nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間23.5分鐘。
C.N-(2-氧乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺在25℃下，將在25mL丙酮中的N-(2，2-二乙氧基乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺(0.622g，1.62mmol)和對甲苯磺酸一水合物(0.010g，0.053mmol，0.032當(dāng)量)的溶液攪拌18小時。此時，濃縮溶液，并用硅膠色譜法(25g重力級凝膠，0～1％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.470g(94％)橙色固體。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.61，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
1H NMR(400MHZ，CDCl3)δ1.03(t，3H，J＝7.3Hz)，1.53(m，2H)，1.78(m，2H)，3.38(t，2H，J＝7.2Hz)，5.02(s，2H)，6.64(d，1H，J＝8.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝7.4，8.3Hz)，8.08(dd，1H，J＝1Hz，8.5Hz)，8.38(d，1H，J＝8.3Hz)，8.46(dd，1H，J＝1.0，7.3Hz)，9.75(s，1H)。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，450nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間19.6分鐘。
D.N-(4-二甲基氨基芐基)-1，6-二氨基己烷在25℃和氮氣氛下，將在20mL無水EtOH中的4-二甲基氨基苯甲醛(1.00g，6.70mmol)、Na2SO4(6.70g，47.2mmol，7.04當(dāng)量)和1，6-二氨基己烷(3.89g，33.5mmol，5.00當(dāng)量)的懸浮液于暗處攪拌18小時。此時，過濾溶液，并將NaBH4(1.73g，45.8mmol，6.84當(dāng)量)加入濾液中。在25℃下將懸浮液攪拌5小時。此時，濃縮反應(yīng)混合物，將殘余物溶解在50mL水中，并用3×50mL乙醚萃取。用2×50mL水洗滌合并的有機萃取物。用2×50mL乙醚萃取合并的水萃取物。用Na2SO4干燥合并的有機萃取物，過濾并濃縮，得到1.35g(81％)粘性油。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.58，用80/15/5 CH2Cl2/CH3OH/iPrNH2，用茚三酮染色、UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，280nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間13.3分鐘。
E.N-2-[5-(N-4-二甲基氨基芐基)氨基己基]氨基乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺向在25mL無水MeOH中的N-(2-氧乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺(0.346g，1.11mmol)的懸浮液中加入在20mL無水MeOH中的N-(4-二甲基氨基芐基)-1，6-二氨基己烷(0.554g，2.22mmol，2.00當(dāng)量)和乙酸(0.067g，1.1mmol，1.0當(dāng)量)的溶液。向此混合物中加入在5mL無水MeOH中的NaCNBH3(0.070g，1.1mmol，1.0當(dāng)量)的溶液。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌15小時。此時，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去MeOH，并將殘余物溶解在30mL水中。用1N HCl將溶液調(diào)節(jié)至pH2，然后在25℃下攪拌1小時。此時，用1N NaOH將溶液調(diào)節(jié)至pH12，然后用3×50mL CH2Cl2萃取。用3×50mL水洗滌合并的有機萃取物，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到粗褐色油。用硅膠色譜法(35g閃蒸級凝膠，0～50％CH3OH/CH2Cl2，然后45/50/5CH3OH/CH2Cl2/iPrNH2)純化粗產(chǎn)物，得到0.190g(32％)二胺產(chǎn)物。
FAB MSC33H45N5O2計算值[M]+544；實測值[M]+544。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.42，用80/20 CH2Cl2/CH3OH，用茚三酮染色和UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，450nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間17.6分鐘。
