專利名稱：同時測定食品中殘留的多種有機磷的gc/ms內標檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類農藥殘留的檢測方法，特別是涉及一種同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法。
二.
背景技術：
隨著我國加入WTO，在國外，出口農產(chǎn)品受國外檢測技術壁壘封鎖的事件不斷發(fā)生如著名的菠菜出口日本被拒事件，茶葉出口歐盟受阻事件等；在國內，食品安全問題也日益受到廣泛關注。為了接軌國際檢測領域、打破國外技術壁壘封鎖、保護食品安全、保障人民身體健康，國家以及各地區(qū)相繼出臺了一系列的質量技術標準，如何能快速、高效、準確地檢測出食品安全相關產(chǎn)品中所含有的有毒物質是迫切需要解決的問題，高毒農藥殘留的檢測更是當務之急。
有機磷農藥是農藥中很重要的一類，它具有高效、殺蟲譜廣等特性，在世界各國均得到了廣泛而有效的應用，在農業(yè)生產(chǎn)防治病蟲害方面起了很大的作用。然而，這類農藥往往具有較高的潛在毒性，對人的健康威脅極大。隨著有機磷農藥使用量的逐年增加，對環(huán)境的污染問題也日趨嚴重。蔬菜、水果、糧食等食品是人們生活中的必需品，且恰恰正是這些必需品，一直被直接或間接地用到有機磷農藥，如果食用了被有機磷農藥污染并有過量殘留的農產(chǎn)品，輕者會給人們的身體健康帶來不良影響，重者可能導致急性中毒甚至危及生命。因吃有毒的蔬菜而引起的傷害之事時有所聞，有機磷類農藥引起的食物中毒事件也是所有農藥中毒事件中最多、后果最嚴重的一種，這也引起了社會的普遍關注。因此，對農產(chǎn)品中有機磷農藥殘留的檢測一直是農業(yè)、環(huán)保、衛(wèi)生、商檢部門的重要任務，更是衛(wèi)生、公安部門應急突發(fā)事件檢測的首要任務。傳統(tǒng)的檢測方法大多采用酶抑制法和色譜分離技術，酶抑制法測定靈敏度相對較低、并且不能對各種有機磷進行分品種定性定量，只能作為篩選方法；色譜分離技術包括薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等分析技術，其原理是利用特征吸收峰在色譜上的保留時間和相應的峰信號強度來判定農藥種類及其含量，這類方法操作繁瑣、耗時，因為僅依據(jù)保留時間定性，可能會將雜質峰誤判為是待測組分，定性可靠性和定量準確度相對較差，而且不是國際公認確證方法，不利于實地操作。
近年氣相色譜-質譜測定方法，又稱GC/MS法開始在我國農殘分析領域開發(fā)應用，資料顯示，開發(fā)應用最廣的是GC/MS外標法，它是一種簡便、快速的絕對定量方法，具體作法是首先用標準樣品配制成不同濃度的標準系列，在與欲測組分相同的色譜、質譜條件下，等體積準確量進樣，利用質譜圖解析分子結構對待測物進行定性，測量待測物峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準工作曲線。在測定樣品中的組分含量時，要用與繪制標準工作曲線完全相同的色譜、質譜條件作出色譜圖，測量色譜峰的峰面積或峰高，然后根據(jù)峰面積和峰高在標準工作曲線上直接查出進入色譜柱中樣品組分的濃度。其優(yōu)點是定性準確度高于普通色譜方法，在GC/MS儀器狀態(tài)一直保持穩(wěn)定、測定條件完全一致情況下，繪制好標準工作曲線，計算時可直接從標準工作曲線上讀出樣品中含量，這對大量樣品分析十分合適。其缺點是每次樣品分析的色譜、質譜條件(檢測器的響應性能，柱溫度，流動相流速及組成，進樣量，柱效、質譜離子源污染程度等)很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差；另外，標準工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標準樣品，因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進行補償，難以控制測定質量和判斷由此產(chǎn)生的誤差大小。
針對這種情況，技術人員有時采用內標法檢測農產(chǎn)品中的農藥殘留，如中國專利(授權公告號為CN1164941C，專利號為01127140.X)公開了一種“禽蛋中微量有機氯農藥及多氯聯(lián)苯殘留量的測定方法”，它以PCB2和PCB209為內標，運用氣相色譜法進行檢測，但是它僅僅是在上機測定的溶液中加入內標，以獲得相應的校正曲線，減少測量儀器狀態(tài)變化帶來的誤差，它在樣品前處理過程中沒有加入內標物，無法補償在樣品的制備和處理過程中殘留農藥的損失，也就無法得到準確的殘留物的含量；同時由于是氣相色譜方法，同樣存在常規(guī)氣相色譜方法僅靠保留時間定性可能將雜質峰誤判為待測物的缺陷。
三.

