專利名稱：龍血竭質(zhì)量控制檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材原料藥的檢測方法，尤其是可以用以進(jìn)行質(zhì)量控制的成分的檢測方法。
背景技術(shù)：
龍血竭為龍舌蘭科植物劍葉龍血樹Dracaeua cochinchinensis(Lour.)S.H.Chen含脂木質(zhì)部經(jīng)提取加工成的樹脂，為常用中藥，有活血散瘀，定痛止血，斂瘡生肌功效，主要用于跌打損傷，瘀血作痛，婦女氣血凝滯，外傷出血，褥瘡久不收口。已收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-082(Z-016)-99(Z)。目前所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制只測定龍血素B(C18H20O5)的含量，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，龍血竭中主要成分為黃酮類，僅僅只控制藥材中一種黃酮的量難以準(zhǔn)確地反映產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種全面、準(zhǔn)確的控制龍血竭質(zhì)量的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法。
本發(fā)明所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法是用高效液相色譜法同時測定龍血竭中龍血素A和龍血素B含量的方法。
為了全面、準(zhǔn)確地控制龍血竭的質(zhì)量，申請人對龍血竭中黃酮類成分進(jìn)行了研究，提出增加其中含量高、易定量的龍血素A(C17H18O4)的含量測定，結(jié)果表明，云南產(chǎn)龍血竭中龍血素A含量較廣西產(chǎn)的高5至6倍，且不同產(chǎn)地龍血竭中龍血素A含量差異較大，據(jù)文獻(xiàn)報道龍血素A(C17H18O4)、龍血素B(C18H20O5)屬黃酮類查耳酮類化合物，是龍血竭的主要有效成分。為確保產(chǎn)品質(zhì)量可控和安全有效，申請人研究制定了用高效液相色譜法同時測定龍血竭中龍血素A和龍血素B的含量。經(jīng)分析方法驗證，其精密度、重現(xiàn)性、回收率和穩(wěn)定性符合中國藥典2000年一部附錄《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則》的要求。
本發(fā)明所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法由以下步驟組成一、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；冰醋酸溶液1→100-乙腈63±1∶37±1為流動相，檢測波長為275±2nm，柱溫30±1℃，理論板數(shù)按龍血素A及B峰計算均應(yīng)不低于5000，龍血素A峰與B峰分離度應(yīng)大于2.0；二、對照品溶液的制備稱取經(jīng)干燥劑減壓干燥24小時的龍血素A、龍血素B對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含龍血素A 0.18mg、含龍血素B 0.04mg的混合溶液，即得；三、供試品溶液的制備取本品粉末約0.25g，精密稱定至25ml量瓶中，加入甲醇約20ml，超聲處理10分鐘使龍血竭溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，即得；四、測定精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明的方法學(xué)考察線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20ul，按上述色譜條件測定峰面積，結(jié)果見表1，采用Agilent色譜工作站Chem Station計算標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1、圖2。以峰面積積分值對樣量進(jìn)行回歸，龍血素A在0.1840μg---3.680μg、龍血素B在0.0419μg---0.8380μg范圍內(nèi)顯現(xiàn)良好的線性關(guān)系。龍血素A回歸方程為Y＝3411.92X+34.40，r＝0.99989；龍血素B回歸方程為Y＝2694.85X+14.79，r＝0.99960；其中Y為峰面積，X為進(jìn)樣量，r為相關(guān)系數(shù)。
表1線性關(guān)系考察結(jié)果進(jìn)樣量 龍血素A 龍血素B(μl) 進(jìn)樣量(μg) 峰面積 進(jìn)樣量(μg) 峰面積1 0.1840 634.9 0.0419 119.02 0.3680 1269.5 0.0838 235.25 0.9200 3179.9 0.2095 588.110 1.8406468.9 0.4190 1195.915 2.7609433.6 0.6285 1690.120 3.68012527.0 0.8380 2259.7精密度試驗取同一龍血素A及龍血素B對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定6次(進(jìn)樣10μl)，測得峰面積積分值見表2。
表2精密度試驗結(jié)果次數(shù)龍血素A峰面積龍血素B峰面積1 6389.5 1116.02 6351.9 1112.13 6363.3 1115.84 6364.9 1118.05 6361.0 1119.36 6361.1 1116.9平均值 6365.3 1116.4RSD(％) 0.20 0.22
穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件，進(jìn)樣10μl，在不同時間測定，結(jié)果見表3。
表3穩(wěn)定性試驗結(jié)果時間龍血素A龍血素B0 10525.51620.35hr 10510.61627.825hr10645.61644.845hr10684.21652.296hr10544.01663.2166hr 10738.41678.2平均值 10608.05 1647.75RSD 0.89％ 1.31％結(jié)果表明，樣品在166hr(約7天)內(nèi)比較穩(wěn)定。
重現(xiàn)性試驗取龍血竭粉末(過三號篩，小試樣)約0.25g，共稱取6份，按含量測定方法試驗，結(jié)果見表4。
表4重現(xiàn)性試驗結(jié)果編取樣量(g)龍血素A(％)龍血素B(％)號1 0.2582 2.88 0.582 0.2457 2.89 0.583 0.2464 2.85 0.584 0.2655 2.92 0.595 0.2488 2.93 0.596 0.2310 2.84 0.59含量平均值 2.885 0.585RSD1.20.94
結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。