F.N-2-[5-(N-4-二甲基氨基芐基)-5-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]氨基己基]-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]氨基乙基-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺向在5mL CHCl3中的N-2-[5-(N-4-二甲基氨基芐基)氨基己基]氨基乙基)-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺(0.150g，0.276mmol)和DIEA(0.355g，0.478mL，2.81mmol，10.0當(dāng)量)的溶液中加入在2mL CHCl3中的(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(0.390g，1.38mmol，5.00當(dāng)量)的溶液。然后在25℃下將溶液攪拌27小時。此時，濃縮混合物，并用氧化鋁柱色譜法(100g活化的中性氧化鋁，0～5％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.024g(19％)粘性褐色油。
FAB MS(甘油基質(zhì))C53H67B2N5O8計算值[M]+924(雙甘油加合物代替硼酸的雙新戊酯)；實測值[M]+924。
TLCMerck中性氧化鋁板，Rf0.62，用80/20 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，1.5mL注射環(huán)，450nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間20.7分鐘。
G.N-2-[5-(N-4-二甲基氨基芐基)-5-[2-(二羥硼基)芐基]氨基己基]-[2-(二羥硼基)芐基]氨基乙基-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺(nBuF-hexa-Q雙硼酸鹽)用于葡萄糖研究的游離雙硼酸產(chǎn)物是將N-2-[5-(N-4-二甲基氨基芐基)-5-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]氨基己基]-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]氨基乙基-4-丁胺基-1，8-萘二甲酰亞胺溶解在MeOH/PBS緩沖系統(tǒng)中而得到的。
H.用葡萄糖和乳酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定葡萄糖和乳酸鹽對此實施例中制備的指示劑化合物(它含有兩種識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。圖5顯示在含有a)0～20mM葡萄糖；b)0～20mM乳酸鹽的70/30 MeOH/PBS中的0.015mM的指示劑化合物溶液的歸一化熒光發(fā)射(I/I0，535nm)。用Shimadzu RF-5301分光熒光光度計記錄光譜，其中在450nm激發(fā)；激發(fā)狹縫為1.5nm；發(fā)射狹縫為1.5nm；室溫。誤差棒為每個數(shù)據(jù)點的三個平行值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。指示劑的熒光受葡萄糖存在影響，但基本上不受乳酸鹽存在影響。
實施例6葡萄糖或乳酸鹽對含有N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]-3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰胺(茜素紅S單體)和α，α′-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯(雙硼酸單體)的丙烯酰胺凝膠的作用A.3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰氯將3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酸鈉鹽(1.4g，3.9mmol)與30mL氯磺酸合并，并加熱至90℃，持續(xù)5小時，然后將溶液冷卻至0℃，并將其傾入100g冰中。在冰熔解后，用CH2Cl2(3×100mL)萃取溶液，合并二氯甲烷萃取物，用Na2SO4干燥并蒸發(fā)，產(chǎn)生0.87g固體(收率66％).
B.N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]-3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰胺將3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰氯(96mg，0.28mmol)和N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(108mg，0.6mmol)與20mL CH2Cl2合并。向此懸浮液加入Et3N(303mg，3mmol)。室溫下將混合物攪拌24小時，過濾，并蒸發(fā)溶劑。將所得固體進行SiO2(10g)柱色譜處理，用CH2Cl2/MeOH(90/10)作為洗脫劑。所得產(chǎn)物為紅色固體(80mg，64％收率)。
FAB MSC21H20N2O7S計算值M+445；實測值M+445。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.100mL注射，0.75mL/min，2mL注射環(huán)，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間17.67分鐘。
