專利名稱：一種檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬中藥制藥領域，涉及一種以靈芝植物特征物質(zhì)為基礎的系統(tǒng)、組合的質(zhì)量檢測方法，具體涉及一種檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑雙靈固本(商品名)質(zhì)量的方法。
背景技術(shù)：
靈芝是中醫(yī)藥用藥歷史較長的中藥之一，兩千年前東漢時期的《神農(nóng)本草經(jīng)》中將靈芝列為上品，認為“久食，輕身不老，延年神仙”。明朝李時珍編著的《本草綱目》中記載靈芝味苦、平，無毒，益心氣，活血，入心充血，助心充脈，安神，益肺氣，補肝氣，補中，增智慧，好顏色，利關(guān)節(jié)，堅筋骨，祛痰，健胃。
現(xiàn)代醫(yī)學證明靈芝含有多種生理活性物質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)、增強人體免疫力，對神經(jīng)衰弱、風濕性關(guān)節(jié)炎、冠心病、高血壓、肝炎、糖尿病、腫瘤等有良好的協(xié)同治療作用。最新研究表明靈芝還具有抗疲勞，美容養(yǎng)顏，延緩衰老，防治愛滋病等功效。
現(xiàn)代化學研究發(fā)現(xiàn)靈芝內(nèi)含化學結(jié)構(gòu)為四環(huán)三萜和五環(huán)三萜的靈芝三萜、靈芝多糖、靈芝多糖肽三個大類的化學物質(zhì)，除外還含有生物堿、酶類及微量元素等。由于靈芝化學成分的多樣性，使靈芝具有較廣泛的藥理活性。
雙靈固本(商品名)口服制劑是在中醫(yī)藥理論的基礎指導下，研制成的含有靈芝活性成分的口服制劑。經(jīng)臨床觀察證明具滋補強身，扶正固本的功效。對消化道腫瘤及術(shù)后，放、化療引起的體弱，厭食，失眠等癥有康復保健作用。為保持雙靈固本口服制劑其臨床恒定的有效性，需要一種能系統(tǒng)性、全過程控制雙靈固本口服制劑質(zhì)量的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能系統(tǒng)性、全過程控制雙靈固本口服制劑質(zhì)量的檢測方法。
雙靈固本口服制劑的組分為靈芝∶靈芝孢子為12.5∶1。
雙靈固本口服制劑的制備方法為取靈芝孢子，經(jīng)超音速噴霧負壓低溫干燥法破壁，備用。取靈芝粉碎成粗粉，加乙醇，加熱回流提取3次，濾過(藥渣備用)，合并濾液，減壓回收乙醇，并濃縮成浸膏，備用；藥渣加水煎煮3次，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮成浸膏，備用；合并上述兩種浸膏，加水稀釋成清膏，噴霧干燥，加入上述破壁的靈芝孢子，混勻，制成口服制劑。
本發(fā)明依據(jù)雙靈固本口服制劑內(nèi)容物的特征，采用定性鑒別和含量測定的組合方法，系統(tǒng)檢測靈芝內(nèi)含特征物質(zhì)靈芝多糖和靈芝總?cè)?，制定了能系統(tǒng)性測試內(nèi)在質(zhì)量的檢測方法。
本發(fā)明的技術(shù)是通過如下方案實現(xiàn)的本發(fā)明雙靈固本口服制劑的檢測方法以靈芝內(nèi)含特征物質(zhì)為基礎，包括對雙靈固本口服制劑的定性鑒別方法和含量測定方法二大部分。
其中所述的定性鑒別包括顯微鑒別、紫外燈、試劑顯色反應鑒別和以國家標準藥材為對照品的薄層層析定性鑒別。
顯微鑒別顯微鑒別是主要針對靈芝孢子粉這一特征物質(zhì)的檢測，靈芝孢子粉是靈芝發(fā)育后期彈射釋放出來的種子，生物學上稱擔孢子，集中后呈末狀，其形態(tài)為一層無色透明的膜狀物，內(nèi)孢壁較厚含堅硬幾丁質(zhì)。孢子體內(nèi)含有豐富的靈芝三萜、靈芝多糖、靈芝多糖肽等活性化學物質(zhì)，所述化學物質(zhì)只有破壁后才可能被人體吸收。目前破壁技術(shù)有物理法、化學法、生物酶解法，其中以物理破壁技術(shù)較佳。本發(fā)明通過顯微鑒別法，首先鑒別產(chǎn)品中有、無靈芝孢子存在，確定孢子的形態(tài)，孢體的狀態(tài)，如有孢子存在則進一步鑒別其破壁效果，測定孢子的大小為(6-10μm)×(11-14μm)，能有效地確?；颊叻脮r對有效活性物質(zhì)的吸收，紫外燈鑒別雙靈固本口服制劑由靈芝所組成，而靈芝中的三萜類化合物含有多個共軛雙鍵，其共軛雙鍵化合物在UV254um紫外燈光下會產(chǎn)生發(fā)色光團，故本方法用上述反應特征鑒別靈芝的特征。檢測結(jié)果表明本方法能有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，具有復性強的特點。
試劑顯色反應鑒別本發(fā)明采用α-萘酚乙醇溶液反應法和茚三酮試液反應法進行試劑顯色反應鑒別。
其中，α-萘酚乙醇溶液反應法依據(jù)靈芝內(nèi)含大量多糖類物質(zhì)，該多糖物質(zhì)在強酸的作用與α-萘酚乙醇溶液發(fā)生反應，由糖先轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡┗蚱溲苌铮倥c酚縮合并經(jīng)氧化而生成有色物質(zhì)。經(jīng)對多批雙靈固本口服制劑進行鑒別驗證，結(jié)果均顯示出上述特征性的反應。
