專利名稱：一種丹參和三七制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物的質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體為指紋圖譜領(lǐng)域，具體涉及丹參和三七復(fù)方的HPLC-DAD指紋圖譜鑒定方法。其可作為含有丹參和三七藥材的復(fù)方制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。
背景技術(shù)：
含有丹參和三七的制劑，通常亦被稱為復(fù)方丹參制劑，在臨床上廣泛用于治療心血管疾病。常見的有復(fù)方丹參片，復(fù)方丹參滴丸，丹七片，冠心丹參片等。
丹參和三七是復(fù)方丹參制劑的兩個(gè)主要組成藥物，其中丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根，具祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩之功效，用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛；三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根，具散瘀止血，消腫定痛之功效。用于咯血，吐血，衄血，外傷出血，跌撲腫痛等癥。
現(xiàn)代研究表明丹參的活性成分主要為二萜醌類脂溶性及丹參酚酸類水溶性有效成分，丹參酚酸類成分具抑制血小板聚集，抗血栓形成，抗氧化及保護(hù)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用；丹參酮等脂溶性成分能擴(kuò)張冠狀動脈，提高冠脈血流，保護(hù)心肌及廣譜抑菌作用。三七皂苷類成分是三七的主要活性成分，具抗血栓形成，擴(kuò)張血管及保護(hù)心肌等作用。
目前關(guān)于丹參和三七復(fù)方制劑指紋圖譜鑒定方法的研究報(bào)導(dǎo)，大多為丹參或三七單味藥材的鑒定，如丹參藥材乙醇提取物高效液相色譜指紋圖譜研究(中國藥學(xué)雜志2004年8月第39卷第8期)、三七指紋圖譜研究(Strait Pharmaceutical Journal Vol14 No52002)?，F(xiàn)有技術(shù)未能用指紋圖譜同時(shí)鑒定丹參和三七兩味藥中多類活性成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于建立一種能夠同時(shí)鑒定丹參和三七復(fù)方中丹參與三七兩味藥中多類活性成分的指紋圖譜。
本發(fā)明的另一目的在于將本發(fā)明的指紋圖譜用于含有丹參和三七藥材的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的
我們模擬了丹七片的處方(以下稱為丹七方)，通過對丹七方供試液制備方法，色譜條件選擇及色譜條件方法學(xué)研究，確定了丹七方HPLC-DAD指紋圖譜。該指紋圖譜可滿足對丹七方中丹參和三七的多類活性成分的同時(shí)檢測與分析。我們又進(jìn)一步將此指紋圖譜用于含有丹參和三七藥材的復(fù)方制劑質(zhì)量控制。
本發(fā)明的具體方案如下使用高效液相色譜儀，DAD檢測器，色譜工作站，將丹參和三七復(fù)方溶液，采用如下色譜條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱和預(yù)柱；柱溫25-35℃；流動相A為0.1-0.5％的磷酸水；B為乙腈；A+B＝100％，采用梯度洗脫0-10min，7-17％B，10-12min，17-20％B，12-16min，20-21％B，16-32min，21％B，32-40min，21-29％B，40-55min，29-35％B，55-65min，35-70％B，65-75min，70-80％B，75-80min，80-97％B，80-82min，97-100％B，82-85min，100％B；或者在55分鐘后梯度為55-65min，35-65％B，65-80min，65-80％B，80-85min，80-100％B；流速1ml/min，在22～28分鐘時(shí)，流速為0.8ml/min；檢測波長203，281nm。
優(yōu)選的柱溫是30℃。
優(yōu)選的磷酸水的濃度為0.1％，為體積百分比。
供試品溶液的制備方法是取粉碎的丹參和三七，加入85-95％乙醇浸泡，水浴回流提取，放冷，濾過；藥渣加水煎煮，放冷，濾過，合并濾液，濃縮至近干，加50-90％甲醇溶解，定容。
優(yōu)選的制備方法是取粉碎的同樣份數(shù)的丹參和三七，加入6-12倍重量份數(shù)的90％乙醇浸泡，水浴回流提取，放冷，濾過；藥渣加水煮，加水量是藥材重量的10-30倍，放冷，濾過，合并濾液，于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解，定容。
上述液相色譜儀進(jìn)樣量優(yōu)選10μl。
本發(fā)明的指紋圖譜鑒定方法，記錄時(shí)間在85分鐘即可，用于鑒定丹七片，復(fù)方丹參滴丸時(shí)記錄時(shí)間為55-65分鐘即可。
