專利名稱：一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，該方法通過(guò)定量檢測(cè)存在于血清/血漿中凝溶膠蛋白(gelsolin)含量，無(wú)創(chuàng)性地輔助胰腺癌的早期發(fā)現(xiàn)。
背景技術(shù)：
胰腺癌是一種兇險(xiǎn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病隱匿，預(yù)后差。近10年來(lái)其發(fā)病率和死亡率呈上升的趨勢(shì)，根據(jù)中國(guó)疾病監(jiān)測(cè)指示系統(tǒng)的報(bào)告，1991年至2000年我國(guó)胰腺癌的死亡率由2.18/10萬(wàn)上升到3.26/10萬(wàn)，胰腺癌是我國(guó)因癌癥死亡的第5-7位常見(jiàn)惡性腫瘤。在美國(guó)，2003年新增胰腺癌病人30,700人，因胰腺癌死亡30,000人，位居惡性腫瘤死亡的第四位。胰腺癌早期一般沒(méi)有癥狀。當(dāng)腫瘤向周?chē)K器浸潤(rùn)，出現(xiàn)腹脹、背痛甚至黃疸等癥狀時(shí)，大部分病人已經(jīng)出現(xiàn)局部血管、臟器或淋巴結(jié)的侵犯或轉(zhuǎn)移，喪失了根治切除的機(jī)會(huì)，而化療、放療對(duì)胰腺癌的控制也不能很有效地延長(zhǎng)生命。目前，胰腺癌總的5年存活率僅為3-5％，確診后的中位生存時(shí)間＜6個(gè)月。然而對(duì)于局限在胰腺內(nèi)的、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的小胰腺癌(直徑＜3cm)實(shí)行根治性切除后，5年存活率可達(dá)40％，中位生存時(shí)間延長(zhǎng)至32個(gè)月。因此能否實(shí)現(xiàn)對(duì)胰腺癌的早期診斷是胰腺癌防治中的關(guān)鍵所在。
尋找胰腺癌特異的生物標(biāo)志分子一直是胰腺癌研究的重要內(nèi)容。Rosty等使用表面增強(qiáng)激光解吸離子化質(zhì)譜技術(shù)從胰液中發(fā)現(xiàn)了稱為肝癌-小腸-胰腺/胰腺炎相關(guān)蛋白I。在胰腺癌患者的胰液中該蛋白含量明顯升高，其輔助胰腺癌診斷的敏感性和特異性分別為75％和87％。由于采集人體胰液具有一定的危險(xiǎn)性，該方法不適合用于常規(guī)臨床檢查。目前用于胰腺癌輔助診斷的血清腫瘤標(biāo)志物有10余種，其中最常用的CA19-9，診斷胰腺癌的敏感性和特異性約為70％和60％。但是，由于CA19-9是Lewis血型抗原標(biāo)志，在人群中約有5％-10％Lewis血型抗原陰性者不分泌CA19-9，因此CA19-9輔助診斷胰腺癌的應(yīng)用具有局限性。尋找特異性和敏感性高的血清/血漿腫瘤相關(guān)標(biāo)志物分子，對(duì)胰腺癌早診、早治很有必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，該方法可以測(cè)定人血清中凝溶膠蛋白含量，血清凝溶膠蛋白含量明顯降低可以作為一個(gè)血清學(xué)標(biāo)志分子，無(wú)創(chuàng)性地輔助胰腺癌診斷，早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌。
本發(fā)明的目的是采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，通過(guò)定量免疫印記法檢測(cè)人血清/血漿中凝溶膠蛋白濃度，根據(jù)所述凝溶膠蛋白含量降低的水平無(wú)創(chuàng)性地輔助早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌，其具體步驟是A、采集病人手術(shù)前的血清，使用1×磷酸鹽緩沖液稀釋50倍后制成待測(cè)血清樣品；B、將已知濃度的人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，按照一定濃度梯度與所述待測(cè)血清樣品共同經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，其中，每塊含有所述待測(cè)血清樣品的膠上至少含有4個(gè)泳道連續(xù)濃度的所述人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品；C、通過(guò)電轉(zhuǎn)移將經(jīng)過(guò)分離的蛋白質(zhì)從所述的膠上轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上，該膜經(jīng)脫脂牛奶封閉后，用抗人凝溶膠蛋白抗體進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)，反應(yīng)信號(hào)經(jīng)化學(xué)發(fā)光、放大，并在暗室內(nèi)對(duì)X光片曝光，形成凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片；D、使用掃描儀對(duì)凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片掃描，用圖像分析軟件根據(jù)已知凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品含量信號(hào)強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)計(jì)算出同一塊膠上所述待測(cè)血清樣品中未知的凝溶膠蛋白含量。