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的克服當前檢測方法的不足，提供一種檢測速度快、對多殘留有機磷無測定歧視，結果準確度高、重現(xiàn)性好、靈敏度達到國家標準要求的、針對食品中多殘留有機磷的、GC/MS內標同時測定方法，以適應衛(wèi)生和公安應急檢測，適應農業(yè)、衛(wèi)生、商檢、公安、技術監(jiān)督、海關、環(huán)保、教育、科研的基層分析單位日常檢測的需要。
本發(fā)明的技術方案是一種同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，包括樣品前處理過程、標準及曲線配制過程，以及氣相色譜-質譜儀定性、定量測定過程，其中樣品前處理過程時，先將樣品混勻、細化，稱取樣品5-20g后，加入內標及回收率指示物，內標及回收率指示物加入量應保證最終上機測定有機相中濃度為2.5-5.0mg/L，混勻后加入20-30ml混合溶劑避光超聲提取20-30分鐘，濾渣用20-30ml混合溶劑振搖提取，剩余殘渣再用20-30ml有機溶劑洗滌，所得全部濾液脫水后抽濾濃縮，后用混合溶劑定容至2.5-5ml，高速離心，取上清液進行測定，所述內標為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，所述回收率指示物為1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；標準及曲線配制過程配制各種濃度的標準溶液，配制過程中同時添加所述內標及回收率指示物，并保證所述內標及回收率指示物的添加量與樣品最終上機測定的有機相中濃度一致，然后分別注入氣相色譜-質譜儀中進行測定，以標準系列濃度為橫坐標，標準目標化合物定量離子與相應內標定量離子峰面積比值為縱坐標制作標準曲線。
所述氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-25分鐘之間的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正。
所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯對物理性質和化學性質相對較不穩(wěn)定的有機磷的測定準確度進行質量控制，回收率指示物氘代蓖對物理性質和化學性質相對穩(wěn)定的有機磷的測定準確度進行質量控制，兩種回收率指示物同時對測定全過程進行質量控制。
所述的混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有機溶劑為二氯甲烷。
所述的脫水、凈化過程為所得的全部濾液過無水硫酸鈉、硅藻土柱脫水、凈化，濃縮過程在旋轉蒸發(fā)儀上進行。
所述的離心過程為首先將濃縮后的有機相用混合溶劑定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上轉速條件下離心3～10分鐘，然后再取上清液在16000r/min條件下，高速離心2～4分鐘。
所述氣相色譜-質譜儀定性、定量測定過程中氣相色譜-質譜儀的測定工作條件為a.色譜條件色譜柱為DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)，30m×0.32mm(0.25mm)×0.25μm，載氣為氦氣，進樣口溫度為270℃，進樣方式為不分流進樣，進樣時間1min，進樣量2μl，柱流量為1.78ml/min，以壓力控制模式，分流比為10，升溫程序為60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；b.質譜條件離子源溫度200℃，接口溫度250℃，電子轟擊能70eV，檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min，檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min，掃描質量范圍40-440，掃描間隔0.5sec。
