專利名稱：同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗的裝置和方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于側向-對角流多參數(shù)試驗的裝置，尤其用于免疫血液病學和傳染血清學的領域，以對液體樣品中的多個分析物同時作定性或定量測定，該裝置包括至少一個膜，所述膜具有施加液體樣品的加樣區(qū)，至少兩個能與分析物互相作用的指示區(qū)，以及至少一個在液體通過指示區(qū)后吸收液體的吸收區(qū)，指示區(qū)位于加樣區(qū)和吸收區(qū)之間，其特征在于，從加樣區(qū)通過對應的指示區(qū)到吸收區(qū)的流動方向(流動軌跡)基本上平行，且存在至少兩個不同的流動軌跡。
本發(fā)明還涉及一種分析液體樣品中多個分析物的方法，該方法包括將樣品施加到本發(fā)明所述裝置的膜的加樣區(qū)上，其中，該樣品的存在量足以使待測液體通過指示區(qū)朝吸收區(qū)的方向流動，并使待測液體中的分析物或其衍生物在指示區(qū)內形成復合物，尤其用于同時測定細胞和血漿參數(shù)，優(yōu)選同時進行血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗，以及同時進行血型測定和輸血相關感染血清標記的測定，以及同時進行血型測定和測定直接抗紅細胞之外的血細胞的抗體，尤其是抗血小板和抗淋巴細胞抗體。
為防止發(fā)生并發(fā)癥，例如在輸血過程中，尤其是血型不合，病毒性和/或細菌性污染，已知需對供體和病人血液實施各種實驗室試驗，以便能提供在血型血清意義上與受體相容的組分，并且沒有已知的傳輸病原體。對應的血清試驗通常包括供體和受體血型測定，尤其是，ABO、Rh和Kell血型系統(tǒng)的血型，對供體和受體的血清交叉核對，對供體和受體不規(guī)則抗體實施的抗體檢測試驗，以及在受體中存在不規(guī)則抗體時的抗體識別。同樣地，在輸液和移植中需實施抗血小板和/或淋巴細胞的抗體的檢測。
對供體的傳染血清試驗包括已知方式的常規(guī)的抗體測定，尤其是，抗HIV-I、HIV-II，抗HCV，抗梅毒螺旋體(梅毒)。以及乙型肝炎表面抗原(＝HbsAg肝炎表面抗原)的測定。
在血型血清診斷學中，一般需試驗多個參數(shù)，它們特別地關聯(lián)到輸液或新生兒溶血病(Mhn)。這包括紅細胞表面上抗原的檢測，它們是血型的特征(血型測定)。此外，重要的抗原系統(tǒng)還存在于血小板、粒細胞、淋巴細胞，它們同樣地在輸液和移植中起到重要作用。在母親和胎兒之間的血小板和粒細胞抗原不一致性的情形中，新生兒可發(fā)生類似于Mhn的病理癥狀。此外，血清或血漿中的規(guī)則血型抗體(同種凝集素)和不規(guī)則血型抗體的檢測在這里也是實用的。
同種凝集素或規(guī)則抗體在人類誕生后就立即獲得，并對應于ABO系統(tǒng)的對應血型。它們抗個體本身所缺乏的血型抗原A或B，即，A血型的人具有抗-B，B血型的人具有抗-A，O血型的人具有抗-A和抗-B；AB血型的人沒有同種凝集素。規(guī)則的抗體也稱之為“完全的”，因為它們能夠在NaCl介質中直接凝集紅細胞。
與同種凝集素相比，不規(guī)則抗體或同種抗體是在晚期通過免疫獲得的，尤其是通過輸液或懷孕。為此原因，大多數(shù)人沒有不規(guī)則血型抗體。與輸液有關的不規(guī)則抗體一般是熱反應性的，且多數(shù)屬于IgG類。與規(guī)則抗體相反，它們不能夠在NaCl介質中直接凝集紅細胞。
眾所周知，為了測定血型，將待測的人體紅細胞(供體或受體)與含有血型特異性抗體的試劑放在一起。一般地，這些試驗在液體狀態(tài)下進行，其中，將含有紅細胞的樣品與含有抗特定血型特征的抗體的樣品混合，由此形成試驗的一批。然后，該試驗的一批在規(guī)定的時間內在規(guī)定的條件下進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)結束后，直接地或在離心步驟之后進行肉眼觀察或光學方法的試驗，以試驗紅細胞可能的凝集或吸附性。血型血清學的主要的終點測量仍然是血細胞凝集試驗。對于待測定的每個血型，必須用吸液管吸取單獨的一批，即，例如為測定九種最重要的血型A、B、D、C、c、E、e、Cw和K，需要九個單獨批次，其中不包括任何對照。
對于血清交叉核對，以已知的方式使用具有已知ABO血型(A1、A2、B、O)的細胞試劑，將它們與待測試的人血清或血漿一起進行培養(yǎng)。在離心分離步驟之后，用肉眼觀察或光學方法試驗紅細胞可能的凝集性。用上述試驗進行血清交叉核對時，細胞通常必須用吸液管吸取四批。
為了研究不規(guī)則的抗體，通常使用試驗板，試驗板包括兩種或三種血型O細胞，它們的組合抗原圖形包含最重要的抗原，尤其是，血型系統(tǒng)Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。細胞試劑與待測試人的血清或血漿放在一起并進行培養(yǎng)，在離心分離步驟之后，用肉眼方法或光學方法對紅細胞的任何凝血進行試驗。為測試一個病人的樣品，必須用吸液管吸取兩至三批。
為了鑒定不規(guī)則抗體，它們一般地在陽性抗體檢測試驗之后發(fā)生，使用包括多達16種血型O細胞的試驗板，它的抗原圖形涵蓋最重要的抗原，尤其是，以準確預定方式排列的血型系統(tǒng)Rh、Kell、Duffy、Kidd、MNS、P、Lewis、Lutheran。細胞試劑與待測試人的血清或血漿放在一起，用肉眼方法或光學方法對紅細胞的任何凝集進行試驗。為測試一個病人的樣品，必須用吸液管吸取多達16批。
由于大部分與輸液相關的不規(guī)則抗體是IgG型，因此不完全地，通常必須加強上述抗體檢測和識別反應以便能檢測血細胞凝集終點。用于此目的的最常用的試劑是多克隆抗-人球蛋白試劑，其中通常添加有抗-補體的抗體(通常為抗-C3d和/或抗-C3d)。
用來檢測血小板抗體的普通采用的方法是所謂的MAIPA試驗(血小板抗原的單克隆抗體固定(monoclonal antibody immobilization of platelet antigens))。在此情形中，將試驗血小板與待測血清一起培養(yǎng)。在沖洗步驟之后，用例如特異于特定血小板糖蛋白的單克隆小鼠抗體進行培養(yǎng)。然后溶解血小板并將稀釋的溶解產物加入涂布有例如羊抗-小鼠抗體的微量滴定板的反應皿中。羊抗-小鼠抗體結合鼠抗體及與其結合的血小板糖蛋白人抗體復合體。通過添加酶偶聯(lián)的羊抗-人IgG對人抗體進行試驗。
采用傳統(tǒng)的診斷試驗，只能測定細胞或血漿的參數(shù)。為了測定血液組分，總是需要首先從血漿中分離出細胞。
如今側向流試驗(lateral flow test)通常用作為快速試驗，例如妊娠試驗，用來確定感染標記或藥物篩選。已知方式的側向流試驗裝置包括剛性支承物，其上提供用于待測樣品的加樣區(qū)，分離膜，膜上結合有結合成分，例如捕獲抗體或抗原，并且可在膜上檢測結合反應，以及產生抽吸的吸收區(qū)，這使得待測樣品以線性的方式流過分離膜。
傳統(tǒng)的側向流試驗的試驗膜通常描述為包括層析法樣的分離。樣品中的分析物特異性結合到固定在膜內的結合成分，結合成分一般以連續(xù)或重疊的帶出現(xiàn)，作為指示區(qū)。結合復合體通過指示劑顆粒而可見，指示劑顆粒通常已經(jīng)以脫水形式存在于裝置中相配的釋放墊內。相配的釋放墊設置在加樣區(qū)和膜之間。用例如針對待測分析物的抗體涂布預涂布的有色指示劑顆粒。
傳統(tǒng)的側向流試驗模式對應于所謂的“夾心試驗”，其中，指示區(qū)以及指示劑顆粒用針對待測分析物(通常為抗體)的配體涂布。文中，配體(結合成分)固定在膜上。檢測試劑，通常是結合到著色的聚苯乙烯顆粒或膠體金屬的抗體，以可濾去的方式沉積在相配的釋放墊內。該結合復合體作為指示劑顆粒。一旦施加了待測樣品，它非?？斓貪櫇裣嗯涞尼尫艍|，從而指示劑顆粒可移動。指示劑顆粒沿著多孔膜隨液體前沿遷移。存在于樣品中的分析物變得被與指示劑顆粒偶聯(lián)的抗體經(jīng)結合。當樣品通過指示區(qū)時，由于分析物與結合在指示區(qū)內的抗體反應，指示區(qū)內的分析物/指示劑顆粒復合體被固定，產生可見信號。
另一已知的用于小分析物的試驗模式是所謂的“競爭性試驗”，所述小分析物只含有一個抗原決定簇，無法同時結合兩種抗體。結合到指示劑顆粒上的檢測試劑通常是與分析物相同的或類似的分子。指示劑顆粒沉積在相配的釋放墊上。指示劑顆粒沿著多孔膜隨液體前沿遷移。如果樣品含有分析物，且如果指示劑顆粒(其同樣有效地含有分析物)通過指示區(qū)，則樣品中的分析物分子部分結合到指示劑顆粒的部分。樣品中的分析物越多，則它將更有效地競爭結合指示劑顆粒，且信號將變得越弱。
根據(jù)現(xiàn)有技術，這些指示劑顆粒主要由膠體金或聚苯乙烯構成，并根據(jù)技術人員所熟知的方法進行制造和涂敷。在典型的側向流試驗模式中，間接測定分析物。文中，直接測定分析物表示分析物已經(jīng)自然地結合到指示劑顆粒(例如，紅細胞)。在間接測定分析物這種更為普通的情形中，待測樣品通常含有諸如血漿組分的非細胞結合組分作為分析物，除了待測樣品，還需要兩種反應試劑組分，即指示劑顆粒和結合成分。在間接測定中，分析物起初結合到從相配的釋放墊溶解出來的指示劑顆粒，然后，借助于第二反應用結合成分將此復合物固定在指示區(qū)。
當使用傳統(tǒng)的側向流試驗時，用已經(jīng)結合到諸如血型特異性抗原的待測分析物的紅細胞作為指示劑顆粒，目前通常在指示區(qū)內以連續(xù)或重疊條帶的形式提供針對作為結合成分的相應血型抗原的抗體，但只在一個流動軌跡內提供，例如，抗血型抗原A或B的抗-A或抗-B或者抗Rh血型系統(tǒng)抗原的抗體。這里，傳統(tǒng)的側向流試驗有這樣的缺點，即，結合到抗體上的紅細胞形成了阻止樣品中仍舊待測的分析物，如與抗原有關的其它細胞，的流動屏障。由于靠近加樣區(qū)的排列的結合成分帶內的細胞的聚集或吸收，其它分析物(尤其是待測樣品中的細胞或細胞碎片)不再無阻礙地和可見地被分離，因此不能不含糊地或完全地進行試驗。例如，在AB Rh D血型呈陽性的人中，這可導致減弱或消除B和D帶，它們可以導致一可解釋為血型A Rh為負的缺陷。為此原因，迄今為止不能在血型血清診斷學中使用具有一個以上指示區(qū)的側向流試驗。為了測定多個尤其是細胞的和血漿的血型參數(shù)，至此有必要單獨地實施單一的參數(shù)試驗。
本發(fā)明的一個目的是克服現(xiàn)有技術狀態(tài)中所涉及的諸多缺點，具體來說，為同時測定不同的樣品參數(shù)(尤其是細胞和血漿參數(shù))現(xiàn)有技術的傳統(tǒng)側向流試驗需連續(xù)的或重疊的指示區(qū)或試驗區(qū)域。
一方面通過同時定性或定量測定一個液體樣品或多個液體樣品中的一種或多種分析物的裝置來達到本發(fā)明的這個目的，該裝置包括至少一層膜，膜上具有用于涂布液體樣品的加樣區(qū)，至少一組能與分析物互相作用或分析物可與其發(fā)生反應的至少兩個指示區(qū)，以及一個在液體通過指示區(qū)后吸收液體的吸收區(qū)，其中，該指示區(qū)位于加樣區(qū)和吸收區(qū)之間，其特征在于，從加樣區(qū)通過一組對應的指示區(qū)到吸收區(qū)的流動方向基本平行，存在至少兩個不同的流動軌跡。