C.α，α′-雙[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯在25℃下將在75mL無水MeOH中的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(3.00g，16.8mmol，2.21當(dāng)量)、DIEA(6.5g，8.8mL，50mmol，6.6當(dāng)量)、對苯二甲醛(1.02g，7.60mmol)和Na2SO4(10.7g，75.3mmol，9.91當(dāng)量)的溶液于暗處攪拌18小時。此時，再加入Na2SO4(10.7g，75.3mmol，9.91當(dāng)量)，并再持續(xù)攪拌6小時。此時，過濾溶液，并將NaBH4(1.73g，45.7mmol，6.01當(dāng)量)分批加入濾液中，然后在25℃下攪拌21小時。用C鹽過濾懸浮液，并濃縮濾液。將殘余物溶解在100mL CH2Cl2并用1×25mL飽和NaHCO3水溶液洗滌。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到粘性油。產(chǎn)物不經(jīng)進一步處理而使用。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2.00mL/min，260nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間15.8分鐘。
D.α，α’-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯在25℃下將在75mL CH2Cl2中的α，α’-雙[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯(2.94g，7.61mmol)、DIEA(2.97g，4.00mL，23.0mmols，3.02當(dāng)量)、(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(6.50g，23.0mmol，3.02當(dāng)量)和BHT(5mg，作為抑制劑)的溶液于暗處攪拌28小時。此時，用1×25mL飽和NaHCO3水溶液洗滌混合物。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮。向殘余物中加入200mL乙醚，并將懸浮液攪拌18小時。過濾懸浮液，并將殘余物溶解在CH2Cl2中，過濾并濃縮濾液。向固體殘余物中加入150mL乙醚，并將懸浮液攪拌18小時。此時，過濾懸浮液，得到1.98g(33％)絨毛狀粉紅色粉末。
FAB MSC46H64B2N4O6計算值[M]+790；實測值[M+1]+791。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，280nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間13.4分鐘。
E.含有N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]-3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰胺(茜素紅S單體)和α，α’-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯的丙烯酰胺凝膠的制備制備含有30％wt.丙烯酰胺和0.8％wt.N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺的乙二醇溶液。將N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]-3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰胺(1.5mg，3.38×10-6mol)和α，α’-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯(28mg，3.54×10-5mol)與800μL乙二醇單體溶液和40μL 5％wt.過硫酸銨水溶液合并。將所得的配方置于用氮凈化的具有由玻璃顯微鏡載玻片和100微米不銹鋼間隔物構(gòu)成的模的手套箱。向此單體溶液中加入N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(40μL，5％wt.)的水溶液以加速聚合，并將最終配方傾入玻璃模中。將模在氮氣氛下靜置16小時，然后將其浸于PBS(pH＝7.4)中，并分離玻璃載玻片，得到薄膜形式的水凝膠聚合物。用100mL含有月桂基硫酸鈉鹽的磷酸鹽緩沖鹽水將所得水凝膠薄膜洗滌3天，溶液每天發(fā)生變化，然后用MeOH/PBS(20/80體積，3×100mL)洗滌，最后用PBS(pH＝7.4，3×100mL)洗滌。將水凝膠聚合物貯存在含有0.2％wt.疊氮化鈉和1mM EDTA鈉鹽的PBS(10mM PBS，pH＝7.4)中。
F.用葡萄糖和乳酸鹽調(diào)節(jié)吸光度測定葡萄糖和乳酸鹽對在此實施例中制備的指示劑水凝膠(它含有兩種識別成分)的吸光度的調(diào)節(jié)。以與實施例4所述相同的方式將丙烯酰胺凝膠裝入PMMA室。在水浴中將含有期望量的葡萄糖或乳酸鈉的pH＝7.4的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)加熱至37℃，并將其置于含有凝膠的PMMA室中，然后在37℃下將PMMA室平衡15分鐘。每個葡萄糖或乳酸鹽濃度的吸光度測量進行平行三次。對于每次測量，將650nm處的吸光度用作空白，從所有A(450nm)和A(530nm)的值中扣除A(650nm)。
圖6顯示含有或不含葡萄糖的含有4mM茜素紅S單體和44mM雙硼酸單體的丙烯酰胺凝膠(30％)的吸收光譜。圖7顯示葡萄糖對含有4mM茜素紅S單體和44mM雙硼酸單體的丙烯酰胺凝膠(30％)的吸光度的作用。圖8顯示乳酸鈉對含有4mM茜素紅S單體和44mM雙硼酸單體的丙烯酰胺凝膠(30％)的吸光度的作用。指示劑的吸光度受葡萄糖存在影響，但基本上不受乳酸鹽存在影響。
G.用葡萄糖和乳酸鹽調(diào)節(jié)熒光測定基本上按照此實施例6合成(除了使用1.9mgN-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙基]-3，4-二羥基-9，10-二氧-2-蒽磺酰胺和35mgα，α’-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]-1，4-二甲苯])的丙烯酰胺凝膠的熒光的調(diào)節(jié)。
