專利名稱：一種治療冠心病的藥物組合物及其制備方法、用途和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療冠心病的藥物組合物及其制備方法、用途和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
冠心病是一種常見的心血管疾病。早在60年代，其發(fā)病率在西方一些國(guó)家就不斷上升，并成為人類死亡之首。例如，只有兩億人口的美國(guó)，每年死于冠心病的約有70萬人，占死亡人數(shù)的1/3，被稱為“第一殺手”。在我國(guó)，隨著人民生活水平的不斷提高，人口日益老齡化和預(yù)防保健工作的相對(duì)滯后，冠心病的患病率、發(fā)病率和死亡率都出現(xiàn)了持續(xù)性上升。據(jù)1973年的全國(guó)普查資料表明，冠心病平均發(fā)病率僅6.46％，到1975年對(duì)北京、上海、廣州、四川等七個(gè)地區(qū)的人群普查顯示，30-69歲齡組的冠心病發(fā)病率為1.65-6.11％，而60歲以上人群的發(fā)病率上升到8.65-24.3％。近年來，發(fā)病率明顯上升，說明防治任務(wù)十分沉重，應(yīng)該引起人們的關(guān)注。
隨著近代科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，人們對(duì)冠心病的診斷和防治也取得了一些進(jìn)展，如在檢查方面，由原來的常規(guī)心電圖、負(fù)荷心電圖檢查，更新到動(dòng)態(tài)心電圖檢查、超聲心動(dòng)檢查術(shù)、心電圖的計(jì)算機(jī)化、核素心肌掃描、冠脈造影，電子束CT機(jī)的應(yīng)用。生化檢查和心功能測(cè)定方法在不斷改進(jìn)，為早期診斷提供了良好手段。在防治方面包括CCV的建立、冠脈搭橋、再通術(shù)的建立等；藥物治療方面，在擴(kuò)張冠脈的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)了鈣離子拮抗劑、一受體阻滯劑、溶栓藥物的應(yīng)用，為治療冠心病提供了多種手段。然而臨床實(shí)踐證實(shí)，單純的西藥治療往往還不盡人意，尤其是藥物的副反應(yīng)，使患者難以接受和長(zhǎng)期服用。當(dāng)代人類“回歸自然”的愿望及呼聲日益強(qiáng)烈，普扁希望天然無公害植物藥治療，從而給中醫(yī)藥防治冠心病提供了了的契機(jī)。開發(fā)一種高效、低毒、質(zhì)量穩(wěn)定的治療冠心病的純中藥產(chǎn)品是我們的目的之所在。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)藥物的活性成分為紅景天甙(C14H20O7)，在單位劑量的藥物中的含量不得少于0.8mg/單位劑量。通常由紅景天或紅景天的水或醇提取物制成。本產(chǎn)品具有活血化瘀，通脈止痛的功效。主治心血瘀阻引起的胸痹心痛(冠心病心絞痛)，胸悶憋氣、心悸氣短、心悸氣短、困倦乏力、脈細(xì)澀等癥。
本申請(qǐng)的藥物可以采用制劑學(xué)的常規(guī)方法制成常規(guī)劑型，如散劑、片劑、沖劑、口服液、注射液等，優(yōu)選劑型為膠囊。以下是本發(fā)明產(chǎn)品的3種非限定性的制備方法，除此之外的方法也在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍內(nèi)。
制法1.取紅景天藥材(景天科植物大株紅景天RhodiolaKirilowii(Regel)Maxim.的干燥根及根莖)1100份，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，濃縮成浸膏，得膏量約190～200g，相對(duì)密度1.2～1.25(60℃測(cè)定)，取浸膏1份加淀粉1.25～1.35份混勻，80℃以下干燥，粉碎，以適當(dāng)濃度乙醇制顆粒，烘干，整粒，裝膠囊，得膠囊1000粒，每粒重0.38g，相當(dāng)于生藥1.1g?；蛑瞥善瑒?、顆粒劑；或?qū)⑸鲜鼋喔稍锖蠹尤?～3份的食用植物油等混懸劑制成軟膠囊。此單位劑量中的紅景天甙含量不少于0.8mg。
制法2.取紅景天藥材，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，減壓濃縮成50℃相對(duì)密度1.05-1.07，加95％乙醇溶液使含醇量達(dá)50-70％，冷藏放置20-26小時(shí)，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.05-1.06，冷卻，加水稀釋至每一體積份藥液相當(dāng)于原藥材0.44重量份，過濾，加入0.1～0.15％的吐溫-80，混勻，制成口服液，分裝于10ml口服液瓶中，每瓶紅景天甙含量不少于1.5mg。
制法3.取紅景天藥材40-60重量份，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，減壓濃縮成50℃相對(duì)密度1.05-1.07，加95％乙醇溶液使含醇量達(dá)50-70％，冷藏放置20-26小時(shí)，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.05-1.06，加60～80℃注射用水1000體積份攪拌，使溶解，加入氯化鈉3～8重量份，以40％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6.0～6.5，冷卻，過濾，再用10000D分子量超濾膜、5000D以下分子量超濾膜分級(jí)超濾，加入針用活性炭2～4重量份攪拌吸附10～30分鐘，過濾除炭，濾液加注射用水至1000體積份，用無菌濾板下襯0.22m微孔濾膜過濾，藥液分裝，滅菌，即得。
本產(chǎn)品也可以由紅景天用30-70％的乙醇提取制得。
性狀 本品為膠囊劑，內(nèi)容物赫紅色粉末，味苦。