加樣回收率試驗取已測定含量龍血竭粉末(中試樣品，010101；含龍血素A為2.80％、龍血素B為0.59％)約0.12g，共稱取6份，精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入龍血素A及B對照品溶液(每lml中含龍血素A 0.1840mg/ml、龍血素B 0.0419mg/ml)10、15、20ml，補加甲醇至約20ml，超聲處理10min，放至室溫，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，測定含量并計算回收率，結(jié)果見表5、表6。
表5龍血素A加樣回收率試驗結(jié)果樣品龍血素A含編號取樣量 加樣量 測得總量 回收率量1 0.1166g3.26mg1.84mg 5.06mg97.8％2 0.1138g3.19mg1.84mg 4.95mg95.7％3 0.1216g3.40mg2.76mg 6.04mg95.7％4 0.1131g3.17mg2.76mg 5.93mg100.0％5 0.1208g3.38mg3.68mg 6.94mg96.7％6 0.1291g3.61mg3.68mg 7.18mg97.0％表6龍血素B加樣回收率試驗結(jié)果樣品龍血素B含編號取樣量 加樣量 測得總量 回收率量1 0.1166g0.69mg0.419mg 1.09mg95.5％2 0.1138g0.67mg0.419mg 1.08mg97.9％3 0.1216g0.72mg0.629mg 1.32mg95.4％4 0.1131g0.67mg0.629mg 1.30mg100.2％5 0.1208g0.71mg0.838mg 1.53mg97.9％6 0.1291g0.76mg0.838mg 1.59mg99.0％
結(jié)果表明，本品加樣回收率符合規(guī)定。


圖1為龍血素A標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
圖2為龍血素B標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式
實施例色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；冰醋酸溶液(1→100)-乙腈(63∶37)為流動相，檢測波長為275nm。柱溫30℃。理論板數(shù)按龍血素A及B峰計算均應(yīng)不低于5000，龍血素A峰與B峰分離度應(yīng)大于2.0。
對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的龍血素A、龍血素B對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含龍血素A 0.18mg、含龍血素B0.04mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約0.25g，精密稱定至25ml量瓶中，加入甲醇約20ml，超聲處理10分鐘使龍血竭溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
權(quán)利要求
1.一種龍血竭質(zhì)量控制檢測方法，其特征是用高效液相色譜法同時測定龍血竭中龍血素A和龍血素B含量的方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法，其特征在于由以下步驟組成一、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；冰醋酸溶液1→100-乙腈63±1∶37±1為流動相，檢測波長為275±2nm，柱溫30±1℃，理論板數(shù)按龍血素A及B峰計算均應(yīng)不低于5000，龍血素A峰與B峰分離度應(yīng)大于2.0；二、對照品溶液的制備稱取經(jīng)干燥劑減壓干燥24小時的龍血素A、龍血素B對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含龍血素A 0.18mg、含龍血素B0.04mg的混合溶液，即得；三、供試品溶液的制備取本品粉末約0.25g，精密稱定至25ml量瓶中，加入甲醇約20ml，超聲處理10分鐘使龍血竭溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，即得；四、測定精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.按照權(quán)利要求2所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法，其特征在于由以下步驟組成一、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；冰醋酸溶液1→100-乙腈63∶37為流動相，檢測波長為275nm，柱溫30℃，理論板數(shù)按龍血素A及B峰計算均應(yīng)不低于5000，龍血素A峰與B峰分離度應(yīng)大于2.0；二、對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時的龍血素A、龍血素B對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含龍血素A 0.18mg、含龍血素B 0.04mg的混合溶液，即得；三、供試品溶液的制備 取過三號篩的本品粉末0.25g，精密稱定至25ml量瓶中，加入甲醇約20ml，超聲處理10分鐘使龍血竭溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，即得；四、測定法精密吸取對照品溶液10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥材原料藥的檢測方法，尤其是可以用以進(jìn)行質(zhì)量控制的成分的檢測方法。發(fā)明所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法是用高效液相色譜法同時測定龍血竭中龍血素A和龍血素B含量的方法。本發(fā)明所述的龍血竭質(zhì)量控制檢測方法由以下步驟組成一、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗；二、對照品溶液的制備；三、供試品溶液的制備；四、測定。為了全面、準(zhǔn)確地控制龍血竭的質(zhì)量，本發(fā)明制定了用高效液相色譜法同時測定龍血竭中龍血素A和龍血素B的含量。經(jīng)分析方法驗證，其精密度、重現(xiàn)性、回收率和穩(wěn)定性符合中國藥典2000年一部附錄《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則》的要求。
文檔編號G01N30/00GK1712953SQ20051001085
公開日2005年12月28日 申請日期2005年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月13日
發(fā)明者陳植和, 周家礽, 汪伯良 申請人:昆明滇虹藥業(yè)有限公司