專利名稱：羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法
技術領域：
本發(fā)明屬分析化學領域，涉及化合物的柱前衍生化方法，具體涉及羥基化合物和巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法。
背景技術：
柱前衍生化是提高羥基化合物及巰基化合物的檢測靈敏度常用的方法，但目前已報道的羥基化合物及巰基化合物的衍生化方法均存在反應時間長、反應所需溫度高、副反應產(chǎn)物多、過量衍生化試劑干擾待側物的測定等缺陷?；酋．惽杷狨ヮ惢衔?，其結構通式可表示為RSO2NCO，其中R可以為烷基、芳基等各種基團，以往主要用于有機合成，未見其用于柱前衍生化的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種化合物的柱前衍生化方法，具體是提供一種反應條件溫和、快速高效的羥基化合物及巰基化合物的柱前衍生化方法。本發(fā)明方法以磺酰異氰酸酯類為衍生化試劑進行柱前衍生化，與高效液相色譜、高效液相色譜—質(zhì)譜、毛細管電泳或者毛細管電泳—質(zhì)譜法聯(lián)和使用，可以實現(xiàn)對羥基化合物及巰基化合物的高靈敏度測定。
本發(fā)明方法通過下述技術方案和步驟實現(xiàn)取含有待測羥基化合物或巰基化合物樣品，經(jīng)過樣品預處理后，加入不含活潑氫的反應溶劑，以及磺酰異氰酸酯類衍生化試劑，混勻，室溫下放置2-5分鐘，加水終止反應，用高效液相色譜、高效液相色譜—質(zhì)譜、毛細管電泳或者毛細管電泳—質(zhì)譜法測定羥基化合物或巰基化合物的濃度。
本發(fā)明方法所述的衍生化試劑是磺酰異氰酸酯類化合物，其結構通式可表示為RSO2NCO，其中R可以為烷基、芳基等各種基團。本發(fā)明使用磺酰異氰酸酯類化合物作為衍生化試劑，衍生化反應在室溫下即可以發(fā)生；將衍生化試劑與待測溶液混勻2-5分鐘后，衍生化反應即已經(jīng)完成。
本發(fā)明方法所述的不含活潑氫的溶劑是乙腈、四氫呋喃、乙醚、苯和四氯化碳等溶劑。
本發(fā)明中衍生化反應完畢后加水終止反應。通過水解反應可以將過量的衍生化試劑—磺酰異情酸酯轉變?yōu)榛前?，由于磺胺類化合物的反相色譜保留時間較短，因而不會干擾羥基化合物及巰基化合物的測定。
本發(fā)明方法克服了已有的羥基化合物及巰基化合物的衍生化方法均存在的缺陷，較已知化合物的衍生化方法靈敏度高50倍。具有反應時間短、室溫下即可以發(fā)生衍生化反應、副反應產(chǎn)物少和過量衍生化試劑不會干擾待側物的測定等優(yōu)點。


圖1是C3～C10脂肪醇衍生化后高效液相色譜(HPLC)圖，其中A是空白對照，B是C3～C10脂肪醇反應色譜圖，圖2是空白血漿液相質(zhì)譜(LC-MS)圖，圖3是血漿樣品液相質(zhì)譜(LC-MS)圖，其中I是代謝物Org4094，II是代謝物Org 30126，III是內(nèi)標(倍他米松)。
具體實施例方式
20 0 10025 0 100流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長227nm實驗步驟分取1×10-4mol/L C3～C10脂肪醇混合溶液100μl，加入20％(V/V)的TSIC乙腈溶液10μl，漩渦使其充分混勻，置室溫下2min后加水10μl除去未反應的衍生化試劑，取此溶液按上述條件作高效液相色譜分析，同做隨行空白。實施實例2儀器與條件美國Agilent 1100型HPLC-MSD高效液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)，系統(tǒng)包括在線脫氣、二元高壓梯度系統(tǒng)、柱溫控制箱、自動進樣器、二極管陣列檢測器、電噴霧接口(離子源)、四極質(zhì)量分析系統(tǒng)以及ChemStation for LC-MS 3D工作站。
