專利名稱：四季三黃膠囊活性成分含量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物活性成分檢測(cè)方法，具體涉及中藥復(fù)方制劑四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
四季三黃膠囊處方由大黃、黃柏、黃芩、桅子組成，具有消炎退熱，通便利水功能。主治口鼻生瘡，咽痛齒痛，口干舌燥，目眩頭暈，大便秘結(jié)，小便赤黃等。該處方為較經(jīng)典的消炎退熱中藥復(fù)方，原一直以丸劑形式服用。該丸劑為生藥原粉水泛丸而制成，由于其服用量較大，加之水泛丸易長(zhǎng)菌生霉，且不便于部分患者尤其是小兒服用，生物利用度也低，因此，近年來(lái)通過采用現(xiàn)代藥學(xué)技術(shù)理論，運(yùn)用新的提取制備工藝，將丸劑改成膠囊劑，克服了老劑型的不足，便于有效成分的吸收，增強(qiáng)藥物的療效，為患者提供一個(gè)質(zhì)優(yōu)效佳、攜帶服用方便的新型中藥制劑。
但對(duì)四季三黃膠囊的有效成分含量檢測(cè)一直采用半定量的方式，如活性成分大黃素含量的檢測(cè)是以大黃素為對(duì)照品，采用薄層色譜法，在紫外光365nm下測(cè)得，黃柏含量以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，同樣采用薄層色譜法測(cè)得；黃芩含量以黃芩苷為對(duì)照品，用紫外分光光度法測(cè)得。這些方法操作繁瑣，準(zhǔn)確度差，精確度低，重現(xiàn)性受干擾因素較多，不能迅速及時(shí)地獲得分析數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是采用現(xiàn)代分析儀器和手段，快速準(zhǔn)確地定量測(cè)定四季三黃膠囊的活性成分含量。
本發(fā)明采用高效液相色譜法，分別定量測(cè)定四季三黃膠囊中各活性成分大黃中的大黃素和大黃酚、黃柏中的鹽酸小檗堿、黃芩中的黃芩甙，具體測(cè)定方法包括(1)大黃素和大黃酚測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.1％磷酸镕液(85∶15)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫25℃。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品各10mg，分別置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取大黃素溶液1ml、大黃酚溶液2ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，大黃素每1ml含4μg、大黃酚每1ml含8μg；c、供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約0.1g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次約8ml，合并氯仿液，以無(wú)水硫酸鈉脫水，揮去氯仿，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每粒含大黃以大黃素(C15H10O5)和大黃酚(C15H10O4)的總量計(jì)，不得少于2.0mg。
(2)鹽酸小檗堿測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液0.025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液(50∶25∶25)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫25℃，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.040mg的溶液，即得；c、供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入鹽酸-甲醇(1∶100)約15ml，超聲處理10分鐘(功率不少于150W，頻率不少于12KHz)，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每粒含黃柏以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，不得少于0.8mg。
(3)黃芩苷的測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.060mg的溶液，即得；c、供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每粒含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，不得少于10.0mg。
本發(fā)明所述四季三黃膠囊處方組成為大黃452.8g，黃柏452.8g，黃芩452.8g，桅子141.5g。
其制劑制備包括黃芩、桅子加水煎煮，濾過，濾液濃縮至浸膏，噴霧干燥，得噴霧粉備用。大黃用乙醇回流提取，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至浸膏，噴霧干燥，得噴霧粉備用。大黃藥渣回收，干燥，粉碎成細(xì)粉備用。黃柏用乙醇回流提取，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至浸膏備用。將兩種噴霧粉合并，加入適量大黃藥渣細(xì)粉，用黃柏浸膏制粒，粉碎，干燥，混合，填充膠囊，即得。
下面對(duì)本發(fā)明分析方法的建立作進(jìn)一步描述1.大黃素和大黃酚總量的含量測(cè)定(1)儀器與試藥高效液相色譜儀Elite Hypersil C18柱，5μm，4.6×250mm；G1314A(VWD檢測(cè)器)；Agilent化學(xué)1100工作站；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。
色譜條件流動(dòng)相甲醇-0.1％磷酸溶液(85∶15)；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫25℃。此條件下大黃素和大黃酚與其它組分達(dá)到較好分離。波長(zhǎng)選擇參照《中國(guó)藥典》2000年版“大黃”項(xiàng)下，選擇254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
(2)線性關(guān)系的考察精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成8.08μg/ml的溶液，精密吸取上述溶液2ml，5ml，10ml，15ml，20ml于20ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，大黃素對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算的回歸方程為Y＝4445.25X-1.7317 r＝0.9999具體數(shù)據(jù)見表1
表1 大黃素對(duì)照品線性考察結(jié)果