在裝有可變溫度附件的Shimadzu RF-5301 PC分光熒光光度計(在470nm激發(fā)，狹縫為3/10nm，高靈敏度)中進行實驗。將丙烯酰胺凝膠附在一片玻璃載玻片上，所述載玻片以45°角粘合在PMMA熒光室內(nèi)。用2.5ml PBS(pH＝7.4)填充該室，并加熱至37℃。制備在PBS(pH＝7.4)中的葡萄糖儲備溶液(100mM和500mM)，并在水浴中將其加熱至37℃。定時將熱的葡萄糖儲備溶液的等分試樣加入PMMA室中，同時在550nm處監(jiān)測作為時間的函數(shù)的熒光強度(每2分鐘1次測量)。用YSI Model 2300 STAT和葡萄糖分析儀測定PMMA室中的葡萄糖濃度。圖9顯示的結(jié)果表明，葡萄糖的加入降低指示劑水凝膠的熒光強度。在圖10中觀察到相同的作用，它表明葡萄糖對相同類型的凝膠的熒光光譜的作用。
據(jù)信此作用發(fā)生緣于以下考慮。茜素紅S(報道分子)的甲基丙烯酰胺單體含有連位二醇官能團和單體官能團(見以下結(jié)構(gòu))。在水溶液和有機溶劑中，茜素紅S和雙硼酸鹽識別成分單體(見以下結(jié)構(gòu))能夠彼此可逆地反應(yīng)形成硼酸酯。在此可逆反應(yīng)中形成的硼酸酯分子是熒光分子，而茜素紅S單體本身在水溶液和有機溶劑如MeOH中基本上不發(fā)射熒光。因此在與葡萄糖識別成分結(jié)合時，茜素紅S改變其光學(xué)性質(zhì)，如吸光度和熒光量子產(chǎn)率。
可以具含有單體官能團的茜素紅S和具有單體官能團的葡萄糖識別成分的溶液與水凝膠單體和交聯(lián)劑一起制備。此混合物的共聚產(chǎn)生可擴散至各種小或中等尺寸的分子的水凝膠物質(zhì)；從而能夠進行分析物檢測和定量。分析物，如葡萄糖，將在水凝膠基質(zhì)中擴散，并取代先前與識別成分結(jié)合的報道分子。該事件導(dǎo)致水凝膠膜的光學(xué)性質(zhì)改變，因為現(xiàn)在它含有更多未與識別成分結(jié)合的報道分子。
還測定了葡萄糖和乳酸鹽對在此實施例中制備的指示劑化合物(它含有兩種識別成分)的熒光的調(diào)節(jié)。在裝有可變溫度附件的Shimadzu RF-5301 PC分光熒光光度計(在470nm激發(fā)，狹縫為5/10nm，低靈敏度)中進行實驗。將丙烯酰胺凝膠附在一片玻璃載玻片上，所述載玻片以45°角粘合在PMMA熒光室內(nèi)。用2.5ml PBS(pH＝7.4)填充該室，并在水浴中加熱至37℃。制備在PBS(pH＝7.4)中的乳酸鈉儲備溶液(100mM)，并在水浴中將其加熱至37℃。制備在PBS(pH＝7.4)中的葡萄糖儲備溶液(100mM和500mM)，并在水浴中將其加熱至37℃。定時地將熱乳酸鹽儲備溶液的等分試樣加入PMMA室中，同時在550nm處監(jiān)測作為時間的函數(shù)的熒光強度(每2分鐘1次測量)，直至乳酸鹽濃度達到8mM。然后，定時地將熱葡萄糖儲備溶液的等分試樣加入PMMA室中，同時在550mm處監(jiān)測作為時間的函數(shù)的熒光強度(每2分鐘1次測量)。用YSI Model 2300 STAT和葡萄糖分析儀測定PMMA室內(nèi)的葡萄糖濃度。圖11顯示的結(jié)果表明，乳酸鹽的加入對指示劑水凝膠的熒光強度沒有顯著作用，而隨后加入的葡萄糖降低指示劑水凝膠的熒光強度。
實施例7雙硼酸鹽蒽的單甲基丙烯酰胺單體 A.9-氯甲基-10-[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽鹽酸鹽向在200mL NMP中的9，10-雙(氯甲基)蒽(5.18g，18.8mmol，3.99當(dāng)量)的懸浮液中加入2-(2-氨基乙氧基)乙醇(0.495g，0.475mL，4.71mmol)。將混合物于暗處攪拌17小時。此時，在真空和50℃下將反應(yīng)混合物濃縮到～50mL。用硅膠色譜法(150g重力級硅膠，0～10％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.425g(24％)黃色/橙色固體。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.72，使用70/30 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)，茚三酮染色觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間16.1分鐘。
B.9-[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[[(3-甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]蒽向23℃的在125mL CHCl3中的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(3.08g，17.2mmol，4.2當(dāng)量)、DIEA(5.19g，7.00mL，40.1mmol，9.8當(dāng)量)和～3mg BHT的懸浮液滴加到在25mL CHCl3中的9-氯甲基-10-[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽鹽酸鹽(1.56g，4.10mmol)的溶液中。然后將混合物于暗處攪拌92小時。此時，過濾反應(yīng)混合物，并用2×40mL NaHCO3(飽和水溶液)洗滌。用無水Na2SO4干燥有機萃取物，過濾并濃縮，得到絨毛狀橙色固體，用氧化鋁色譜法(50g活化的中性氧化鋁，0～5％CH3OH/CH2Cl2)純化該固體，得到0.364g(20％)橙色固體。
TLCMerck硅膠60板，Rf0.16，用70/30 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)，茚三酮染色觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間16.85分鐘。