色譜條件色譜柱200×4.6mm ID，5μm DiamonsilTMC18(DIKMA)；流動相A0.2％醋酸銨溶液(g/ml)；流動相B甲醇；梯度洗脫程序T(min) A(％) B(％)0 22 7810 0 100流速0.8ml/min；柱溫25℃質(zhì)譜條件ESI負離子方式電離；碎裂電壓130V；噴霧壓力40psi；氮氣流速10L/min；干燥氣流溫度350℃；毛細管電壓4000V；選擇離子檢測，檢測質(zhì)荷比為M1＝511.0(Org4094及Org 30126)，M2＝588.0(內(nèi)標)。
實驗步驟取血漿樣品1.0ml，置10ml具塞試管內(nèi)，加入內(nèi)標倍他米松3.5ng，加入pH＝11的硼砂緩沖溶液0.5ml，搖勻，加入乙酸乙酯6ml，漩渦混旋2min，靜置，離心5min(3000rpm)，取有機相于離心試管中，50℃水浴氮氣流吹干。
取吹干之殘渣，于進樣前用100μl乙腈溶解，加入20％的TSIC乙腈溶液10μl，充分混勻，室溫下放置2min，加水20μl，混勻，進樣50μl作HPLC-ESI-MS分析，以內(nèi)標法測定血漿樣品種替勃龍兩種活性羥基代謝物Org4094及Org 30126的濃度。
權利要求
1，羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是以磺酰異氰酸酯類為衍生化試劑進行柱前衍生化，與高效液相色譜、高效液相色譜—質(zhì)譜、毛細管電泳或者毛細管電泳—質(zhì)譜法聯(lián)和使用，對羥基化合物或巰基化合物測定。
2，根據(jù)權利要求1所述的羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化試劑磺酰異氰酸酯類化合物，其結構通式可表示為RSO2NCO，其中R可以為烷基、芳基基團。
3，根據(jù)權利要求1所述的羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是按下述步驟進行，1)待測樣品羥基或巰基化合物預處理，2)加入不含活潑氫的反應溶劑和磺酰異氰酸酯類衍生化試劑，混勻，3)室溫放置2-5分鐘，加水終止反應，4)用高效液相色譜、高效液相色譜—質(zhì)譜、毛細管電泳或毛細管電泳—質(zhì)譜法測定羥基或巰基化合物的濃度。
4，根據(jù)權利要求3所述的羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的不含活潑氫的反應溶劑是乙腈、四氫呋喃、乙醚、苯和四氯化碳溶劑。
5，根據(jù)權利要求3所述的羥基，巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化反應為室溫放置2-5分鐘，反應完畢加水終止反應。
全文摘要
本發(fā)明屬分析化學領域，涉及化合物的柱前衍生化方法，具體涉及羥基化合物和巰基化合物的磺酰異氰酸酯柱前衍生化方法。本發(fā)明在不含活潑氫的溶劑中，以磺酰異氰酸酯類化合物為衍生化試劑，對羥基化合物或巰基化合物進行柱前衍生化之后，加水終止反應。本發(fā)明提供的衍生化方法具有反應條件溫和、反應速度快、副反應少、過量衍生化試劑不干擾羥基化合物或巰基化合物的測定等優(yōu)點，本發(fā)明衍生化方法與高效液相色譜、高效液相色譜—質(zhì)譜、毛細管電泳或者毛細管電泳—質(zhì)譜等方法聯(lián)合使用可以實現(xiàn)對羥基化合物或巰基化合物的高靈敏度測定。
文檔編號G01N30/88GK1480726SQ0314171
公開日2004年3月10日 申請日期2003年7月18日 優(yōu)先權日2003年7月18日
發(fā)明者段更利, 左明 申請人:復旦大學