專利名稱：一種利用菲律賓蛤仔檢測海洋環(huán)境中三丁基氧化錫的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在環(huán)境保護、生態(tài)監(jiān)測以及水產(chǎn)品養(yǎng)殖、出口和加工等領(lǐng)域中使用的檢測方法，即利用海洋底棲無脊椎動物—菲律賓蛤仔對海洋環(huán)境中存在的內(nèi)分泌干擾物—三丁基氧化錫的富集作用，采用氣相色譜儀與電子俘獲檢測器來檢測海洋環(huán)境中微量或痕量的三丁基氧化錫。
背景技術(shù)：
隨著社會科技進步和工農(nóng)業(yè)的發(fā)展，人類制造的各種化學(xué)品在為人類帶來方便的同時也隨人類的活動而大量進入周圍環(huán)境。其中許多化學(xué)物質(zhì)具有干擾內(nèi)分泌系統(tǒng)的作用，從而影響生物的正常生命活動，它們被稱為環(huán)境內(nèi)分泌擾亂化學(xué)物(Endocrine disrupting chemicals，EDCs)或內(nèi)分泌干擾物、環(huán)境激素，包括三丁基氧化錫在內(nèi)的有機錫化合物就是一類典型的內(nèi)分泌干擾物。
有機錫化合物的大規(guī)模使用始于20世紀中期，主要用作塑料工業(yè)生產(chǎn)的穩(wěn)定劑和催化劑。隨著使用范圍的不斷擴大，大量有機錫化合物被用于工業(yè)、各種殺蟲劑、除草劑、紡織品防霉以及海洋船只防污(antifouling)涂料中。但到上世紀70年代中期，有機錫的強毒性便顯現(xiàn)出來，被認為是迄今為止由人為因素大量進人海水環(huán)境的最毒的化學(xué)品之一，因此已有許多個國家制定了相關(guān)法規(guī)對這類化合物的使用加以限制。但由于這種化合物可以在環(huán)境中長期滯留，而且有機錫作為更新?lián)Q代迅速的精細化工產(chǎn)品，是優(yōu)良的塑料穩(wěn)定劑及紡織品防霉劑，用途十分廣泛，其世界年消耗量與日俱增，造成的環(huán)境污染也日益嚴重。
據(jù)統(tǒng)計，我國年有機錫消耗量已達7500噸左右。目前我國港口水域有機錫污染問題相當嚴重，特別是近海、港灣和內(nèi)河港口，有機錫的污染是造成魚類、甲殼類和軟體類、水生生物以及藻類污染的主要因素之一。但是，目前對于三丁基氧化錫等環(huán)境激素的篩選和測試研究多集中于化學(xué)領(lǐng)域，而由于許多內(nèi)分泌干擾物在海洋環(huán)境中存在的濃度很小，需要發(fā)展微量或痕量化學(xué)物質(zhì)檢測技術(shù)和高精度儀器設(shè)備，否則難以檢測到。
軟體動物對有機錫化合物的敏感性已經(jīng)被眾多學(xué)者所證實，基于有機錫長期低劑量的生態(tài)效應(yīng)主要是通過生物積累或食物鏈放大產(chǎn)生，即軟體動物體內(nèi)污染物含量往往較周圍海水中高得多，從而引起其內(nèi)分泌擾亂的現(xiàn)象，世界許多國家和地區(qū)正在研究如何利用軟體動物建立一種生物監(jiān)測及快速檢測系統(tǒng)。菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum Adams et Reeve)又稱蛤仔，隸屬于軟體動物門，廣泛分布于我國南北沿海，資源蘊藏量很大，棲息密度高，是自然海區(qū)底棲生物群落常見優(yōu)勢種，具有分布廣泛、易獲得、易飼養(yǎng)等特點，而且基礎(chǔ)研究比較深入，易于取得其不同部位的組織，是用于環(huán)境激素生物檢測的較為理想的模式動物。但是，目前尚無利用菲律賓蛤仔檢測海洋環(huán)境中微量或痕量三丁基氧化錫的方法，所以開發(fā)建立這種靈敏、實用的生物檢測技術(shù)非常必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用海洋底棲無脊椎動物菲律賓蛤仔(RuditapesPhilippinarum，以下簡稱蛤仔)來檢測海洋環(huán)境中內(nèi)分泌干擾物三丁基氧化錫(TBTO)的方法，它能彌補現(xiàn)有技術(shù)的上述不足。
一種利用菲律賓蛤仔檢測海洋環(huán)境中三丁基氧化錫的方法，其特征是首先取樣，樣品為菲律賓蛤仔的器官—肝臟、鰓或外套膜；先將樣品勻漿，加水，再加入氯化鈉、濃鹽酸，反應(yīng)后再加入乙酸乙酯和正己烷混合液，振蕩，離心，取上清液，再加入硼氫化鈉乙醇溶液。對樣品做前處理后利用氣相色譜儀和電子俘獲檢測器檢測樣品中TBTO的含量。
本檢測方法的優(yōu)點是快速、簡便和靈敏，這是由于海洋底棲無脊椎動物菲律賓蛤仔的肝臟等器官對三丁基氧化錫有較強的富集能力、氣相色譜儀優(yōu)越的分離性能和微型電子俘獲檢測器良好的靈敏度。