鑒別 取藥物適量，以70-100％濃度的乙醇熱提取，或取液體劑型的藥物適量，蒸干后以70-100％濃度的乙醇熱提取所余殘余物，過濾，濾液濃縮至干，殘留物加乙醇適量使溶解，作為供試品溶液；另取紅景天甙對(duì)照品加乙醇制成溶液，作為對(duì)照品溶液，吸取上述二種溶液各適量，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶1∶0.8)為展開劑，展開，取出晾干，噴以1％FeCl3-1％鐵氰化鉀(1∶1)溶液，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的蘭色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定 照高效液相色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典2000年版一部》附錄39頁(yè))測(cè)定(外標(biāo)二點(diǎn)法)。
系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，甲醇-水-冰醋酸(7∶93∶1)為流動(dòng)相，流速0.9ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，柱溫40℃，理論塔板數(shù)按紅景天甙峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取紅景天甙對(duì)照品約10mg，置25ml溶量瓶中，。加水溶解，并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備與測(cè)定精密稱取藥物適量，或取相應(yīng)量的藥液蒸干，置燒瓶中，加90-100％濃度的乙醇適量，熱提取，過濾，濾渣以乙醇洗滌三次，合并濾液并濃縮至盡干，殘留物加水使溶解，加于聚酰胺柱，用水進(jìn)行洗脫，準(zhǔn)確收集洗脫液一定體積，作為供試品溶液，吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各適量，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得。
本品內(nèi)容物含紅景天甙(C14H20O7)，不得少于0.8mg/粒。
用法用量 口服。一次4粒，一日3次。
藥效研究表明由紅景天制成的膠囊，大劑量組在給犬灌胃給藥后，則使心肌缺血過程中心肌收縮性增強(qiáng)，并能改善心臟的血流動(dòng)力學(xué)狀況；以心外膜心電圖(正ST和NST)為指標(biāo)的觀察表明，膠囊大、小劑量組于給藥后均可減輕心肌缺血損傷程度，縮小損傷范圍；以心臟血?dú)夂脱醮x及冠脈流量為指標(biāo)觀察到，心肌缺血過程中心肌氧提取率有所增加，冠脈竇血PH值及冠脈流量明顯下降，而膠囊大劑量組則可抑制冠脈流量的下降，降低心肌缺血時(shí)的心臟氧提取率，并使心臟冠狀靜脈竇血PH值升高，從而減輕心肌細(xì)胞的酸中毒。我們于1996年7月至1997年6月對(duì)紅景天膠囊治療胸痹心痛(冠心病心絞痛)的臨床效果進(jìn)行了二期臨床研究，臨床試驗(yàn)結(jié)果為隨機(jī)治療組胸痹心痛顯效率為46.00％，總有效率90.00％；開放治療組胸痹心痛顯效率為44.78％，總有效率為86.07％；總治療組(治療組1+治療組2)胸痹心痛顯效率為45.18％，總有效率為87.37％；心電圖顯效率為26.25％，總有效率為60.13％。對(duì)照組胸痹心痛顯效率為27.00％，總有效率為72.00％，心電圖顯效率為11.00％，總有效為40.00％。兩組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，p＜0.05，治療組療效優(yōu)于對(duì)照組。
紅景天膠囊的藥效研究資料本研究用健康雜種犬25只，隨機(jī)分為正常組、模型組、復(fù)方丹參片對(duì)照組、膠囊小劑量組和膠囊大劑量組，每組5只。于犬的左冠狀動(dòng)脈前降支的第2、3分支之間結(jié)扎冠脈造成急性心肌缺血模型，觀察了藥物灌胃給予犬后，對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血時(shí)心肌收縮性、心臟血流動(dòng)力學(xué)、心外膜心電圖、左旋支冠狀動(dòng)脈流量、心臟血?dú)饧把醮x等指標(biāo)的影響，評(píng)價(jià)紅景天膠囊有無治療冠心病的作用及其量效關(guān)系。
材料與方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選用解放軍總醫(yī)院動(dòng)物房提供的健康雜種犬25只，隨機(jī)分為五組，正常組、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)、復(fù)方丹參片對(duì)照組(簡(jiǎn)稱丹參組)、膠囊小劑量組(簡(jiǎn)稱小劑量組)和膠囊大劑量組(簡(jiǎn)稱大劑量組)，每組各5只，各組動(dòng)物雌雄比例基本相同。
二、受試藥物紅景天膠囊(以下簡(jiǎn)稱膠囊)，每粒重0.38g，相當(dāng)于生藥1.1g。對(duì)照品用復(fù)方丹參片，遼寧省桓仁中藥廠生產(chǎn)，每片重0.25g。
三、受試藥物的配制取紅景天膠囊，除去膠囊殼，稱取藥粉適量，在乳缽中邊加生理鹽水邊研磨，制成1ml中含1g生藥和1ml中含0.5g生藥兩種懸液(依次簡(jiǎn)稱A液、B液)。復(fù)方丹參片亦以生理鹽水溶化制成1ml中含藥片0.33g的溶液(簡(jiǎn)稱C液)。
四、給藥劑量和方法膠囊大劑量按1.5ml/kg給A液，即按1.5g生藥/kg給藥，相當(dāng)人用量的11倍；膠囊小劑量組按1.5ml/kg給B液，即按0.75g生藥/kg給藥，相當(dāng)于人用量的5.5倍，丹參組按1.5ml/kg給C液，即按0.5g/kg給復(fù)方丹參片，相當(dāng)于人用量的11倍；模型組按1.5ml/kg給1.5％的羧甲基纖維素。除正常組不給藥外，其余各組均經(jīng)胃管給藥。