茚三酮試液反應法依據(jù)靈芝內(nèi)含有肽類物質(zhì)的特征性反應進行設計，其原理是肽類物質(zhì)與茚三酮試液在熱的催化條件下，能形成有色的氨縮合物。此反應特征性較強。經(jīng)對多批雙靈固本口服制劑進行鑒別驗證，均顯示出特征性的反應。
薄層層析定性鑒別以國家認定的標準靈芝藥材進行點對點成分鑒別，方法的特點是將國家認定的標準藥材與檢驗樣品在同一供試液制備方法下，通過超聲處理提取，各吸取兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。檢測結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與國家認定的標準藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
上述方法的優(yōu)點在于能鑒別出產(chǎn)品中所用靈芝是否為國家認定的標準藥材靈芝及產(chǎn)品提取方式是否合理。本方法最大程度能體現(xiàn)在相同RF值位子上，有四組以上的成分，顯相同顏色的熒光斑點。所述方法具有鑒別性強、特征性明顯、重復性好的特點。
含量測定方法現(xiàn)代研究證實靈芝起藥理作用的主要物質(zhì)基礎是靈芝多糖和靈芝總?cè)疲景l(fā)明對所述二個物質(zhì)基礎進行含量測定，有利于雙靈固本口服制劑質(zhì)量的調(diào)控及其療效的發(fā)揮及對產(chǎn)品生產(chǎn)工藝、貯藏期質(zhì)量的控制。
1)靈芝多糖含量測定方法現(xiàn)有靈芝多糖的含量測定方法有許多種，一般分為直接水溶變色法、水解變色法、薄板吸附變色法和酶解變色法，前三種方法在測定時，被測液中多糖成分分子范圍廣，易受粗多糖等多糖結(jié)構(gòu)物質(zhì)的干擾，造成測定值不穩(wěn)定。
本發(fā)明對多糖的測定根據(jù)靈芝多糖的特性，采用10％α-淀粉酶溶液對靈芝中的多糖進行充分酶解，使其水解后形成單糖，再經(jīng)反應變色以無水葡萄糖為標準參比物進行紫外吸收的測定。包括下述步驟a.制備對照品溶液 精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得(每1ml含無水葡萄糖0.6mg)。
b.制備標準曲線 精密量取對照品溶液0.0ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸7.0ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰浴中5分鐘，取出，以第一份為空白，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VA)，在489nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
c.制備樣品液 取經(jīng)研細的內(nèi)容物約1.5g，精密稱定，置研缽中，加熱水少量研勻，移置100ml量瓶中，研缽用熱水洗滌數(shù)次，洗滌液并入量瓶中，水浴加熱15分鐘，冷卻至60℃以下。加1.0mL 10％α-淀粉酶溶液，加0.5ml醋酸鈉緩沖液(PH7.4)，密閉，于55-60℃保溫1小時后，加熱至沸。冷卻后，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml于離心管中，置快速混勻器上，緩慢滴加乙醇8ml，離心，取沉淀加水溶解，置100ml量瓶中，并稀釋至刻度備用。
d.含量測定 精密量取樣品液2ml，照b標準曲線的制備的方法，自“加4％苯酚1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中靈芝多糖的重量(ug)，計算，即得。
本方法克服了粗多糖，小分子多糖對測定值的影響，經(jīng)測得數(shù)值偏差幅度明顯小，重現(xiàn)性強。
靈芝多糖含量測定的方法學考查a.最大吸收波長的選擇精密量取葡萄糖對照品溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對照品溶液的稀釋液。精密量取對照品稀釋液2ml及供試品溶液2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸7.0ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰浴中5分鐘，取出，以蒸餾水2ml同上操作制做空白溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版附錄VB)試驗，在400～600nm波長范圍內(nèi)掃描。掃描結(jié)果顯示葡萄糖對照品和供試品的入max均為488.7nm。
b.顯色穩(wěn)定性的考察。
依照選擇的最大吸收波長對供試品溶液及對照品溶液測定方法及在入max處對供試品及對照品的顯色穩(wěn)定性進行考察結(jié)果表明，樣品在1-3小時內(nèi)測定結(jié)果。表1是穩(wěn)定性考察結(jié)果。
表1