本發(fā)明所述裝置的指示區(qū)存在于膜上，并包含捕捉或結合樣品中待測分析物的結合成分。分析物和結合成分之間的結合反應在指示區(qū)內被檢測到。抗體或抗體片段、凝集素、抗原或抗原表位，和/或細胞或細胞碎片都固定到多孔膜，作為特別優(yōu)選的結合成分。指示區(qū)優(yōu)選各包含針對一種待測分析物的一種結合成分。
在本發(fā)明的一個實施方案中，指示區(qū)排列成對于每個流動軌跡，待測液體將流過至多一個指示區(qū)。例如，指示區(qū)以交叉的關系設置在膜上。指示區(qū)的這種排列最好構造成一排，其從近端到遠端對角地延伸，反之亦然。特定的例子是V形、W形、M形或N形，或倒置的V形、W形、M形或N形。在另一實施方案中，指示區(qū)交叉地平行并排排成一排。
提供交叉的指示區(qū)對于多參數(shù)試驗是先決條件，使紅細胞在側向排列中作為指示劑顆粒。對角排列的特別優(yōu)選的實施方案提供了這樣的優(yōu)點所顯示的結果可以特別實用和容易讀取的方式應用于本發(fā)明的裝置；因為待測試的各參數(shù)占據(jù)一規(guī)定的X和Y位置，所以，根據(jù)本發(fā)明裝置的結構可被看作為一具有縱坐標(流動方向的平面)和橫坐標(加樣區(qū)的平面)的坐標系。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，指示區(qū)的一個以上的這樣的排最好各從近端到遠端對角方向地延伸，反之亦然，或者，例如，其是V形、W-、M-或N形，或倒置的V形、W-、M-或N形，沿流動方向延伸，相繼地和/或側向地交叉，各排的指示區(qū)以間隔開的關系排列，以使對于各流動軌跡的待測液體流過不多于一單一指示區(qū)，或者各排的指示區(qū)彼此接觸地延伸，以使對于各流動軌跡的待測液體流過一個以上的指示區(qū)。
一個以上這樣的指示區(qū)，例如，具有離加樣區(qū)不同距離的兩排指示區(qū)在以下情形中特別具有優(yōu)點，即從一全血樣品中測定細胞和血漿的參數(shù)。在一實施方案中，例如，在一含有全血作為樣品的試驗一批中，選擇結合成分，以使流過裝置從加樣區(qū)通過指示區(qū)到吸收區(qū)的包含在血漿中的分析物(例如，各種類型的抗體)，變得結合到靠近加樣區(qū)排列的成排的指示區(qū)內的結合成分。另一方面，選擇用來檢測細胞結合分析物(例如，紅細胞抗原)的結合成分，以使它們變得結合到遠離加樣區(qū)排列的成排的指示區(qū)內的結合成分。在該優(yōu)選的實施方案中，除了紅細胞之外，優(yōu)選操作另一類型的指示劑顆粒，最好是膠體金或聚苯乙烯，或固定的紅細胞。使用這些指示劑顆粒是特別為了在指示區(qū)內的結合復合體中可見那些未結合到紅細胞上的分析物，例如，在血漿中自由發(fā)生的抗體。例如，如果使用兩種類型的指示劑顆粒，其中一個不是紅細胞，則兩排的指示區(qū)可并排地排列而彼此接觸，或其后成一單一的流動軌跡。這里的該結構具有這樣的優(yōu)點，其中，血漿的待測試的分析物在近端的指示區(qū)內檢測，而結合紅細胞的分析物在遠端的指示區(qū)內檢測。本發(fā)明的一實施方案包括如上所述的一排以上的指示區(qū)，其中，各排的結合成分反應或結合到紅細胞而起作指示劑顆粒，指示區(qū)的各排保持彼此間隔開的關系，或位于一單一的流動軌跡內且不連續(xù)。
在另一特別優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案中，指示區(qū)的一個以上的這樣的排最好在從近端到遠端對角方向延伸的一排中設置，反之亦然，或者，例如，其是呈V形、W-、M-或N形方式延伸的排，或是倒置的V形、W-、M-或N形排，或甚至是相對于一中心的加樣區(qū)以交叉的關系雙向地(例如，彼此成180°角度)并排地平行延伸的排。這樣的結構特別在從全血樣品中測試細胞和血漿參數(shù)的情形中具有優(yōu)點。
在一實施方案中，例如，在包括全血作為樣品的試驗一批中，選擇結合成分，以使從加樣區(qū)通過指示區(qū)流到吸收區(qū)的包含在血漿中的分析物(例如，各種類型的抗體)，變得結合到設置在加樣區(qū)一側上的成排的指示區(qū)內的結合成分。另一方面，選擇用來檢測細胞地結合的分析物(例如，紅細胞抗原)的結合成分，以使它們變得結合到在加樣區(qū)相對側上排列的端部排的指示區(qū)的結合成分。在該優(yōu)選的實施方案的情形中，除了紅細胞之外，優(yōu)選操作另一類型的指示劑顆粒，最好是膠體金或聚苯乙烯。使用這些指示劑顆粒是特別為了在指示區(qū)內的結合復合體中可見那些未結合到紅細胞上的分析物，例如，在血漿中自由地發(fā)生的抗體。
在一優(yōu)選的實施方案中，加樣區(qū)還包括兩個不同孔隙率的不同的膜。在此優(yōu)選的實施方案中，除了紅細胞之外，優(yōu)選操作另一類型的指示劑顆粒，最好是膠體金或聚苯乙烯。使用這些指示劑顆粒是特別為了在指示區(qū)內的結合復合體中可見那些未結合到紅細胞上的分析物，例如，在血漿中自由發(fā)生的抗體。
在一特別優(yōu)選的實施方案中，加樣區(qū)包括一種膜或兩種不同孔隙率的不同的膜。此外，其中一種膜包括一排列在一密封元件和指示區(qū)之間的相配的墊。在此優(yōu)選的實施方案中，除了紅細胞之外，優(yōu)選操作另一類型的指示劑顆粒，最好是膠體金或聚苯乙烯。使用這些指示劑顆粒是特別為了在指示區(qū)內的結合復合體中可見那些未結合到紅細胞上的分析物，例如，在血漿中自由地發(fā)生的抗體。除了用于紅細胞之外，該類型的指示劑顆粒以干的形式存在于相配墊內。此外，相配墊小心顧及使紅細胞流動減緩。這在包括一單一共用的加樣區(qū)的雙向的結構中具有的這樣的效應沿一個方向保持優(yōu)化的條件以檢測細胞的特性，而沿相對方向保持優(yōu)化的條件以檢測血漿的特性。
借助于本發(fā)明的裝置，可提供側向流試驗，尤其是用于血液血清診斷學，借助于該裝置紅細胞可用作為指示劑顆粒，其中，在一單一的試驗一批中，在各待測樣品中，可同時地測定若干個細胞參數(shù)，具體來說，紅細胞抗原或抗原表位，血漿參數(shù)和/或血細胞特性，尤其可測定每個待測樣品的全血組分。此外，這樣可提供一試驗系統(tǒng)，其可特別容易地進行制造并可特別地用于少數(shù)的試驗系列而不需樣品準備，并且成本經(jīng)濟有效，但借助于該系統(tǒng)，可同時地測定待測一個樣品或多個樣品的各種細胞參數(shù)和/或血漿參數(shù)。
本發(fā)明的裝置在所有醫(yī)學診斷學領域內提供上述的優(yōu)點，其中，同時地測定不同的細胞參數(shù)和血漿參數(shù)，具體來說，在血型和傳染血清的領域中，在與輸血醫(yī)學相關的任何診斷學中，例如，對于同時進行血型測定，其中，特別地測定結合紅細胞的抗原或抗原表位，而對于血清交叉核對，其中，特別地測定規(guī)則抗體(同種凝集素)，和/或抗體檢測試驗，其中，特別地測定不規(guī)則抗體，例如，對于同時進行血型測定和與感染血清標記相關的輸液的檢測，例如，抗HIV-I、HIV-2、HCV、梅毒螺旋體的抗體，以及乙型肝炎病毒的表面抗原，以及同時進行血型測定和檢測抗諸如紅細胞的其它血細胞的抗體(尤其是抗血小板和抗淋巴細胞抗體)。
在本文中，可使用抗凝血處理的或天然的全血，其中，在試驗之前不必過度地將紅細胞和血清或血漿組分彼此分離。可以手工方式實施測定，即完全不使用儀器(包括電流)。
在根據(jù)本發(fā)明裝置的一優(yōu)選實施方案中，指示區(qū)優(yōu)選包括一排對加樣區(qū)成對角排列的指示區(qū)，抗體或抗體片段或凝集素存在于樣品中，它們捕捉或結合所有可能的血型系統(tǒng)的待測血型抗原和由此的起作其載體的細胞。抗體或抗體片段或抗抗原的凝集素，或抗原表位，具體來說，它們屬于ABO、Rh和Kell血型系統(tǒng)(例如，抗-A、抗-B、抗-D、抗-K)，它們在多孔的膜上的指示區(qū)內用作為優(yōu)選結合成分，優(yōu)選，位于其它指示劑排的遠端的一排中。
優(yōu)選將對照結合成分(對照＝ctl)施加到該排指示區(qū)的一個指示區(qū)內，優(yōu)選，在該排的所有其余指示區(qū)遠端的指示區(qū)內，其對通過指示區(qū)的樣品流動給予正確指示。對照結合成分優(yōu)選是多克隆的抗紅細胞抗體。
本發(fā)明裝置的該優(yōu)選實施方案包括另一排的指示區(qū)，優(yōu)選靠近加樣區(qū)排列，抗原或抗原表位捕捉或結合樣品中的規(guī)則的抗體。為此目的，A1、A2、B、O血型抗原或抗原表位，起作為優(yōu)選的結合成分，例如，將規(guī)定血型(A1、A2、B、O)的紅細胞的紅細胞膜或合成的血型物質施加到多孔的膜上。優(yōu)選，在該排指示區(qū)的一指示區(qū)中，優(yōu)選，在該排的所有其余指示區(qū)遠端的指示區(qū)內，施加對照結合成分(對照＝ctl)，它正確指示通過指示區(qū)的樣品流動。對照結合成分優(yōu)選是抗IgG的抗體。
本發(fā)明裝置的該優(yōu)選實施方案可以位于另一排的指示區(qū)內，優(yōu)選靠近加樣區(qū)，其包括抗原或抗原表位，它們捕捉或結合樣品中的不規(guī)則抗體或抗體片段。作為用于該目的的優(yōu)選的結合成分，不同血型O紅細胞準備的細膜、它們組合的抗原圖形覆蓋針對與重要的輸液相關的不規(guī)則抗體的那些抗原，所有這些固定到多孔的膜上。優(yōu)選，將正確指示通過指示區(qū)的樣品流動的對照結合成分(對照＝ctl)施加到該排指示區(qū)的一個指示區(qū)內，優(yōu)選，在該排的所有其余指示區(qū)遠端的指示區(qū)內。對照結合成分優(yōu)選是抗IgG的抗體。
在本發(fā)明裝置的另一優(yōu)選實施方案中，指示區(qū)優(yōu)選排列在加樣區(qū)遠端的一排指示區(qū)內，其包括抗體或抗體片段或凝集素，它們捕捉或結合血型測定中待測定的血型抗原和由此的承載這些抗原的樣品中的細胞?？贵w或抗體片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系統(tǒng)的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它們固定在多孔的膜上的指示區(qū)內用作為優(yōu)選結合成分，優(yōu)選，位于加樣區(qū)和其它指示劑排的遠端的一排中。
優(yōu)選，將正確指示通過指示區(qū)的樣品流動的對照結合成分(對照＝ctl)施加到該排指示區(qū)的一個指示區(qū)內，優(yōu)選，在該排的所有其余指示區(qū)遠端的指示區(qū)內。對照結合成分優(yōu)選是多克隆的抗紅細胞的抗體。
本發(fā)明裝置的該優(yōu)選實施方案包括另一排的指示區(qū)，其優(yōu)選靠近加樣區(qū)排列，血小板和/或淋巴細胞膜或膜部件起作結合成分，以檢測抗血小板/淋巴細胞抗體。
