專利名稱：一種狂犬病毒保護(hù)性抗體膠體金檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種狂犬病毒保護(hù)性抗體檢測(cè)試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患的傳染病，該病極為兇險(xiǎn)，一旦發(fā)病，100％死亡。迄今為止，對(duì)此病尚無(wú)有效的治療方法，只有注射狂犬疫苗和抗狂犬病血清或免疫球蛋白進(jìn)行預(yù)防。注射狂犬疫苗能否取得保護(hù)作用，一個(gè)重要的指標(biāo)就是檢測(cè)血清中狂犬病毒抗體，只有產(chǎn)生了足量的保護(hù)性抗體才能認(rèn)為免疫成功。
常用的檢測(cè)狂犬病毒抗體的方法有快速熒光灶抑制試驗(yàn)、放射免疫分析法、中和試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。這些檢測(cè)方法需要在國(guó)家認(rèn)證的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴，具有一定的危險(xiǎn)性。最近出現(xiàn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，雖然時(shí)間縮小到2小時(shí)，在一般實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行，但其檢測(cè)的抗體是總抗體，不能真實(shí)反映保護(hù)性抗體的水平，而且必須由專業(yè)人員操作，需要配備特殊的儀器，不易推廣。

發(fā)明內(nèi)容
(一)要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷的檢測(cè)血清標(biāo)本中狂犬病毒保護(hù)性抗體的試紙條。發(fā)明人通過(guò)在硝酸纖維膜(NC膜)上包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗體二條帶，并結(jié)合應(yīng)用膠體金標(biāo)記的狂犬病毒抗原，實(shí)現(xiàn)了在試劑條上檢測(cè)狂犬病毒保護(hù)性抗體，完成了本發(fā)明?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)操作復(fù)雜、繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)、需要儀器、需要專業(yè)人員，需要一定條件的實(shí)驗(yàn)室，以及只能檢測(cè)狂犬病毒的全抗體而不能檢測(cè)保護(hù)性抗體的不足。
(二)技術(shù)方案本發(fā)明提供了一種檢測(cè)試紙條，它包含(1)包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗體二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標(biāo)記狂犬病毒抗原的玻璃纖維膜。
優(yōu)選的，本發(fā)明所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標(biāo)抗原保護(hù)膜。
其中反應(yīng)支持物優(yōu)選PVC板；吸水墊優(yōu)選濾油紙；金標(biāo)抗原保護(hù)膜具有吸水功能，優(yōu)選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
本發(fā)明還公開了所述試紙條在檢測(cè)狂犬病毒保護(hù)性抗體中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用提純的狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗體分別固相于硝酸纖維膜(NC膜)上，結(jié)合膠體金標(biāo)記的狂犬病毒抗原，應(yīng)用膜層析雙抗原夾心法的原理檢測(cè)標(biāo)本中的狂犬病毒保護(hù)性抗體。
(三)有益效果本發(fā)明的有益效果是試紙條能定性檢測(cè)血清中抗狂犬病毒的保護(hù)性抗體，克服了以往只能檢測(cè)全病毒抗體的不足。用試紙條檢測(cè)，方便、快速、簡(jiǎn)捷，不需特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨，操作簡(jiǎn)單，易于推廣，適合于突發(fā)事件的大批量現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，適用于基層和流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)疫苗效果的觀察起到診斷作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(A包被狂犬病毒糖蛋白的條帶；B包被抗狂犬病毒多克隆抗體的條帶)；3含有膠體金標(biāo)記狂犬病毒抗原的玻璃纖維膜；4金標(biāo)抗原保護(hù)膜；
5反應(yīng)支持物。
圖2檢測(cè)結(jié)果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽(yáng)性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線未顯色為無(wú)效。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1狂犬病毒保護(hù)性抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗體；狂犬病毒糖蛋白；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的狂犬病毒玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了狂犬病毒保護(hù)性抗體檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例2狂犬病毒保護(hù)性抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗體；狂犬病毒糖蛋白；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的狂犬病毒玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了狂犬病毒保護(hù)性抗體檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例3狂犬病毒保護(hù)性抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗體；狂犬病毒糖蛋白；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的狂犬病毒玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了狂犬病毒保護(hù)性抗體檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例4檢測(cè)方法(參見圖2)于實(shí)施例1試紙條“4”處，用吸管加入待檢血清3-4滴(150μl)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如血清標(biāo)本中含有抗狂犬病毒糖蛋白抗體，則與試紙條上膠體金標(biāo)記的狂犬病毒抗原形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的狂犬病毒糖蛋白特異性結(jié)合，形成紅色線條，即在“T”處形成紅色條帶。
無(wú)論是否含有相對(duì)應(yīng)的抗原，膠體金標(biāo)記的狂犬病毒繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗狂犬病毒多克隆抗體形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如此線不出現(xiàn)，說(shuō)明試紙條失效。
陽(yáng)性結(jié)果會(huì)出現(xiàn)2條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說(shuō)明試紙條失效。
實(shí)驗(yàn)例1臨床檢測(cè)結(jié)果經(jīng)檢測(cè)121例狂犬疫苗免疫后的血清標(biāo)本，與目前應(yīng)用ELISA法(T1)相比較，試紙法(T2)靈敏度為92.4％，特異度93.8％。
ELISA法(T1)與試紙條法(T2)對(duì)比實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表

權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)試紙條，其特征在于，它包含(1)包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗體二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標(biāo)記狂犬病毒抗原的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標(biāo)抗原保護(hù)膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中金標(biāo)抗原保護(hù)膜選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
6.權(quán)利要求1-5之任一所述試紙條在檢測(cè)狂犬病毒保護(hù)性抗體中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)狂犬病毒保護(hù)性抗體的膠體金檢測(cè)試紙條。它是在硝酸纖維膜(NC膜)上，分別包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗體，結(jié)合膠體金標(biāo)記的狂犬病毒抗原，應(yīng)用膜層析雙抗原夾心法，檢測(cè)標(biāo)本中的狂犬病毒保護(hù)性抗體。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測(cè)，減少了繁瑣的程序，操作方便快捷，10－15分鐘判讀結(jié)果，不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓(xùn)，適用于醫(yī)院等基層單位，適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查及應(yīng)付突發(fā)事件。
文檔編號(hào)G01N33/544GK1963509SQ200510086850
公開日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請(qǐng)人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司