所述的氣相色譜-質譜儀的全掃描方式定性方法是采用全掃描譜庫檢索與相應保留時間提取質量色譜圖進行特征選擇離子指紋圖譜定性相結合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標準，要求相應保留時間下，特征鑒定離子中，至少3個特征離子的豐度比例變化不大于標準的相同離子豐度比例的±20％。
所述的氣相色譜-質譜儀的定量方法為選擇各目標化合物特征離子中豐度較高噪聲相對較低的離子為定量離子，測定時，吸取添加有內標及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入氣相色譜-質譜儀中，定性確證有機磷農藥品種后，對定量離子進行峰積分，再配制對應的標準溶液，繪制內標法標準曲線，將樣品測得比值與標準曲線比較定量；或者以內標法配制與待測目標化合物濃度接近的單點標準，將樣品測得比值與單點標準比較定量。
本發(fā)明的有益效果是1.本發(fā)明克服了GC/MS外標標準曲線法中，每次樣品分析時色譜、質譜條件很難完全相同而引起的誤差把內標和回收率指示物加到標準和樣品中，使欲測組分、內標和回收率指示物在同一色譜條件下進行分析，通過進行誤差校正，可使定量的準確度提高。
2.本發(fā)明克服了GC/MS外標標準曲線法中由于進樣量不準確產(chǎn)生的誤差因為內標法測定中的欲測組分、內標和回收率指示物在同一檢測條件下響應值之比與進樣量多少無關，而內標法的定量依據(jù)是響應值之比。
3.本發(fā)明在一定程度上克服了GC/MS外標標準曲線法中樣品前處理過程產(chǎn)生的誤差在樣品前處理開始即加入內標和回收率指示物，這樣可以對包括樣品前處理過程在內的整個操作過程進行有效的質量控制，可以對操作失誤和儀器狀態(tài)異常變化帶來的偶然誤差進行正確判斷，可以通過回收率指示物的回收率判斷和校正測定誤差。
4.本發(fā)明采用多內標分段質控法，克服了普通內標法采用單一內標對多種化合物同時進行測定質控時，由于難以兼顧造成質控效果不佳，甚至使部分化合物失控的問題本發(fā)明內標法同時加入氘代屈，氘代蓖，氘代菲多個內標指示物，其中氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前(色譜柱溫度在130℃-150℃之間)的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-20分鐘之間(色譜柱溫度在150℃-200℃之間)的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后(色譜柱溫度在210℃-265℃之間)的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，即使一次同步測定有機磷的種類提高到30多種，也不會出現(xiàn)失控現(xiàn)象，對提高多成份同時定量分析的準確度和精度做出了貢獻。
5.本發(fā)明采用添加回收率指示物的內標法，克服了普通內標法對樣品操作失誤和儀器狀態(tài)偶然異常變化造成的偶然誤差難以及時進行正確判斷的缺點，提高了方法回收率的穩(wěn)定性，解決了測定失控的判斷問題采用氘代比作為回收率指示物，對性質相對穩(wěn)定的有機磷化合物測定準確度進行質量控制或進行誤差校正，采用1，3二甲基-2硝基苯作為回收率指示物，對性質相對較不穩(wěn)定的有機磷化合物測定準確度進行質量控制或進行誤差校正，由于針對不同性質有機磷采用不同的回收率指示物，使測定誤差直接反映在回收率指示物的測定結果上，不僅可使操作人員及時了解測定過程產(chǎn)生的誤差大小、測定結果的準確度，并可根據(jù)回收率指示物的回收率在一定程度上對測定結果進行適當?shù)恼`差校正，對提高多成份同時定量分析的準確度做出了貢獻。
