專利名稱：無毒害中藥材遼細(xì)辛的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切的說它涉及可期待中藥材規(guī)范化種植研究的無毒害中藥材遼細(xì)辛檢測(cè)方法，確定無馬兜鈴酸的遼細(xì)辛的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
遼細(xì)辛為常用中藥，各版藥典均有記載，主產(chǎn)東北地區(qū)，以遼寧產(chǎn)者質(zhì)量最佳，不含馬兜鈴酸，故而馳名中外，稱遼細(xì)辛。遼細(xì)辛原植物為細(xì)辛Asarumheterotropoides Fr. Schmidt var.mandxhuricum (Maxim)Kitag.和漢城細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.Var.seoulense Nakai.具祛風(fēng)散寒，通竅止痛，溫肺化飲作用，其主要藥效成分為揮發(fā)油，具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、麻醉等藥理作用。
中藥材資源比其他生物資源具有更強(qiáng)的地域性，所以中醫(yī)藥一直強(qiáng)調(diào)使用中藥時(shí)應(yīng)選用道地藥材。道地藥材是指在一特定自然條件、生態(tài)環(huán)境的地域內(nèi)所產(chǎn)生的藥材，其生產(chǎn)較為集中，栽培技術(shù)、采收、加工也都有一定講究，較其他地區(qū)所產(chǎn)同種藥材品質(zhì)佳、療效好。遼細(xì)辛始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，陶弘景稱“今用東陽臨海者形段乃好，辛烈不及華陰高麗者?！备啕?今本溪、桓仁一帶)于今遼細(xì)辛產(chǎn)地一致?，F(xiàn)代研究表明細(xì)辛的有效成分為揮發(fā)油，揮發(fā)油中主要含甲基丁香酚、黃樟醚和欖香脂素，揮發(fā)油含量的總和遼寧產(chǎn)為2.92％，華細(xì)辛為2.68％。所以遼寧產(chǎn)細(xì)辛品質(zhì)最好，藥效最佳。遼寧是其道地產(chǎn)區(qū)，故而馳名中外。但是如何對(duì)遼細(xì)辛進(jìn)行檢測(cè)就顯得很重要，目前尚無規(guī)范化的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供規(guī)范化種植的無毒害中藥材遼細(xì)辛的檢測(cè)方法。本發(fā)明的特點(diǎn)在于將中藥遼細(xì)辛采用高效液相、氣相色譜進(jìn)行含量測(cè)定，制定指紋圖譜以及確定馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。
提供上述中藥遼細(xì)辛的檢測(cè)方法，其特征主要包括高效液相、氣相指紋圖譜的制定切實(shí)可行；馬兜鈴酸的檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。
提供上述中藥遼細(xì)辛的檢測(cè)方法，其中包括；a揮發(fā)油的氣相檢測(cè)法。采用《中國(guó)藥典》2000年版一部揮發(fā)油提取法提取揮發(fā)油，經(jīng)環(huán)己烷溶解，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用色譜議中，繪制指紋圖譜，并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析結(jié)果，得到甲基丁香酚、黃樟醚、肉豆蔻醚等28個(gè)峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％。
b揮發(fā)油的高效液相色譜檢測(cè)法。經(jīng)藥典法提取制得的揮發(fā)油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色譜議中，得到高效液相指紋圖譜，并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
c馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。馬兜鈴酸是引起腎損傷的物質(zhì)之一，必須對(duì)馬兜鈴酸進(jìn)行研究，采用甲醇-水(3∶1)超聲提取30分鐘的溶液作為供試液，注入高效液相色譜儀，建立高效液相色譜馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提供了規(guī)范化種植的無毒害中藥材遼細(xì)辛的檢測(cè)方法。對(duì)于確定規(guī)范化種植的無毒害中藥材遼細(xì)辛的質(zhì)量提供了保證。制定了切實(shí)可行的馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。


圖1為細(xì)辛的氣相指紋圖譜。
圖2為細(xì)辛的高效液相指紋圖譜。
圖3為細(xì)辛葉中馬兜鈴酸檢查圖。
圖4為細(xì)辛莖中馬兜鈴酸檢查圖。
圖5為細(xì)辛根中馬兜鈴酸檢查圖。
圖6為馬兜鈴酸的限量檢查圖。
圖7為馬兜鈴酸的限量檢查10倍量圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1揮發(fā)油的氣相檢測(cè)法。
取60℃干燥的細(xì)辛100g，置1000ml燒瓶中，加水600ml，浸泡過夜，按《中國(guó)藥典》2000年版一部，提取8小時(shí)揮發(fā)油收集得到的揮發(fā)油置10ml量瓶，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，取0.4μl注入氣相-質(zhì)譜聯(lián)用色譜儀中，色譜條件為美國(guó)Finigan Trace GC-MS儀，DB-1MS(0.25×0.25×30)程序升溫初始溫度為60℃，保持3分鐘后10℃/min的速率升至230℃，保持20min，氣化室溫度260℃，分流比10∶1，載氣He，流速1ml/min，進(jìn)樣量0.4μl，電子轟擊(EI)離子流，高子能量70ev，離子流溫度230℃，質(zhì)量掃描范圍33u-500u，掃描速率1000amu/s，記錄40分鐘的色譜圖，以10批細(xì)辛為研究對(duì)象，得揮發(fā)油的氣相指紋圖譜，并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。其中1.側(cè)柏烯；2.α-蒎烯；3.莰烯；4.α-松油烯；5.β-蒎烯；6.香葉烯；7.α-水芹烯；8.3-蒈烯；9.對(duì)-聚傘花系；10.檸烯；11.γ-松油烯；12.α-異松油烯；13.優(yōu)葛縷酮；14.龍腦；15.愛革腦；16.3，5-二甲氧基甲苯；17.黃樟醚；18.甲基丁香酚；19.三甲氧基甲苯；20.β-古蕓烯；21.α-愈創(chuàng)木烯；22.β-愈創(chuàng)木烯；23.肉豆蔻醚；24.δ畢澄茄烯；25.asarone；26.反式-異欖香脂素；27.異-異欖香脂素。