五、實(shí)驗(yàn)步驟所有動(dòng)物采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(30mg/kg)，氣管切開后插管，以SC-2型電動(dòng)呼氣器維持人工呼吸。分離左側(cè)頸總動(dòng)脈和右側(cè)頸外靜脈以備插管，經(jīng)股靜脈插管恒速輸入生理鹽水(20滴/分左右)以補(bǔ)充血容量。沿左側(cè)第四肋間開胸，于膈神經(jīng)內(nèi)例約1.5cm處剪開心包并縫制心包床，游離主動(dòng)脈根部并安置ME-27型電磁流量計(jì)探頭(根據(jù)主動(dòng)脈外徑粗細(xì)選擇不同型號(hào)大小的探頭)以備測(cè)取心輸出量(CO)，將一根6#F心導(dǎo)管經(jīng)左例頸總動(dòng)脈向心插入至主動(dòng)脈根部，以備測(cè)取動(dòng)脈血樣及測(cè)量動(dòng)脈血壓，將另一根6#F心導(dǎo)管經(jīng)右側(cè)頸外管脈向心方向插入冠狀靜脈竇內(nèi)，以備抽取心臟的靜脈血樣，然后在左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)第2-3分支間(距LAD起始部1.5～2cm處)分離冠狀動(dòng)脈以備結(jié)扎造成肌缺血，子冠狀動(dòng)脈左旋支起始部分離約1.5～2cm的一段動(dòng)脈，以備安置電磁流量計(jì)傳感器測(cè)取冠狀動(dòng)脈流量；用一根7#F心導(dǎo)管于心尖部直接插入左心室以測(cè)量左心室內(nèi)壓力(LVP)等指標(biāo)，各心導(dǎo)管內(nèi)充以肝素溶液(0.2％)；將改良后的TH602T型張力弓直接插入左室前壁預(yù)定的缺血區(qū)，張力弓的長(zhǎng)軸與左室表面心肌纖維走行一致，并使兩弓之間的心肌纖維被牽伸約30％左右。將一胃管插管經(jīng)口腔直接插入胃中，以備灌注各種實(shí)驗(yàn)及對(duì)照用藥物，所有動(dòng)物均于術(shù)后30分鐘抽取心臟動(dòng)脈及靜脈血樣，并記錄生理指標(biāo)作為正常缺血前對(duì)照值；除正常組外，其余各組均結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支造成心肌缺血，于缺血后30分鐘再記錄各項(xiàng)指標(biāo)并抽取血樣，然后實(shí)驗(yàn)藥物組及對(duì)照藥物組均經(jīng)胃管給藥，正常組既不缺血也不給藥，其余步驟均同上述各組，各組于給藥后30分鐘、60分鐘及90分鐘各記錄一次各項(xiàng)指標(biāo)并抽取血樣，前后共記錄五次。
六、觀測(cè)指標(biāo)和儀器1.心外膜心電圖ST段，通過銀絲一棉芯電極接RD-5生物物理放大器標(biāo)測(cè)心外膜心電圖，電極置于缺血中心區(qū)及邊緣區(qū)共12點(diǎn)以心外膜心電圖ST段抬高超過2mv的導(dǎo)聯(lián)數(shù)(NST)表示心肌缺血的范圍，以ST段抬高的電壓值總和(∑ST)表示心肌缺血性損傷的程度。
2.心率(HP)，由60/FCG的R-R期間計(jì)算(次/min)。
3.左心室內(nèi)壓力峰值(LVSP)，將心尖部心室導(dǎo)管連至MPU-0.5A型壓力換能器后接RP-6載波放大器測(cè)取。
4.左室壓力變化速率(dp/dt)，將左室壓力信號(hào)輸入RPD-5微分放大器獲得，由基線至dp/dt正向最高處為左室壓力最大上升速率(dp/dtmax)；由基線至dp/dt反向最低處為左室內(nèi)壓最大下降速率(_dp/dtmax)。
5.平均動(dòng)脈壓(MAP)，將頸總動(dòng)脈插管連至MPU-0.5A型壓力換能器接RP-5載波放大器獲得。
6.心肌發(fā)展張力(DT)，將固定子缺血區(qū)的TH-602T型張力弓連接至RP-5載波放大器測(cè)得。
1～6項(xiàng)指標(biāo)采用日本光電公司產(chǎn)RM86型多導(dǎo)生理記錄儀測(cè)得。
7.心輸出量(CO)，將安裝在主動(dòng)脈根部的電磁流量計(jì)探頭連至日本光電公司產(chǎn)MF-27型電磁流量計(jì)直接讀出CO值(L/min)。
8.冠狀動(dòng)脈流量(CBF)，將安裝手左旋支冠脈的電磁流量計(jì)探頭連至日本光電公司產(chǎn)MF-120型電磁流量計(jì)直接測(cè)取。
9.心臟血?dú)夥治?，將抽取的?dòng)脈血及冠狀靜脈竇血樣各約0.5ml立即注入丹麥產(chǎn)ABL-2型血?dú)庾詣?dòng)分析儀，直接測(cè)定動(dòng)、靜脈血的二氧化碳分壓(PaCO2，PvCO2)，氧飽和度(SaO2，SvO2)，血紅蛋白濃度(Hba、HBv)及PHv值等，然后計(jì)算出二氧化碳分壓的靜、動(dòng)脈差(Pv-aCO2)，血氧飽和度的動(dòng)靜脈差(Sa-vO2)。
10.心臟氧提取率(O2E)由下式計(jì)算得出
其中Cz-vO2＝(SaO2×Hba×1.39)-(SvO2×HBv×1.39)CaO2＝SaO2×Hba×1.39七、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理本實(shí)驗(yàn)所用數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)時(shí)均采用T檢驗(yàn)。
本文各表中均以“*”、“**”和“***”分別表示各組內(nèi)缺血30′時(shí)檢測(cè)值與缺血前對(duì)應(yīng)值及給藥后各時(shí)相檢測(cè)值的組內(nèi)比較P＜0.05、P＜0.001，以“Δ”“ΔΔ”“ΔΔΔ”分別表示模型組各時(shí)相檢測(cè)值與其它各組各時(shí)相對(duì)應(yīng)值比較P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001。