在本發(fā)明裝置的另一優(yōu)選的實施方案中，優(yōu)選位于加樣區(qū)遠端的一排指示區(qū)中的指示區(qū)包括抗體或抗體片段或凝集素，它們捕捉或結合血型測定中待測定的血型抗原，以及承載上述抗原的樣品中的細胞?？贵w或抗體片段或抗抗原的凝集素，或ABO血型系統(tǒng)的抗原表位，例如，抗-A、抗-B、抗-A和抗-B，它們附連在多孔的膜上的指示區(qū)內用作為優(yōu)選結合成分，優(yōu)選，位于加樣區(qū)和其它指示劑排的遠端的一排中。
優(yōu)選，在該排指示區(qū)的一指示區(qū)中，優(yōu)選，在該排的所有其余指示區(qū)遠端的指示區(qū)內施加對照結合成分(對照＝ctl)，其對通過指示區(qū)的樣品流動給予正確指示。對照結合成分優(yōu)選是多克隆的抗紅細胞的抗體。
本發(fā)明裝置的該優(yōu)選的實施方案包括位于另一排優(yōu)選靠近加樣區(qū)排列的指示區(qū)中的結合成分，其用來檢測傳染的試劑，尤其是，合成的肽或用重組DNA方法表達的重組抗原，它們包括在診斷上重要的各種標記表面蛋白的序列(抗體檢測)或針對感染物(表面)蛋白的抗體的序列(抗原檢測)。
由于本發(fā)明的裝置不再需要同時地測定樣品的細胞和血漿參數(shù)而對每個個別的測定實施單獨的吸液管的吸取，但相反，所有需要的參數(shù)可在一樣品中同時地測定，尤其是，在同時執(zhí)行血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗，以及同時執(zhí)行血型測定和與感染血清標記相關的輸液的測定的情形中，其中，可將血型測定與任何感染血清標記測定組合起來，以及在同時執(zhí)行血型測定和對抗紅細胞之外的血細胞的抗體測定中，尤其是，抗血小板和抗淋巴細胞的抗體。
這代表了該方法罕見的合理性。除了具有同時測定許多血清參數(shù)的優(yōu)點之外，與傳統(tǒng)的試驗相比，應提一下樣品準備的事實上的全部冗余性。對角圖形中表示的結果讀取同樣更具優(yōu)點。因此，在本發(fā)明的裝置中，可在裝置中平行地進行測定和讀取，例如，尤其是ABO特征的血型和血清交叉核對以及抗體檢測試驗，或者尤其是ABO特征的血型和其它免疫血液病學參數(shù)，尤其是抗血小板和/或抗淋巴細胞抗體或其片段，或尤其是ABO特征的血型和感染血清標記，尤其是抗細菌和/或病毒試劑的抗體或其片段，或病毒性或細菌性抗原或抗原表位。
二維平面顯示以及穩(wěn)定的反應終點，不僅便于肉眼讀取而且用傳統(tǒng)的顯示分析方法自動讀取結果，例如，CCD照相機。甚至在執(zhí)行手工評估時也可減少花費的工作量。本發(fā)明的裝置還導致減小對環(huán)境的影響，并有利于成本降低。即使在時間緊迫的緊急情形中，也可在短時間內在一單一試驗裝置中對不規(guī)則抗體實施一完全的ABO血型測定和血清交叉核對及抗體檢測試驗，例如，完全ABO血型測定和感染血清標記測定或抗血小板/淋巴細胞抗體測定。
從生產技術的觀點來看，側向-對角流圖形較之于現(xiàn)有技術狀態(tài)提供了相當?shù)膬?yōu)點，鑒于在一單一裝置內提供多個試驗參數(shù)，這在過去必須單獨地進行試驗，所以大大地減少所用試劑的消耗量。
由于本發(fā)明的裝置，尤其是對于免疫的血液病學和傳染的血清診斷學提供了一種側向流動試驗，借助于該試驗，在一單一的試驗批中，可根據(jù)試驗的樣品同時測定若干細胞尤其是紅細胞的抗原或抗原表位、血漿參數(shù)和/或血細胞特性(尤其是全血組分)，其使用至少兩種類型的指示劑顆粒，其中至少一種類型由紅細胞表示。此外，由此可提供一種成本經(jīng)濟的試驗系統(tǒng)，其能以可能的最簡單的方式進行操作，以少的試驗循環(huán)容易地進行生產，不需樣品的準備，借助于該系統(tǒng)，可同時地測定樣品的不同的細胞參數(shù)和/或血漿參數(shù)(尤其是血型特征)，檢測抗血小板和/或淋巴細胞的規(guī)則的和不規(guī)則的抗體，和/或感染血清標記(尤其是與輸液醫(yī)學相關的那些標記物)。
本發(fā)明所述裝置的膜是多孔膜。優(yōu)選的膜材料是硝酸纖維素(例如，Sartorius的UniS-art，Millipore的HiFlow，Whatman，Schleicher & Schüell的AE99或FF85/100)、聚乙烯(Porex Corporation的Lateral Flo)或尼龍(CUNO的Novalon)。該膜優(yōu)選具有最大可能的孔尺寸，因為膜的高孔隙率便于待測樣品的細胞組分(例如，紅細胞)流入多孔的結構內。使用吸收的膜特別地有利。然而，本發(fā)明的裝置不局限于這樣的特性。優(yōu)選是所有的膜都具有高毛細管流速(毛細管速度)，其中，毛細管流量代表染料溶液為在給定膜上通過四十毫米所需要的時間。特別優(yōu)選的是具有小于100的毛細管流量的膜。
在使用兩種不同膜的雙向實施方案中，一種膜優(yōu)選具有較高的毛細管流量，優(yōu)選小于100，而另一種膜優(yōu)選具有較低的毛細管流量，優(yōu)選大于100。
在本發(fā)明的一優(yōu)選實施方案中，一密封元件設置在位于根據(jù)本發(fā)明裝置的加樣區(qū)下游的多孔膜上?？墒褂枚S或三維的密封元件，它們放置在多孔膜上，借助于密封元件，樣品的加樣區(qū)與多孔膜的其余表面分離。根據(jù)本發(fā)明，密封元件主要具有液體屏障的作用，并允許在多孔膜內定向分布待測液體和試驗試劑。此外，本發(fā)明的密封元件密封樣品的加樣區(qū)，以便防止液體無意地進入側向流裝置的其余部分內。
密封元件的優(yōu)選實施方案是絲網(wǎng)形狀或槽形狀或漏斗形狀。密封元件的形狀通過從用于密封元件生產的材料中切割下的過程而發(fā)生。在漏斗或槽形狀的情形中，密封元件設置有一內孔，其優(yōu)選改型是圓形、方形或矩形，并在漏斗形狀的情形中，朝向密封元件的底側(膜接觸側)呈現(xiàn)錐形。
用于密封元件的優(yōu)選的材料是不易沾水的材料。在一特定的實施方案中，材料在一側上涂敷有結合膜，例如，壓敏的或自結合的丙烯酸鹽的粘合劑。因此，密封元件可以直接地結合到多孔膜的表面上?；蛘?，密封元件可以結合到側向流外殼上，例如，用粘合劑粘合，這樣，在此實施方案中，側向流外殼壓迫密封元件抵靠在多孔膜的表面上，以達到密封元件的功能。
形成二維密封元件的優(yōu)選材料是任何形式的粘合劑帶或粘合劑箔(例如，Beiersdorf AG的Tesa 4124，Adhesives Research的Arcare 7815)。
形成三維密封元件的優(yōu)選材料是各種材料厚度的柔性閉合的多孔彈性體材料，或柔性硅材料，厚度最好是3-5毫米(例如，Pitzner的蜂窩狀天然橡膠EPDM140，硅樹脂橡膠或固體天然橡膠，Castan硬度為40°或更小)。
由于本發(fā)明的結構，本發(fā)明的裝置能夠容納含有細胞的液體樣品，例如，全血，而不需過濾細胞。此外，密封元件允許大量的樣品涂敷到多孔的膜上(加樣區(qū))，沒有發(fā)生泛濫。因此，密封元件支持利用多孔膜的吸收特性。此外，密封元件確保樣品的定向流動。但是，不管有無任何的密封元件，本發(fā)明的裝置都能很好地發(fā)揮功能。
對于根據(jù)本發(fā)明裝置的吸收區(qū)(吸收墊)，機械上穩(wěn)定的材料是優(yōu)選的，最好具有20-30g/100cm2的吸水能力(例如，300型Wicking Papier，Schleicher andSchüll)。吸收墊和根據(jù)本發(fā)明裝置的側向流膜之間的接觸，通過接觸壓力和與多孔膜的疊合而形成。通過吸收墊與承載側向流膜的載體層(背襯片)的結合，實現(xiàn)吸收墊在膜上的正確定位。
相配的墊優(yōu)選包括玻璃纖維或纖維素，且優(yōu)選具有阻礙天然紅細胞流動的特性。
在另一實施方案中，為了達到機械上加強的目的，將根據(jù)本發(fā)明裝置的諸部件應用到支承或載體層上。然而，本發(fā)明的裝置沒有一載體層也可發(fā)揮功能。優(yōu)選，機械上穩(wěn)定和無水的吸收劑材料，優(yōu)選具有100μm或以上的厚度用一粘合劑薄膜粘貼在一側或兩側上，例如，一壓敏的或自結合的丙烯酸鹽的粘合劑(例如，0.005英寸聚酯W/GL-187，G&L)。多孔膜和吸收墊固定在載體層上。在粘合劑呈現(xiàn)在兩側上的載體層的情形中，使用粘合劑第二側以將堆疊固定到其它的表面上，例如，在側向流外殼內。
在本發(fā)明裝置的另一實施方案中，本發(fā)明裝置的諸部件施加到其上的載體層可有可無，其一體地形成在外殼內，膜諸部件通過載體層彼此壓靠，而外殼支持密封元件的功能。然而，不管有無一外殼，本發(fā)明的裝置都可很好地發(fā)揮功能。
本發(fā)明的另一目的是使用本發(fā)明的裝置來作血液分析，尤其是同時進行血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗，和/或同時進行血型測定和抗感染性試劑尤其是細菌性和/或病毒性試劑的抗體或其片段的檢測，和/或同時進行血型測定和抗血細胞之外的紅細胞的抗體，尤其是抗血小板和/或抗淋巴細胞抗體，或其片段的檢測。
還通過測定液體樣品中的多個分析物或其衍生物的方法實現(xiàn)了本發(fā)明的該目的，所述方法包括將樣品施加到本發(fā)明所述裝置的膜的加樣區(qū)上，其中，該樣品的量足以使待測液體通過指示區(qū)朝吸收區(qū)的方向流動，并使待測液體中的分析物或其衍生物結合到對應的指示區(qū)或在指示區(qū)內形成復合物。
本發(fā)明所述方法的特定實施方案同時地實施血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗。
例如，全血或其稀釋的形式施加到裝置的加樣區(qū)上。所有的組分在密封元件的導向下滲透到多孔膜內并在遷移過程中沿吸收墊的方向通過，起初通過指示區(qū)以便作血清交叉核對，接受細胞A1、A2、B、O的片段，并通過包括抗IgG/IgM的所示的對照指示劑。存在于血清內的同種凝集素變得結合到對應的細胞連接的抗原。血清IgG結合到對照結合成分(血清交叉核對敏感)。
細胞結合抗原遷移到指示區(qū)區(qū)域遠端的指示區(qū)內，以作血清交叉核對，作血型測定，其中，在每個指示區(qū)內，抗體對于不同的血型特征(例如，抗-A、抗-B、抗-AB)固定。最遠離加樣區(qū)的該區(qū)域的指示區(qū)包括作為結合成分的多克隆的抗紅細胞抗體。在該指示區(qū)內，紅細胞變得結合到對應于相應血型特征的結合成分上。無論哪種血型的紅細胞都結合到對照結合成分上(血型測定)。
在其后的沖洗步驟中，未結合的材料從膜上洗掉。在其后的檢測步驟中，通過涂布有抗-IgG/IgM的合成顆粒可見固定的同種凝集素和固定在指示區(qū)近端系列結合成分上的對照抗體(血清交叉核對檢測)。
在本發(fā)明方法的另一實施方案中，同時進行血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗，如上所述，血型特征直接地測定，而血清交叉核對和/或抗體檢測試驗作為競爭性試驗進行。
例如，全血或其稀釋形式施加到裝置的加樣區(qū)上。在密封元件的導向下，所有組分滲透到多孔膜內并在其遷移過程中沿吸收墊的方向通過，起初通過指示區(qū)以便作血清交叉核對，其包括血型A和B細胞碎片，以及對照指示區(qū)，其包括血型O的片段。存在于血清內的同種凝集素變得結合到對應的細胞連接的抗原(血清交叉核對敏感)。