6.本發(fā)明研發(fā)了較大口徑(30m×0.32mm×0.25μm)毛細管柱測定多種有機磷目標化合物的色譜-質譜技術。由于改用較大口徑毛細管柱對目標化合物進行色譜分離，解決了多種有機磷目標化合物同時測定色譜分離難的問題，改善了含N化合物在常規(guī)毛細管柱上色譜峰拖尾帶來的相近峰部分重疊現(xiàn)象，促進了有機磷化合物之間、有機磷化合物與樣品基質之間的分離，使得簡化、優(yōu)化的前處理方法得以實施，可大大提高樣品前處理速度，對應急有機磷毒檢十分有利。
7.本發(fā)明研發(fā)的多種有機磷農殘的GC/MS法SCAN\SIM檢測方式的全面、詳細的檢測技術，適用于不同儀器狀態(tài)、不同溶劑介質、常見樣品基質中的多種有機磷目標化合物的同時測定。該發(fā)明SIM檢測方式指紋圖譜技術對定性確證提供了可靠質量保證，不僅解決了常量多殘留有機磷同時準確定性測定中存在的問題，也解決了低濃度有機磷多殘留的定性問題，為最大限度地減少復雜樣品基質雜質帶來的測定干擾，提高測定技術方法的靈敏度作出了貢獻。
8.本發(fā)明的發(fā)明人通過大量試驗確定了多種有機磷目標化合物和內標及回收率指示物的可靠定量離子，解決了復雜樣品基質下多殘留有機磷質譜準確定量問題。其技術原理是，保留時間內真正由殘留農藥裂解的特征離子碎片，是質譜儀定量的依據(jù)。
9.本發(fā)明研發(fā)了適用于普通實驗室的混合溶劑、分步提取的快速前處理方法，并研發(fā)了適用于常規(guī)樣品的簡單優(yōu)化的前處理凈化過程，解決了基層應用單位在前處理設備落后情況下，因為前處理過程復雜、周期長而出現(xiàn)樣品污染、樣品損失，造成測定回收率不穩(wěn)定、結果不準確，不能正常大量開展工作的問題，提高了測定效率、測定方法靈敏度和準確度。單樣品前處理測定時間由原來的幾個小時縮短為20-40分鐘。其技術原理是，在樣品前處理方面，只有處理樣品的過程簡單、處理速度快、引進的誤差小、對欲測定組分的選擇性高，樣品回收率才會好，才能保證檢測結果準確。
10.本發(fā)明具有廣泛的社會應用價值。它不僅能滿足衛(wèi)生部門、公安部門應對與有機磷中毒有關的突發(fā)事件的應急檢測的需要，也可應用于農藥生產(chǎn)企業(yè)，為鑒定農藥組分、定量農藥純度服務，可應用于環(huán)保等公用事業(yè)單位進行環(huán)境有機磷污染調查，應用于大專院校為有機磷生命科學的研究服務，還可應用于其他研究機構進行與有機磷分析有關的研究技術服務，是一種快速、準確、有效的定性、定量確證檢驗技術。
本發(fā)明有益效果的具體數(shù)據(jù)說明參見表一、表二、表三。表一和表二是用同一臺儀器，在同樣的實驗條件下，對不同濃度的目標化合物混合標準系列進行測定的結果，分別以外標法和內標法進行結果比較。從表二外標法結果可以看出甲拌磷等十余種目標化合物標準系列線性很差，這是由于不同濃度混合標準放置時間不同、測定時儀器狀態(tài)變化、不同人員進樣差別等引起的測定誤差帶來的結果；由于同時進行了內標法測定，同樣的實驗結果以內標法進行校正后，上述外標法的缺點即得以克服，標準系列線性良好，見表一。表三是以回收率指示物氘代蓖為代表進行的方法精密度測定實驗結果，對同一濃度水平的混合標準溶液和內標(5mg/L)，每天測定一次，連續(xù)25天的測定中，作為回收率指示物的氘代蓖峰面積與內標氘代屈峰面積比值范圍0.497±0.0337，氘代蓖峰面積與內標氘代菲的峰面積比值范圍2.230±0.056，氘代蓖峰面積與內標氘代屈、氘代菲的峰面積比值的RSD分別為7.05％和4.84％，證明該內標法具有良好的精密度；同樣的標準若以外標法進行測定定量，氘代蓖峰面積絕對值范圍為83383-3548244單位，同一標準不同時間測定定量結果最大誤差達到55％，測定精度與內標法根本無法相比。
四.