結(jié)果與分析1、紅景天膠囊對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌缺血時(shí)心臟流動(dòng)力學(xué)的影響(見附表1)從表1中可見，缺血前各組各項(xiàng)指標(biāo)比較均無明顯差異(P均＜0.05)，表明各組動(dòng)物缺血前基礎(chǔ)水平大體相同。缺血30′時(shí)，膠囊大小劑量組、丹參組及模型組MAP、CO降低，LWEDP升高，與缺血前值及正常組相應(yīng)值比較均有顯著性差異(P＜0.005或P＜0.01)，HR則改變不大，上述結(jié)果表明，心肌缺血使心臟血流動(dòng)力學(xué)受到損害；而膠囊大、小劑量組和丹參組與缺血組相比，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯差異(P＞0.05)，表明上述三組因心肌缺血導(dǎo)致的血流動(dòng)力學(xué)紊亂程度基本一致。藥后模型組MAP、CO進(jìn)一步降低，LVEDP繼續(xù)升高，各實(shí)驗(yàn)藥物組與對(duì)照的丹參組雖出現(xiàn)同樣方向的改變，但程度較輕，尤其是膠囊大劑量組與模型組相比，MAP和CO等在給藥后90′時(shí)均有顯著性差異(P＜0.05)，表明膠囊大劑量組可改善心臟的血流動(dòng)力學(xué)，從效果上看，膠囊大劑量組優(yōu)于丹參組，而丹參組又優(yōu)于膠囊小劑量組。
2.紅景天膠囊對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌缺血時(shí)心肌收縮性的影響(見附表2)從附表2中可見，缺血前各項(xiàng)參數(shù)比較，各組間無明顯差異(P＞0.05)，表明各組動(dòng)物缺血前基礎(chǔ)水平大體相同，缺血30分鐘時(shí)，膠囊大小劑量組、丹參組及模型組DT、LVSP、dp/dtmax、-dp/dtmax降低，表明心肌缺血使左室心肌收縮力學(xué)性能受到了損害而上述各組間比較，各項(xiàng)指標(biāo)均差異不大(P＞0.05)，說明插管后上述各組心肌收縮性受損害程度基本一致。模型組隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)，上述各項(xiàng)指標(biāo)持續(xù)下降。至藥后90′各藥物雖亦有下降，但程度較輕，與模型組相比，除LVSP外其余各項(xiàng)指標(biāo)在藥后60′或90′時(shí)均有顯著性差異(P＜0.05)。表明膠囊大、小劑量組及丹參組均可保護(hù)缺血心臟的功能，抑制因缺血導(dǎo)致的心肌收縮性的進(jìn)一步損害，從效果上看，膠囊小劑量組與丹參組類似，而膠囊大劑量組則略優(yōu)于膠囊小劑量組及丹參組。
3、紅景天膠囊對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌缺血時(shí)心外膜心電圖的影響(見表附3)附表3的結(jié)果顯示，缺血前各組的∑ST和NST比較均無明顯差異(P＞0.05)，表明各組動(dòng)物缺血前基礎(chǔ)水平大體相同。缺血30分鐘時(shí)各藥物組(包括膠囊大、小劑量及丹參組)和模型組∑ST、NST均增加，與缺血前及正常組相應(yīng)時(shí)值比較均有顯著性差異(P＜0.01)，表明結(jié)扎冠脈告造成了心肌缺血性損傷；而各藥物組與模型組比，兩項(xiàng)指標(biāo)均無明顯差異(P＞0.05)，說明各組心肌缺血程度及范圍基本一致。藥后，模型組∑ST及NST進(jìn)一步增加；各藥物組NST雖然也增加，但程度較輕，而∑ST及各藥物繃則有所降低，與模型組比較，兩項(xiàng)指標(biāo)在藥后60′或90′時(shí)有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01)，表明膠囊大、小劑量及丹參組效果相仿，而膠囊小劑量組的作用則稍遜于前兩組。
4、紅景天膠囊對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌血時(shí)冠脈流量及心肌氧提取率的影響(見附表4)附表4顯示，缺血前各組冠脈流量(CBF)及心臟氧提取率(O2E)均無明顯差異(P均＞0.05)，表明各組動(dòng)物缺血前基礎(chǔ)水平大體相同。缺血30分鐘時(shí)各藥物組冠脈流量降低而O2E則升高，各藥物組與模型組相比，各指標(biāo)均無明顯差異(P＞0.05)，提示各組動(dòng)物因缺血所致的心肌血流供應(yīng)及氧代謝異常的程度基本一致。藥后30′至藥后90′，模型組冠脈流量的降低則沒有模型組明顯，至藥后60′或90′時(shí)，丹參組和膠囊大劑量組比模型組相對(duì)明顯升高(P＜0.05)，提示此兩組藥物可防止心肌缺血時(shí)冠脈流量的下降；而O2E在藥后30′至藥后90′時(shí)，模型組基本上居高不下，各藥物物組(包括膠囊大、小劑量組和丹參組)則均有不同程度的下降，至藥后60′和90′時(shí)，大劑量膠囊組和丹參組明顯低于缺血組(P＜0.05)，表明該兩組藥物抑制了心肌缺血時(shí)心肌氧提取率的提高，從效果上看，膠囊小劑量組作用不如膠囊大劑量組和丹參組明顯，而后兩者效果相近。