本發(fā)明的有益效果是通過(guò)建立檢測(cè)病人血清中凝溶膠蛋白(gelsolin)含量的定量免疫印跡方法，準(zhǔn)確測(cè)定血清凝溶膠蛋白含量。該方法簡(jiǎn)便、快捷、患者易于接受，對(duì)輔助胰腺癌診斷有較高的敏感性和特異性，也為胰腺癌高危人群篩查提供了一種新的、無(wú)創(chuàng)性的檢查方式。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
圖1血清凝溶膠蛋白含量的計(jì)算方法圖2血清凝溶膠蛋白平均含量的計(jì)算圖3血清凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制具體實(shí)施方式
一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，通過(guò)定量免疫印記法檢測(cè)人血清/血漿中凝溶膠蛋白(gelsolin)濃度，根據(jù)所述凝溶膠蛋白含量降低的水平無(wú)創(chuàng)性地輔助早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌，其具體步驟是A、采集病人血清用不含任何抗凝劑的真空采血管(Greiner-Bio One，F(xiàn)rickenhausen，Germany)采集病人清晨空腹血液樣本4毫升，在4℃下經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘，于冰上分離血清。血清分裝于多個(gè)0.5毫升的離心管中，于干冰上速凍后立即轉(zhuǎn)-80℃冰箱保存。使用時(shí)從冰箱中取出，在冰上自然融化后，用1×磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，簡(jiǎn)稱PBS)稀釋50倍后制成待測(cè)血清樣品；B、用1×PBS稀釋人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品至5微克/毫升，制成已知濃度的人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品；將已知濃度的人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清樣品共同經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gelelectrophoresis，簡(jiǎn)稱SDS-PAGE)分離蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清樣品在2×SDS凝膠加樣緩沖液中，經(jīng)100℃加熱10分鐘處理后，加入SDS-PAGE加樣孔。每塊膠上含有由4種連續(xù)遞增濃度的標(biāo)準(zhǔn)凝溶膠蛋白泳道(即每泳道上樣量分別為1微克/毫升；2微克/毫升；3微克/毫升；3.5微克/毫升)和數(shù)個(gè)1∶50稀釋的待測(cè)病人血清樣品(每泳道上樣5微升)。凝膠置于垂直蛋白質(zhì)電泳儀(mini-protein III，Bio-Rad Laboratories)上，在100-120伏恒壓條件下使標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)在同一塊膠上和完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下分離；C、電泳后將已分離的蛋白從凝膠上通過(guò)電轉(zhuǎn)膜儀(mini-transblot cell，Bio-Rad Laboratories)在4℃、110伏恒壓條件下轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜(polyvinylidene difluoride，簡(jiǎn)稱PVDF膜)，轉(zhuǎn)膜1小時(shí)；含有樣品的PVDF膜經(jīng)1×PBS稀釋的10％脫脂牛奶(安怡長(zhǎng)青高鈣脫脂奶粉)于4℃封閉3小時(shí)。用抗人凝溶膠蛋白抗體在膜上進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)加入1∶1000稀釋的小鼠抗人凝溶膠蛋白單克隆抗體(BD Biosciences Pharmingen)室溫孵育2-3小時(shí)；洗膜液洗膜，5分鐘/次，共洗3次；加入1∶3000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG(Santa Cruz Biotechnology)室溫孵育1小時(shí)；洗膜液洗膜，5分鐘/次，共洗5次；加入化學(xué)發(fā)光試劑ECL(Santa CruzBiotechnology)放大凝溶膠蛋白印跡信號(hào)，在暗室內(nèi)對(duì)X光片(Kodak X-Omat V.Film)曝光(每張膜至少選3種不同曝光時(shí)間，曝光3次以上)，經(jīng)顯影、定影后形成凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片，見(jiàn)圖1中的A部。