細胞結合抗原遷移到位于指示區(qū)區(qū)域遠端的供血型確定的指示區(qū)內，以進行血清交叉核對，其中，在每個指示區(qū)內，針對不同血型特征的抗體(例如，抗-A、抗-B、抗-D)被固定。該區(qū)域中最遠離加樣區(qū)的指示區(qū)例如可包含作為結合成分的多克隆的抗紅細胞抗體。在該指示區(qū)區(qū)域內，紅細胞變得結合到對應于相應血型特征的結合成分上。無論哪種血型的紅細胞都結合對照結合成分(血型測定)。
在其后的沖洗步驟中，未結合的材料從膜上沖洗掉。在其后的步驟中，分別涂敷有抗-A、抗-B或抗-H的不同的合成顆粒的懸浮液施加到加樣區(qū)上。顆粒只能各結合到指示區(qū)內的結合成分上，以作血清交叉核對，在敏感步驟中，其與血清同種凝集素還未接觸，即顯示顏色的帶，在此情形中，其指示對應的同種凝集素不存在。例如，在血型A(具有同種凝集素抗-B的人)的情形中，通過其后施加的合成顆粒的混合，因抗-A顆粒包含在其中，B細胞的細胞碎片被同種凝集素阻塞，這導致A細胞的細胞碎片被染色。血型O片段在所有可想像的組群中被染色，因為它們不被同種凝集素阻塞，并因此總是不與被染色的抗-H顆粒反應，由此，在競爭性試驗的改進中也可提供對照成分(血清交叉核對檢測)。
在本發(fā)明方法的另一實施方案中，其同時地實施血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗，其包括直接地測定血型特征，而血清交叉核對和/或抗體檢測試驗作為競爭性試驗執(zhí)行，將遵循以下的程序。
全血或其稀釋形式施加到具有兩個不同多孔膜的裝置的非對稱的加樣區(qū)上。其中一個多孔膜具有比另一膜低的毛細管流量。在后者的情形中，一包含干的抗-A/抗-B/抗-H顆粒的相配墊施加到密封元件和指示區(qū)之間的膜上。在密封元件導向下，所有的組分滲透到兩個多孔膜內，導致以下的流動特征“膜唯一側”在其遷移過程中所有組分沿相關的吸收墊方向通過指示區(qū)以作血型測定，其中，在每個指示區(qū)內，存在呈固定不動形式的抗不同血型特征的抗體(例如，抗-A、抗-B、抗-D)。最遠離加樣區(qū)的該區(qū)域的指示區(qū)包括作為結合成分的多克隆的抗紅細胞抗體。在該指示區(qū)內，紅細胞變得結合到對應于相應血型特征的結合成分上。每個血型的紅細胞變得結合到對照結合成分上。
“膜/相配墊側”滲透到膜內并通過密封元件的所有組分進入與相配墊外殼接觸，細胞的組分被保持或阻止，而液體(血漿)可向前流動而無阻礙。后者致使抗-A/抗-B/抗-H顆粒從相配墊中釋放。血清交叉核對的指示區(qū)包括血型A和B的細胞碎片以及血型O的對照成分的細胞碎片。存在于血清中的同種凝集素變得結合到對應的細胞結合抗原上，并由此競爭而結合染色的抗-A、抗-B顆粒。這意味著，如果不存在對應的同種凝集素，則才可結合顆粒。例如，一血型為A的人具有抗-B同種凝集素，其導致血型B片段阻塞在指示區(qū)內，這樣，只有血型A片段可被著色的抗-A顆粒染色。因此，不存在同種凝集素的對于這種對照成分總是保持未被阻塞，并變得被包含在相配墊的顆粒混合物內的抗-H顆粒染色成可見帶。
本發(fā)明方法的另一特定實施方案同時進行血型測定和抗血小板和/或抗淋巴細胞抗體或其片段的測定。
舉例來說，對于抗血小板抗體的測定，靠近加樣區(qū)的指示區(qū)包括作為結合成分的血小板碎片，包含在血清中的抗血小板抗體(如果存在于樣品中的話)將變得結合到結合成分上。該方法的其余部分如同根據(jù)本發(fā)明方法的上述實施方案中所描述的，尤其是，血型測定如上所述地進行。
根據(jù)本發(fā)明方法的另一特定實施方案同時地實施血型測定和輸液相關的感染血清標記的測定。
舉例來說，對于感染標記的測定，第一近端指示區(qū)的指示區(qū)包括作為結合成分的合成肽和/或對應于病毒或細菌試劑的蛋白質序列的重組蛋白質(測定抗感染標記的抗體，例如，抗-HIV-I)，以及針對感染標記的蛋白質的抗體(測定抗原，例如，HbsAg)。如上情形的抗體或抗原可被包含在血清中，在第一步驟中結合到對應的抗原或抗體。該方法的其余部分如同根據(jù)本發(fā)明方法的上述實施方案中所描述的，尤其是，血型測定如上所述地進行。
在本發(fā)明的方法中，待測定的分析物更加特定地代表血型抗原或抗原表位，優(yōu)選，代表ABO、Rh、Kell血型系統(tǒng)的那些抗原或抗原表位，以便與血型抗原或抗抗體或其片段的抗原表位互相作用，優(yōu)選是規(guī)則的抗體、不規(guī)則的抗體，以便檢測抗傳染物的傳染物(表面)抗原的抗體和/或抗血小板或抗淋巴細胞抗體或其片段。
待檢查的樣品，例如，天然或抗凝血的全血，或紅細胞濃度或稀釋的紅細胞懸浮液、血組分或諸如對照血清或對照細胞的待測液體，它們施加到根據(jù)本發(fā)明裝置的加樣區(qū)上。包含在樣品中的紅細胞，它們攜帶分析物同時起作指示劑顆粒的作用。
尤其是，使用了兩組指示劑顆粒。其中之一獨特地由紅細胞代表以便直接檢測結合紅細胞的分析物。另一組由任何可想像類型和組合的顆粒組成，借助于它可顯示結合反應，優(yōu)選，顆粒是膠合金或聚苯乙烯或固定不動的紅細胞。在一優(yōu)選的實施方案中，在每一試驗循環(huán)中使用不同的指示劑顆粒，其至少一種類型代表天然紅細胞。
下面本發(fā)明將用附圖和實施例(不受限制)作進一步闡述。其中

圖1是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和血清交叉核對；圖2是示于圖1中的用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖；圖3是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用呈一網(wǎng)膜形式的三維密封元件來同時進行血型測定和血清交叉核對；圖4是示于圖3中的用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖；圖5是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用呈一槽形式的三維密封元件來同時進行血型測定和血清交叉核對；圖6是示于圖5中的用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖；圖7是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來對受者同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗；圖8是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來對供者同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗；圖9是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和感染標記的檢測；圖10是用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和抗血小板抗原的抗體的檢測；圖11示出用于采用雙向流的側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測試和血清交叉核對；圖12示出如圖11所示的用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖。
圖1借助于實例示出用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和血清交叉核對。在本實施例中，該裝置包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及帶形的二維密封元件4。多孔膜2借助于壓敏丙烯酸粘合劑固定到支承層1。同樣地，吸收墊3被固定到支承層1上，部分吸收墊3與多孔膜2重疊。固定在多孔膜2上側上的密封元件4將加樣區(qū)5與其余的膜表面分離，并能使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2中。在加樣區(qū)5和與吸收墊3接觸的多孔膜2的區(qū)域之間設置指示區(qū)6。后者是由排列在規(guī)定的X和Y位置內的對角交叉的點形指示區(qū)I-IX形成的，其中，指示區(qū)I-V表示“血清交叉核對”指示區(qū)，而指示區(qū)VI-IX表示“血型測定”指示區(qū)，且它們由以下結合成分組成
指示區(qū)V是血清交叉核對的對照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗體。指示區(qū)X是血型測定的對照(ctl)，并含有多克隆的抗-紅細胞抗體。它位于全部剩余指示區(qū)的遠側。
在圖2中，顯示了圖1所示用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖，其包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3以及將加樣區(qū)5與膜的其余部分分離的密封元件4，膜又包括“血清交叉核對”和“血型測定”指示區(qū)，其包括對角交叉的指示區(qū)I-IX。
在圖3中，顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和血清交叉核對。在本實施例中，裝置的諸部件對應于圖1所示裝置的諸部件，例外地是，固定到多孔膜2上側的密封元件呈三維板條4的形式。
在圖4中，顯示了圖3所示用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖，其包括諸部件有支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及將加樣區(qū)5與其余的膜分離的三維板條形式的密封元件4，膜又包括指示區(qū)6，它包括“血清交叉核對”和“血型測定”指示區(qū)，其包括對角交叉的指示區(qū)I-IX。
在圖5中，借助于實例顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和血清交叉核對。在本實施例中，裝置的諸部件對應于圖1所示裝置的諸部件，例外地是，固定到多孔膜2上的密封元件4呈三維槽的形式。
在圖6中，顯示了圖5中所示的用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的分解立體圖，其包括諸部件有支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及將加樣區(qū)5與其余的膜分離的呈三維槽形式的密封元件4，膜又包括由“血清交叉核對”和“血型測定”指示區(qū)構成的指示區(qū)6，其包括對角交叉的指示區(qū)I-IX。