附圖1為本發(fā)明方法測得的蛤仔器官中三丁基氧化錫含量隨取樣時間的變化。
附圖中的數(shù)值經(jīng)t檢驗，除肝臟第4周與第5周間差異較小外(p＝0.08)，其余各周數(shù)值間差異均顯著(p＜0.05)；對照組因均未檢出TBTO，故未在圖中標出。
具體實施例方式
1.將菲律賓蛤仔飼養(yǎng)子TBTO濃度為200ng/L(76.55ngSn/L)水體中，每周取出48只蛤仔用于檢測分析。其中菲律賓蛤仔產(chǎn)于青島近海，于實驗室馴養(yǎng)1～2周后進行TBTO毒理實驗。海水取自青島石老人海水浴場自然海區(qū)。TBTO為美國Aldrich公司生產(chǎn)，純度96％，分子式為C24H54OSn2。實驗進行5周，設(shè)3個平行組、3個對照組，每組50只蛤仔，水體20L，每24小時全換水，水中TBTO濃度維持不變。實驗期間餌料為新月菱形藻(Nitzschiaclosterium)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、青島大扁藻(Platymonashelgolandica Kylin var.tsingtaoensis)和湛江等鞭金藻(Isochrysiszhanjiangensis)。
2.取蛤仔的三種不同器官(肝臟、鰓、外套膜)各1g(按濕重計，用濾紙將各樣品表面海水及殘存組織液吸凈)，勻漿并對分裝好后的樣品以水補至10g，再向各樣品中分別加入氯化鈉1.5g、濃鹽酸1g，反應(yīng)10min；反應(yīng)完成后分別向其中加入乙酸乙酯及正己烷混合液5g(乙酸乙酯與正己烷的體積比為3∶2)；劇烈振蕩30min，隨后倒入20ml離心管中離心(3000rpm，10min)；3.離心后分別將上清液(每管約回收2ml)移入小燒杯中，并于40℃水浴上蒸干；殘余物用1ml無水乙醇溶解，并加入2.5％(重量百分濃度)的硼氫化鈉乙醇溶液1.58g，反應(yīng)10min；4.反應(yīng)完成后分別加入氯化鈉2.5g、水7.5ml，靜置10min；再向其中分別加入正己烷2.5ml，先振蕩后靜置；30min后分離出有機層；5.將各有機層上30×10mm硅膠柱，對樣品作凈化處理(硅膠需事先用正己烷溶脹并將層析柱充分平衡后再進行洗脫分離)，洗脫溶劑為正己烷。
6.將經(jīng)過凈化處理的樣品以氣相色譜儀與電子俘獲器聯(lián)用，按已知的方法檢測各樣品中TBTO的含量。操作條件如下進樣量1μl，進樣口溫度200℃，柱溫箱溫度100℃-240℃，10℃/min程序升溫，檢測器溫度250℃，載氣N2，流速1.5ml/min，色譜柱0.32mm×30m HP-5，運行時間10min。7.檢測結(jié)果見表1、圖1和表2。
表1.不同批次各組蛤仔臟器中TBTO含量(ng/g)

注1.首行各編號依次對應(yīng)第1～3實驗組和第1～3對照組；2.第二行中各字母分別表示D-肝臟，G-鰓，M-外套膜；3.“-”表示未檢出TBTO。
表2.菲律賓蛤仔三種器官對三丁基氧化錫的富集因子

注富集因子—菲律賓蛤仔臟器內(nèi)TBTO的濃度與周圍水環(huán)境中TBTO濃度的比值。
本發(fā)明中所述的向樣品加入水、氯化鈉和濃鹽酸的重量分別為樣品重量的8-10、1.3-1.7、0.8-1.2倍，反應(yīng)后加入的乙酸乙酯及正己烷混合液的重量為樣品重量的4-6倍。所述的硼氫化鈉乙醇溶液的濃度為2-3％，它的用量與蛤仔器官用量的重量比為1.5-1.7。
權(quán)利要求
1.一種利用菲律賓蛤仔檢測海洋環(huán)境中三丁基氧化錫的方法，其特征是首先取樣，樣品為菲律賓蛤仔的器官—肝臟、鰓或外套膜；先將樣品勻漿，加水，再加入氯化鈉、濃鹽酸，反應(yīng)后再加入乙酸乙酯和正己烷混合液，振蕩，離心，取上清液，再加入硼氫化鈉乙醇溶液。對樣品做前處理后利用氣相色譜儀和電子俘獲檢測器檢測樣品中TBTO的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的向樣品加入水、氯化鈉和濃鹽酸的重量分別為樣品重量的8-10、1.3-1.7、0.8-1.2倍，反應(yīng)后加入的乙酸乙酯及正己烷混合液的重量為樣品重量的4-6倍。所述的硼氫化鈉乙醇溶液的濃度為2-3％，它的用量與蛤仔器官用量的重量比為1.5-1.7。
全文摘要
一種利用菲律賓蛤仔檢測海洋環(huán)境中三丁基氧化錫的方法，其特征是首先取樣，樣品為菲律賓蛤仔的器官——肝臟、鰓或外套膜；先將樣品勻漿，加水，再加入氯化鈉、濃鹽酸，反應(yīng)后再加入乙酸乙酯和正己烷混合液，振蕩，離心，取上清液，再加入硼氫化鈉乙醇溶液。對樣品做前處理后利用氣相色譜儀和電子俘獲檢測器檢測樣品中TBTO的含量。本檢測方法的優(yōu)點是快速、簡便和靈敏，這是由于海洋底棲無脊椎動物菲律賓蛤仔的肝臟等器官對三丁基氧化錫有較強的富集能力、氣相色譜儀優(yōu)越的分離性能和微型電子俘獲檢測器良好的靈敏度。
文檔編號G01N30/00GK1603816SQ200410036078
公開日2005年4月6日 申請日期2004年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月11日
發(fā)明者朱麗巖, 齊亞超, 劉光興 申請人:中國海洋大學(xué)