5、紅景天膠囊對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌缺血時(shí)心臟血?dú)獾挠绊?見附表5)從表中可見，缺血前各組二氧化碳分壓靜動(dòng)脈差(Pv-aCO2)及靜脈PH值(PHv)比較均無明顯差異(P＞0.05)，缺血30分鐘時(shí)，各藥物組(膠囊大、小劑量組及丹參組)和模型組Pv-aCO2增加PHv降低，表明缺血導(dǎo)致了心肌代謝產(chǎn)物堆積，血液變酸；各藥物組與模型組相比，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯差異(P＞0.05)，提示各組動(dòng)物缺血程度基本一致。藥后30′至90′，模型組Pv-aCO2進(jìn)一步增加，PHv進(jìn)一步降低，各藥物組雖呈類似變化，但程度較輕，與模型組相比，膠囊大劑量級(jí)及丹參組PHv在藥后60′或90′，時(shí)有明顯性差異(P＜0.05)，提示上述兩藥物在押制缺血導(dǎo)致的二氧化碳堆積，防止血液酸化方面有一定的作用。而膠囊小劑量組相對(duì)效果略差，與模型組比較藥后30′至90′時(shí)均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論1、膠囊大劑量組及丹參組均可不同程度地改善因缺血導(dǎo)致的心臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂，且前者效果略優(yōu)于后者，而膠囊小劑量組的效果則不甚明顯。
2、膠囊大、小劑量組及丹參組都可一定程度地防止實(shí)驗(yàn)性心肌缺血過程中心肌收縮力學(xué)性能的異常改變，其中膠囊小劑量組與丹參組效果相仿，而膠囊大劑量組優(yōu)于前二組。
3、膠囊大、小劑量組及丹參組均可減輕心肌缺血性損傷的程度和損傷范圍，從效果上看，膠囊大劑量組與丹參組作用相似，膠囊小劑量組的作用較前二組稍遜。
4、膠囊大劑量組及丹參組可抑制心肌缺血時(shí)心肌氧提取率的升高和冠脈流量的降低，提示該二組藥物可改善缺血心肌的供血狀態(tài)，提高缺血時(shí)心肌的氧利用率，而膠囊小劑量組則無明顯效果。
5、膠囊大，小劑量組及丹參組可不同程度地防止心肌缺血時(shí)冠脈竇血二氧化碳分壓靜動(dòng)脈差的增加，但均未見明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；膠囊大劑量組及丹參組可明顯抑制心肌缺血后冠脈竇血PH值的下降，減輕缺血性心肌細(xì)胞的酸中毒，而膠囊小劑量組對(duì)此無明顯效果。
綜觀上述，紅景天膠囊可抑制心肌的缺血性損害，減輕損害程度，縮小損害范圍，減輕缺血心肌細(xì)胞的酸中毒，并能糾正實(shí)驗(yàn)性心肌缺血過程中的心臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂，改善缺血心肌供血狀況，提高其氧利用率，從而提高怠性心肌缺血時(shí)的心臟功能；不容忽視的是，紅景天膠囊的上述作用強(qiáng)度與其給藥劑量有關(guān)。
表1紅景天膠囊對(duì)急性心肌缺血犬心臟血液動(dòng)力學(xué)的影響(M±SD)組別 缺血前 缺血30′ 藥后30′ 藥后60′ 藥后90′正常組70.8±8.74 69.3±8.0168.7±7.61 68.5±6.91Δ68.6±7.20ΔMAP 模型組73.69.70 59.5±8.16* 57.3±8.32 55.7±7.23 54.3±7.03(平均小劑量組 76.1±7.97 62.7±8.07* 66.4±8.21 65.7±7.93 64.9±7.87動(dòng)脈壓) 大劑量組 73.2±8.72 64.1±7.9865.2±8.13 65.0±8.24 66.6±8.18Δ(mmHg) 丹參組75.4±9.12 61.9±8.28* 65.1±8.21 63.9±8.49 64.1±8.74正常組134.0±13.14 132.4±11.50 128.8±12.10 127.0±15.38 127.8±15.70HR 模型組136.0±12.88 121.6±11.42* 116.6±10.24 112.4±10.19 110.2±9.63(心率) 小劑量組 133.6±12.14 117.0±10.44* 112.6±14.75 122.0±13.25 121.0±10.84(次/分) 大劑量組 133.6±12.29 116.4±10.24* 124.4±11.51 129.0±12.10 123.0±10.05丹參組130.6±12.26 119.8±10.％ 113.6±11.72 115.8±14.03 111.0±14.35正常組1.48±0.27 1.45±0.251.44±0.36Δ 1.44±0.28ΔΔ 1.37±0.24ΔΔCO 模型組1.60±0.24 1.12±0.22* 0.99±0.24 0.90±0.20 0.87±0.18(心輸小劑量組 1.56±0.23 1.18±0.21* 1.12±0.24 1.09±0.18 1.44±0.22出量)大劑量組 1.51±0.28 1.16±0.331.14±0.25 1.20±0.21Δ1.16±0.21Δ(L/分) 丹參組1.54±0.24 1.20±0.221.19±0.26 1.18±0.23 1.18±0.24Δ正常組2.60±0.73 2.88±0.71Δ 2.95±0.65Δ 3.12±0.67Δ1.37±0.24ΔΔLVEDP模型組2.54±0.61 4.20±0.78** 4.42±0.77 4.52±0.70 4.68±0.72(輸張小劑量組 2.75±0.69 4.08±0.67* 4.30±0.65 4.51±0.72 4.64±0.68終末壓) 大劑量組 2.38±0.64 4.32±0.65** 4.37±0.71 4.39±0.79 4.44±0.57(mmHg) 丹參組2.69±0.76 4.51±0.70** 4.50±0.69 4.49±0.68 4.52±0.69
