專利名稱：六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝病的藥品的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
目前，肝病是我國(guó)的常見病，多發(fā)病。過量飲酒，藥物濫用導(dǎo)致肝臟疾患逐年上升，臨床迫切需要療效確切、安全性高的藥物以解除廣大患者的痛苦。
國(guó)家藥典委員會(huì)批準(zhǔn)命名為六維磷脂軟膠囊，是一種安全有效的肝病治療用藥，為軟膠囊，內(nèi)容物為棕黃色油狀液體。每粒膠囊含300mg大豆磷脂，6mg維生素B1，6mg維生素B2，6mg維生素B6，26μg維生素B1，6mg維生素E，30mg煙酰胺。國(guó)外的同類產(chǎn)品是肝得健(現(xiàn)名易善力)，一種德國(guó)A.Nattermann&Cie.GmbH生產(chǎn)軟膠囊。
中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)中，煙酰胺鑒別方法為化學(xué)法、紫外光譜法和紅外光譜法；維生素B1鑒別方法為化學(xué)法；維生素B2鑒別方法為化學(xué)法、紫外光譜法和紅外光譜法；維生素B6鑒別方法為化學(xué)法、液相色譜法和紅外光譜法；維生素E鑒別方法為化學(xué)法和紅外光譜法。測(cè)定之前，樣品均需經(jīng)化學(xué)方法的預(yù)處理，經(jīng)顯色，測(cè)定吸收度，方法比較麻煩。這些鑒別方法麻煩、費(fèi)時(shí)、浪費(fèi)財(cái)力和物力。
肝利健質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，煙酰胺的鑒別方法為薄層色譜法；維生素B1和維生素B2的鑒別方法均為經(jīng)前處理后，觀察熒光顏色的物理方法；維生素B6的鑒別方法為化學(xué)方法；維生素E為氣相色譜法。這些鑒別方法麻煩、費(fèi)時(shí)、浪費(fèi)財(cái)力和物力，而且需對(duì)五種物質(zhì)分別進(jìn)行鑒別，適用性差。煙酰胺和維生素B6的含量測(cè)定，均為紫外分光光度法。測(cè)定之前，樣品均需經(jīng)化學(xué)方法的前處理，經(jīng)顯色，測(cè)定吸收度，方法比較麻煩。而維生素B1和維生素B2的含量測(cè)定方法則均為熒光分光光度法。熒光分析法遠(yuǎn)不如高效液相色譜法普及，熒光法作為含量測(cè)定方法，因靈敏度較高，干擾因素也多，如溶劑、測(cè)定液的澄清度、所用玻璃儀器及吸收池的潔凈度、包括溫度對(duì)熒光強(qiáng)度影響甚大。
綜上所述，目前對(duì)六維磷脂軟膠囊的含量測(cè)定方法，普遍存在著需要多種測(cè)定方法和儀器，對(duì)各組分分別進(jìn)行測(cè)定。還未見簡(jiǎn)單方便的六維磷脂軟膠囊的含量測(cè)定方法的報(bào)道，急需一種簡(jiǎn)便易行的六維磷脂軟膠囊的含量測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法。本發(fā)明旨在使六維磷脂軟膠囊的鑒別與含量測(cè)定方法有較強(qiáng)的專屬性和可靠性，靈敏、準(zhǔn)確、省時(shí)并可控。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案以高效液相色譜法(用PLC法)鑒別煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和維生素E，并測(cè)定煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和維生素E的含量。
在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6供試品各組分的主峰保留時(shí)間應(yīng)分別與其對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致；并且在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，維生素E供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與其對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。
在測(cè)定煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的含量時(shí)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為容量比14∶6∶80的乙腈-甲醇-水，水中含0.0506％庚烷磺酸鈉和0.12％三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)至pH2.5；檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm；煙酰胺、維生素B1、維生素B2和維生素B6的色譜峰之間的分離度大于1.5，理論板數(shù)按煙酰胺計(jì)算不低于1200。
測(cè)定維生素E的含量時(shí)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為容量比97∶3的甲醇-水；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論板數(shù)按維生素E峰計(jì)算不低于3500。
具體測(cè)定時(shí)，測(cè)定時(shí)采用避光操作；取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，精密稱定后置于容器中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取對(duì)照品，按與供試品相同的制備方法，制得對(duì)照品溶液；精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)中和肝利健標(biāo)準(zhǔn)中維生素E的含量測(cè)定方法為氣相色譜法。因?yàn)橛酶咝б合嗌V儀能夠同時(shí)檢測(cè)六維磷脂軟膠囊中5種成分(煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和維生素E)的含量與鑒別，避免只為測(cè)定維生素E而購(gòu)置氣相色譜儀造成資金浪費(fèi)，所以，新的維生素E的含量測(cè)定方法也為高效液相色譜法。含量測(cè)定方法的方法學(xué)研究結(jié)果表明，本方法同氣相色譜法一樣簡(jiǎn)便、靈敏，是可靠的檢測(cè)方法。
