專利名稱：抗干擾鱟試劑的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬一種抗干擾鱟試劑的制備工藝。
背景技術(shù)：
鱟試劑自我國1982年研制成功，在制藥行業(yè)應(yīng)用21年，但開始只應(yīng)用于對鱟試驗(yàn)沒有干擾的注射劑(主要五種大輸液)。二000年版中國藥典增加了167個品種都必須用鱟試劑檢測其熱原的藥品，其中包括化學(xué)藥品、生物制品、抗生素類，這些藥品對鱟實(shí)驗(yàn)都有不同程度干擾作用。據(jù)國外報(bào)道，當(dāng)檢測樣品含干擾物質(zhì)時(shí)，多采用稀釋法，但是有的藥品(如多醣類)用稀釋法也達(dá)不到目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種新型抗干擾鱟試劑，用于檢測對普通鱟試劑有干擾的檢品。在試驗(yàn)時(shí)有的用于減少被檢的藥品稀釋倍數(shù)，有的用于稀釋法不能消除干擾的藥品檢測。
本發(fā)明抗干擾鱟試劑的制備工藝包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟，其特征在于后續(xù)步驟為A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品即采用親和層析法，利用凝膠Dextransulfate Sepharose CL-6B制備的無菌無熱原親和層析柱以及收集分離成份的設(shè)備，將鱟血細(xì)胞中各因子如C因子、B因子、G因子、抗內(nèi)毒素因子、凝固酶原等成份分別分離出來。棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，收集其余成份即為P型抗干擾鱟試劑半成品。
B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。
C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成80～150mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.1～0.5％。旋渦混合20～40分鐘，以-15℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合20～40分鐘，加入1～10％若干增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.5～0.03EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-40℃以下凍干，在25℃以下封口或壓蓋制成品。
后續(xù)步驟B采用的專門除熱原凝膠，為日本Daicel化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)的Pyrodel-c。
所述的增活劑包括0.1N的Na2SO4、KCl、NaF、MgCl2、CaCl2、KBr、SrCl2，0.2N PH7.5 Tris-HCl。
本發(fā)明采用國際上先進(jìn)的親和層析法，棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，添加脂肪族二元醇類以保護(hù)鱟試劑中絲氨酸蛋白的Domain部分，使抗生素的甲基基團(tuán)無法干擾絲氨酸蛋白活性化水解反應(yīng)的原理，研制出P型抗干擾鱟試劑。與特異性鱟試劑阻斷旁路原理不同，亦克服傳統(tǒng)鱟試劑無抗干擾能力的缺點(diǎn)。該產(chǎn)品具有下述顯著優(yōu)點(diǎn)1本發(fā)明生產(chǎn)出的P型抗干擾鱟試劑，可用于原鱟試劑所無法檢測或檢測有困難的抗生素藥品等，可實(shí)現(xiàn)對最廣泛使用的藥品——抗生素進(jìn)行快速、靈敏、簡便、經(jīng)濟(jì)的鱟試劑測試。因此，擴(kuò)大了鱟試劑應(yīng)用范圍，對保障人民生命財(cái)產(chǎn)安全的意義更為重大。能適應(yīng)我國與國際接軌和2000年及2005年藥典擴(kuò)大鱟試劑應(yīng)用范圍需求。不僅有利于促進(jìn)我國抗生素藥品出口，而且本產(chǎn)品自身也有出口優(yōu)勢。
2本發(fā)明產(chǎn)品生產(chǎn)工藝采用先進(jìn)蛋白質(zhì)提取新工藝—親和層析法，摒除傳統(tǒng)的氯仿提取技術(shù)，大大提高了收得率，故能節(jié)約鱟血原料，降低生產(chǎn)成本，從而有效地保護(hù)了世界上有限的鱟資源，并能夠增加利稅多創(chuàng)效益為各制藥廠節(jié)省資金，提高企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。


圖1是親和層析圖，A峰凝固酶原，B峰凝固原，C、D峰C因子、B因子，E峰抗內(nèi)毒素因子，F(xiàn)峰G因子。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1工藝步驟包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟。其后續(xù)步驟A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品即采用親和層析法，利用凝膠Dextransulfate Sepharose CL-6B制備的無菌無熱原親和層析柱以及收集分離成份的設(shè)備，將鱟血細(xì)胞中各因子如C因子、B因子、G因子、抗內(nèi)毒素因子、凝固酶原等成份分別分離出來。棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，收集其余成份即為P型抗干擾鱟試劑半成品。
B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。
C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成80mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.1％。旋渦混合20分鐘，以-15℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合20分鐘，加入1％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.5EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-40℃以下凍干，在25℃以下封口或壓蓋制成品。