C.9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(單甲基丙烯酰胺單體)將23℃的在20mL CHCl3中的9-[[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[[(3-甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]蒽(0.343g，0.763mmol)、DIEA(0.965g，1.30mL，9.8當(dāng)量)和(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(1.09g，3.85mmol，5.0當(dāng)量)的溶液于暗處攪拌25小時。此時，首先通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將反應(yīng)混合物濃縮，然后用真空泵除去DIEA。用氧化鋁柱色譜法(40g活化的中性氧化鋁，0～10％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.299g(46％)黃橙色固體。此化合物可以與上述適宜的單體共聚、脫保護并用于檢測葡萄糖。
FAB MSC51H65B2N3O7計算值[M]+854；實測值[M+1]+855。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.35，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Vydac 201TP 10×250mm柱，0.100mL注射，2mL/min，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間19.7分鐘。
實施例8雙硼酸鹽蒽的雙甲基丙烯酸酯單體 A.9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽在0℃下，將在5mL CH2Cl2中的9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽(0.100g，0.120mmol；見實施例2)、甲基丙烯酸(0.112g，0.110mL，1.30mmol，10.8當(dāng)量)、DCC(0.316g，1.53mmol，12.8當(dāng)量)和N，N-二甲基氨基吡啶(0.014g，0.11mmol，0.92當(dāng)量)的溶液攪拌1小時，然后在23℃下攪拌22小時。此時，過濾反應(yīng)混合物，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。用氧化鋁柱色譜法(30g活化的中性氧化鋁，0～2％CH3OH/CH2Cl2)純化殘余物，得到0.030g(26％)黃色固體。此化合物可以與前述的適宜單體共聚、脫保護并用于檢測葡萄糖。
FAB MSC56H70B2N2O10計算值[M]+953；實測值[M]+951(弱分子離子峰)。
TLCMerck堿性氧化鋁板，Rf0.67，用95/5 CH2Cl2/CH3OH，用UV(254/366)觀察。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.100mL注射，0.75mL/min，2mL注射環(huán)，370nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間19.6分鐘。
實施例9雙5-氨基戊基雙硼酸鹽蒽 A.9，10-雙[[5-(t-BOC)-氨基戊胺基]甲基]蒽在45℃下，將9，10-雙(氯甲基)蒽(0.28g，1mmol)、DIEA(7.0mL，40mmol)、單叔丁氧羰基1，5-二氨基戊烷(3.75g，10mmol)和50mlCHCl3的懸浮液于暗處攪拌2天。用飽和H2O/NaHCO3洗滌溶液，干燥(Na2SO4)有機相，并蒸發(fā)溶劑。用氧化鋁色譜法(40g活化的中性氧化鋁，95/5％vol.CH2Cl2/MeOH)純化殘余物，得到0.55g粘性油。將此物質(zhì)不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。
B.9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[5-(t-BOC)-氨基戊胺基]甲基]蒽在25℃下，將在20mL CH2Cl2中的9，10-雙[[5-(t-BOC)-氨基戊胺基]甲基]蒽(0.3g，0.49mmol)、DIEA(0.35mL，2mmol)和(2-溴甲基苯基)硼酸新戊酯(0.566g，2.0mmol)的溶液于暗處攪拌2天。此時，真空濃縮反應(yīng)混合物，并用氧化鋁色譜法(60g活化的中性氧化鋁，98/2％vol.CH2Cl2/MeOH)純化殘余物，得到0.401g黃色油。將此物質(zhì)不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。
C.9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[5-氨基戊胺基]甲基]蒽三氟乙酸鹽將9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[5-(t-BOC)-氨基戊胺基]甲基]蒽(0.4g，0.39mmol)溶解在20ml CH2Cl2/TFA(80/20％vol.)中。將溶液攪拌12小時，并將溶劑蒸發(fā)，用10ml乙醚洗滌殘余物。得到總共373mg固體(72％收率)。產(chǎn)物的RP-HPLC純度為～80％。此化合物可以與前述的適宜單體共聚、脫保護并用于檢測葡萄糖。
HPLCHP 1100 HPLC色譜，Waters 5×100mm NovaPak HR C18柱，0.050mL注射，0.75mL/min，360nm檢測，A＝水(0.1％HFBA)和B＝MeCN(0.1％HFBA)，梯度10％B 2分鐘，18分鐘內(nèi)10～80％B，2分鐘內(nèi)80～100％B，100％B 2分鐘，保留時間16.0分鐘。