下面是本發(fā)明的部分試驗(yàn)1.供試品溶液的制備取粉碎的丹參和三七適量，加入90％乙醇，浸泡，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加適量水繼續(xù)煎煮2h，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至容量瓶定容至刻度，微孔濾膜過濾，得供試品溶液(0.024g生藥/ml)。進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析。
2.HPLC色譜分析條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱(4.6×250mm ID，5μm)和預(yù)柱(4.6×12.5mm ID，5μm)；柱溫30℃；流動相，A為0.1％的磷酸水；B為乙腈；A+B＝100％，采用梯度洗脫0-10min，7-17％B，10-12min，17-20％B，12-16min，20-21％B，16-32min，21％B，32-40min，21-29％B，40-55min，29-35％B，55-65min，35-70％B，65-75min，70-80％B，75-80min，80-97％B，80-82min，97-100％B，82-85min，100％B；或者在55分鐘后梯度為55-65min，35-65％B，65-80min，65-80％B，80-85min，80-100％B。流速1ml/min(22-28min，0.8ml/min)；檢測波長203，281nm。記錄時(shí)間85min。
3色譜條件的選擇及結(jié)果3.1洗脫系統(tǒng)的選擇及結(jié)果本實(shí)驗(yàn)對3種流動相系統(tǒng)進(jìn)行了選擇(1)乙腈-水梯度洗脫；(2)乙腈-0.1％-0.5％磷酸梯度洗脫；(3)乙腈-0.1％甲酸梯度洗脫。
結(jié)果表明，乙腈-0.1％-0.5％磷酸梯度洗脫吸收峰數(shù)目多，峰形好，基線平穩(wěn)，優(yōu)于乙腈-0.1％甲酸，乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)。乙腈-0.1％-0.5％磷酸梯度洗脫效果相當(dāng)，0.1％磷酸濃度較低，對色譜柱的損耗小，故更優(yōu)的是乙腈-0.1％磷酸梯度洗脫。
3.2洗脫梯度、柱溫、及流速的選擇及結(jié)果對5個(gè)洗脫梯度，柱溫(25-35℃)及流速進(jìn)行考察。結(jié)果確定洗脫梯度0-10min，7-17％B，10-12min，17-20％B，12-16min，20-21％B，16-32min，21％B，32-40min，21-29％B，40-55min，29-35％B，55-65min，35-70％B，65-75min，70-80％B，75-80min，80-97％B，80-82min，97-100％B，82-85min，100％B(流動相A為0.1％的磷酸水；B為乙腈；A+B＝100％)?；蛘咴?5分鐘后梯度為55-65min，35-65％B，65-80min，65-80％B，80-85min，80-100％B。優(yōu)選的柱溫30℃3.3檢測波長的確定丹七方提取液中三七的主要成分為三七皂苷類；丹參的主要成分為丹參酚酸類水溶性及丹參醌類脂溶性成分。根據(jù)這些成分的紫外吸收特征，設(shè)置203，254，270，281和286nm五個(gè)波長對色譜條件進(jìn)行考察，結(jié)果表明三七皂苷類成分只在203nm低波長處出峰；丹參化學(xué)成分在各波長均有不同吸收，281nm比254，270和286nm能更好的兼顧丹參水溶性及脂溶性成分。綜合考慮，選擇203nm和281nm兩個(gè)波長。
3.4丹七方供試品溶液制備的方法及結(jié)果本試驗(yàn)對丹七方的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，旨在使丹七方供試液能全面反映其有效成分，同時(shí)減少糖類、鞣質(zhì)等雜質(zhì)的干擾。
供試液1取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入30ml水浸泡1h，煎煮2h，放冷，濾過，濾液于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液2取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入30ml水浸泡1h，煎煮2h，放冷，濾過，濾液于50℃減壓濃縮至2ml，加3倍量95％乙醇醇沉，冰箱靜置過液，濾過，濾液于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液3取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過，濾液于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液4取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入70％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過，藥渣繼續(xù)用70％乙醇提取1次，合并濾液，濾液于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液5取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加入50％乙醇10ml繼續(xù)提取1次，合并濾液，濾液于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