專利名稱：一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)研究及臨床應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法。
背景技術(shù)：
研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)人體感染疾病時(shí)，血清或體液中含有與疾病有關(guān)的病原微生物相關(guān)指標(biāo)、細(xì)胞因子，如特異性IgG/IgM抗體、抗原及細(xì)胞因子。通過酶聯(lián)免疫測(cè)定法、放射免疫測(cè)定法、熒光免疫測(cè)定法可以測(cè)定其含量，有助于對(duì)疾病的早期診斷、鑒別、發(fā)現(xiàn)。目前用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢查方法有病原微生物的分離鑒定、免疫學(xué)診斷、基因?qū)W診斷，操作復(fù)雜，檢測(cè)周期長(zhǎng)，DNA擴(kuò)增的高效性導(dǎo)致假陽性高，免疫學(xué)方法包括補(bǔ)體結(jié)合法(CF)、間接免疫熒光法(IFA)、免疫粘附法(IAHA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等，但這些方法都不太理想，存在的主要的問題是1、操作麻煩一般只能檢測(cè)一種指標(biāo)，因此需要重復(fù)操作，增加工作量；2、檢測(cè)周期長(zhǎng)要檢測(cè)多種病原微生物及細(xì)胞因子，就需要進(jìn)行大量重復(fù)工作；3、成本高需要花費(fèi)大量的人力、物力、財(cái)力；4、檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確由于實(shí)驗(yàn)條件不統(tǒng)一，批間差大，因此檢測(cè)結(jié)果不夠準(zhǔn)確，限制了臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的操作麻煩、檢測(cè)周期長(zhǎng)、成本高和檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問題。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，依次包括下述步驟①用生物活性物質(zhì)包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤(rùn)濕；③加入待測(cè)樣品將使蛋白芯片中的活性物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；④用免疫金試劑對(duì)蛋白芯片進(jìn)行二次結(jié)合反應(yīng)，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對(duì)蛋白芯片進(jìn)行分析、檢測(cè)通過檢測(cè)蛋白芯片的發(fā)光強(qiáng)度與對(duì)照值，得出相應(yīng)的待測(cè)抗原或抗體的含量。
上述方案中，①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的抗體，如抗人IgG/IgM抗體進(jìn)行反應(yīng)。該方案適用于檢測(cè)血清或體液中各種特異性抗體。
上述方案中，①用抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的抗體。該方案適用于檢測(cè)血清或體液中各種抗原。
上述方案中，①用細(xì)胞因子單克隆抗體抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的配對(duì)單克隆抗體。該方案適用于檢測(cè)細(xì)胞因子。
上述方案中，第⑤步用蛋白芯片閱讀儀檢測(cè)，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式輸入。這樣大大提高芯片閱讀速度、提高了蛋白芯片的準(zhǔn)確性。避免手工輸入造成的時(shí)間浪費(fèi)和差錯(cuò)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快速由于利用蛋白芯片上的數(shù)十種、數(shù)百種抗原或特異性抗體對(duì)被測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，其操作步驟僅需兩步即可完成，在5-10分鐘內(nèi)即可給出檢測(cè)結(jié)果；
2、敏感性高可以檢測(cè)出待測(cè)樣品中極其微量的抗原或抗體的含量；3、特異性強(qiáng)因?yàn)槭翘禺愋缘目乖涂贵w反應(yīng)，因而具有很高的特異性；4、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可靠性好各項(xiàng)試驗(yàn)流程易于標(biāo)準(zhǔn)化，一次完成檢測(cè)，試驗(yàn)誤差小，重復(fù)性好，可有效保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠；5、成本低、減輕患者負(fù)擔(dān)試劑消耗少，設(shè)備的重復(fù)使用減少，有效降低檢測(cè)成本；因此可廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)及進(jìn)行研究。
6、適用范圍廣使用本方法可用于人血清或體液中各種疾病相關(guān)的特異性抗原或抗體含量的檢測(cè)，如各種病原微生物抗原或抗體、各種細(xì)胞因子、各種細(xì)胞的可溶性表面標(biāo)記、各種可溶性受體分子等。
具體實(shí)施例方式發(fā)明人給出了以下的實(shí)施例，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1、使用蛋白芯片進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育病毒十項(xiàng)的檢測(cè)①準(zhǔn)備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時(shí)準(zhǔn)備弓形體、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹I(lǐng)型和單純皰疹I(lǐng)I型病毒抗原，然后進(jìn)行點(diǎn)樣包被，用抗人IgG/IgM標(biāo)記膠體金，即形成可檢測(cè)優(yōu)生優(yōu)育病毒十項(xiàng)的蛋白芯片。