本發(fā)明無(wú)須專門進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，利用含量測(cè)定時(shí)的高效液相色譜圖即可。即方便又準(zhǔn)確，而且省時(shí)、節(jié)約。方法學(xué)研究數(shù)據(jù)證明了本發(fā)明具有專屬性，準(zhǔn)確性高，可控性強(qiáng)。
具體實(shí)施例方式
儀器，試藥，樣品及對(duì)照品1.1儀器和試藥高效液相色譜儀 島津LC-10AT檢測(cè)器 島津SPD-10A控制器 島津Class-VP工作站色譜柱 ODSC18 5μm150×4.6mm乙腈、甲醇 均為色譜純?nèi)野?、庚烷磺酸鈉 均為分析純1.2原料大豆磷脂 本公司生產(chǎn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(地標(biāo)升部標(biāo))煙酰胺北京第二制藥廠中國(guó)藥典2000年版維生素B1 華中制藥廠中國(guó)藥典2000年版維生素B2 上海新亞制藥廠中國(guó)藥典2000年版維生素B6 上海新亞制藥廠中國(guó)藥典2000年版維生素B12 廣東制藥廠中國(guó)藥典2000年版維生素E 河北制藥有限公司 中國(guó)藥典2000年版1.3樣品六維磷脂軟膠囊 由申請(qǐng)人自制1.4對(duì)照品煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6對(duì)照品 取原料多次精制而得(含量測(cè)定按中國(guó)藥典2000年版二部測(cè)定)煙酰胺 99.1％
維生素B199.5％維生素B2100.0％維生素B699.3％維生素E 由中檢所提供實(shí)施例1 煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6含量測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為重量比為14∶6∶80的乙腈-甲醇-水混合物，水中含0.0506％庚烷磺酸鈉和0.12％三乙胺，并用磷酸調(diào)PH值至2.5；檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm。煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的色譜峰之間分離度1.8，理論板數(shù)按煙酰胺計(jì)算為1200。
對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取煙酰胺約60mg、維生素B1約12mg、維生素B2約12mg、維生素B6約12mg，置于200ml量瓶中，加乙醇100ml，加熱溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置于50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品溶液(每1ml中含煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6分別為30μg、6μg、6μg、6μg)，備用。
供試品溶液的制備 精密稱取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6分別為30mg、6mg、6mg、6mg)，置于圓底燒瓶中，加乙醇約100ml，在水浴上加熱回流至內(nèi)容物溶解，放冷至室溫，用流動(dòng)相將溶液轉(zhuǎn)移至200ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置于25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，高速離心，取上清液為供試品溶液。
測(cè)定法 精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
流動(dòng)相與檢測(cè)波長(zhǎng)的選則 通過參考2000版中國(guó)藥典二部，有關(guān)文獻(xiàn)(1、《藥學(xué)進(jìn)展》2003年第27卷第1期P44-47，作者王林、孫國(guó)慶、平其能；2、《中國(guó)公共衛(wèi)生》1994年06期，作者王雅賢、李靜；3、《藥物分析雜志》1995年05期，作者黃冠文、薛衛(wèi)平、于志超)及相關(guān)試驗(yàn)，最終選定上述色譜條件。在色譜圖中，當(dāng)流速為0.7ml/min時(shí)，煙酰胺主峰的保留時(shí)間為3.6分鐘、維生素B1主峰的保留時(shí)間為8.9分鐘、維生素B2主峰的保留時(shí)間為10.4分鐘、維生素B6主峰的保留時(shí)間為5.2分鐘。在同一張色譜圖中，四種成分的出峰順序?yàn)闊燉０罚S生素B6，維生素B1，維生素B2。
專屬性按處方精密稱取空白樣品(除煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6外，輔料及所有成分)適量，按供試品溶液的制備項(xiàng)下制備空白對(duì)照溶液，按選定的色譜條件試驗(yàn)。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。精密量取對(duì)照品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，所用輔料及大豆磷脂、維生素E均得到基線分離，而且不干擾煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的測(cè)定，說明本試驗(yàn)所采用含量測(cè)定方法的色譜條件具有良好的專屬性。
線性關(guān)系 精密稱取對(duì)照品煙酰胺97.12mg、維生素B118.14mg、維生素B218.80mg、維生素B619.42mg，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液0.2、0.4、1.0、2.0、4.0ml，分別置于25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。繪制以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。以各組分峰面積與其相應(yīng)的濃度進(jìn)行回歸處理，求得回歸方程.試驗(yàn)結(jié)果表明，在本試驗(yàn)的色譜條件下，煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6在各自的濃度范圍內(nèi)，濃度與其相對(duì)應(yīng)的色譜峰面積呈有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1。
表1 藥物濃度與峰面積的線性關(guān)系