表2紅景天膠囊對(duì)急性心肌缺血犬心肌收縮性的影響(M±SD)指標(biāo) 組別 缺血前 缺血30′ 藥后30′ 藥后60′ 藥后90′正常組 107.6±10.3 102.4±9.3Δ 98.5±11.498.1±10.3Δ 95.9±11.1ΔΔLVSP 模型組 104.3±9.4 38.7±9.2* 84.6±9.7 80.8±11.074.2±9.2*(mmHg)小劑量組 103.7±11.0 88.4±8.8* 84.6±9.8 81.2±10.179.1±10.7*大劑量組 104.8±11.4 90.5±11.4 85.7±10.286.2±10.987.7±10.8丹參組 102.4±10.8 91.4±10.9 86.5±11.383.6±12.182.2±11.3正常組 2095±278.2 1965±229.3 1975±204.1 1946±208.4Δ1939±198.9Δdp/dt 模型組 2141±246.7 1871±229.5 1767±221.7 1638±197.9 1550±190.4*MmHg/S小劑量組 2168±252.3 1903±230.8 1882±196.8 1859±204.1 1834±188.2Δ大劑量組 2208±238.4 1978216.11942±221.2 1935±203.7Δ1892±201.3Δ丹參組 2183±228.2 1924±207.5 1897±204.1 1869±132.3 1846±203.1Δ正常組 1481±179.3 1427±153.6 1399±149.3 1371±147.5 1359±143.1Δdp/dt 模型組 1506±173.6 1364±137.2 1241±131.5 1180±128.4 1158±127.6*MmHg/s小劑量組 1547±164.2 1294±144.1 1281±137.8 1264±131.6 1243±131.8大劑量組 1531±158.2 1391±142.3 1387±128.4 1398±132.4Δ1377±138.5Δ丹參組 1497±182.7 1328±148.1 1298±139.5 1271±132.3 1279±140.3正常組 56.2±11.06 55.8±9.88Δ 53.4±9.00ΔΔ53.4±8.97ΔΔ 51.6±9.39ΔΔΔDT模型組 58.0±12.8 34.4±9.72* 31.0±9.1027.6±8.54* 22.4±7.11*(g) 小劑量組 59.3±11.73 36.9±9.95* 35.8±8.9434.8±9.4434.6±9.06大劑量組 59.0±11.34 38.1±9.07* 36.3±9.3039.0±9.4542.4±8.76ΔΔ丹參組 57.6±9.61 39.8±9.72* 39.4±9.3038.1±9.5434.9±8.67Δ
表3紅景天膠囊對(duì)急性心肌缺血程度及范圍的影響(M±SD)指標(biāo) 組別 缺血前 缺血30′ 藥后30′ 藥后60′ 藥后90′正常組 8.50±3.01 9.76±2.93ΔΔΔ 10.02±3.27ΔΔΔ 10.54±3.03ΔΔΔ 10.66±3.44ΔΔΔHST 模型組 8.46±2.92 60.68±16.74***82.47±16.34 80.71±9.61 93.72±21.20小劑量組 8.28±2.87 61.34±15.74***70.73±20.97 60.67±21.87 64.24±17.38Δ大劑量組 8.36±2.96 50.41±12.23***60.58±13.14 63.54±14.20Δ 60.39±13.23Δ丹參組 7.98±3.10 56.93±11.20***59.16±11.86 61.41±11.29Δ 63.41±14.01Δ正常組 2.10±0.74 2.51±0.82ΔΔΔ 2.64±0.87ΔΔΔ2.75±0.782.01±0.82ΔΔΔ∑ST 模型組 1.96±0.76 9.25±1.25*** 10.11±1.14 10.37±1.13 10.56±1.18小劑量組 2.03±0.79 9.31±1.34*** 9.83±1.318.89±1.468.37±1.14Δ大劑量組 1.87±0.71 8.96±0.95*** 8.58±0.988.21±0.89Δ 6.45±0.92ΔΔ丹參組 1.94±0.76 9.05±1.07** 8.77±0.918.42±0.97Δ 6.78±0.94ΔΔ表4紅景天膠囊對(duì)急性心肌缺血犬冠脈流量及心臟氧提取率的影響(M±SD)指標(biāo)組別 缺血前 缺血30′ 藥后30′ 藥后60′藥后90′正常組 70.6±6.89 70.31±7.01 70.8±7.1670.6±7.03 70.4±7.00O2E模型組 68.79±5.01 73.6±4.7472.47±4.68 72.8±4.87 72.1±4.65心臟氧 小劑量組 67.94±5.78 71.6±5.6570.3±5.4369.2±5.21 67.4±5.17提取率 大劑量組 67.71±5.29 72.7±5.0170.8±5.4165.1±5.13*Δ 64.1±5.07*Δ(％)丹參組 69.1±5.81 72.8±5.2471.6±5.1567.4±5.31 64.7±5.06*Δ正常組 56.27±4.33 55.44±5.31Δ 54.29±4.67ΔΔ 52.36±4.78ΔΔ51.89±4.69ΔΔ冠脈模型組 54.38±6.39 47.21±5.28 43.18±5.03 40.15±4.10 39.89±4.11流量小劑量組 53.69±5.07 47.10±6.08 45.39±4.21 45.31±4.69 44.96±4.93CBF 大劑量組 54.69±6.01 48.45±5.66 47.23±5.82 40.75±5.71Δ 40.98±4.77Δml/min 丹參組 52.87±5.12 46.87±5.06 47.34±6.01 47.78±5.48Δ 46.41±4.936