實施例10 A.N-2-(叔丁氧羰基)氨基乙基-4-溴萘-1，8-二甲酰亞胺將N-t-Boc-乙二胺(Fluka，1.6g，10mmol)和4-溴-1，8-萘二甲酸酐(Aldrich，2.77g，10mmol)與60ml無水乙醇合并，在60℃下將懸浮液攪拌20小時，冷卻至室溫，并過濾。用30ml冷EtOH洗滌所得的固體，并真空干燥。得到3.84g(91％)。NMR(CDCl3)δ1.28(9H，s)；3.52(2H，t)；4.35(2H，t)；4.92(1H，s)；7.84(1H，t)；8.04(1H，d)；8.42(1H，d)；8.58(1H，d)；8.67(1H，d)。
B.N-2-(叔丁氧羰基)氨基乙基-4-(N’-甲基氨基乙胺基)萘-1，8-二甲酰亞胺將N-甲基乙二胺(1.48g，20mmol)與2ml 1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)合并，然后加入N-2-(叔丁氧羰基)氨基乙基-4-溴萘-1，8-二甲酰亞胺(0.35g，0.845mmol)。在45℃下，將所得的溶液攪拌40小時，然后真空蒸發(fā)NMP和N-甲基乙二胺。將所得的殘余物進行柱色譜處理(20g硅膠，最初用CH2Cl2/MeOH(90/10)，然后用CH2Cl2/MeOH/Et3N(75/20/5))。得到黃色固體(0.311g，89％收率)。用RP-HPLC檢查純度。
C.N-氨基乙基-4-(N’-氨基亞乙基-N”-[2-(二羥硼基)芐基]甲基氨基)萘-1，8-二甲酰亞胺三氟乙酸鹽合并N-2-(叔丁氧羰基)氨基乙基-4-(N’-甲基氨基乙胺基)萘-1，8-二甲酰亞胺(0.3g，0.73mmol)、2-溴甲基苯基硼酸、頻那醇酯(0.6g，2mmol)、N，N-二異丙基-N-乙胺(1.3ml，8mmol)和10ml CH2Cl2。將溶液攪拌20小時，然后加入2g PS-Trisamine樹脂(ArgonautTechnologies，3.38mmol/g)。將反應(yīng)混合物和樹脂攪拌10小時，然后過濾移出樹脂，并用CH2Cl2(2×20ml)洗滌。蒸發(fā)合并的CH2Cl2溶液并真空干燥。將含有20％vol.TFA和5％vol.三異丙基甲硅烷的二氯甲烷溶液加入所得的橙色殘余物中。室溫下將所得的溶液攪拌10小時，然后蒸發(fā)溶劑，并用乙醚研磨殘余物，得到黃色固體。過濾固體，并真空干燥(得到580mg)。通過RP-HPLC檢查該物質(zhì)的純度。將固體不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。
D.N-(3-二羥硼基-5-硝基苯甲酰胺基)乙基-4-(N’-氨基亞乙基-N”-[2-(二羥硼基)芐基]甲基氨基)萘-1，8-二甲酰亞胺合并N-氨基乙基-4-(N’-氨基亞乙基-N”-[2-(二羥硼基)芐基]甲基氨基)萘-1，8-二甲酰亞胺三氟乙酸鹽(0.225g，0.4mmol)、3-羧基-5-硝基苯基硼酸(0.085g，0.4mmol)、二苯基磷?；B氮化物(0.13ml，0.6mmol)和2ml無水DMF。加入N，N-二異丙基-N-乙胺(0.7ml，4mmol)并將溶液攪拌20小時。將乙醚(10ml)加入反應(yīng)混合物中，分離不溶殘余物，并用5ml CH2Cl2超聲處理，得到橙色固體，將其過濾并在真空下干燥(38mg，15％收率)。通過RP-HPLC檢測固體的純度。NMR(DMSO-d6/D2O，90/10)δ2.32(3H，s)；2.82(2H，t)；3.58(2H，t)；3.65(2H，t)，3.70(2H，s)；6.65(1H，d)；7.0-7.3(4H，m)；7.68(1H，t)；8.18(1H，d)；8.42(1H，d)；8.47(1H，d)；8.1-8.35(3H，m)。
E.通過熒光監(jiān)測N-(3-二羥硼基-5-硝基苯甲酰胺基)乙基-4-(N’-氨基亞乙基-N”-[2-(二羥硼基)芐基]甲基氨基)萘-1，8-二甲酰亞胺與葡萄糖相互作用的試驗此實驗在MeOH/磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，10mM，pH＝7.4)中進行。N-(3-二羥硼基-5-硝基苯甲酰胺基)乙基-4-(N’-氨基亞乙基-N”-[2-(二羥硼基)芐基]甲基氨基)萘-1，8-二甲酰亞胺在MeOH/PBS(50/50vol.％)中的濃度為15mM。葡萄糖濃度的范圍為0mM～50mM，而L-乳酸鈉的濃度范圍為0mM～7mM。此實驗在Shimadzu RF-5301 PC分光熒光光度計中進行激發(fā)波長設(shè)定在430nm，在480～650nm范圍內(nèi)監(jiān)測發(fā)射，狹縫寬度3/1.5nm，PMT的高靈敏度。
結(jié)果如圖12和13所示，它們表明此實施例中的指示劑的熒光受葡萄糖存在影響，但不受乳酸鹽存在影響。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測可能還含有α-羥酸或β-二酮的樣品中葡萄糖的存在或濃度的方法，所述方法包括a)使樣品與具有至少兩個葡萄糖的識別成分的化合物接觸，該識別成分的取向使該化合物與葡萄糖之間的相互作用比該化合物與α-羥酸或β-二酮之間的相互作用更為穩(wěn)定，所述化合物還含有具有可檢測性質(zhì)的可檢測部分，該性質(zhì)在所述化合物與所述樣品中的葡萄糖接觸時以濃度依賴性方式變化；和b)測量所述可檢測性質(zhì)的任何變化，以測定所述樣品中葡萄糖的存在或濃度，其中α-羥酸或β-二酮的存在基本上不干擾所述測定。