表明大黃素在0.00808-0.0808μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。
精密稱取大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成16.16μg/ml的溶液，精密吸取上述溶液2ml，5ml，10ml，15ml，20ml于20ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，大黃酚對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算的回歸方程為Y＝6491.91X-5.8879r＝1.0000具體數(shù)據(jù)見表2表2 大黃酚對(duì)照品線性考察結(jié)果

表明大黃酚在0.01616-0.1616μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。
(3)精密度試驗(yàn)精密吸取大黃素對(duì)照品溶液(0.00404mg/ml)10μl重復(fù)進(jìn)樣5次，大黃素峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果列于表3。
表3 大黃素對(duì)照品精密度試驗(yàn)結(jié)果

精密吸取大黃酚對(duì)照品溶液(0.00808mg/ml)10μl重復(fù)進(jìn)樣5次，大黃酚峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果列于表4。
表4 大黃酚對(duì)照品精密度試驗(yàn)結(jié)果

(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取大黃素對(duì)照品溶液(0.00404mg/ml)10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得大黃素的峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表5。
表5 大黃素對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

取大黃酚對(duì)照品溶液(0.00808mg/ml)10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得大黃酚的峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表6。
表6 大黃酚對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)照正文測(cè)定方法制備供試品溶液，精密吸取該溶液10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得大黃素和大黃酚的峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表7-8。
表7 樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(大黃素峰)

表8 樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(大黃酚峰)

(5)回收率試驗(yàn)大黃素回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的四季三黃膠囊(批號(hào)20000903，含量為3.132mg/g)樣品，分別稱取樣品約0.04g(5份)，精密加入大黃素對(duì)照品溶液(0.10mg/ml)1ml按上述方法測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果列于表9，結(jié)果表明本法有良好的回收率。

表9 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

大黃酚回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的四季三黃膠囊(批號(hào)20000903，含量為5.724mg/g)樣品，分別稱取樣品約0.05g(5份)，精密加入大黃酚對(duì)照品溶液(0.101mg/ml)3ml按上述方法測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果列于表10，結(jié)果表明本法有良好的回收率。

表10 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(6)重復(fù)性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)，按上述樣品測(cè)定法進(jìn)行含量測(cè)定，平行樣5份，樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表11。
表11 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

(7)樣品測(cè)定按正文所述的方法，進(jìn)行樣品測(cè)定，以下式計(jì)算樣品中大黃素和大黃酚的含量，十批樣品測(cè)定結(jié)果列于表12，由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定本品含大黃素和大黃酚的總量不得低于2.0mg/粒。

As供試品溶液的峰面積； Ar對(duì)照品溶液的峰面積；Cs對(duì)照品濃度(mg/ml)；Vs供試品取樣量(g)； V定容體積(ml)表12 樣品測(cè)定結(jié)果