液6取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加水30ml煎煮2h，放冷，濾過，濾液于50℃減壓濃縮至2ml，加3倍量95％乙醇醇沉，冰箱靜置過液，濾過，濾液同90％乙醇提取濾液合并，于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液7取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加水30ml煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液，于50℃減壓濃縮至近干，加50％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液8取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加水30ml煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液，于50℃減壓濃縮至近干，加60％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
供試液9取粉碎的丹參0.6g，三七0.6g，加入90％乙醇10ml浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加水30ml煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液，于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶定容。
制備丹七方各供試品溶液，液相色譜儀自動進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析。結(jié)果表明單純水提，70％乙醇及90％乙醇提取均不能很好的兼顧丹七方水溶性及脂溶性成分；90％乙醇與水提取相結(jié)合比90％乙醇與50％乙醇提取相結(jié)合效果好，但水提部分經(jīng)醇沉對原兒茶醛略有損失，故可不經(jīng)過醇沉；樣品用70％甲醇溶解比用50％及60％甲醇溶解能更好的兼顧水溶性及脂溶性成分。綜上，選取最優(yōu)的供試液9的制備工藝。
3.5檢測方法的方法學(xué)考察3.5.1供試品溶液穩(wěn)定性及儀器精密度實(shí)驗(yàn)按“1”項(xiàng)下方法制備丹七方供試品溶液，分別在0、2、4、12、18、24小時(shí)檢測指紋圖譜(見圖1-1，1-2)，考察丹七方供試品溶液的穩(wěn)定性以及高效液相色譜儀的精密度。結(jié)果表明丹七方供試液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，高效液相色譜儀的精密度也符合要求。
3.5.2供試品溶液測定的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批丹參及三七藥材粗粉(40目)，按“1”項(xiàng)下方法平行制備3份丹七方供試溶液，檢測HPLC指紋圖譜(見圖2-1，2-2)，考察丹七方的提取方法及指紋圖譜檢測方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性。結(jié)果表明丹七方供試液制備方法穩(wěn)定可靠，具有很好的重現(xiàn)性。
3.5.3記錄時(shí)間的確定丹七方供試液在“2”項(xiàng)色譜條件下的2小時(shí)記錄圖和空白對照圖(見圖3-1，3-2)，考察最佳記錄時(shí)間。結(jié)果表明，80min以后基本無樣品中的成分，因而確定最佳記錄時(shí)間為85min。
3.5.4標(biāo)準(zhǔn)品對照實(shí)驗(yàn)采用原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮IIA、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1為參照物，精密稱定適量，用70％甲醇溶解，制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液，記錄色譜圖(見圖4)。
結(jié)論通過對丹七方供試液制備方法，色譜條件選擇及色譜條件方法學(xué)研究，確定的現(xiàn)有丹七方色譜分析條件可滿足對丹七方中丹參和三七的多類活性成分的同時(shí)檢測與分析。
我們將此指紋圖譜條件進(jìn)一步用于含有丹參和三七藥材的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制。具體如下1.復(fù)方丹參制劑的供試液制備取丹七片(去糖衣)、復(fù)方丹參片和復(fù)方丹參滴丸(去除薄膜衣)適量，研成粉末，用70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移到容量瓶中定容。超聲提取，放冷，加入70％甲醇補(bǔ)足重量。溶液過0.45μm濾膜，即得。
2.用本發(fā)明的指紋圖譜條件對復(fù)方丹參制劑的供試液進(jìn)行HPLC-DAD色譜分析，即得復(fù)方丹參制劑指紋圖譜。