重復(fù)性 取同一供試品溶液20μl，以上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。分別測(cè)定煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的峰面積，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)％分別為0.16％，0.21％，0.20％，0.24％，結(jié)果見表2。
表2 煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

穩(wěn)定性 取混合對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件，分別于0小時(shí)、1小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)進(jìn)樣1次，測(cè)定其峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果表明12小時(shí)內(nèi)測(cè)定值基本穩(wěn)定。見表3。
表3 煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

耐用性 為了考查本測(cè)定方法的耐用性，選用同類柱不同廠牌的C18色譜柱(蘭州化物所ODS柱與迪馬公司鉆石柱)，對(duì)同一樣品(批號(hào)030819)進(jìn)行測(cè)定，考查其理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性、拖尾因子等能否通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。試驗(yàn)結(jié)果(表4)表明，色譜條件稍有變動(dòng)，仍能夠滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，確保了測(cè)定方法的有效性。
表4 煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6耐用性試驗(yàn)中重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

中間精密度 取樣品(批號(hào)030819)適量，攪拌均勻，各精密稱取6份樣品，以不同試驗(yàn)者，在不同日期，用同一臺(tái)高效液相色譜儀，按規(guī)定的含量測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果(表5)表明，隨機(jī)變動(dòng)因素(試驗(yàn)者、日期)對(duì)測(cè)定結(jié)果的精密度影響甚小。
表5 中間精密度測(cè)試結(jié)果

回收率 按處方比例配制三個(gè)空白樣品(包括輔料，大豆磷脂，維生素E及維生素B12)，煙酰胺按標(biāo)示量的80％，100％，120％分別加入，維生素B1、維生素B2、維生素B6按標(biāo)示量的70％，100％，130％分別加入，制成低，中，高三種含量的樣品。每種樣品各取3份平行樣，精密稱定，每份取約相當(dāng)于1粒量，按含量測(cè)定方法操作，分別測(cè)定其回收率。結(jié)果見表6，表7，表8，表9。試驗(yàn)結(jié)果表明，在本試驗(yàn)采用的色譜條件條件下，煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的回收率良好。
表6 煙酰胺的回收率測(cè)定結(jié)果

