專利名稱：一種登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種登革熱病毒抗體檢測(cè)試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
登革熱(Dengue Fever，簡(jiǎn)稱DF)是由登革熱病毒引起的急性傳染病。登革病毒屬黃毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(Flavivirus)，按流行病學(xué)分類屬蟲媒病毒B組，血清學(xué)上分4個(gè)血清型，主要通過埃及伊蚊和白紋伊蚊(俗稱花班蚊)傳播。登革熱廣泛流行于全球熱帶和亞熱帶地區(qū)，是分布最廣，發(fā)病最多，危害較大的一種蟲媒病毒性疾病。
常用的抗體檢測(cè)方法有ELISA法和RT-PCR法。但這些檢測(cè)技術(shù)需要特殊的儀器設(shè)備，并且要求專業(yè)技術(shù)人員在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，不適宜于現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
(一)要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷的能同時(shí)檢測(cè)登革熱病毒抗體IgG和IgM的檢測(cè)試紙條。發(fā)明人通過在硝酸纖維膜(NC膜)上包被抗人IgM(單克隆抗體或多克隆抗體)、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體三個(gè)條帶，并結(jié)合膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原，實(shí)現(xiàn)了用試紙條檢測(cè)登革熱病毒抗體(IgG和IgM)的目的，完成了本發(fā)明?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)操作復(fù)雜、繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、需要特殊的儀器、且必需專業(yè)人員才能操作的不足。
(二)技術(shù)方案本發(fā)明提供了一種檢測(cè)試紙條，它包含(1)同時(shí)包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體三個(gè)條帶的硝酸纖維膜；
(2)含有膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原的玻璃纖維膜。
本發(fā)明所述試紙條，其中硝酸纖維膜上包被的抗人IgM為單克隆抗體或多克隆抗體。
本發(fā)明所述試紙條，其中硝酸纖維膜上包被的登革熱病毒重組抗原是四個(gè)亞型的登革熱病毒的共同抗原。
優(yōu)選的，本發(fā)明所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標(biāo)抗原保護(hù)膜。
其中反應(yīng)支持物優(yōu)選PVC板；吸水墊優(yōu)選濾油紙；金標(biāo)抗原保護(hù)膜同時(shí)具有吸水功能，優(yōu)選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
本發(fā)明還公開了所述試紙條在檢測(cè)登革熱病毒抗體中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述試紙條檢測(cè)的登革熱病毒抗體為IgM和IgG。
本發(fā)明的檢測(cè)樣本為患者的血清、血漿或全血。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體分別固相于硝酸纖維膜(NC膜)上，結(jié)合膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原，應(yīng)用免疫色譜層析原理檢測(cè)登革熱病毒抗體。
(三)有益效果本發(fā)明的有益效果是用本發(fā)明所述的試紙條能同時(shí)檢測(cè)登革熱病毒IgG和IgM抗體，該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不需特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨，操作簡(jiǎn)單，易于推廣，適合大批量檢測(cè)，適用于基層和流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)登革熱病毒感染的早期及中晚期都能起到輔助診斷作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T1IgM條帶，包被抗人IgM；T2IgG條帶，包被登革熱病毒重組抗原；C質(zhì)控條帶，包被抗登革熱病毒重組抗原的多抗)；
3玻璃纖維膜膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原；4金標(biāo)抗原保護(hù)膜；5反應(yīng)支持物。