圖1-1供試品溶液穩(wěn)定性及儀器精密度實(shí)驗(yàn)色譜圖(203nm)，其中色譜圖WDQ00135～WDQ00140分別為0～24小時(shí)色譜1-2供試品溶液穩(wěn)定性及儀器精密度實(shí)驗(yàn)色譜圖(281nm)，其中色譜圖WDQ00135～WDQ00140分別為0～24小時(shí)色譜2-1供試品溶液測定的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)色譜圖(203nm)圖2-2供試品溶液測定的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)色譜圖(281nm)圖3-1記錄時(shí)間實(shí)驗(yàn)的色譜圖(203nm其中WDQ00120為空白；WDQ00121為供試品)圖3-2記錄時(shí)間實(shí)驗(yàn)的色譜圖(281nm其中WDQ00120為空白；WDQ00121為供試品)圖4標(biāo)準(zhǔn)品對照試驗(yàn)的色譜5是實(shí)施例1中的丹七方指紋圖譜圖6是實(shí)施例2中市售丹七片的指紋圖譜圖7是實(shí)施例3中市售批號為040602的復(fù)方丹參片的指紋圖譜圖8是實(shí)施例3中市售批號為050308的復(fù)方丹參片的指紋圖譜圖9是實(shí)施例3中市售批號為03121024的復(fù)方丹參片的指紋圖譜圖10是實(shí)施例4中批號為20020921的復(fù)方丹參滴丸的指紋圖譜圖11是實(shí)施例4中批號為20030604的復(fù)方丹參滴丸的指紋圖譜圖12是實(shí)施例4中批號為20040303的復(fù)方丹參滴丸的指紋圖譜圖13是實(shí)施例5中丹七方的指紋圖譜。
圖14是實(shí)施例5中丹七片的指紋圖譜。
圖15是實(shí)施例5中復(fù)方丹參片的指紋圖譜。
圖16是實(shí)施例5中復(fù)方丹參滴丸的指紋圖譜。
圖17是實(shí)施例6中丹七片的指紋圖譜。
圖18是實(shí)施例6中復(fù)方丹參滴丸的指紋圖譜。
以上附圖中各數(shù)字表示的是1.原兒茶醛 2.三七皂苷R1 3.人參皂苷Rg1 4.丹酚酸B 5.人參皂苷Rb1 6.隱丹參酮 7.丹參酮IIA
具體實(shí)施例方式實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)材料1.1儀器與器材Agilent 1100型系列高效液相色譜儀，包括G1312A四元梯度泵、G1313A自動進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱，G1315A DAD檢測器，HP Chemstation色譜工作站(美國惠譜公司)；旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀(瑞士Büchi公司)。
1.2試劑及試藥藥材丹參(陜西天士力植物藥業(yè)有限公司，陜西商洛)，經(jīng)李萍教授鑒定為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根；三七(云南文山)，經(jīng)李萍教授鑒定為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。
2.實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件色譜柱C18色譜柱(ZORBAX ODS 4.6×250mm ID，5μm)和C18預(yù)柱(4.6×12.5mmID，5μm)；柱溫30℃；流動相，A為0.1％的磷酸水；B為乙腈；A+B＝100％，采用梯度洗脫0-10min，7-17％B，10-12min，17-20％B，12-16min，20-21％B，16-32min，21％B，32-40min，21-29％B，40-55min，29-35％B，55-65min，35-70％B，65-75min，70-80％B，75-80min，80-97％B，80-82min，97-100％B，82-85min，100％B；流速1ml/min(22-28min，0.8ml/min)；檢測波長203，281nm。記錄時(shí)間85min。
2.2供試品溶液的制備取粉碎的丹參1.2g，三七1.2g，加入90％乙醇25ml，浸泡1h，水浴回流提取2h，放冷，濾過；藥渣加40ml水繼續(xù)煎煮2h，濾過，合并濾液，于50℃減壓回收乙醇至干，加70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶定容至刻度，微孔濾膜過濾，得供試品溶液。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果將供試品溶液進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析，即得丹七方指紋圖譜，記錄時(shí)間為85min。見圖5。
實(shí)施例2取市售丹七片(湖南安邦制藥有限責(zé)任公司，批號040803)20片，去糖衣并研磨成粉末，精密稱取0.5g，置25ml棕色容量瓶中，70％甲醇定容。超聲提取30min，放冷，加入70％甲醇補(bǔ)足重量。溶液過0.45μm濾膜。其它條件同實(shí)施例1。進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析，得丹七片HPLC-DAD指紋圖譜，見圖6。