圖7借助于實例顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來對受者同時進行對血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗。此時，該裝置包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及呈條帶形式的二維密封元件4。多孔膜2附加到具有壓敏丙烯酸粘合劑的支承層1。同樣地，吸收墊3附加到支承層1上，有部分吸收墊3與多孔膜2重疊。固定在多孔膜2上側的密封元件4將加樣區(qū)5與其余的膜表面分離，并使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2內。在加樣區(qū)5和與吸收墊3接觸的多孔膜2的區(qū)域之間設置指示區(qū)6。后者是由排列在規(guī)定的X和Y位置內的對角交叉的點形指示區(qū)I-XII形成的，其中，指示區(qū)I-VIII表示“血清交叉核對/抗體檢測試驗”指示區(qū)，而指示區(qū)IX-XII表示“血型測定”指示區(qū)，且它們由以下結合成分組成
指示區(qū)VIII是血清交叉核對和抗體檢測試驗的對照(ctl)，并含有抗-人IgG/IgM抗體。指示區(qū)XII是血型測定的對照，并含有多克隆的抗-紅細胞抗體。它位于全部剩余指示區(qū)的遠處。
在圖8中，借助于實例顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來對血液供者同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗。此時，該裝置包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及呈條帶形式的二維密封元件4。多孔膜2固定到具有壓敏丙烯酸粘合劑的支承層上。同樣地，吸收墊3固定到支承層1上，有部分吸收墊3與多孔膜2重疊。固定在多孔膜2上側的密封元件4將加樣區(qū)5與其余的膜表面分離，并使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2內。在加樣區(qū)5和與吸收墊3接觸的多孔膜2的區(qū)域之間設置指示區(qū)6。它是由在規(guī)定的X和Y位置內對角交叉排列的點形指示區(qū)I-X形成的，其中，指示區(qū)I-VI表示“血清交叉核對/抗體檢測試驗”指示區(qū)，而指示區(qū)VII-X包括“血型測定”指示區(qū)，且它們由以下結合成分組成
指示區(qū)VI是血清交叉核對和抗體檢測試驗的對照，并含有抗-人IgG/IgM抗體。指示區(qū)X是血型測定的對照，并含有多克隆的抗-紅細胞抗體。它們位于全部剩余指示區(qū)的遠處。
在圖9中，借助于實例顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和感染標記的檢測。在本實施例中，該裝置包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及呈條帶形式的二維密封元件4。多孔膜2固定到具有壓敏丙烯酸粘合劑的支承層1上。同樣地，吸收墊3固定到支承層1上，有部分吸收墊3與多孔膜2重疊。固定在多孔膜2上側的密封元件4將加樣區(qū)5與其余的膜表面分離，并使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2內。在加樣區(qū)5和與吸收墊3接觸的多孔膜2的區(qū)域之間設置指示區(qū)6。后者是由排列在規(guī)定的X和Y位置內的對角交叉的點形指示區(qū)I-XII形成的，其中，指示區(qū)I-VI表示“感染標記檢測”指示區(qū)，而指示區(qū)VII-XII包括“血型測定”指示區(qū)，且它們由以下結合成分組成
指示區(qū)VI是抗感染劑抗體檢測的對照，并含有抗-人IgG/IgM抗體。指示區(qū)XII是血型測定的對照，并含有多克隆的抗-紅細胞抗體。它們相對于所有其它指示區(qū)排列在遠處。
在圖10中，借助于實例顯示了用于側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和抗血小板抗體的檢測。在本實施例中，該裝置包括支承層1、多孔膜2、吸收墊3，以及呈條帶形式的二維密封元件4。多孔膜2固定到具有壓敏丙烯酸粘合劑的支承層1上。同樣地，吸收墊3固定到支承層1上，有部分吸收墊3與多孔膜2重疊。固定在多孔膜2上側的密封元件4將加樣區(qū)5與其余的膜表面分離，并使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2內。在加樣區(qū)5和與吸收墊3接觸的多孔膜2的區(qū)域之間設置指示區(qū)6。它是由在規(guī)定的X和Y位置內對角交叉的點形指示區(qū)I-IX形成的，其中，指示區(qū)I-III包括“抗血小板抗原抗體的檢測”指示區(qū)，而指示區(qū)IV-IX包括“血型測定”指示區(qū)，且它們由以下結合成分組成
指示區(qū)III是抗細胞系抗原抗體檢測的對照，并包含抗-人IgG/IgM抗體。指示區(qū)IX是血型測定的對照，并包含多克隆的抗-紅細胞抗體。它們相對于所有其它指示區(qū)定位在遠處。
在圖11中，借助于實例顯示了用于雙向流的側向流試驗的本發(fā)明的裝置的立體圖，其用來同時進行血型測定和血清交叉核對。在本實施例中，該裝置包括支承層1、用于血型測定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核對的多孔膜2b、吸收墊3a和3b、呈一槽形式的三維密封元件4、以及相配的墊6。多孔膜2a和2b固定到具有壓敏丙烯酸粘合劑的支承層1上。同樣地，吸收墊3a和3b固定到支承層1上，各吸收墊3a和3b的一部分與多孔膜2a和2b重疊。固定在多孔膜2a和2b上側的密封元件4將加樣區(qū)5a和5b分別與其余的膜表面分離，并使樣品液和檢測試劑定向分布到多孔膜2a和2b內。在加樣區(qū)5a和與吸收墊3a接觸的多孔膜2a的區(qū)域之間設置指示區(qū)7a(血型測定)。后者是由排列在規(guī)定的X和Y位置內的對角交叉的點形指示區(qū)I-VI形成的，其中，指示區(qū)區(qū)域7a的指示區(qū)由以下結合成分組成
指示區(qū)VI是血型測定的對照，并包含多克隆的抗-紅細胞抗體。它相對于指示區(qū)I-V定位在遠處。
在加樣區(qū)5b和與吸收墊3b接觸的多孔膜2b的區(qū)域之間設置指示區(qū)7b(血清交叉核對)。它是由在規(guī)定的X和Y位置內的偏離對角設置的點形指示區(qū)VII-IX形成的，其中，指示區(qū)區(qū)域7b的指示區(qū)由以下結合成分組成
在圖12中，顯示了用于雙向流的側向流試驗的如圖11所示的本發(fā)明裝置的分解立體圖，該裝置包括一下部件支承層1、用于血型測定的多孔膜2a、不同于膜2a的用于血清交叉核對的多孔膜2b、吸收墊3a和3b、呈一槽形狀設計的三維密封元件4、以及相配的墊6。樣品的加樣區(qū)在兩個多孔膜上方延伸，其包括膜2a的探針加樣區(qū)5a和膜2b的探針加樣區(qū)5b，并通過呈槽形式的密封元件4與膜2a和2b的其余表面分離。膜2a包含指示區(qū)區(qū)域7a，其包括從近端到遠端成對角交叉排列的指示區(qū)I-VI，而膜2b包含指示區(qū)區(qū)域7b，其包括從近端到遠端成對角交叉排列的指示區(qū)VII-IX。
實施例實施例1同時進行血型測定(直接測定)和血清交叉核對(直接結合測定)試驗帶的準備試驗帶包括加樣區(qū)、指示區(qū)和吸收區(qū)。將Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(寬度/長度；x/y)帶形的規(guī)格，并用粘合劑結合到支承層(背襯片，例如，G&L)。用例如AD3200(Biodot)將各種結合成分對角交叉地點到指示區(qū)，每個點0.2μl，指示區(qū)被分成“血清交叉核對”指示區(qū)(靠近加樣區(qū))和血型測定指示區(qū)(加樣區(qū)遠端)“血清交叉核對”指示區(qū)規(guī)格血型A1、血型A2、血型B和血型O(由紅細胞濃縮形成)的紅細胞影以及作為對照的抗-人IgG/IgM抗體(羊抗人IgG、羊抗人IgM，sigma，I-3382、I-0759)的懸浮液，“血型測定”指示區(qū)抗-A抗體-Birma-1克隆(Serologials，TLJ0105)；抗-B抗體-ES-4克隆(Serologials，NCA0201)；抗-AB抗體-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-紅細胞抗體(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核對”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的規(guī)格血型A1的紅細胞影。所有其它結合成分相對于規(guī)格血型A1的紅細胞影的位置以距離x＝2.5mm/y＝1.5mm重復分配。紅細胞影配制成在15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的懸浮液，抗-人IgG/IgM抗體為用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的濃度為50μg/ml的1∶1混合物。
“血型測定”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗體。所有其它結合成分相對于抗-A抗體的位置以距離x＝3mm/y＝1.5mm重復分配。用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀釋抗體抗-A抗體1∶3，抗-B抗體1∶2，抗-AB抗體1∶4，抗-RBC抗體1∶3。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為15×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝5mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批對于血樣品采用抗凝血的全血。對于試驗，將合適的100μl未稀釋或用稀釋緩沖液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀釋的血施加到加樣區(qū)內。一旦將血留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII沖洗兩次，以從膜上除去未結合的紅細胞。之后在加樣區(qū)中加入50μl以1∶10(v/v)稀釋于0.08％明膠、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶聯(lián)的金顆粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的著色的聚苯乙烯顆粒代替金顆粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯顆粒。一旦金顆粒留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII再次沖洗膜一遍或兩遍。