圖2檢測(cè)結(jié)果示意圖；從左至右依次為IgG和IgM同時(shí)陽(yáng)性A、B、C三條線顯色；IgG陽(yáng)性A、C兩條線顯色；IgM陽(yáng)性B、C兩條線顯色；陰性C一條線顯色；無(wú)效三條線均不顯色。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cmm的濾油紙；2.5cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原的玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例2登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；2.5cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體；含有0.4cm×0.4cmm膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原的玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例3登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；2.5cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體；含有0.4cm×0.4cmm膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原的玻璃纖維膜；金標(biāo)抗原保護(hù)膜為2cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了登革熱病毒抗體膠體金檢測(cè)試紙條。
實(shí)施例4檢測(cè)方法(參見圖2)按臨床常規(guī)取血并分離血清，如樣品不能于三日內(nèi)檢測(cè)，應(yīng)存放入-20℃。取150-200ul血清滴加至實(shí)施例1檢測(cè)試紙條“4”處，樣品中的液體上行，如30秒內(nèi)于“2”處未見液體爬行，則應(yīng)于“4”處再加1-2滴生理鹽水或PBS緩沖液。10-15分鐘判讀結(jié)果如樣本中含有登革熱病毒IgM抗體，則其經(jīng)過膠體金墊時(shí)，會(huì)與金標(biāo)重組登革熱病毒抗原結(jié)合，進(jìn)而被T1處的抗人IgM捕獲，聚集而形成紅色的檢測(cè)線，是為陽(yáng)性，反之則為陰性。
如樣本中含有登革熱病毒IgG抗體，則會(huì)與金標(biāo)重組登革熱病毒抗原結(jié)合，進(jìn)而被T2處的包被重組抗原捕獲，聚集形成紅色的檢測(cè)線，表明IgG陽(yáng)性，反之則為陰性。
無(wú)論樣本中是否含有待檢測(cè)的抗體，金標(biāo)重組抗原都會(huì)與C處包被的抗重組抗原多抗形成紅色沉淀線，即質(zhì)控線。如此線不出現(xiàn)，說明試紙條失效。
實(shí)驗(yàn)例1 疑似病人IgM抗體檢測(cè)在流行季節(jié)，檢驗(yàn)疑似病人血清樣本49例，與傳統(tǒng)常用的抗體檢測(cè)ELISA法(T1)比較，，試紙條法(T2)有一例登革熱病毒IgM抗體未檢出。其敏感性為97.9％，特異性為100％。
ELISA法(T1)與試紙條法(T2)對(duì)比實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表

實(shí)驗(yàn)例2 確診病人IgG抗體檢測(cè)檢測(cè)確診病人恢復(fù)期血清樣本37例，與傳統(tǒng)常用的抗體檢測(cè)ELISA法(T1)比較，試紙條法(T2)敏感性為100％，特異性為100％。
ELISA法(T1)與試紙條法(T2)對(duì)比實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表

權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)試紙條，其特征在于，它包含(1)同時(shí)包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體三個(gè)條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于，硝酸纖維膜上包被的抗人IgM為單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，其特征在于，硝酸纖維膜上包被的登革熱病毒重組抗原是四個(gè)亞型的登革熱病毒的共同抗原。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標(biāo)抗原保護(hù)膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述試紙條，其中金標(biāo)抗原保護(hù)膜選用聚脂膜、玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
8.權(quán)利要求1-7之任一所述試紙條在檢測(cè)登革熱病毒抗體中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述試紙條的應(yīng)用，其中檢測(cè)的登革熱病毒抗體為IgM和IgG。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能同時(shí)檢測(cè)登革熱病毒IgG和IgM抗體的膠體金試紙條。它是在硝酸纖維膜(NC膜)上，分別包被抗人IgM、登革熱病毒重組抗原和抗重組抗原多克隆抗體，結(jié)合膠體金標(biāo)記的登革熱病毒特異性重組抗原，應(yīng)用免疫膜層析技術(shù)，同時(shí)檢測(cè)登革熱病毒的IgG和IgM抗體。用本發(fā)明所述的試紙條檢測(cè)，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不需特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨，操作簡(jiǎn)單，易于推廣，適合大批量檢測(cè)，適用于基層和流調(diào)，對(duì)登革熱病毒感染的早期及中晚期都能起到輔助診斷作用。
文檔編號(hào)G01N33/569GK1963515SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請(qǐng)人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司