2.權(quán)利要求1的方法，其中該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 其中-R1和R2相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R3為氫或能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R4和R5相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個Z獨立地為碳或氮；-R6和R7相同或不同，并且為i)具有0～10個相鄰或分枝的碳和/或雜原子的連接基團，或ii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R選自以下i)含有1～10個相鄰的選自碳、氧、氮、硫和磷的原子的脂肪和/或芳香間隔基，ii)可檢測部分，或iii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個R8相同或不同，且是能夠與葡萄糖中存在的連位二醇基團相互作用的部分；和-R9和R10相同或不同，并且是i)氫，ii)可檢測部分，iii)以下基團a)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分，和/或b)包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)的官能團的基團；附帶條件是該指示劑化合物含有至少一個與其締合的可檢測部分。
3.權(quán)利要求2的方法，其中R8選自硼酸、硼酸根離子、亞砷酸、亞砷酸根離子、碲酸、碲酸根離子、鍺酸、鍺酸根離子及它們的組合。
4.權(quán)利要求3的方法，其中每個R8為硼酸基團。
5.權(quán)利要求2的方法，其中該化合物包含至少兩個能夠從一個向另一個進行能量轉(zhuǎn)移的可檢測部分，且其中所述能量轉(zhuǎn)移受樣品中葡萄糖的存在的調(diào)節(jié)。
6.權(quán)利要求2的方法，其中R、R1、R2、R4、R5、R9或R10中至少一個基團包含熒光團部分，且其中這些基團中至少一個包含猝滅部分，而且其中當(dāng)所述化合物與樣品中的葡萄糖相互作用時所述熒光團猝滅或去猝滅。
7.權(quán)利要求2的方法，其中該化合物包含熒光團，且所述熒光團的熒光受所述化合物與葡萄糖的相互作用的調(diào)節(jié)。
8.權(quán)利要求1的方法，其中該樣品為生理液體。
9.權(quán)利要求8的方法，其中該生理液體選自血液、血漿、血清、間隙液、腦脊髓液、尿、唾液、眼內(nèi)液、淋巴液、淚液、汗液和生理緩沖液。
10.權(quán)利要求1的方法，其中該化合物與溶液中的樣品接觸。
11.權(quán)利要求1的方法，其中該化合物固定在固體載體上或固體載體內(nèi)。
12.權(quán)利要求11的方法，其中該固體載體為聚合物基質(zhì)。
13.權(quán)利要求1的方法，其中該化合物與可植入器件締合，且其中步驟a)在體內(nèi)發(fā)生。
14.權(quán)利要求2的方法，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為硼酸基團；R9和R10為脂族羧酸殘基；且每個Z為碳。
15.權(quán)利要求14的方法，其中R9和R10為丙酸殘基。
16.權(quán)利要求2的方法，其中R為六亞甲基殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為硼酸基團；R9為萘二甲酰亞胺殘基；R10為二甲氨基芐基殘基；且每個Z為碳。
17.權(quán)利要求2的方法，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為硼酸基團；R9和R10相同或不同，并選自甲基丙烯酰氨基烷基殘基、甲基丙烯酰氧乙氧基烷基殘基、羥基乙氧基烷基殘基和氨基烷基殘基；且每個Z為碳。
18.權(quán)利要求2的方法，其中該化合物選自9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(丙?；?氨基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽；9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；和9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[5-氨基戊胺基]甲基]蒽；和它們的鹽。
19.一種具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中-R1和R2相同或不同，并選自以下i)氫；ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R3為氫或能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R4和R5相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個Z獨立地為碳或氮；-R6和R7相同或不同，并且為i)具有0～10個相鄰或分枝的碳和/或雜原子的連接基團，或ii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R選自以下i)含有1～10個相鄰的選自碳、氧、氮、硫和磷的原子的脂肪和/或芳香間隔基，ii)可檢測部分，或iii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個R8相同或不同，且是在脫保護時能夠與葡萄糖中存在的連位二醇基團相互作用的任選地被保護的部分；和-R9和R10相同或不同，并且是i)氫，ii)可檢測部分，iii)以下基團a)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分，和/或b)包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)的官能團的基團；附帶條件是該指示劑化合物含有至少一個與其締合的可檢測部分。
20.權(quán)利要求19的化合物，其中R8選自硼酸、硼酸根離子、亞砷酸、亞砷酸根離子、碲酸、碲酸根離子、鍺酸、鍺酸根離子及它們的組合，所有基團任選地被保護。
21.權(quán)利要求20的化合物，其中每個R8為任選地被保護的硼酸基團。
22.權(quán)利要求19的化合物，其中該化合物包含熒光團，且所述熒光團的熒光受所述化合物與葡萄糖的相互作用的調(diào)節(jié)。
23.權(quán)利要求19的化合物，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為任選地被保護的硼酸基團；R9和R10為脂族羧酸殘基；且每個Z為碳。