結果(a)對照如果抗-RBC對照(指示區(qū)IX、“血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，并且如果抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)V、“血清交叉核對”指示區(qū))呈現(xiàn)特征性的紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。
(b)試驗結果根據(jù)有無對應的血型抗原，“血型測定”指示區(qū)區(qū)域內的對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。通過紫色形狀點形式的金顆粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯顆粒的顏色，可在“血清交叉核對”指示區(qū)內識別相應的同種凝集素。在沒有同種凝集素的情況下，在這些位置未發(fā)現(xiàn)不同于背景的信號。
實施例2同時進行血型測定(直接試驗)和血清交叉核對(競爭試驗)試驗帶的準備試驗帶包括加樣區(qū)、位于加樣區(qū)兩側的兩個指示區(qū)和兩個吸收區(qū)。將MilliporeHiFlow Plus 065和HiFlow Plus 140型號的膜切割成15mm×20mm(寬度/長度；x/y)帶形的規(guī)格，并用粘合劑并排地結合到支承層(背襯片，例如，G&L)。另外，在HiFlowPlus 140上施加含有抗-A/抗-B/抗-H偶聯(lián)的金顆粒的經(jīng)過干燥的相配的墊，使其位于密封元件(粘合劑帶)和指示區(qū)之間。也可采用100-400nm的著色的聚苯乙烯顆粒代替金顆粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯顆粒。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，將以下各個結合成分施加到HiFlow Plus 065膜上“血型測定”指示區(qū)的對角交叉位置上，每個點0.2μl抗-A抗體-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗體-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗體-AB6、AB26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-紅細胞抗體(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
以同樣的方式將血型A、B和血型O(由紅細胞濃縮制成)的紅細胞影的懸浮液施加到HiFlow Plus 140膜上的“血清交叉核對”指示區(qū)區(qū)域。
“血清交叉核對”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝3mm/y＝10mm位置上的規(guī)格血型A的紅細胞影。所有其它結合成分相對于規(guī)格血型A的紅細胞影的位置以距離x＝3mm/y＝1.5mm重復地分配。紅細胞影配制成在15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的懸浮液。
“血型測定”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗體。所有其它結合成分相對于抗-A抗體的位置以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復分配。用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀釋抗體抗-A抗體1∶3，抗-B抗體1∶2，抗-AB抗體1∶4，抗-RBC抗體1∶3。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為15×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝5mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批采用抗凝血的全血作為血樣品。對于實際的試驗，將100μl未稀釋或用稀釋緩沖液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1 DiaMed)1∶3或1∶6稀釋的血施加到加樣區(qū)內。一旦將血留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII沖洗兩次，以從膜上除去未結合的紅細胞。。
結果(a)對照如果抗-RBC對照(”血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，并且如果紅細胞血型O對照(“血清交叉核對”指示區(qū))被特征性染成紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。
(b)試驗結果根據(jù)有無對應的血型抗原，“血型測定”指示區(qū)區(qū)域內的對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。根據(jù)沒有對應的帶，則“血清交叉核對”指示區(qū)區(qū)域內表征為對應的同種凝集素。如果沒有同種凝集素，則對應的帶被特征性地染色。
實施例3對受者同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗試驗帶的準備試驗帶包括加樣區(qū)、指示區(qū)和吸收區(qū)。將Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成20mm×35mm(寬度/長度；x/y)帶形的規(guī)格，并用粘合劑結合到支承層(背襯片，例如，G&L)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，將各種結合成分對角交叉地施加到指示區(qū)區(qū)域中，每個點0.2μl，指示區(qū)區(qū)域被進一步分成“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)區(qū)域(靠近加樣區(qū))和“血型測定”指示區(qū)區(qū)域(加樣區(qū)遠端)。
“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)規(guī)格血型A1、血型A2、血型B和血型O、血型O Rh-公式R1R1w(檢測細胞1)、血型O Rh-公式R2R2(檢測細胞2)、血型O RH-公式R1R1(檢測細胞3)，以及作為對照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)；“血型測定”指示區(qū)抗-A抗體-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗體-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗體-AB6、Ab26、AB92克隆(Medion Diagnostics，010062)；抗-紅細胞抗體(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“血清交叉核對”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝3mm/y＝10mm位置上的規(guī)格血型A1的紅細胞影。所有其它結合成分相對于規(guī)格血型A2、B、O的紅細胞影的位置以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復分配。檢測細胞1的紅細胞影的定位前進到位置x＝11mm/y＝10mm，而檢測細胞2和3的紅細胞影及人IgG/IgM的定位以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復。紅細胞影配制成在15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的懸浮液，抗-人IgG/IgM抗體為用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的濃度為50μg/ml的1∶1混合物。
“血型測定”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝4mm/y＝20mm位置上的抗-A抗體。所有其它結合成分相對于抗-A抗體的位置以距離x＝4mm/y＝1.5mm重復分配。用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀釋抗體抗-A抗體1∶3，抗-B抗體1∶2，抗-AB抗體1∶4，抗-RBC抗體1∶3。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為20×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝5mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批對于血樣品采用抗凝血的全血。對于試驗，將合適的120μl未稀釋或用稀釋緩沖液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀釋的血施加到加樣區(qū)內。一旦將血留在加樣區(qū)，則用120μl EnlisstII沖洗兩次，以從膜上除去未結合的紅細胞。之后在加樣區(qū)中加入75μl以1∶10(v/v)稀釋于0.08％明膠、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶聯(lián)的金顆粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的著色的聚苯乙烯顆粒代替金顆粒，例如，Merck Eurolab France/Estapor的聚苯乙烯顆粒。一旦金顆粒留在加樣區(qū)，則用120μl EnlisstII再次沖洗膜一遍或兩遍。
結果(a)對照如果抗-RBC對照(指示區(qū)XII、“血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，并且如果抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)VIII、“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū))呈現(xiàn)特征性的紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。在每種情形下抗-IgG/IgM對照必須被染色，以使在沒有不規(guī)則抗體的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)區(qū)域中完全不存在其它信號時，該指示區(qū)的染色能夠確保正確的試驗結果。指示區(qū)IV(紅細胞影血型O)是同種凝集素是陰性對照。該指示區(qū)的染色意味著，除了同種凝集素外還必須存在不規(guī)則的抗體，即三個指示區(qū)V、VI、VII中的至少一個必須同樣地染色。如果不是這樣的情形，則試驗無效。