圖中顯示出梯度稀釋的凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(一塊膠上至少有連續(xù)4個(gè)不同濃度)與待測(cè)血清樣品在同一膠上使蛋白質(zhì)分離，并用凝溶膠蛋白抗體做特異性免疫印跡分析。結(jié)果顯示，血清中凝溶膠蛋白分子量為93kDa，N113、N115和N116為正常血清樣品；P16、P57和P118為胰腺癌血清樣品。用人血清中相對(duì)恒定表達(dá)的轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin，分子量為80kDa)含量作為血清樣本上樣量的內(nèi)對(duì)照。
D、用掃描儀(N-TEK NuScan 900)掃描凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片，用圖像分析軟件Quantity One 4.4.1(Bio-Rad Laboratories)根據(jù)已知凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品含量信號(hào)強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。只有當(dāng)已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品與其對(duì)應(yīng)的蛋白印跡強(qiáng)度呈線性分布時(shí)(r＞0.94)，方可繪制二者之間線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線反之，如果r≤0.94，表示標(biāo)準(zhǔn)曲線不可信。進(jìn)一步在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，定量分析同一膠上待測(cè)血清的蛋白印跡強(qiáng)度，換算出凝溶膠蛋白含量。
參見(jiàn)圖2所示，為了減小由于曝光時(shí)間不同對(duì)蛋白量與印跡強(qiáng)度間線性關(guān)系影響的實(shí)驗(yàn)誤差，分別計(jì)算三次不同曝光時(shí)間下凝溶膠蛋白含量，并取平均值作為待測(cè)樣本中凝溶膠蛋白的最終含量。
參見(jiàn)圖1中的B部，圖中顯示根據(jù)凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白含量及其對(duì)應(yīng)印跡信號(hào)強(qiáng)度，用Quantity One 4.4.1軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)待測(cè)血清樣本凝溶膠蛋白免疫印跡信號(hào)強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)計(jì)算出待測(cè)血清樣本中凝溶膠蛋白含量。橫坐標(biāo)為蛋白印跡強(qiáng)度(像素/平方毫米)，縱坐標(biāo)為蛋白濃度(微克/毫升)。Std1-Std4為凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，N113、N115和N116為正常血清樣本；P16、P57和P118為胰腺癌血清樣品。
圖2顯示血清中凝溶膠蛋白平均含量的計(jì)算方法。圖中的A部、B部、C部、D部、E部和F部代表六次實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由于曝光時(shí)間的不同對(duì)蛋白含量與蛋白印跡強(qiáng)度之間的線性關(guān)系有一定的影響，為了減小實(shí)驗(yàn)誤差，每次實(shí)驗(yàn)取三種不同曝光時(shí)間對(duì)X光片曝光(曝光時(shí)間1、2、3)，分別計(jì)算三次不同曝光時(shí)間的血清樣本凝溶膠蛋白的平均含量，作為待測(cè)樣品中凝溶膠蛋白最終含量。
結(jié)果判定待測(cè)血清樣品中凝溶膠蛋白的含量降低，低于191.15mg/L時(shí)，提示該患者可能患有胰腺癌，需高度注意。