②將上述蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤(rùn)濕；③加入200μl待測(cè)血清進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，再逐滴加入洗滌液8滴；④逐滴加入膠體金標(biāo)記的抗人IgG/IgM8滴，再逐滴加入洗滌液6滴；⑤用蛋白芯片閱讀儀對(duì)蛋白芯片進(jìn)行分析、檢測(cè)。
實(shí)施例2、使用蛋白芯片進(jìn)行心肌梗塞標(biāo)志物的檢測(cè)①準(zhǔn)備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時(shí)準(zhǔn)備8種不同特異性的單克隆抗體，然后點(diǎn)樣包被，再用這些配對(duì)單克隆抗體分別標(biāo)記膠體金，即形成可檢測(cè)心肌梗塞標(biāo)志物蛋白芯片。
②將這些蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤(rùn)濕；③加入200μl待測(cè)血清進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，再逐滴加入洗滌液8滴，④逐滴加入單克隆抗體分別標(biāo)記的膠體金8滴，再逐滴加入洗滌液6滴，⑤蛋白芯片閱讀儀對(duì)蛋白芯片進(jìn)行分析、檢測(cè)。
實(shí)施例3、使用蛋白芯片進(jìn)行生殖道感染標(biāo)志物的檢測(cè)①準(zhǔn)備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時(shí)準(zhǔn)備4種不同特異性的羊抗或兔抗多克隆抗體，然后點(diǎn)樣包被，再用這些抗體分別標(biāo)記膠體金，即形成可檢測(cè)心肌梗塞標(biāo)志物蛋白芯片。
②將這些蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤(rùn)濕；③加入經(jīng)處理過的標(biāo)本進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，再逐滴加入洗滌液8滴，④逐滴加入抗體分別標(biāo)記的膠體金8滴，再逐滴加入洗滌液6滴，⑤用蛋白芯片閱讀儀檢測(cè)，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式，這樣大大提高芯片閱讀速度、提高了蛋白芯片的準(zhǔn)確性。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，其特征在于依次包括下述步驟，①用生物活性物質(zhì)包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤(rùn)濕；③加入待測(cè)樣品將使蛋白芯片中的活性物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；④用免疫金試劑對(duì)蛋白芯片進(jìn)行二次結(jié)合反應(yīng)，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對(duì)蛋白芯片進(jìn)行分析、檢測(cè)通過檢測(cè)蛋白芯片的發(fā)光強(qiáng)度與對(duì)照值，得出相應(yīng)的待測(cè)抗原或抗體的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，其特征在于所述步驟①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的抗體，如抗人IgG/IgM抗體進(jìn)行反應(yīng)。
3.如權(quán)利要求1所述的一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，其特征在于所述步驟①用抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的抗體。
4.如權(quán)利要求1所述的一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，其特征在于所述步驟①用細(xì)胞因子單克隆抗體抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤(rùn)濕，將蛋白芯片與待測(cè)樣品混合進(jìn)行抗原和抗體的特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；在第④步中二次結(jié)合反應(yīng)是指加入經(jīng)膠體金標(biāo)記過的相應(yīng)的配對(duì)單克隆抗體。
5.如權(quán)利要求2或3或4所述的一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，其特征在于所述第⑤步用蛋白芯片閱讀儀檢測(cè)，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式輸入。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)研究及臨床應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法。本發(fā)明的目的是要克服現(xiàn)有技術(shù)存在的操作麻煩、檢測(cè)周期長(zhǎng)、成本高和檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問題。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)的方法，依次包括下述步驟①用生物活性物質(zhì)包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤(rùn)濕；③加入待測(cè)樣品將使蛋白芯片中的活性物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合，再將蛋白芯片用洗滌液進(jìn)行洗滌；④用免疫金試劑對(duì)蛋白芯片進(jìn)行二次結(jié)合反應(yīng)，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對(duì)蛋白芯片進(jìn)行分析、檢測(cè)通過檢測(cè)蛋白芯片的發(fā)光強(qiáng)度與對(duì)照值，得出相應(yīng)的待測(cè)抗原或抗體的含量。
文檔編號(hào)G01N21/64GK1996018SQ20051002278
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2005年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月31日
發(fā)明者馬秦榮, 陶東, 任躍軍, 李治國(guó) 申請(qǐng)人:西安聯(lián)爾科技有限公司