專(zhuān)利名稱(chēng)：一種高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)，為一種超微量分析方法，屬于國(guó)際專(zhuān)利分類(lèi)GO1N21/17“光學(xué)手段測(cè)試分析”技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)是現(xiàn)代微量分析方法之一，由于其靈敏度高，簡(jiǎn)便快速，線性好，有效期長(zhǎng)，安全無(wú)害(無(wú)放射性和致畸物污染)等特點(diǎn)而成為取代放免和酶聯(lián)的重要技術(shù)。以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)分析法是在免疫反應(yīng)完成后，加入HRP底物H2O2，在堿性條件下，HRP催化H2O2，使發(fā)光底物魯米諾發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光。但現(xiàn)有的該項(xiàng)技術(shù)一是H2O2隨放置時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸被破壞，二是產(chǎn)生的光信號(hào)不穩(wěn)定，對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成偏差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，在于克服上述不足，提供一種高穩(wěn)定性的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物及其檢測(cè)方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下。
一種高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物，該底物由特定比例的魯米諾、增強(qiáng)劑對(duì)碘苯酚、協(xié)同增強(qiáng)劑四苯硼鈉，氧化劑過(guò)氧化脲和H2O2，分別配制成的A液和B液組成。等量的A液和B液與免疫反應(yīng)后的催化劑(如辣根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記物接觸，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)生成一種激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物，它在回到基態(tài)的過(guò)程中，釋放出的能量轉(zhuǎn)變成光子從而產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。其優(yōu)點(diǎn)是具有發(fā)光靈敏度高、穩(wěn)定性好、結(jié)果準(zhǔn)確、使用方便和成本低等。適用于全自動(dòng)、半自動(dòng)和手工分析?？蓮V泛用于臨床檢驗(yàn)，生物學(xué)研究，法醫(yī)鑒定，農(nóng)牧業(yè)及環(huán)境科學(xué)中對(duì)核酸及抗原抗體等生物大分子的檢測(cè)。
化學(xué)發(fā)光免疫分析方法因?qū)Νh(huán)境無(wú)污染、對(duì)人體無(wú)毒無(wú)害等綜合優(yōu)勢(shì)和潛力，成為目前體外診斷試劑檢測(cè)方法中的佼佼者。
本發(fā)明的目的是進(jìn)一步提高化學(xué)發(fā)光免疫分析底物的穩(wěn)定性，為產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)和使用帶來(lái)更大的方便性和靈活性。


附圖為0～4小時(shí)測(cè)定同一系列校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線穩(wěn)定性的示意圖。
附圖的時(shí)間取值及計(jì)算結(jié)果如下0miny＝-0.9755x+1.2635 150miny＝-0.9055x+1.1964R2＝0.998 R2＝0.997230miny＝-0.9205x+1.2034 180miny＝-0.909x+1.2062R2＝0.9977 R2＝0.997760miny＝-0.9151x+1.2052 240miny＝-0.9094x+1.2093R2＝0.9972 R2＝0.997890miny＝-0.9068x+1.198R2＝0.99具體實(shí)施方式
底物液制備0.5mol/L pH8.6的硼酸緩沖液分別配制A液和B液A液含魯米諾3.0mg/ml，增強(qiáng)劑對(duì)碘苯酚0.25mg/ml，協(xié)同增強(qiáng)劑四苯硼鈉0.5mg/ml；B液含過(guò)氧化脲0.4g/ml，H2O20.1g/ml。
貯存穩(wěn)定性高。A液和B液分別貯存。2～8℃保存有效期2年。
反應(yīng)穩(wěn)定性高。在HRP標(biāo)記的免疫反應(yīng)后樣品管(孔)中加入等量混合的A液和B液，0～4小時(shí)測(cè)定的同一系列校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線穩(wěn)定(附圖)；0～4小時(shí)同樣品測(cè)定值變異系數(shù)小于5％，其對(duì)應(yīng)的發(fā)光值變異系數(shù)(CV％)小于15％，參見(jiàn)附表0～4小時(shí)測(cè)定的同樣品測(cè)定值及其對(duì)應(yīng)發(fā)光值穩(wěn)定性。
附表

權(quán)利要求
1.一種高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物，其特征在于該化學(xué)發(fā)光底物由A、B兩種液體組成，并且在在辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的免疫反應(yīng)后被加入樣品管中等量混勻；用硼酸緩沖液分別配制A液和B液A液含魯米諾和魯米諾增強(qiáng)劑對(duì)碘苯酚和協(xié)同增強(qiáng)劑四苯硼鈉，B液含氧化劑過(guò)氧化脲和H2O2。
2.一種高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)方法包括以下步驟化學(xué)發(fā)光底物A液和B液的組成成分及制備；A液和B液分別貯存；臨用前A液和B液等量混合，在辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的免疫反應(yīng)后加入樣品管孔中。
3.按照權(quán)利要求1所述的高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物及其檢測(cè)方法，其特征在于其貯存穩(wěn)定性，A液和B液分別貯存，2～8℃保存有效期2年；其反應(yīng)穩(wěn)定性4小時(shí)，包括在辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的免疫反應(yīng)后樣品管孔中加入等量混合的A液和B液其發(fā)光值的穩(wěn)定性和被測(cè)物濃度值的穩(wěn)定性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物，該高穩(wěn)定性增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物由A液和B液組成，并且在辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的免疫反應(yīng)后被加入混勻。其中A液中含有魯米諾、增強(qiáng)劑對(duì)碘苯酚和協(xié)同增強(qiáng)劑四苯硼鈉；B液中含有過(guò)氧化脲和H
文檔編號(hào)G01N21/76GK1687751SQ20051007182
公開(kāi)日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月25日
發(fā)明者段虎 申請(qǐng)人:段虎