實(shí)施例2工藝步驟包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟。后續(xù)步驟為A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品即采用親和層析法，利用凝膠Dextransulfate Sepharose CL-6B制備的無菌無熱原親和層析柱以及收集分離成份的設(shè)備，將鱟血細(xì)胞中各因子如C因子、B因子、G因子、抗內(nèi)毒素因子、凝固酶原等成份分別分離出來。棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，收集其余成份即為P型抗干擾鱟試劑半成品。
B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。
C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成100mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.2％。旋渦混合30分鐘，以-18℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合30分鐘，加入3％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.06EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-50℃以下凍干，在30℃以下封口或壓蓋制成品。
實(shí)施例3工藝步驟包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟。其后續(xù)步驟A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品即采用親和層析法，利用凝膠Dextransulfate Sepharose CL-6B制備的無菌無熱原親和層析柱以及收集分離成份的設(shè)備，將鱟血細(xì)胞中各因子如C因子、B因子、G因子、抗內(nèi)毒素因子、凝固酶原等成份分別分離出來。棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，收集其余成份即為P型抗干擾鱟試劑半成品。
B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。
C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成150mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.5％。旋渦混合40分鐘，以-21℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合40分鐘，加入8％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.03EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-60℃以下凍干，在35℃以下封口或壓蓋制成品。
權(quán)利要求
1.一種抗干擾鱟試劑的制備工藝，包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟，其特征在于后續(xù)步驟為A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品即采用親和層析法，利用凝膠Dextransulfate Sepharose CL-6B制備的無菌無熱原親和層析柱以及收集分離成份的設(shè)備，將鱟血細(xì)胞中各因子如C因子、B因子、G因子、抗內(nèi)毒素因子、凝固酶原等成份分別分離出來。棄去G因子和抗內(nèi)毒素因子，收集其余成份即為P型抗干擾鱟試劑半成品。B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成80～150mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.1～0.5％，旋渦混合20～40分鐘，以-15℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合20～40分鐘，加入1％～10％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.5～0.03EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-40℃以下凍干，在25℃以下封口或壓蓋制成品。
2 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗干擾鱟試劑的制備工藝，其特征在于所述的后續(xù)步驟B采用的專門除熱原凝膠，為日本Daicel化學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)的Pyrodel-c。
3 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗干擾鱟試劑的制備工藝，其特征在于所述的后續(xù)步驟C的最佳配比步驟為，將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成100mg/ml的溶液，取若干抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.2％。旋渦混合30分鐘，以-18℃存放24小時(shí)以上，再旋渦混合30分鐘，加入3％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.06EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)-50℃以下凍干，在30℃以下封口或壓蓋制成品。
4 根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的抗干擾鱟試劑的制備工藝，其特征在于所述的增活劑包括0.1N的Na2SO4、KCl、NaF、MgCl2、CaCl2、KBr、SrCl2，0.2N PH7.5 Tris-HCl。
全文摘要
本發(fā)明屬一種抗干擾鱟試劑的制備工藝，包括從鱟全血中分離提取血細(xì)胞步驟，其特征在于后續(xù)步驟為A.制取P型抗干擾鱟試劑半成品，B.為脂肪族二元醇類去除熱原即采用專門除熱原凝膠，過柱洗脫除去脂肪族二元醇類的熱原。C.將制備好的脂肪族二元醇類用無熱原水溶解配成100mg/ml的溶液，取若干P型抗干擾鱟試劑半成品，加入若干配好的脂肪族二元醇類，使其脂肪族二元醇類含量為0.2％。旋渦混合30分鐘，－18℃過夜，再旋渦混合30分鐘，加入1％～10％增活劑，使其靈敏度達(dá)到0.5～0.03EU/ml，將其分裝到安瓿或西林瓶中后，放入冷凍干燥機(jī)－40℃左右凍干，在25℃以下封口或壓蓋制成品。
文檔編號G01N33/579GK1621841SQ20031010576
公開日2005年6月1日 申請日期2003年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月29日
發(fā)明者丁友玲 申請人:丁友玲