(b)試驗結果根據(jù)有無對應的血型抗原，“血型測定”指示區(qū)區(qū)域內的對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。通過紫色形狀點形式的金顆粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯顆粒的顏色，可在“血清交叉核對”指示區(qū)內識別相應的同種凝集素。在沒有同種凝集素的情況下，在這些位置未發(fā)現(xiàn)不同于背景的信號。如果存在不規(guī)則的抗體，則包括檢測細胞1、2或3的紅細胞影的指示區(qū)中的一個、兩個或全部三個被金顆粒的特征紫色或所用聚苯乙烯顆粒的顏色染色。
實施例4對供者同時進行血型測定、血清交叉核對和抗體檢測試驗試驗帶的準備原則上試驗帶的結構與實施例2的試驗帶的結構相同。Millipore HiFlow Plus065膜的尺寸為15mm×35mm(寬度/長度；x/y)。“血型測定”指示區(qū)區(qū)域的指示區(qū)與實施例2相同。在“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)中，使用分配器，例如AD3200(Biodot)，來分配以下結合成分的0.2μl的點以下物質的懸浮液規(guī)格血型A1、血型A2、血型B、血型O的紅細胞影，待測細胞1-3的混合物的紅細胞影(見實施例2)以及作為對照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，sigma，I-3382、I-0759)。
“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)的結合成分的位置開始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上的規(guī)格血型A1的紅細胞影，而規(guī)格血型A2、B、O的紅細胞影的位置以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復分配。檢測細胞1-3的混合物的紅細胞影的定位發(fā)生在位置x＝10.5mm/y＝13mm，而人IgG/IgM定位在位置x＝12.5mm/y＝14.5mm。紅細胞影配制成在15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇中的0.1-0.5％(v/v)的懸浮液，抗-人IgG/IgM抗體為用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5、10％(v/v)甲醇配制的濃度為50μg/ml的1∶1混合物。
“血型測定”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝3mm/y＝20mm位置上的抗-A抗體。所有其它結合成分相對于抗-A抗體的位置以距離x＝3mm/y＝1.5mm重復分配。用50mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀釋抗體抗-A抗體1∶3，抗-B抗體1∶2，抗-AB抗體1∶4，抗-RBC抗體1∶3。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為15×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝6mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批該試驗的一批與實施例1中的一批相同。
結果(a)對照如果抗-RBC對照(指示區(qū)X、“血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，或者如果抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)VI、“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū))呈現(xiàn)特征性的紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。在每種情形下抗-IgG/IgM對照必須被染色，以使在沒有不規(guī)則抗體的AB血型的人的情形中，在“血清交叉核對/抗體檢測”指示區(qū)區(qū)域中完全不存在其它信號時，該指示區(qū)的染色能夠確保正確的試驗結果。指示區(qū)IV(紅細胞影血型O)是陰性對照。該指示區(qū)的染色表面，除了同種凝集素外還必須存在不規(guī)則的抗體，即三個指示區(qū)V、VI、VII中的至少一個必須同樣地染色。如果不是這樣的情形，則試驗無效。
(b)試驗結果根據(jù)有無對應的血型抗原，“血型測定”指示區(qū)區(qū)域內的對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。通過紫色形狀點形式的金顆粒的特征性紫色或所用聚苯乙烯顆粒的顏色，可在“血清交叉核對”指示區(qū)內識別相應的同種凝集素。在沒有同種凝集素的情況下，在這些位置未發(fā)現(xiàn)不同于背景的信號。如果存在不規(guī)則的抗體，則包括檢測細胞1、2或3的紅細胞影的指示區(qū)中的一個、兩個或全部三個被金顆粒的特征紫色或所用聚苯乙烯顆粒的顏色染色。
實施例5同時進行血型測定和感染標記的檢測試驗帶的準備試驗帶由加樣區(qū)、指示區(qū)和吸收區(qū)組成。將Millipore HiFlow Plus 065型膜切割成15mm×35mm(寬度/長度；x/y)的規(guī)格，并用粘合劑結合到支承層(例如，G&L的背襯片)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，將各種結合成分對角交叉地施加到指示劑區(qū)域，每個點0.2μl，指示劑區(qū)域被進一步分成“感染標記檢測”指示區(qū)區(qū)域(靠近加樣區(qū))和“血型測定”指示區(qū)區(qū)域(加樣區(qū)遠端)“感染標記的檢測”指示區(qū)區(qū)域重組抗原(梅毒；TpN15、TpN17、TpN47)、糖蛋白gp-14、gp-41(HIV-1；HIV-0)和gp-36(HIV-2)序列的合成肽、重組HCV抗原(C-100、C-200、C33c、C22)、單克隆抗體(HBsAg)以及作為對照的抗-人IgG/IgM抗體(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)的溶液；“血型測定”指示區(qū)區(qū)域抗-A抗體-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗體-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗體-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗體-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗體-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-紅細胞抗體(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。
“感染標記檢測”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝2.5mm/y＝10mm位置上特異性HIV-1(gp-14、gp-41)的合成肽。所有其它結合成分以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復分配到指示區(qū)I的位置。指示區(qū)I-V的結合成分用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合適濃度，抗-人IgG/IgM抗體用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成50μg/ml的濃度。
“血型測定”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝2.5mm/y＝20mm位置上的抗-A抗體。指示區(qū)區(qū)域的所有其它結合成分以距離x＝2mm/y＝1.5mm重復分配到抗-A抗體的位置。用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇如下稀釋抗體抗-A抗體1∶3，抗-B抗體1∶2，抗-AB抗體1∶4，抗-RBC抗體1∶3。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為15×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝6mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批對于血樣品采用抗凝血的全血。對于試驗，將合適的100μl未稀釋或用稀釋緩沖液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀釋的血施加到加樣區(qū)內。一旦將血留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII沖洗兩次，以從膜上除去未結合的紅細胞。
之后在加樣區(qū)中加入50μl以1∶10(v/v)稀釋于0.08％明膠、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶聯(lián)的金顆粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)和抗-HbsAg偶聯(lián)的金顆粒(Arista Biologicals，ABHBS-0500)的混合物。也可采用100-400nm的著色的聚苯乙烯顆粒代替金顆粒，例如，Merck EurolabFrance/Estapor的聚苯乙烯顆粒。一旦金顆粒留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII再次沖洗膜一遍或兩遍。