2.鹽酸小檗堿的含量測(cè)定(1)儀器與試藥高效液相色譜儀Elite Hypersil C18柱，5μm，4.6×250mm；G1314A(VWD檢測(cè)器)；Agilent化學(xué)1100工作站；甲醇、乙腈均為色譜純，水為重蒸餾水。
色譜條件流動(dòng)相乙腈0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液0.025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液(50∶25∶25)；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫25℃。此條件下鹽酸小檗堿與其它組分達(dá)到較好分離。波長(zhǎng)選擇時(shí)，以鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描(200-500nm)，其最大吸收峰為345nm，故選擇345nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
(2)線性關(guān)系的考察精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇制成0.082mg/ml的溶液，精密吸取上述溶液4ml，5ml，10ml，15ml，20ml于20ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算的回歸方程為Y＝4541.8X+42.391r＝0.9999具體數(shù)據(jù)見表13表13 線性考察結(jié)果

表明鹽酸小檗堿在0.164-0.820μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。
(3)精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液(0.0424mg/ml)10μl重復(fù)進(jìn)樣5次，鹽酸小檗堿峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果列于表14。
表14 精密度試驗(yàn)結(jié)果

(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液(0.0424mg/ml)10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得鹽酸小檗堿的峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表15。
表15 對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)照正文測(cè)定方法制備供試品溶液，精密吸取該溶液10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得鹽酸小檗堿峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表16。
表16 樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果


(5)回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的四季三黃膠囊(批號(hào)20000903，含量為3.40mg/g)樣品，精密稱取約0.1g，再精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.082mg/ml)3ml(平行樣5份)，按上述方法測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果列于表17，結(jié)果表明本法有良好的回收率。

表17 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(6)重復(fù)性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)，按上述樣品測(cè)定法進(jìn)行含量測(cè)定，平行樣5份，樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表18。
表18 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

(7)樣品測(cè)定按正文所述方法，進(jìn)行樣品測(cè)定，以下式計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，十批樣品測(cè)定結(jié)果列于表19，由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定本品含鹽酸小檗堿不得少于0.8mg/粒。

As供試品溶液的峰面積； Ar對(duì)照品溶液的峰面積；Cs對(duì)照品濃度(mg/ml)；Ms供試品取樣量(g)； V定容體積(ml)表19 樣品測(cè)定結(jié)果

3.黃芩苷的含量測(cè)定(1)儀器與試藥高效液相色譜儀Elite Hypersil C18柱，5μm，4.6×250mm；G1314A(VWD檢測(cè)器)；Agilent化學(xué)1100工作站；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。
色譜條件流動(dòng)相甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；柱溫25℃。此條件下黃芩苷與其它組分達(dá)到較好分離。波長(zhǎng)選擇時(shí)，以黃芩苷對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描(200-500nm)，其最大吸收峰為280nm，故選擇280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
(2)線性關(guān)系的考察精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇制成0.119mg/ml的溶液，精密吸取上述溶液2，5，10，15，20于20ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算的回歸方程為Y＝3287.2X-48.238r＝1.000具體數(shù)據(jù)見表20表20 線性考察結(jié)果

表明黃芩苷在0.119-1.19μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。
(3)精密度試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液(0.0604mg/ml)10μl重復(fù)進(jìn)樣5次，黃芩苷峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果列于表21。
表21 精密度試驗(yàn)結(jié)果

(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液(0.0604mg/ml)10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得黃芩苷的峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表22。
表22 對(duì)照品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果


樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)照正文測(cè)定方法制備供試品溶液，精密吸取該溶液10μl，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)得黃芩苷峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表23。
表23 樣品的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

(5)回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的四季三黃膠囊(批號(hào)20000903，含量為28.9mg/g)樣品，精密稱取約0.8g，再精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液(0.792mg/ml)5ml(平行樣5份)，按上述方法測(cè)定，以下式計(jì)算回收率，結(jié)果列于表24，結(jié)果表明本法有良好的回收率。

表24 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(6)重復(fù)性試驗(yàn)取四季三黃膠囊(批號(hào)20000903)，按上述樣品測(cè)定法進(jìn)行含量測(cè)定，平行樣5份，樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2％，結(jié)果見表25。
表25 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