24.權(quán)利要求23的化合物，其中R9和R10為丙酸殘基。
25.權(quán)利要求1的化合物，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為任選地被保護的硼酸基團；R9和R10相同或不同，并選自甲基丙烯酰胺基烷基殘基、甲基丙烯酰氧乙氧基烷基殘基、羥基乙氧基烷基殘基和氨基烷基殘基；且每個Z為碳。
26.權(quán)利要求19的化合物，其中該化合物選自9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(丙?；?氨基]甲基]蒽；9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽；9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；和9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[5-氨基戊胺基]甲基]蒽；和它們的鹽。
27.一種用于檢測可能還含有α-羥酸或β-二酮的樣品中葡萄糖的存在或濃度的檢測系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中-R1和R2相同或不同，并選自以下i)氫；ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R3為氫或能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R4和R5相同或不同，并選自以下i)氫，ii)改變R8部分的pKa和水解穩(wěn)定性的取代基，iii)可檢測部分，或iv)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個Z獨立地為碳或氮；-R6和R7相同或不同，并且為i)具有0～10個相鄰或分枝的碳和/或雜原子的連接基團，或ii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-R選自以下i)含有1～10個相鄰的選自碳、氧、氮、硫和磷的原子的脂肪和/或芳香間隔基，ii)可檢測部分，或iii)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分；-每個R8相同或不同，且是在脫保護時能夠與葡萄糖中存在的連位二醇基團相互作用的任選地被保護的部分；和-R9和R10相同或不同，并且是i)氫，ii)可檢測部分，iii)以下基團a)能夠與固體載體或聚合物基質(zhì)結(jié)合的連接基團，所述載體或基質(zhì)任選地含有可檢測部分，和/或b)包括能夠改變該化合物的物理性質(zhì)的官能團的基團；附帶條件是該指示劑化合物含有至少一個與其締合的可檢測部分。
28.權(quán)利要求27的檢測系統(tǒng)，其中R8選自硼酸、硼酸根離子、亞砷酸、亞砷酸根離子、碲酸、碲酸根離子、鍺酸、鍺酸根離子及它們的組合，所有基團任選地被保護。
29.權(quán)利要求28的檢測系統(tǒng)，其中每個R8為任選地被保護的硼酸基團。
30.權(quán)利要求27的檢測系統(tǒng)，其中該化合物包含熒光團，且所述熒光團的熒光受所述化合物與葡萄糖的相互作用的調(diào)節(jié)。
31.權(quán)利要求27的檢測系統(tǒng)，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為任選地被保護的硼酸基團；R9和R10為脂族羧酸殘基；且每個Z為碳。
32.權(quán)利要求31的檢測系統(tǒng)，其中R9和R10為丙酸殘基。
33.權(quán)利要求27的檢測系統(tǒng)，其中R為蒽殘基；R1、R2、R3、R4和R5為氫；R6和R7為二甲胺殘基；每個R8為硼酸基團；R9和R10相同或不同，并選自甲基丙烯酰胺基烷基殘基、甲基丙烯酰氧乙氧基烷基殘基、羥基乙氧基烷基殘基和氨基烷基殘基；且每個Z為碳。
34.權(quán)利要求27的檢測系統(tǒng)，其中該化合物選自9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(丙酰基)氨基]甲基]蒽；9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基蒽；9-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[3-(甲基丙烯酰胺基)丙胺基]甲基]-10-[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-羥基乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-[2-(5，5-二甲基硼烷-2-基)芐基]-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[2-(2-甲基丙烯酰氧乙氧基)乙胺基]甲基]蒽；和9，10-雙[N-(2-二羥硼基芐基)-N-[5-氨基戊胺基]甲基]蒽；和它們的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于測定可能還含有α－羥酸或β－二酮的樣品中葡萄糖的存在或濃度的組合物和方法。該方法使用具有至少兩個葡萄糖的識別成分的化合物，該識別成分的取向使該化合物與葡萄糖之間的相互作用比該化合物與α－羥酸或β－二酮之間的相互作用更為穩(wěn)定，從而使α－羥酸或β－二酮的存在基本上不干擾所述的測定。
文檔編號G01N33/533GK1513117SQ02806012
公開日2004年7月14日 申請日期2002年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月5日
發(fā)明者喬治·Y·丹尼洛夫, 亞里士多德·G·卡利佛蘭特諾斯, 亞歷山大·V·尼古拉奇克, 喬治 Y 丹尼洛夫, 多德 G 卡利佛蘭特諾斯, 大 V 尼古拉奇克 申請人:醫(yī)藥及科學(xué)傳感器公司