專利名稱：一種流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種流行性出血熱病毒抗體檢測試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
國際上將流行性出血熱(EHF)與流行性腎病(NE)等統(tǒng)稱腎綜合征出血熱(HFRS)。(HFRS)是由布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Hantavirus)中某些病毒引起和有某些嚙齒動物攜帶傳播的一類自然疫源性疾病。在我國流行的是EFH，黑線姬鼠和褐家鼠為其主要宿主和傳染源，傳播主要通過與宿主動物或其排泄物(尿、糞)/分泌物(唾液)接觸。我國是受漢坦病毒危害最為嚴重的國家，近10年來每年報告病例4-6萬，占世界報道病例總數(shù)的90％以上，是國家重點防治的傳染病之一。EHF起病急，進展快，病死率高，早期診斷對降低病死率有著特殊的重要意義。
漢坦病毒的基因組由L、M和S三個片段組成，S片段編碼病毒核蛋白，核蛋白可誘導(dǎo)產(chǎn)生非中和抗體，在免疫保護中起一定的作用；M片段編碼病毒糖核蛋白，包括G1和G2，G1區(qū)有抗原決定簌的主要部位，毒力基因可能也在G1區(qū)，糖蛋白可能是產(chǎn)生中和抗體、血凝抑制抗體、細胞融合和細胞免疫的主要功能部位，不同血清型病毒的糖蛋白有差異，血清型不同的病毒毒力和同一血清型不同毒株的毒力也均不同，造成了不同血清型病毒在病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)等方面的差異的基礎(chǔ)；L片段編碼L蛋白主要是病毒多聚酶(或轉(zhuǎn)錄酶)蛋白，在病毒復(fù)制中起主要作用。
目前流行性出血熱病毒抗體傳統(tǒng)的檢測方法是采用血清學(xué)診斷方法，包括有應(yīng)用IgM捕獲ELISA法檢測EHF IgM抗體、間接酶免疫吸附試驗檢測EHFIgG抗體、免疫熒光試驗檢測雙份血清IgG抗體等，這些方法均需要一定的儀器設(shè)備，需要專業(yè)技術(shù)人員在專業(yè)實驗室進行，有的方法需要檢測雙份血清，在檢測時間上也達不到快速篩查病人、及時控制疫情的目的。
針對流行現(xiàn)狀和防治要求，對于流行性出血熱的診斷，不但要求高的特異性和敏感性，還需要快速、簡便、易于基層醫(yī)療和衛(wèi)生單位使用。

發(fā)明內(nèi)容
(一)、要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷地檢測流行性出血熱病毒抗體的試紙條。
本發(fā)明另一個目的是提供所述試紙條在檢測流行性出血熱病毒抗體中的應(yīng)用。
(二)、技術(shù)方案本發(fā)明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。
本發(fā)明所述的試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗原保護膜。
本發(fā)明所述的試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
本發(fā)明所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
本發(fā)明所述的試紙條，其中金標抗原保護膜同時具有吸水功能，選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發(fā)明還提供了所述試紙條在檢測流行性出血熱中的應(yīng)用。將疑似病人血清標本滴入金標抗原保護膜上，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有流行性出血熱抗體，則與試紙條上膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的抗人IgMμ鏈單克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在T處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙條失效。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結(jié)合膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原，應(yīng)用膜層析及膠體金標記技術(shù)，檢測標本中的流行性出血熱病毒抗體。
(三)、有益效果本發(fā)明結(jié)合膠體金標記技術(shù)和膜層析技術(shù)，可快速定性半定量檢測樣本中可能存在的流行性出血熱病毒抗體，達到快速篩檢病人、及時控制疫情的目的，為下一步的分離鑒定創(chuàng)造了有利條件，節(jié)省了大量人力物力，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨；操作簡單、易于推廣、適合基層以及突發(fā)事件的大批量現(xiàn)場檢測，適合流行病調(diào)查，對流行性出血熱病毒感染診斷起到輔助作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(T包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體條帶；C抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體的質(zhì)控條帶)；3含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜；4金標抗原保護膜；5反應(yīng)支持物。
圖2檢測結(jié)果示意圖；從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線均未顯色為無效。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cmm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例2 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cmm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例3 流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.5cm×0.4cmm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體、抗人IgMμ鏈單克隆抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒重組抗原玻璃纖維膜；金標抗原保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了流行性出血熱病毒抗體膠體金快速檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)將疑似病人血清標本100μl滴入金標抗原保護膜上，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有流行性出血熱抗體，則與試紙條上膠體金標記的流行性出血熱漢坦病毒的重組抗原形成相應(yīng)的復(fù)合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的抗人IgMμ鏈單克隆抗體結(jié)合，形成紅色線條，即在T處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙條失效。
實驗例1 臨床檢測結(jié)果共檢測疑似病人和密切接觸者樣本500例，結(jié)果快速試紙條(T2法)檢出陽性14例，與間接酶免疫吸附試驗相比完全吻合，其特異性和敏感性均為100％。
間接熒光法(T1)與試紙條法(T2)對比實驗統(tǒng)計表

權(quán)利要求
1.一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗原保護膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其中金標抗原保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
6.權(quán)利要求1-5之任一所述試紙條在檢測流行性出血熱病毒抗體中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被抗人IgMμ鏈單克隆抗體和抗流行性出血熱漢坦病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記流行性出血熱漢坦病毒重組抗原的玻璃纖維膜。應(yīng)用膜層析及膠體金標記技術(shù)，檢測標本中的流行性出血熱病毒抗體。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測，不需特殊儀器，不需專業(yè)培訓(xùn)，且方便快捷、準確特異，10－15分鐘判讀結(jié)果，適合醫(yī)院等基層單位，適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查及應(yīng)對突發(fā)公共衛(wèi)生事件。
文檔編號G01N33/569GK1963516SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司