在本實(shí)施例中，需要提供一個(gè)已知濃度的人血漿凝溶膠蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)產(chǎn)生如下將已知濃度(1毫克/毫升)的人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自Cytoskeleton公司，美國(guó)Denver，CO)用1×PBS稀釋至5微克/毫升，并呈梯度遞增加樣，使每泳道標(biāo)準(zhǔn)品上樣量分別為1微克/毫升、1.5微克/毫升、2微克/毫升、2.5微克/毫升、3微克/毫升和3.5微克/毫升。在每一批實(shí)驗(yàn)中至少含有4個(gè)連續(xù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和數(shù)個(gè)1∶50稀釋的待測(cè)血清(每泳道上樣5微升)樣本在2×SDS凝膠加樣緩沖液中經(jīng)100℃加熱10分鐘后，SDS-PAGE凝膠置于垂直蛋白質(zhì)電泳儀(mini-protein III，Bio-Rad Laboratories)上，在100-120伏恒壓條件下使標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)在同一塊膠上和完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下按分子量大小分離；通過(guò)電轉(zhuǎn)膜儀(mini-transblot cell，Bio-Rad Laboratories)在4℃、110伏恒壓條件下，將電泳后的蛋白從凝膠上轉(zhuǎn)移至PVDF膜(轉(zhuǎn)膜1小時(shí))。含有樣本的PVDF膜經(jīng)1×PBS稀釋的10％脫脂牛奶(安怡長(zhǎng)青高鈣脫脂奶粉)于4℃封閉3小時(shí)。加入1∶1000稀釋的小鼠抗人凝溶膠蛋白單克隆抗體(BD BiosciencesPharmingen)室溫孵育2-3小時(shí)；洗膜液洗膜，5分鐘/次，共洗3次；加入1∶3000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG(Santa Cruz Biotechnology)室溫孵育1小時(shí)；洗膜液洗膜，5分鐘/次，共洗5次；加入化學(xué)發(fā)光試劑ECL(SantaCruz Biotechnology)放大凝溶膠蛋白印跡信號(hào)，在暗室內(nèi)對(duì)X光片(KodakX-Omat K Film)曝光(每張膜至少選3種不同曝光時(shí)間，曝光3次以上)，經(jīng)顯影、定影后形成凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片，參見(jiàn)圖3中的A部。
凝溶膠蛋白印跡結(jié)果經(jīng)掃描儀(N-TEK NuScan 900)掃描，使用圖像分析軟件Quantity One 4.4.1(Bio-Rad Laboratories)根據(jù)已知凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品含量和對(duì)應(yīng)的印跡信號(hào)強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。只有當(dāng)已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品與其對(duì)應(yīng)的蛋白印跡強(qiáng)度呈線性分布時(shí)(r＞0.94)，方可繪制二者之間線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
圖3中的A部顯示凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品呈梯度遞增加樣后的免疫印跡結(jié)果。每泳道標(biāo)準(zhǔn)品上樣量分別為1微克/毫升、1.5微克/毫升、2微克/毫升、2.5微克/毫升、3微克/毫升和3.5微克/毫升等；圖3中的B部顯示使用Quantity One 4.4.1軟件繪制凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白濃度與其對(duì)應(yīng)的蛋白印跡強(qiáng)度之的標(biāo)準(zhǔn)曲線(r＝0.996)。橫坐標(biāo)為蛋白印跡強(qiáng)度，即每平方毫米面積中的平均像素?cái)?shù)(pixel/mm2)，縱坐標(biāo)為蛋白濃度，即每毫升體積含蛋白質(zhì)的微克數(shù)(μg/ml)。
本實(shí)施例中所用液體配方如下1、1×PBS(pH7.4)137mM NaCl，2.68mM KCl，10mM Na2HPO4，1.76mM KH2PO4。
2、2×SDS凝膠加樣緩沖液100mM Tris-HCl，pH6.8，200mM DTT，4％SDS，0.2％溴酚藍(lán)，20％甘油。
3、Tris-甘氨酸電泳緩沖液25mM Tris，250mM甘氨酸，pH8.3，0.1％SDS。
4、轉(zhuǎn)膜液25mM Tris，192mM甘氨酸，20％甲醇，pH8.3。
5、洗膜液20mM Tris-HCl，pH7.5，200mM NaCl，0.1％Tween-20。