c.標準曲線制備精密量取對照品溶液0.0ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液1ml，混勻，加入硫酸7.0ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰浴中5分鐘，取出，以第一份為空白，用分光光度法在489nm的波長處測定吸收度，結(jié)果表明，葡萄糖濃度在2.436～9.744ug/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。表2是線性關(guān)系考察結(jié)果。
表2

y＝0.0579x-0.0548 r＝0.9963d.精密度考察精密量取對照品溶液3.0ml，取6份照標準曲線方法測定，結(jié)果表明，精密度良好。表3是測定結(jié)果，精密度考察結(jié)果。
表3

e.重復性考察以雙靈固本口服制劑批號為050402供試品，照供試品溶液制備法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2ml，共6份，照標準曲線方法測定，表4是重復性考察結(jié)果。
表4

2)靈芝總?cè)坪繙y定靈芝含有豐富的飽和和不飽和三萜類化合物，其代表性成分有靈芝酸A、B、C-----等約120多種，從其結(jié)構(gòu)上分析該類物質(zhì)在強酸的存在下，與香草醛形成顯色反應，此顏色能在波長為560nm處有最大的吸收峰出現(xiàn)，本發(fā)明方法鑒于上述原理采用了本含量測定方法方法，其中參比物質(zhì)為中國藥品生物制品檢定所提供的批號為(110709-200304)的齊墩果酸標準品。本方法包括如下步驟a.制備對照品溶液 精密稱取105℃干燥至恒重的齊墩果酸對照品5.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得，每1ml含齊墩果酸0.20mg。
b.制備標準曲線 精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置試管中，于水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，在560nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
c.制備樣品液 取經(jīng)研細的內(nèi)容物約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，冷卻，加甲醇至刻度，混勻，過濾，濾液備用。
d.含量測定 精密量取樣品液1ml置試管中，于水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，在560nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中總?cè)频闹亓?mg)，計算，即得。
靈芝總?cè)坪繙y定的方法學考查a.最大吸收波長的選擇精密量取對照品溶液0.4ml分別置試管中，水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，照分光光度法在400-800nm范圍內(nèi)進行波長掃描，結(jié)果最大吸收峰為560nm。故以560nm作為測定波長。
b.線性關(guān)系的考察精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置試管中，水浴揮干溶劑，同上法制備對照品溶液，照分光光度法在560nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，含量(mg)為橫坐標，繪制標準曲線。表5是線性關(guān)系考察結(jié)果。
表5

回歸方程為Y＝4.7128X-0.0099 R＝0.9997結(jié)果表明齊墩果酸含量在0.0392～0.196mg范圍內(nèi)，含量與吸收度呈良好線性關(guān)系。
c.精密度試驗精密量取對照品溶液0.6ml共6份分別置試管中，水浴揮干溶劑，同上法制備對照品溶液，測定吸收度。表6是精密度試驗結(jié)果。
表6

結(jié)果表明齊墩果酸精密度試驗的RSD為0.89％.
d.穩(wěn)定性試驗取同一批號樣品制備供試品溶液，每間隔2小時測定吸收度。表7是穩(wěn)定性試驗結(jié)果。
表7

結(jié)果表明樣品溶液在8小時內(nèi)，樣品吸收值相對穩(wěn)定，RSD＝1.10％。
e.重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品制備供試品溶液5份，按上述條件，測定吸收度。
表8是重現(xiàn)性試驗結(jié)果。
表8

結(jié)果表明重現(xiàn)性試驗RSD為1.19％。
f.回收率試驗取已知含量的樣品0.2g，精密稱定，精密加入對照品3.5mg，置100ml量瓶中，加甲醇約80ml，超聲處理30分鐘，冷卻，加甲醇至刻度，混勻，過濾，精密量取續(xù)濾液1ml置試管中，自“水浴揮干溶劑”起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中總?cè)频闹亓?mg)，計算，即得。表9是齊墩果酸回收率試驗結(jié)果。
表9