結果如果抗-RBC對照(指示區(qū)XII、“血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，并且如果抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)VI、“感染標記檢測”指示區(qū))呈現(xiàn)特征性的紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。根據(jù)有無對應的血型抗原，對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。在存在抗HIV-1、HIV-2、梅毒抗體或存在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)時，由于被金顆粒染成特征性紫色從而可以根據(jù)紫色染色點來檢測對應的位置。如果使用聚苯乙烯顆粒作為指示劑顆粒，則對應的位置被染成所用聚苯乙烯顆粒的顏色。在最常見的情形中，即對于所有感染標記為陰性反應，只有抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)VI，“感染標記檢測”指示區(qū))被染色。
實施例6同時進行血型測定和抗血小板抗原抗體的檢測試驗帶的準備原則上試驗帶的結構和模式與實施例4的試驗帶的結構相同。指示區(qū)區(qū)域被進一步劃分為“血型測定”指示區(qū)和“抗血小板抗原抗體的檢測”指示區(qū)。使用分配器，例如AD3200(Biodot)，來分配以下各種結合成分的0.2μl點
“抗血小板抗原抗體的檢測”指示區(qū)區(qū)域具有諸如HPA 1bb3aa5bb和HPA1aa3bb5aa的獨特HPA抗原特征的O型血血小板的膜蛋白，以及作為對照的抗-人IgG/IgM(羊抗-人IgG、羊抗-人IgM，Sigma，I-3382、I-0759)；“血型測定”指示區(qū)區(qū)域抗-A抗體-Birma-1克隆(serologicals，TLJ0105)；抗-B抗體-ES-4克隆(serologicals，NCA0201)；抗-AB抗體-AB6、Ab26、AB92克隆(MedionDiagnostics，010062)；抗-D抗體-LDM3/ESD1克隆(SNBTS)，抗-CDE抗體-MS-24/MS-201/MS 80/MS-258克隆(serologicals)，抗-紅細胞抗體(抗-人RBC的兔IgG片段，Rockland，209-4139)。作為血小板膜蛋白的替代物，也可應用具有相應特征(HPA-抗原特征)的重組抗原?！翱寡“蹇乖目贵w檢測”指示區(qū)區(qū)域結合成分的位置開始于x＝4mm/y＝10mm位置上具有HPA 1bb3aa5bb特征的膜蛋白抗原。所有其它結合成分以距離x＝3.5mm/y＝2mm重復地分配到指示區(qū)I的位置。指示區(qū)I和II的結合成分用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成合適濃度，抗-人IgG/IgM抗體用15mM磷酸鉀緩沖液pH7.5，10％(v/v)甲醇配制成15μg/ml的濃度。
“血型測定”指示區(qū)結合成分的定位與實施例4相同。
分配結合成分之后，將膜在40℃下干燥20分鐘，然后儲存在恒定的空氣濕度下，直到進行試驗。在遠離加樣區(qū)的一端將規(guī)格為15×15mm的吸收墊(Schleicherand Schüll 300)粘到膜上，與膜重疊3mm。通過在位置y＝6mm處粘貼1-2mm寬的粘合劑帶(Tesa 4124)使加樣區(qū)在整個膜寬度上與其余的膜分離。
試驗的一批對于血樣品采用抗凝血的全血。對于試驗，將合適的100μl未稀釋或用稀釋緩沖液(EnlisstII，Medion Diagnostics或Diluent 1，DiaMed)1∶3或1∶6稀釋的血施加到加樣區(qū)內。一旦將血留在加樣區(qū)，則用100μl EnlisstII沖洗兩次，以從膜上除去未結合的紅細胞。
之后在加樣區(qū)中加入50μl以1∶10(v/v)稀釋于0.08％明膠、0.5％白蛋白的抗-IgG/A/M偶聯(lián)的金顆粒(20-40nm，Arista Biologicals，CGIGA-0800，CGIGG-0800，CGIGM-0800)。也可采用100-400nm的著色的聚苯乙烯顆粒代替金顆粒，例如，MerckEurolab France/Estapor的聚苯乙烯顆粒。一旦金顆粒留在加樣區(qū)，則用100μlEnlisstII再次沖洗膜一遍或兩遍。
結果如果抗-RBC對照(指示區(qū)IX、“血型測定”指示區(qū))顯示一清晰的陽性信號(紅點)，并且如果抗-IgG/IgM對照(指示區(qū)III、“抗血小板抗原的抗體檢測”指示區(qū))呈現(xiàn)特征性的紫色(金顆粒)或呈所用聚苯乙烯顆粒的顏色，則試驗有效。根據(jù)有無對應的血型抗原，對應位置上顯示紅點(陽性)或幾乎白背景膜著色(陰性)。在存在抗血小板抗原的抗體時，通過金顆粒特有的紫色染色以及紫色的點可識別對應的位置。如果使用聚苯乙烯顆粒作為指示劑顆粒，則對應的位置被染成所用聚苯乙烯顆粒的顏色。
權利要求
1.一種用于同時定性或定量檢測液體樣品中的多個分析物的裝置，所述裝置包括至少一層膜(2)，膜上具有-用于涂布液體樣品的加樣區(qū)(5)，-至少一組能與分析物互相作用的至少兩個指示區(qū)，以及-至少一個在液體通過指示區(qū)后吸收液體的吸收區(qū)(3)，其中，所述指示區(qū)位于加樣區(qū)(5)和吸收區(qū)(3)之間，其特征在于，從加樣區(qū)(5)通過一組對應的指示區(qū)到吸收區(qū)(3)的流動方向(流動軌跡)基本平行，并存在至少兩個不同的流動軌跡。
2.如權利要求1所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)排列成對于任何一個流動軌跡，待測液體流過至多一個指示區(qū)。
3.如權利要求1所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)排列成對角的V-、W-、M-、N-形，或排成直線。
4.如權利要求1至3中任何一項所述的裝置，其特征在于，至少兩排指示區(qū)沿流動方向排成一個在另一個后面和/或側向交叉，且不同排的指示區(qū)排列成相互之間存在間隙，以使對于任何一個流動軌跡，待測液體流過至多一個指示區(qū)。
5.如權利要求1至3中任何一項所述的裝置，其特征在于，至少兩排指示區(qū)沿流動方向排成一個在另一個后面和/或并排，且不同排的指示區(qū)排列成相互之間不存在一間隙，以使對于任何一個流動軌跡，待測液體流過一個以上指示區(qū)。
6.如權利要求1至3中任何一項所述的裝置，其特征在于，排列至少兩組指示區(qū)，從加樣區(qū)開始它們被放置在不同流動方向上。
7.如權利要求1至6中任何一項所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)含有抗體或抗體片段或凝集素，抗原或抗原表位，和/或細胞或細胞碎片。
8.如權利要求1至7中任何一項所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗體或抗體片段以及A1、A2、B和/或O血型紅細胞的膜或細胞碎片。
9.如權利要求1至7中任何一項所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗體或抗體片段以及合成肽、重組抗原和/或抗感染標記的抗體或抗體片段。
10.如權利要求1至7中任何一項所述的裝置，其特征在于，指示區(qū)尤其含有抗血型抗原或抗原表位的抗體或抗體片段以及血小板和/或淋巴細胞的碎片。
11.如權利要求1至10中任何一項所述的裝置，其特征在于，所有膜(2)優(yōu)選由聚乙烯、硝酸纖維素或尼龍構成。
12.如權利要求1至11中任何一項所述的裝置，其特征在于，在加樣區(qū)(5)下游和指示區(qū)上游，在膜(2)上提供至少一個密封元件(4)。
13.如權利要求1至12中任何一項所述的裝置，其特征在于，在密封元件(4)下游和指示區(qū)上游施加至少一個相配的墊。
14.如權利要求1至13中任何一項所述的裝置，其特征在于，裝置的部件施加到支承層(1)上以作機械加強。
15.如權利要求1至14中任何一項所述的裝置，其特征在于，裝置的部件一體地形成在外殼內。
16.使用如權利要求1至11中任何一項所述的裝置用于血液分析，尤其用于同時進行血型測定和血清交叉核對和/或抗體檢測試驗。
17.使用如權利要求1至11中任何一項所述的裝置用于血液分析，尤其用于同時進行血型測定和感染血清標記或其片段的檢測。
18.使用如權利要求1至11中任何一項所述的裝置用于血液分析，尤其用于同時進行血型測定和抗血細胞抗體尤其是抗血小板或抗淋巴細胞抗體或其對應片段的檢測。
19.一種測定液體樣品中的多個分析物或其衍生物的方法，該方法包括將樣品施加到如上述權利要求1至15中任何一項所述裝置的至少一個膜(2)的加樣區(qū)(5)上，其中，該樣品的量足以使待測液體通過指示區(qū)朝吸收區(qū)(3)的方向流動，并使待測液體中的分析物或其衍生物在指示區(qū)內形成復合物。
20.如權利要求19所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物是血型抗原或抗原表位、直接抗血型抗原或其片段的抗體、直接抗血小板或白細胞的抗體或其片段，或直接抗傳染物或者傳染物的抗原或抗原表位的抗體或其片段。
21.如權利要求19或20所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括ABO、Rh和Kell血型系統(tǒng)的抗原或抗原表位。
22.如權利要求19或20所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括抗血小板和/或淋巴細胞的抗體或其片段。
23.如權利要求19或20所述的方法，其特征在于，所述分析物或其衍生物尤其包括抗細菌性和/或病毒性試劑或者病毒性或細菌性抗原或抗原表位的抗體。
24.如權利要求19至23中任何一項所述的方法，其特征在于，所述液體樣品優(yōu)選包括全血、血細胞濃縮物、血清、血漿和/或待測液體，例如對照血清或對照細胞。
25.如權利要求19至24中任何一項所述的方法，其特征在于，使用至少兩種類型的指示劑顆粒，其中至少一種類型代表紅細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于同時定性或定量檢測液體樣品中的幾種分析物的裝置，所述裝置包括膜(2)，膜上具有供涂布液體樣品的加樣區(qū)(5)，至少兩個可與分析物相互作用的指示區(qū)，和至少一個在液體通過指示區(qū)之后接受液體吸收區(qū)(3)，其中，指示區(qū)位于加樣區(qū)(5)和吸收區(qū)(3)之間，其特征在于，從加樣區(qū)(5)通過每個指示區(qū)到吸收區(qū)(3)的流動方向(流動軌跡)基本平行，且存在至少兩個不同的流動軌跡。本發(fā)明還涉及檢測液體樣品中的幾種分析物或其衍生物的方法，所述方法包括將樣品施加到如權利要求1－8所給裝置的膜的加樣區(qū)(5)，其中，所述樣品的存在量足以使樣品流通過指示區(qū)朝吸收區(qū)(3)流動，并能使液體樣品中的分析物或其衍生物在指示區(qū)形成復合物。
文檔編號G01N33/80GK1894584SQ200480025576
公開日2007年1月10日 申請日期2004年7月8日 優(yōu)先權日2003年7月9日
發(fā)明者P·施溫特, K·洛斯特 申請人:麥迪奧診斷產品有限公司