本發(fā)明建立檢測(cè)病人血清中新的胰腺癌血清學(xué)標(biāo)志分子——凝溶膠蛋白含量的定量免疫印跡方法，準(zhǔn)確測(cè)定血清凝溶膠蛋白含量對(duì)早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌具有重要意義。通過(guò)定量免疫印跡方法檢測(cè)了血漿型凝溶膠蛋白(gelsolin)在65例胰腺導(dǎo)管腺癌、34例消化系統(tǒng)其它惡性腫瘤(包括食管癌6例、胃癌6例、結(jié)直腸癌5例、十二直腸癌5例、膽囊癌4例、膽管癌3例和胰島細(xì)胞瘤5例)、11例胰腺良性疾病(慢性胰腺炎5例、假性囊腫3例和良性腺瘤3例)和54例正常人血清中的表達(dá)水平。胰腺癌病人血清中凝溶膠蛋白的平均含量為155.24±44.29mg/L，顯著低于正常人血清凝溶膠蛋白平均含量224.44±42.92mg/L；消化系統(tǒng)其它惡性腫瘤病人平均血清凝溶膠蛋白含量為212.10±60.35mg/L；胰腺良性疾病病人血清凝溶膠蛋白含量為203.74±26.70mg/L(P＜0.001)。而且，血清凝溶膠蛋白含量不受血清中其它成分，如白蛋白、膽紅素等的影響，比較穩(wěn)定。受試者工作特征(receiveroperating characteristic，ROC)曲線顯示，以血清凝溶膠蛋白濃度≤191.15mg/L為標(biāo)準(zhǔn)，用血清凝溶膠蛋白含量檢測(cè)胰腺癌的敏感性為78.5％，特異性為72.7％，可以作為胰腺癌的一個(gè)血清學(xué)輔助診斷標(biāo)志分子。
權(quán)利要求
1.一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，其特征在于通過(guò)定量免疫印記法檢測(cè)人血清/血漿中凝溶膠蛋白濃度，根據(jù)所述凝溶膠蛋白含量降低的水平無(wú)創(chuàng)性地輔助早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，其特征在于A、采集病人手術(shù)前的血清，使用1×磷酸鹽緩沖液稀釋50倍后制成待測(cè)血清樣品；B、將已知濃度的人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，按照一定濃度梯度與所述待測(cè)血清樣品共同經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，其中，每塊含有所述待測(cè)血清樣品的膠上至少含有4個(gè)泳道連續(xù)濃度的所述人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品；C、通過(guò)電轉(zhuǎn)移將經(jīng)過(guò)分離的蛋白質(zhì)從所述的膠上轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上，該膜經(jīng)脫脂牛奶封閉后，用抗人凝溶膠蛋白抗體進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)，反應(yīng)信號(hào)經(jīng)化學(xué)發(fā)光、放大，并在暗室內(nèi)對(duì)X光片曝光，形成凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片；D、使用掃描儀對(duì)凝溶膠蛋白印跡結(jié)果X光片掃描，用圖像分析軟件根據(jù)已知凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品含量信號(hào)強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)計(jì)算出同一塊膠上所述待測(cè)血清樣品中未知的凝溶膠蛋白含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種胰腺癌血清標(biāo)志分子的檢測(cè)方法，通過(guò)定量免疫印記法檢測(cè)人血清/血漿中凝溶膠蛋白濃度，根據(jù)所述凝溶膠蛋白含量降低的水平無(wú)創(chuàng)性地輔助早期發(fā)現(xiàn)胰腺癌。人血漿凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，按照一定濃度梯度稀釋后與待測(cè)血清樣本總蛋白共同經(jīng)SDS－PAGE分離，將分離的蛋白從凝膠上轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。含有樣本的PVDF膜與抗人凝溶膠蛋白抗體做免疫印跡反應(yīng)，印跡信號(hào)經(jīng)化學(xué)發(fā)光、放大后使X光片曝光。印跡結(jié)果掃描后在圖像分析軟件輔助下，繪制凝溶膠蛋白標(biāo)準(zhǔn)品含量與印跡強(qiáng)度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)計(jì)算出同一凝膠上待測(cè)血清樣品的凝溶膠蛋白含量。該方法簡(jiǎn)便、快捷，易于被患者接受，對(duì)輔助胰腺癌診斷有較高的敏感性和特異性。
文檔編號(hào)G01N23/04GK1746676SQ20041007430
公開(kāi)日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2004年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月8日
發(fā)明者趙曉航, 倪曉光, 趙平 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所