(7)樣品測(cè)定按正文所述方法，進(jìn)行樣品測(cè)定，以下式計(jì)算樣品中黃芩苷的含量，十批樣品測(cè)定結(jié)果列于表26，由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定本品含黃芩苷不得少于10mg/粒。

As供試品溶液的峰面積； Ar對(duì)照品溶液的峰面積；Cs對(duì)照品濃度(mg/ml)；Vs供試品取樣量(g)； V定容體積(ml)表26 樣品測(cè)定結(jié)果


上述試驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明建立高效液相色譜法測(cè)定大黃素和大黃酚、鹽酸小檗堿、黃芩苷的方法，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性好，精確度高，為工業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量監(jiān)控提供了一種科學(xué)、迅速的檢測(cè)方法。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1大黃素和大黃酚測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.1％磷酸镕液(85∶15)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫25℃。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品各10mg，分別置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取大黃素溶液1ml、大黃酚溶液2ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，大黃素每1ml含4μg、大黃酚每1ml含8μg；c、供試品溶液的制備取四季三黃膠囊內(nèi)容物約0.1g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次約8ml，合并氯仿液，以無(wú)水硫酸鈉脫水，揮去氯仿，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見圖1。圖中A1峰和A2峰分別為大黃素和大黃酚所對(duì)應(yīng)的峰。
實(shí)施例2鹽酸小檗堿測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液0.025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液(50∶25∶25)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫25℃，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.040mg的溶液，即得；C、供試品溶液的制備取四季三黃膠囊內(nèi)容物約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入鹽酸-甲醇(1∶100)約15ml，超聲處理10分鐘(功率不少于150W，頻率不少于12KHz)，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，見圖2，其中B峰即為鹽酸小檗堿所對(duì)應(yīng)的峰。
實(shí)施例3黃芩苷的測(cè)定a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.060mg的溶液，即得；c、供試品溶液的制備取四季三黃膠囊內(nèi)容物約1g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，見圖3，其中C峰即為黃芩苷所對(duì)應(yīng)的峰。


圖1大黃素、大黃酚色譜2鹽酸小檗堿色譜3黃芩苷色譜圖
權(quán)利要求
1.一種中藥復(fù)方制劑四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法，其特征在于所述活性成分采用高效液相色譜法，分別定量測(cè)定各活性成分大黃中的大黃素和大黃酚、黃柏中的鹽酸小檗堿、黃芩中的黃芩苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法，其特征在于其中活性成分大黃素和大黃酚的測(cè)定包括a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.1％磷酸镕液(85∶15)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品各10mg，分別置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取大黃素溶液1ml、大黃酚溶液2ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，大黃素每1ml含4μg、大黃酚每1ml含8μg；c、供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約0.1g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次約8ml，合并氯仿液，以無(wú)水硫酸鈉脫水，揮去氯仿，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法，其特征在于其中活性成分黃柏中鹽酸小檗堿測(cè)定方法包括a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液0.025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液(50∶25∶25)為流動(dòng)相；流速0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫25℃，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.040mg的溶液，即得；c、供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入鹽酸-甲醇(1∶100)約15ml，超聲處理10分鐘(功率不少于150W，頻率不少于12KHz)，放冷至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法，其特征在于其中活性成分黃芩中的黃芩苷的測(cè)定包括a、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500；b、對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.060mg的溶液，即得；c、供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，加70％乙醇40ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；d、測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液10μl，對(duì)照品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑四季三黃膠囊活性成分含量的檢測(cè)方法。本發(fā)明采用高效液相色譜法，分別定量測(cè)定四季三黃膠囊中各活性成分大黃中的大黃素和大黃酚、黃柏中的鹽酸小檗堿、黃芩中的黃芩苷。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，提供了一種有效地監(jiān)控四季三黃膠囊質(zhì)量的手段。
文檔編號(hào)G01N30/74GK1540337SQ03116638
公開日2004年10月27日 申請(qǐng)日期2003年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月25日
發(fā)明者董大倫 申請(qǐng)人:貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司