實(shí)施例3取市售復(fù)方丹參片(廣東白云山制藥廠，批號03121024；南京同仁堂制藥有限責(zé)任公司，批號040602；浙江胡慶余堂制藥有限責(zé)任公司，批號050308)20片，研磨成粉未，精密稱取0.5g，置25ml棕色容量瓶中，70％甲醇定容。超聲提取30min，放冷，加入70％甲醇補(bǔ)足重量。溶液過0.45μm濾膜。其它條件同實(shí)施例1。進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析，得3個(gè)廠家復(fù)方丹參片HPLC-DAD指紋圖譜，見圖7-9。
實(shí)施例4取市售復(fù)方丹參滴丸(天津天士力制藥有限責(zé)任公司，批號20020921，20030604，20040303)75粒，精密稱定，研成粉未，去除薄膜衣，用70％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移到25ml棕色容量瓶中定容。超聲提取30min，放冷，加入70％甲醇補(bǔ)足重量。溶液過0.45μm濾膜。其它條件同實(shí)施例1。進(jìn)樣10μl進(jìn)行色譜分析，得3個(gè)批號復(fù)方丹參滴丸的HPLC-DAD指紋圖譜。見圖10-12。
實(shí)施例5用上述實(shí)施例同樣的方法，只是將洗脫梯度改為55分鐘后55-65min，35-65％B，65-80min，65-80％B，80-85min，80-100％B。分別對丹七方，丹七片，復(fù)方丹參片(廣東白云山制藥廠，批號03121024)及復(fù)方丹參滴丸(天津天士力制藥有限責(zé)任公司，批號20020921)進(jìn)行色譜分析，得指紋圖譜見圖13-16。
實(shí)施例6用實(shí)施例1、2、4的方法，只是記錄時(shí)間改為60分鐘，分別對丹七片和復(fù)方丹參滴丸(天津天士力制藥有限責(zé)任公司，批號20020921)進(jìn)行色譜分析。得指紋圖譜見圖17-18。
綜上，本發(fā)明所建立的丹參和三七復(fù)方的HPLC-DAD指紋圖譜可用于同時(shí)檢測丹參中丹酚酸B等酚酸類水溶性成分和丹參酮IIA等二萜醌類脂溶性成分以及三七中皂苷類成分，方法可靠、穩(wěn)定，可用于含有丹參和三七的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制。
權(quán)利要求
1.丹參和三七復(fù)方制劑的指紋圖譜鑒定方法包括建立標(biāo)準(zhǔn)的指紋圖譜、用相同方法測定待測樣品的指紋圖譜、將待測品的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，其特征采用如下方法獲得指紋圖譜使用高效液相色譜儀，DAD檢測器，色譜工作站，將丹參和三七復(fù)方溶液，采用如下色譜條件色譜柱碳十八烷基鍵合硅膠填料色譜柱和預(yù)柱；柱溫25-35℃；流動相A為0.1-0.5％的磷酸水；B為乙腈；A+B＝100％，采用梯度洗脫0-10min，7-17％B，10-12min，17-20％B，12-16min，20-21％B，16-32min，21％B，32-40min，21-29％B，40-55min，29-35％B，55-65min，35-70％B，65-75min，70-80％B，75-80min，80-97％B，80-82min，97-100％B，82-85min，100％B；或者在55分鐘后梯度為55-65min，35-65％B，65-80min，65-80％B，80-85min，80-100％B；流速1ml/min，在22～28分鐘時(shí)，流速為0.8ml/min；檢測波長203，281nm。
2.權(quán)利要求1的指紋圖譜鑒定方法，其中柱溫是30℃。
3.權(quán)利要求1的指紋圖譜鑒定方法，其中磷酸水的濃度為0.1％。
4.權(quán)利要求1的指紋圖譜鑒定方法，其中標(biāo)準(zhǔn)圖譜供試品溶液的制備方法是取粉碎的丹參和三七，加入85-95％乙醇浸泡，水浴回流提取，放冷，濾過；藥渣加水煎煮，放冷，濾過，合并濾液，濃縮至近干，加50-90％甲醇溶解，定容。
5.權(quán)利要求4的指紋圖譜鑒定方法，其中樣品的制備方法取粉碎的同樣份數(shù)的丹參和三七，加入6-12倍重量份數(shù)90％乙醇浸泡，水浴回流提取，放冷，濾過；藥渣加水煮，加水量是藥渣重量的10-30倍，放冷，濾過，合并濾液，于50℃減壓濃縮至近干，加70％甲醇溶解，定容。
6.權(quán)利要求1的指紋圖譜鑒定方法，其中待測樣品的制備方法為將待測樣品制劑去糖衣或去除薄膜衣，研成粉末，用70％甲醇溶解并定容，超聲提取，放冷，加入70％甲醇補(bǔ)足重量，過濾，即得。
7.權(quán)利要求1的指紋圖譜鑒定方法，液相色譜儀進(jìn)樣量為10μl。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然藥物的質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體為指紋圖譜領(lǐng)域，具體涉及丹參和三七復(fù)方的HPLC－DAD指紋圖譜鑒定方法。本發(fā)明可作為含有丹參和三七藥材的復(fù)方制劑如丹七片、復(fù)方丹參片及復(fù)方丹參滴丸等的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。
文檔編號G01N33/15GK1806819SQ200510095180
公開日2006年7月26日 申請日期2005年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日
發(fā)明者李萍, 韋英杰, 李松林 申請人:中國藥科大學(xué)