結(jié)果表明齊墩果酸回收率達100.02％，RSD％為1.84％，方法準確性良好。
g.超聲提取時間的考查取已知含量的樣品0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理10、20、30、40、50分鐘，冷卻，加甲醇至刻度，依法制備供試品溶液，測定吸收度。表10是超聲提取時間的考察結(jié)果。
表10

結(jié)果表明樣品用超聲提取30分鐘后，總?cè)瞥煞旨纯商崛⊥耆?，故樣品采用超聲提?0分鐘，制備供試品溶液。
檢測結(jié)果顯示，本發(fā)明以靈芝植物特征物質(zhì)為基礎的系統(tǒng)、組合的質(zhì)量檢測方法，能用于放、化療康復治療的雙靈固本口服制劑的質(zhì)量檢測，本方法對雙靈固本口服制劑生產(chǎn)及貯藏期產(chǎn)品質(zhì)量的控制起到了監(jiān)控的作用，為雙靈固本口服制劑臨床療效的穩(wěn)定奠定了較為有效的基礎。


圖1是靈芝總?cè)坪妄R墩果酸對照品最大吸收峰。
具體實施例方式
實施例1采用系統(tǒng)、組合的檢測方法對多劑型雙靈固本口服制劑進行檢測1、顯微鑒別取經(jīng)研細內(nèi)容物1g，加水5ml，振搖，使靈芝浸膏粉溶解，靜置，待靈芝孢子沉淀，取沉淀物置顯微鏡下觀察散在孢子卵形，頂端平截，雙層壁，外壁透明平滑，內(nèi)壁棕褐色或淡棕色，有明顯的紋篩，孢子大小為(6-10μm)×(11-14μm)。
2、紫外燈鑒別取顯微鑒別項下的上層溶液，點于濾紙上，置紫外燈(254nm)下觀察，呈藍灰色熒光。
3、試劑顯色反應鑒別3.1α-萘酚顯色反應取經(jīng)研細內(nèi)容物0.5g，加水10ml，搖勻后靜置5分鐘，濾過，取濾液2ml，滴加新鮮配制的5％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，沿管壁緩緩滴加硫酸1ml，在兩液界面顯紫紅色環(huán)。
3.2茚三酮顯色反應取鑒別3.1項下的溶液，滴于濾紙上，晾干，滴加茚三酮試液1-2滴，在105℃烘數(shù)分鐘，顯紫紅色斑點。
4、薄層層析定性鑒別取經(jīng)研細內(nèi)容物1.0g，加乙醇10ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90℃)-醋酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
5、靈芝多糖的含量測定5.1對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得(每1ml含無水葡萄糖0.6mg)。
5.2標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.0ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸7.0ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰浴中5分鐘，取出，以第一份為空白，照分光光度法在489nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
5.3測定法 取本品10片，除包衣后研細，取約1.0g，精密稱定，置研缽中，加熱水少量研勻，移置100ml量瓶中，研缽用熱水洗滌數(shù)次，洗滌液并入量瓶中，水浴加熱15分鐘，冷卻至60℃以下。加1.0mL 10％α-淀粉酶溶液，密閉，于55-60℃保溫1小時后，加熱至沸。冷卻后，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml于離心管中，置快速混勻器上，緩慢滴加乙醇8ml，離心，取沉淀加水溶解，置100ml量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取2ml，照標準曲線的制備項下的方法，自“加4％苯酚1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中靈芝多糖的重量(ug)，計算，即得。
6、靈芝總?cè)频臏y定6.1對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的齊墩果酸對照品5.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得(每1ml含齊墩果酸0.20mg)。
6.2標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置試管中，水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，照分光光度法在560nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
6.3測定法 取靈芝測定項下研細的粉末約0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，冷卻，加甲醇至刻度，混勻，過濾，精密量取續(xù)濾液1ml置試管中，自“水浴揮干溶劑”起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中總?cè)频闹亓?mg)，計算，即得。
本品每片含靈芝總?cè)埔札R墩果酸計，不得少于9.0mg。
本品每片含靈芝多糖以無水葡萄糖(C6H12O6)計，不得少于32mg。
表11是本發(fā)明檢測方法對各劑型雙靈固本口服制劑檢測結(jié)果。
表11