表5 紅景天膠囊對(duì)急性心肌缺血犬心臟氣及氧代謝的影響(M±SD)指標(biāo)組別 缺血前 缺血30′ 藥后30′ 藥后60′藥后90′正常組 6.31±1.21 6.33±1.25 6.31±1.29 6.29±1.26 6.29±1.24PV-aCO2模型組 6.25±1.26 7.50±1.31 8.04±1.26 8.09±1.29 8.07±1.28二氧化碳小劑量組 6.27±1.24 7.43±1.24 7.48±1.21 7.51±1.19 7.52±1.16分壓靜動(dòng)大劑量組 6.28±1.19 7.54±1.31 7.52±1.25 7.56±1.27 7.49±1.28脈差丹參組 6.25±1.23 7.47±1.20 7.44±1.31 7.51±1.23 7.47±1.25正常組 7.513±0.089 7.536±0.096 7.507±0.104Δ 7.496±0.097ΔΔ 7.494±0.104ΔPHv 模型組 7.499±0.106 7.448±0.093 7.349±0.103 7.306±0.093* 7.304±0.094*小劑量組 7.511±0.098 7.454±0.109 7.417±0.098 7.421±0.0987.420±0.106大劑量組 7.520±0.110 7.418±0.103 7.446±0.107 7.457±0.103Δ 7.469±0.110Δ丹參組 7.501±0.101 7.444±0.109 7.437±0.102 7.448±0.096Δ 7.439±0.101實(shí)施例1制法 取紅景天藥材1100克，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，濃縮成浸膏，得膏量約190～200g，相對(duì)密度1.2～1.25(60℃測(cè)定)，取浸膏1份加淀粉1.25～1.35份混勻，80℃以下干燥，粉碎，以適當(dāng)濃度乙醇制顆粒，烘干，整粒，裝膠囊，得膠囊1000粒，每粒重0.38g，相當(dāng)于生藥1.1g。
實(shí)施例2鑒別方法的實(shí)施例 取上述制得的膠囊內(nèi)容物1g，置燒瓶中，加95％濃度的乙醇30ml，加熱回流1小時(shí)，過濾，濾液濃縮至干，殘留物加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取紅景天甙對(duì)照品加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典1990年版一部》)附錄57頁(yè))試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各式各2～4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶1∶0.8)為展開劑，展開，取出晾干，噴以1％FeCl3-1％鐵氰化鉀(1∶1)溶液，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的蘭色斑點(diǎn)。
實(shí)施例3含量測(cè)定方法的實(shí)施例 精密稱取上述制備的膠囊內(nèi)容物約2g，置燒瓶中，加乙醇30ml，加熱回流1小時(shí)，過濾，濾渣以20ml乙醇洗滌三次，合并濾液并濃縮至盡干，殘留物加水5ml使溶解，加于聚酰胺柱(80-120目，5g干法裝柱，φ1.5cm)，用水進(jìn)行洗脫，準(zhǔn)確收集洗脫液25ml，作為供試品溶液，吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液5--10μl，注入液相色譜儀，在系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)所述的條件下測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療冠心病的藥物，其特征在于其中的有效成分為紅景天甙，且在單位劑量中的含量不少于0.8mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于由景天科植物大株紅景天Rhodiola Kirilowii的干燥根及根莖制成。
3.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物的方法，其特征在于按以下a、b、c三種方法中的任何一種進(jìn)行a.取紅景天藥材1100份，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，濃縮成相對(duì)密度1.2～1.25的浸膏，取浸膏1份加淀粉1.25～1.35份混勻，80℃以下干燥，粉碎，以適當(dāng)濃度乙醇制顆粒，烘干，整粒，裝膠囊，或制成片劑、顆粒劑；或?qū)⑸鲜鼋喔稍锖蠹尤?～3份的食用植物油等混懸劑制成軟膠囊；b.取紅景天藥材，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，減壓濃縮成50℃相對(duì)密度1.05-1.07，加95％乙醇溶液使含醇量達(dá)50-70％，冷藏放置20-26小時(shí)，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.05-1.06，冷卻，加水稀釋至每一體積份藥液相當(dāng)于原藥材0.44重量份，過濾，加入0.1～0.15％的吐溫-80，混勻，制成口服液；c.取紅景天藥材40-60重量份，加8倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，藥渣再加6倍量水煮1.5小時(shí)，過濾，合并兩次藥液，減壓濃縮成50℃相對(duì)密度1.05-1.07，加95％乙醇溶液使含醇量達(dá)50-70％，冷藏放置20-26小時(shí)，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至50℃下相對(duì)密度為1.05-1.06，加60～80℃注射用水1000體積份攪拌，使溶解，加入氯化鈉3～8重量份，以40％氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6.0～6.5，冷卻，過濾，再用10000D分子量超濾膜、5000D以下分子量超濾膜分級(jí)超濾，加入針用活性炭2～4重量份攪拌吸附10～30分鐘，過濾除炭，濾液加注射用水至1000體積份，用無菌濾板下襯O.22m微孔濾膜過濾，藥液分裝，滅菌，即得。