具體實施例方式實施例一.試驗儀器島津GCMS-QP2010氣相色譜質譜儀，EI源；粉碎機；組織搗碎機；超聲波提取器；電動振蕩器；旋轉蒸發(fā)儀；具塞錐形瓶，250mL；分液漏斗250mL。臺式離心機(4000r/min以上)；GL--16高速臺式離心機(16000r/min以上)；旋渦式振蕩器；加樣槍(100μl-1000ul；10μl---100μl；2μl-20μl；)槍頭用前以二氯甲烷及混合溶劑處理。
標準化合物及試劑內標指示物及回收率指示物為氘代屈、氘代蓖、氘代菲和1，3二甲基-2-硝基苯，有機溶劑為二氯甲烷，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1。氘代屈、氘代蓖、氘代菲分別用D8、D10、D12表示。
小麥樣品的制備方法取1公斤有代表性的小麥樣品經(jīng)粉碎機粉碎，過40目篩后，備用。
提取和凈化過程稱取上述試樣20g，精確至0.001g，置于具塞錐形瓶中，分別加入內標及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲和1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混勻，加入30mL混合溶液，避光超聲提取0.5h，抽濾，殘渣用20mL混合溶劑振搖提取、洗滌一次，合并濾液，剩余殘渣再用30mL二氯甲烷分數(shù)次洗滌，過濾，合并所有濾液，過無水硫酸鈉，于旋轉蒸發(fā)儀上濃縮，用混合溶劑定容至5mL，3500r/min以上離心10分鐘；取上清液1mL轉入1.5ml一次性離心試管中，16000r/min，高速離心2分鐘；取澄清有機相2μl進樣。
氣相色譜--質譜儀測定條件及定性定量方法1.色譜條件色譜柱DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)30m×0.32mm(0.25mm)×0.25μm載氣氦氣；進樣口溫度270℃；進樣方式不分流進樣；進樣時間1min；進樣量2μl；柱流量1.78(1.0)ml/min，壓力控制模式；分流比10；升溫程序60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min。
2.質譜條件離子源溫度200℃；接口溫度250℃；電子轟擊能70eV；檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min
檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min；SIM(選擇離子掃描)，掃描時間段、選擇離子見表四；掃描質量范圍40-440；掃描間隔0.5sec；3.氣相色譜--質譜儀定性定量方法全掃描檢測模式定性標準采用全掃描譜庫檢索與相應保留時間提取質量色譜圖進行特征選擇離子定性相結合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標準按歐盟殘留分析要求選確認鑒定點數(shù)，相應保留時間下，要求特征離子中，至少3個特征離子的豐度變化，不大于標準的相同離子豐度的±20％。
定量計算選擇豐度較高樣品及溶劑基質中噪聲相對較低的離子為定量離子。以標準系列濃度為橫坐標，標準目標化合物定量離子與相應內標定量離子峰面積比值為縱坐標制作標準曲線；待測目標化合物定量離子峰面積與相應內標定量離子峰面積比值，扣除空白后，與相應目標化合物標準曲線或與待測目標化合物濃度接近的單點標準的比值比較定量。各待測目標化合物對應參照內標、對應回收率指示物見表五。
樣品的測定及分析結果表述測定吸取2.0μl添加有內標及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入GC/MS中，定性確證有機磷農藥品種后，對定量離子進行峰積分；再分別配制各種濃度的對應標準溶液(配制同時添加內標及回收率指示物)，分別注入GC/MS中，繪制成標準曲線，將樣品測得比值與標準曲線比較定量；或者以單點法定量。
分析結果的表述X＝A×V×1000/m式中X----樣品中有機磷的含量，mg/kg；A----進樣樣液中有機磷的含量(由標準曲線查出)，μg；V----樣品提取液濃縮定容體積，mL；m----樣品質量，g。
上述小麥樣品中測定結果為檢出氧化樂果0.0411mg/kg，甲胺磷0.0052mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例二本實施例與實施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的大米為樣品，加入的內標及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝7∶0.6∶1.5。