其中3-蒈烯具有局部刺激作用，優(yōu)葛縷酮具有鎮(zhèn)咳平喘作用，甲基丁香酚具有解痙降溫作用。
實(shí)施例2揮發(fā)油的高效液相色譜檢測(cè)法。
將提取的揮發(fā)油精密吸取0.2ml置10ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，取10μl注入高效液相色譜儀中，色譜條件為日本島津公司LC-10AT色譜儀，島津SPD-10A型紫外-可見檢測(cè)器。大連依利特有限公司Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)色譜柱，乙睛-水(40-60)為流動(dòng)相，流速0.8ml/min，波長(zhǎng)250nm，記錄50分鐘色譜圖，以10批細(xì)辛為研究對(duì)象，得揮發(fā)油的高效液相指紋圖譜并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例3
馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。
供試品溶液的制備 取細(xì)辛藥材根、莖、葉粉末各1g，加甲醇-水(3∶1)溶液25ml，浸泡15min，超聲處理20min，濾過。濾液再以0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。
對(duì)照品溶液的制備 馬兜鈴酸對(duì)照品用甲醇-水(3∶1)溶液稀釋成0.45μg/ml的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。
取上述供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，注入HPLC。
日本島津公司LC-10AT色譜儀，島津SPD-10A型紫外-可見檢測(cè)器，大連依利特有限公司Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相0.05mol/L磷酸二氫鈉(含磷酸1ml/L)-乙腈(60∶40)，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)400nm，柱溫室溫，進(jìn)樣量10μl，馬兜鈴酸的理論塔板數(shù)不低4900。馬兜鈴酸對(duì)照品線性范圍及最低檢測(cè)限試驗(yàn) 馬兜鈴酸對(duì)照品用甲醇-水(3∶1)溶解并溶液稀釋成0.09mg/ml的溶液，搖勻，再稀釋，搖勻，精確吸取10μl，注入HPLC，測(cè)得線性范圍45-900μg。信噪比為3∶1時(shí)，馬兜鈴酸對(duì)照品最低檢測(cè)濃度為0.45μg/ml，最低檢出量為4.5ng。
上述來源的細(xì)辛的高效液相色譜圖中在馬兜鈴酸標(biāo)準(zhǔn)品峰相應(yīng)的位置上均無色譜峰，表明細(xì)辛中無馬兜鈴酸。
權(quán)利要求
1.無毒害中藥材遼細(xì)辛的檢測(cè)方法，其特征在于a揮發(fā)油的氣相檢測(cè)法；采用《中國(guó)藥典》2000年版一部揮發(fā)油提取法提取揮發(fā)油，經(jīng)環(huán)已烷溶解，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用色譜議中，繪制指紋圖譜，并制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析結(jié)果，得到甲基丁香酚、黃樟醚、肉豆蔻醚等28個(gè)峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％；b揮發(fā)油的高效液相色譜檢測(cè)法經(jīng)藥典法提取制得的揮發(fā)油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色譜議中，得到高效液相指紋圖譜；c馬兜鈴酸的檢測(cè)方法采用甲醇-水(3∶1)超聲提取30分鐘的溶液作為供試液，注入高效液相色譜儀，建立高效液相色譜馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種無毒害中藥材遼細(xì)辛的檢測(cè)方法，它具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。采用《中國(guó)藥典》2000年版一部揮發(fā)油提取法提取揮發(fā)油，經(jīng)環(huán)己烷溶解，注入氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用色譜議中，繪制指紋圖譜，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析結(jié)果，得到甲基丁香酚、黃樟醚、肉豆蔻醚等28個(gè)峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％；經(jīng)藥典法提取制得的揮發(fā)油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色譜議中，得到高效液相指紋圖譜；采用甲醇－水(3∶1)超聲提取30分鐘的溶液作為供試液，注入高效液相色譜儀，建立高效液相色譜馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。本發(fā)明對(duì)于確定規(guī)范化種植的無毒害中藥材遼細(xì)辛的質(zhì)量提供了保證。制定了切實(shí)可行的馬兜鈴酸的檢測(cè)方法。
文檔編號(hào)G01N30/88GK1570625SQ20041002047
公開日2005年1月26日 申請(qǐng)日期2004年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月27日
發(fā)明者孫啟時(shí), 賈凌云 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)