表7 維生素B1的回收率測(cè)定結(jié)果

表8 維生素B2的回收率測(cè)定結(jié)果

表9 維生素B6的回收率測(cè)定結(jié)果

兩種含量測(cè)定方法的比對(duì)精密稱取同一批樣品，各取6份，分別用修訂前后的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表10，表11，表12，表13。
表10 兩種方法測(cè)定煙酰胺含量的比對(duì)結(jié)果

表11 兩種方法測(cè)定維生素B1含量的比對(duì)結(jié)果

表12 兩種方法測(cè)定維生素B2含量的比對(duì)結(jié)果

表13 兩種方法測(cè)定維生素B6含量的比對(duì)結(jié)果

六維磷脂軟膠囊中，煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的含量測(cè)定 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于煙酰胺30mg、維生素B16mg、維生素B26mg、維生素B66mg)，精密稱定，置于圓底燒瓶中，加乙醇約100ml，在水浴上加熱回流至內(nèi)容物溶解，放冷至室溫，用流動(dòng)相將溶液轉(zhuǎn)移至200ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，高速離心，取上清液作為供試品溶液。另取煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6對(duì)照品60mg、12mg、12mg、12mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加乙醇100ml，加熱溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6分別為30μg、6μg、6μg、6μg的混合對(duì)照品溶液)。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表14～17。
表14 六維磷脂軟膠囊中煙酰胺的含量測(cè)定結(jié)果

表15 六維磷脂軟膠囊中維生素B1的含量測(cè)定結(jié)果

表16 六維磷脂軟膠囊中維生素B2的含量測(cè)定結(jié)果

表17 六維磷脂軟膠囊中維生素B6的含量測(cè)定結(jié)果

實(shí)施例2 維生素E的含量測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；重量比為97∶3的甲醇-水混合物為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論板數(shù)按維生素E峰計(jì)算為3500。
對(duì)照品溶液的配制 避光操作。精密稱取維生素E對(duì)照品適量，加甲醇適量溶解并稀釋制成每1ml中含維生素E 0.48mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 避光操作。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于維生素E 12mg)，精密稱定，置于25ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法 避光操作。分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
流動(dòng)相與檢測(cè)波長(zhǎng)的選則 通過參考2000版中國(guó)藥典，有關(guān)文獻(xiàn)及相關(guān)試驗(yàn)，最終選定上述色譜條件。當(dāng)流速為1ml/min時(shí)，維生素E主峰的保留時(shí)間為18.3分鐘。
專屬性 按處方精密稱取空白輔料(除維生素E外，所有成分和輔料)適量，加甲醇制備空白對(duì)照溶液，按選定的色譜條件試驗(yàn)。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。精密量取維生素E對(duì)照品溶液20μl(0.473mg/ml)，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在本色譜條件下，所用輔料及大豆磷脂、煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12均得到基線分離，不干擾維生素E的測(cè)定，說明本試驗(yàn)所采用含量測(cè)定方法的色譜條件具有良好的專屬性。
線性關(guān)系 精密稱取維生素E對(duì)照品26.83mg，置于25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液0.6、1.25、2.5、5.0ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液和貯備液20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。繪制以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明維生素E濃度在64.4μg～1073μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為A＝5585C+27720r＝1.000取同一供試品溶液20μl，以上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)定維生素E的峰面積。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)為0.17％。結(jié)果見表18。
表18 維生素E重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

穩(wěn)定性 取維生素E對(duì)照品溶液20μl，以上述色譜條件分別于0h、0.5h、1h、3h、6h各進(jìn)樣1次，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積。結(jié)果表明6小時(shí)內(nèi)測(cè)定值比較穩(wěn)定。結(jié)果見表19。
表19 維生素E穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