權(quán)利要求
1.一種檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于采用定性鑒別和含量測定的組合方法，系統(tǒng)檢測靈芝內(nèi)含特征物質(zhì)靈芝多糖和靈芝總?cè)?，所述定性鑒別方法及其檢測步驟依次為顯微鑒別、紫外燈、試液反應鑒別和薄層層析鑒別；所述含量測定方法及其檢測步驟依次為靈芝多糖含量測定和靈芝總?cè)坪繙y定。
2.如權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于其中所述的顯微鑒別方法包括下述步驟取研細的待檢樣品內(nèi)容物1g，加水5ml，振搖，使靈芝浸膏粉溶解，靜置，待靈芝孢子沉淀，取沉淀物置顯微鏡下觀察孢子形態(tài)。
3.如權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于其中所述的紫外燈鑒別包括下述步驟取研細的待檢樣品內(nèi)容物1g，加水5ml，振搖，使靈芝浸膏粉溶解，靜置，待靈芝孢子沉淀后吸取上層溶液，點于濾紙上，置紫外燈(254nm)下觀察熒光色。
4.如權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于其中所述的試液反應鑒別包括下述步驟(1)取待檢樣品0.5g，加水10ml，搖勻后靜置5分鐘，濾過，取濾液2ml，滴加新配制的5％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，沿管壁緩緩滴加硫酸1ml，在兩液界面顯紫紅色環(huán)；(2)取待檢樣品0.5g，加水10ml，搖勻后靜置5分鐘，濾過，取濾液滴于濾紙上，晾干，滴加茚三酮試液1-2滴，在105℃烘數(shù)分鐘，顯紫紅色斑點。
5.權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于其中所述的薄層層析鑒別包括如下步驟，取取待檢樣品0.5g，加乙醇10ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液，另取靈芝對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚，60-90℃，—醋酸乙酯，8∶2，為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。
6.如權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于所述的靈芝多糖的含量測定方法通過如下步驟a.對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖60mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得，每1ml含無水葡萄糖0.6mg；b.標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.0ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸7.0ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰浴中5分鐘，取出，以第一份為空白，照分光光度法，在489nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；c.樣品液制備取經(jīng)研細的內(nèi)容物約1.5g，精密稱定，置研缽中，加熱水研勻，移置瓶中，研缽用熱水洗滌，洗滌液并入量瓶中，水浴加熱15分鐘，冷卻至60℃以下，加1.0mL 10％α-淀粉酶溶液，加0.5ml醋酸鈉緩沖液，PH7.4，密閉，于55-60℃保溫1小時，加熱至沸，冷卻后，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取續(xù)濾液2ml于離心管中，置快速混勻器上，滴加乙醇8ml，離心，取沉淀加水溶解，置量瓶中，備用；d.含量測定量取樣品液2ml，照b標準曲線的制備的方法，自“加4％苯酚1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中靈芝多糖的重量，計算，即得。
7.如權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法，其特征在于其中所述的靈芝總?cè)频暮繙y定通過如下步驟a.對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的齊墩果酸對照品5.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得，每1ml含齊墩果酸0.20mg；b.標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分別置試管中，于水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，在560nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；c.樣品液制備取經(jīng)研細的內(nèi)容物約0.2g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，冷卻，加甲醇至刻度，混勻，過濾，濾液備用；d.含量測定精密量取樣品液1ml置試管中，于水浴揮干溶劑，加5％香草醛冰醋酸溶液0.4ml及高氯酸1.6ml，混勻，置70℃水浴加熱15分鐘，放冷，加乙酸乙酯8ml，混勻，在560nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中總?cè)频闹亓?mg)，計算，即得。
8.權(quán)利要求1所述檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑質(zhì)量的方法在檢測靈芝產(chǎn)品雙靈固本(商品名)口服制劑質(zhì)量中的用途。
9.按權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的雙靈固本(商品名)口服制劑包括靈固本片劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑和軟膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領域，涉及一種以靈芝植物特征物質(zhì)為基礎的系統(tǒng)、組合的質(zhì)量檢測方法，尤其涉及檢測靈芝產(chǎn)品口服制劑雙靈固本(商品名)質(zhì)量的方法。本發(fā)明的定性鑒別方法及其檢測步驟依次為顯微鑒別、紫外燈、試液反應鑒別和薄層層析鑒別；所述含量測定方法及其檢測步驟依次為靈芝多糖含量測定和靈芝總?cè)坪繙y定。本方法能嚴格控制雙靈固本口服制劑生產(chǎn)全過程和監(jiān)控產(chǎn)品貯藏期質(zhì)量。
文檔編號G01N30/00GK1895296SQ20051002779
公開日2007年1月17日 申請日期2005年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月15日
發(fā)明者劉梅英, 李寶棣, 曹暉, 吳云鳴, 王峰 申請人:西安綠谷制藥有限公司, 綠谷(集團)有限公司