上述大米樣品測定結果為檢出氧化樂果0.0356mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例三本實施例與實施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的玉米為樣品，分別加入內標及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、和1，3二甲基-2-硝基苯，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝5∶0.4∶0.8。
上述玉米樣品測定結果為檢出甲胺磷0.0032mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例四菜花樣品中有機磷的測定。本實施例與實施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取有代表性的菜花樣品1公斤左右，丟掉非可食用部分后，剁碎或經(jīng)組織粉碎制成試樣，稱取試樣20g，精確至0.001g，置于具塞錐形瓶中，分別加入內標及回收率指示物各25μg，混勻，加無水硫酸鈉吸水至混合樣品干燥成散狀，其余同實施例一。
上述菜花樣品測定結果為檢出甲基對硫磷0.0067mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例五西紅柿樣品中有機磷的測定。本實施例與實施例四基本相同，相同之處不重述，不同之處在于加入的內標及回收率指示物氘代屈、氘代蓖、氘代菲，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4∶0.3∶1.5。上述西紅柿樣品測定結果為檢出二嗪農0.0581mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例六青菜樣品中有機磷的測定。本實施例與實施例四基本相同，相同之處不重述，不同之處在于加入的內標及回收率指示物氘代屈、氘代蓖，各25μg，混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝8∶0.8∶1.5。上述青菜樣品測定結果為檢出殺撲磷0.1491mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
實施例七食物中毒樣品中有機磷的測定。本實施例與實施例一基本相同，相同之處不重述，不同之處在于取中毒患者的嘔吐物5克，所有濾液過無水硫酸鈉及硅藻土柱凈化。其測定結果為檢出甲胺磷10.5491mg/kg，未檢出其他有機磷農藥。
表一內標、回收率指示物和目標化合物內標法測定曲線



表四選擇離子掃描時間通帶及選擇離子


權利要求
1.一種同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，包括樣品前處理過程、標準及曲線配制過程，以及氣相色譜-質譜儀定性、定量測定過程，其特征是樣品前處理過程時，先將樣品混勻、細化，稱取樣品5-20g后，加入內標及回收率指示物，內標及回收率指示物加入量應保證最終上機測定有機相中濃度為2.5-5.0mg/L，混勻后加入20-30ml混合溶劑避光超聲提取20-30分鐘，濾渣用20-30ml混合溶劑振搖提取，剩余殘渣再用20-30ml有機溶劑洗滌，所得全部濾液脫水后抽濾濃縮，后用混合溶劑定容至2.5-5ml，高速離心，取上清液進行測定，所述內標為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，所述回收率指示物為1，3二甲基-2-硝基苯或氘代蓖，所述混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝4～8∶0.3～0.7∶0.8～1.5；標準及曲線配制過程配制各種濃度的標準溶液，配制過程中同時添加所述內標及回收率指示物，并保證所述內標及回收率指示物的添加量與樣品最終上機測定的有機相中濃度一致，然后分別注入氣相色譜-質譜儀中進行測定，以標準系列濃度為橫坐標，標準目標化合物定量離子與相應內標定量離子峰面積比值為縱坐標制作標準曲線。
2.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述氘代屈對色譜保留時間在15分鐘以前的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代蓖對色譜保留時間在15-25分鐘之間的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正，氘代菲對色譜保留時間在25分鐘以后的有機磷類化合物進行測定質控或進行誤差校正。