耐用性 為了考查本測(cè)定方法的耐用性，選用同類柱不同廠牌的C18色譜柱(蘭州化物所ODS柱與迪馬公司鉆石柱)對(duì)同一樣品(批號(hào)030819)進(jìn)行測(cè)定，考查其理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性、拖尾因子等能否通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。試驗(yàn)結(jié)果(表20)表明，色譜條件稍有變動(dòng)，仍能夠滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，確保了測(cè)定方法的有效性。
表20 維生素E耐用性試驗(yàn)中重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

中間精密度 取樣品(批號(hào)030819)適量，攪拌均勻，各精密量取6份樣品，以不同試驗(yàn)者，在不同日期，用同一臺(tái)高效液相色譜儀，按規(guī)定的含量測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果(見表21)表明，隨機(jī)變動(dòng)因素(試驗(yàn)者、日期)對(duì)測(cè)定結(jié)果的精密度影響甚小。
表21 維生素E中間精密度測(cè)試結(jié)果

回收率 按處方量配制三個(gè)空白樣品(包括輔料，大豆磷脂，煙酰胺、維生素B1，維生素B2，維生素B6，維生素B12)，維生素E對(duì)照品按標(biāo)示量的70％、100％、130％分別加入，每個(gè)樣品各取三份平行樣，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，精密量取20μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，維生素E的平均回收率為100.03％(RSD 0.44％)。結(jié)果見表22。結(jié)果表明，在本試驗(yàn)采用含量測(cè)定的色譜條件下，維生素E含量測(cè)定的方法的回收率良好。
表22 維生素E的回收率測(cè)定結(jié)果

兩種含量測(cè)定方法的比對(duì) 精密稱取同一批樣品，各取6份，分別用修訂前后的含量測(cè)定方法(GC法HPLC法)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表23。
表23 兩種方法測(cè)定維生素B6含量的比對(duì)結(jié)果

六維磷脂軟膠囊中維生素E的含量測(cè)定避光操作。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于維生素E12mg)，精密稱定，置于25ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取維生素E對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml中含維生素E約0.48mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。結(jié)果見表24。
表24 六維磷脂軟膠囊中維生素E的含量測(cè)定結(jié)果

以上對(duì)本發(fā)明所提供的六維磷脂軟膠囊的含量測(cè)定方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實(shí)施方式
及應(yīng)用范圍上均會(huì)有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1.一種六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法，其特征在于以高效液相色譜法鑒別煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和維生素E，并測(cè)定煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6和維生素E的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法，其特征在于在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6供試品各組分的主峰保留時(shí)間應(yīng)分別與其對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致；并且在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，維生素E供試品主峰的保留時(shí)間應(yīng)與其對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致。
3.如權(quán)利要求1所述的六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法，其特征在于測(cè)定煙酰胺、維生素B1、維生素B2、維生素B6的含量時(shí)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為容量比14∶6∶80的乙腈-甲醇-水，水中含0.0506％庚烷磺酸鈉和0.12％三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)至pH2.5；檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm；煙酰胺、維生素B1、維生素B2和維生素B6的色譜峰之間的分離度大于1.5，理論板數(shù)按煙酰胺計(jì)算不低于1200。
4.如權(quán)利要求1所述的六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法，其特征在于測(cè)定維生素E的含量時(shí)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為容量比97∶3的甲醇-水；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，理論板數(shù)按維生素E峰計(jì)算不低于3500。
5.如權(quán)利要求1所述的六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法，其特征在于測(cè)定時(shí)采用避光操作；取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量，精密稱定后置于容器中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取對(duì)照品，按與供試品相同的制備方法，制得對(duì)照品溶液；精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種六維磷脂軟膠囊的鑒別和含量測(cè)定方法。以高效液相色譜法鑒別煙酰胺、維生素B
文檔編號(hào)G01N30/86GK1808115SQ200510097538
公開日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
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