4.制備權(quán)利要求1或2所述藥物的方法，其特征在于用30-70％的乙醇提取紅景天制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物在制備治療冠心病的藥物中的用途。
6.鑒別藥物中紅景天甙的方法，其特征在于取藥物適量，或取藥液蒸干，以70-100％濃度的乙醇適量熱提取，過濾，以提取液制得供試品溶液；另取紅景天甙對(duì)照品加乙醇適量制成溶液，作為對(duì)照品溶液，吸取上述二種溶液各適量，點(diǎn)樣于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層上，以體積比為9∶1∶0.8的乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶劑為展開劑，展開，晾干，噴以1％FeCl3-1％鐵氰化鉀1∶1溶液，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品紅景天甙色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的蘭色斑點(diǎn)。
7.鑒別權(quán)利要求1或2所述的藥物的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行取藥物1g，或相應(yīng)量的藥液蒸干所得的殘余物，加95％濃度的乙醇30ml，加熱回流1小時(shí)，過濾，濾液濃縮至干，殘留物加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取紅景天甙對(duì)照品加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各2～4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層上，以體積比為9∶1∶0.8的乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合溶劑為展開劑，展開，取出晾干，噴以1％FeCl3-1％鐵氰化鉀1∶l溶液，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的蘭色斑點(diǎn)。
8.測(cè)定藥物中紅景天甙含量的方法，其特征在于精密稱取藥物適量，或取相應(yīng)量的藥液蒸干，加90-100％濃度的乙醇適量，熱提取，提取液濃縮至干，殘余物加水溶解，加于聚酰胺柱上，用水洗脫，準(zhǔn)確收集洗脫液一定體積，作為供試品溶液；以紅景天甙對(duì)照品的水溶液為對(duì)照品溶液；吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各適量，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得，測(cè)定條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，體積比為7∶93∶1的甲醇-水-冰醋酸為流動(dòng)相，流速0.9ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，柱溫40℃，理論塔板數(shù)按紅景天甙峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。
9.測(cè)定權(quán)利要求1或2所述的藥物中紅景天甙含量的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行精密稱取藥物約2g，或取相應(yīng)量的藥液蒸干，置燒瓶中，加乙醇30ml，加熱回流1小時(shí)，過濾，濾渣以20ml乙醇洗滌三次，合并濾液并濃縮至盡干，殘留物加水5ml使溶解，加于80-120目、直徑為1.5cm的聚酰胺柱上，用水洗脫，準(zhǔn)確收集洗脫液25ml，作為供試品溶液；精密稱取紅景天甙對(duì)照品，加水溶解，并定容至濃度為約10mg/25ml，作為對(duì)照品溶液；吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5--10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得，測(cè)定條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，以體積比為7∶93∶1的甲醇-水-冰醋酸混合溶劑為流動(dòng)相，流速0.9ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，柱溫40℃，理論塔板數(shù)按紅景天甙峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。
10.根據(jù)權(quán)利要求6-9中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于采用超聲波提取藥物的方法代替其中的乙醇熱回流或熱提取藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療冠心病的藥物及其制備方法、用途和質(zhì)量控制方法，本藥物的活性成分為紅景天甙，可以由紅景天制成。采用薄層色譜法鑒別其中的紅景天甙的展開劑為乙酸乙酯－甲醇－甲酸(9∶1∶0.8)，顯色劑為1％FeCl
文檔編號(hào)G01N30/02GK1526401SQ0311928
公開日2004年9月8日 申請(qǐng)日期2003年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月7日
發(fā)明者蕭偉, 楊寅, 戴翔翎, 凌婭, 瘳正根, 蕭 偉 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司