3.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述回收率指示物1，3二甲基-2-硝基苯對物理性質和化學性質相對較不穩(wěn)定的有機磷的測定準確度進行質量控制，回收率指示物氘代蓖對物理性質和化學性質相對穩(wěn)定的有機磷的測定準確度進行質量控制，兩種回收率指示物同時對測定全過程進行質量控制。
4.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述的混合溶劑為環(huán)己烷∶丙酮∶異辛烷＝6∶0.5∶1.0，所述的有機溶劑為二氯甲烷。
5.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述的脫水、凈化過程為所得的全部濾液過無水硫酸鈉、硅藻土柱脫水、凈化，濃縮過程在旋轉蒸發(fā)儀上進行。
6.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是，所述的離心過程為首先將濃縮后的有機相用混合溶劑定容至2.5-5ml，然后在3500r/min以上轉速條件下離心3～10分鐘，然后再取上清液在16000r/min條件下，高速離心2～4分鐘。
7.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述氣相色譜-質譜儀定性、定量測定過程中氣相色譜-質譜儀的測定工作條件為a.色譜條件色譜柱為DB5-MS柱(DB17-MS，DB-1)，30m×0.32nm(0.25mm)×0.25μm，載氣為氦氣，進樣口溫度為270℃，進樣方式為不分流進樣，進樣時間1min，進樣量2μl，柱流量為1.78ml/min，以壓力控制模式，分流比為10，升溫程序為60℃保持1.0min，以40℃/min升到110℃，以5.0℃/min升到190℃，以3℃/min升到210℃，以5.0℃/min升到220℃，以40℃/min升到265℃保持5min；b.質譜條件離子源溫度200℃，接口溫度250℃，電子轟擊能70eV，檢測器電壓1.09Kv，溶劑切除時間3.0min，檢測方式SCAN(全掃描)，掃描時間段3.50-33.00min，掃描質量范圍40-440，掃描間隔0.5sec。
8.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述的氣相色譜-質譜儀的全掃描方式定性方法是采用全掃描譜庫檢索與相應保留時間提取質量色譜圖進行特征選擇離子指紋圖譜定性相結合的方法定性；選擇離子檢測模式定性標準，要求相應保留時間下，特征鑒定離子中，至少3個特征離子的豐度比例變化不大于標準的相同離子豐度比例的±20％。
9.根據(jù)權利要求1所述的同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，其特征是所述的氣相色譜-質譜儀的定量方法為選擇各目標化合物特征離子中豐度較高噪聲相對較低的離子為定量離子，測定時，吸取添加有內標及回收率指示物的試劑空白溶液及樣品溶液，分別注入氣相色譜-質譜儀中，定性確證有機磷農藥品種后，對定量離子進行峰積分，再配制對應的標準溶液，繪制內標法標準曲線，將樣品測得比值與標準曲線比較定量；或者以內標法配制與待測目標化合物濃度接近的單點標準，將樣品測得比值與單點標準比較定量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同時測定食品中殘留的多種有機磷的GC/MS內標檢測方法，該方法在樣品前處理過程開始即加入內標及回收率指示物，所述內標為氘代屈、氘代蓖和氘代菲中的一種或兩種或三種，回收率指示物為1，3二甲基－2－硝基苯或氘代蓖，混合溶劑由環(huán)己烷、丙酮、異辛烷按一定比例混合而成；標準曲線配制過程中同時添加所述內標及回收率指示物，經(jīng)GC/MS測定后，以標準系列濃度為橫坐標，標準目標化合物定量離子與相應內標定量離子峰面積比值為縱坐標制作標準曲線，樣品經(jīng)GC/MS定性后，峰面積比值與標準比較定量。本發(fā)明對測定全過程進行質量控制，通過內標和回收率指示物進行結果定量、誤差判斷和校正，提高測量精度和準確度。
文檔編號G01N30/06GK1693890SQ20051001753
公開日2005年11月9日 申請日期2005年4月22日 優(yōu)先權日2005年4月22日
發(fā)明者李永香, 李玉秦, 李多多, 明佳佳, 房其美, 周麗娟 申請人:鄭州市疾病預防控制中心