專利名稱：利用白蛋白－結(jié)合蛋白作為靶標(biāo)的治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療癌癥以及其他疾病(包括組織和器官異常增殖、增生、重塑、炎性活性)的方法。本發(fā)明進(jìn)一步涉及利用識(shí)別白蛋白-結(jié)合蛋白的合適配體用于靶向、顯影和測(cè)定哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)化療劑的應(yīng)答的方法。
背景技術(shù)：
已顯示白蛋白納米顆粒制劑減少不充分可溶的治療劑的毒性。例如，美國(guó)專利6,537,579公開(kāi)了沒(méi)有毒性的乳化劑的白蛋白-納米顆粒紫杉醇制劑。
以商標(biāo)Taxol由Bristol Myers Squibb銷售的抗癌劑紫杉醇目前批準(zhǔn)用于數(shù)種癌癥，包括卵巢、肺和乳腺癌的治療。使用紫杉醇的主要局限性是其溶解度差。因此，Taxol制劑包含作為溶解賦形劑的CremophorEL，但該制劑中Cremophor的存在與動(dòng)物(Lorenz等，Agents Actions7，63-67，1987)和人中(Weiss等，J.Clin.Oncol.8，1263-1268，1990)嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)有關(guān)。因此，接受Taxol的患者需要以皮質(zhì)類固醇(地塞米松)和抗組胺藥預(yù)先給藥以降低由于Cremophor的存在而發(fā)生的過(guò)敏和過(guò)敏反應(yīng)。
相反，亦稱為ABI-007的Abraxane為由Abraxis Oncology銷售的，無(wú)Cremophor的紫杉醇白蛋白-納米顆粒制劑。當(dāng)用鹽水重制時(shí)白蛋白納米顆粒作為賦形劑的使用產(chǎn)生膠體形式?；谂R床研究，已表明Abraxane的使用與Taxol相比以降低的過(guò)敏反應(yīng)為特征。因此，接受Abraxane的患者不需要預(yù)先給藥。
白蛋白-納米顆粒制劑的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為通過(guò)排除有毒的乳化劑，可以比目前用Taxol可能的更頻繁的時(shí)間間隔給予更高劑量的紫杉醇。存在的潛力為可在實(shí)體瘤中看到的由于下列原因而產(chǎn)生的增強(qiáng)的效力(i)更高的耐受劑量(300mg/m2)、(ii)更長(zhǎng)的半衰期、(iii)延長(zhǎng)的局部腫瘤有效性和/或(iv)體內(nèi)持續(xù)釋放。Abraxane降低過(guò)敏反應(yīng)而維持或改善藥物的化療作用。
已知＜200nm大小的膠體納米顆?；蝾w粒由于滲漏性脈管系統(tǒng)而易于在腫瘤部位集中。已對(duì)一些脂質(zhì)體制劑描述了該作用(Papahadjopoulos，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88，11460，1991)；(Gabizon，A.，Cancer Res.，52，891，1992)；(Dvorak，等，Am.J.Pathol.133，95，1988)；(Dunn，等，Pharm，Res.，11，1016-1022，1994)；和(Gref，等，Science263，1600-1603，1994)?？赡艿氖钱?dāng)與該藥物以其溶解(含有Cremophor)形式給藥相比時(shí)，在腫瘤部位集中的紫杉醇納米顆?？梢鹚幬镌谠撃[瘤部位的緩釋而產(chǎn)生更大的效力。
所述納米顆粒制劑包括至少約50％納米顆粒形式的活性劑。此外，所述納米顆粒制劑包含至少約60％、至少約70％、至少約80％或至少約90％納米顆粒形式的活性劑。另外，所述納米顆粒制劑包含至少約95％或至少約98％納米顆粒形式的活性劑。
酸性的、富含半胱氨酸的分泌蛋白(SPARC)，亦稱骨粘連蛋白(osteonectin)，為281個(gè)氨基酸的糖蛋白。SPARC對(duì)多種配體具有親和力，包括陽(yáng)離子(例如，Ca2+、Cu2+、Fe2+)、生長(zhǎng)因子(例如，血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子(PDGF)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF))、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白(例如，膠原I-V和膠原IX、玻連蛋白(vitronectin)和血小板反應(yīng)蛋白-1)、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、白蛋白和羥基磷灰石。SPARC表達(dá)受發(fā)育調(diào)控，并且主要在正常發(fā)育或損傷應(yīng)答期間在經(jīng)重塑的組織中表達(dá)(參見(jiàn)，例如，Lane等，F(xiàn)ASEB J.，8，163-173(1994))。發(fā)育的骨和牙中表達(dá)高水平的SPARC蛋白。
SPARC為數(shù)種侵襲性癌癥中上調(diào)的細(xì)胞基質(zhì)蛋白，但在正常組織中缺乏(Porter等，J.Histochem.Cytochem.，43，791(1995))。實(shí)際上，在各種腫瘤中(例如，膀胱、肝臟、卵巢、腎、消化道和乳腺)誘導(dǎo)SPARC表達(dá)。例如膀胱癌中，SPARC表達(dá)與晚期癌癥相關(guān)。已顯示T2級(jí)或更晚級(jí)的侵襲性膀胱腫瘤比T1級(jí)膀胱腫瘤(或更次級(jí)淺表腫瘤)表達(dá)更高水平的SPARC，并且預(yù)后較差(參見(jiàn)例如，Yamanaka等，J.Urology，166，2495-2499(2001))。腦膜瘤中，SPARC表達(dá)僅與侵襲性腫瘤相關(guān)(參見(jiàn)例如，Rempel等.，Clincal CancerRes.，5，237-241(1999))。還在74.5％的原位侵襲性乳腺癌病變中(參見(jiàn)例如，Bellahcene，等，Am.J.Pathol.，146，95-100(1995))，以及54.2％的乳腺浸潤(rùn)管癌中(參見(jiàn)例如，Kim等，J.KoreanMed.Sci.，13，652-657(1998))檢測(cè)到SPARC表達(dá)。SPARC表達(dá)還與乳腺癌中常見(jiàn)的微鈣化有關(guān)(參見(jiàn)例如，Bellahcene等，上文)，提示SPARC表達(dá)可能負(fù)責(zé)乳腺轉(zhuǎn)移性病灶對(duì)骨的親和力。還已知SPARC結(jié)合白蛋白(參見(jiàn)例如，Schnitzer，J.Biol.Chem，269，6072(1994))。
抗體療法是用于控制疾病的有效方法，其中可鑒定特定的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。實(shí)例包括Avastin-抗-VEGF抗體、Rituxan-抗-CD20抗體和Remicade-抗-TNF抗體。因而，SPARC的抗體代表用于治療人和其他哺乳動(dòng)物腫瘤、以及表達(dá)SPARC蛋白的其他增殖的、增生的、重塑和炎性病癥的重要治療劑。此外，與顯影或造影劑偶聯(lián)的SPARC抗體將是檢測(cè)和診斷所述病癥的工具。
仍然存在治療人和其他哺乳動(dòng)物腫瘤、以及其他增殖的、增生的、重塑和炎性病癥的方法的需要。另外，仍然存在測(cè)定人或其他哺乳動(dòng)物腫瘤應(yīng)答的需要以評(píng)估化療劑的有效性。此外，需要合適的方法以檢測(cè)和診斷所述病癥。根據(jù)在此提供的本發(fā)明的說(shuō)明書，本發(fā)明的這些和其他的優(yōu)點(diǎn)，以及另外的發(fā)明特征將是顯而易見(jiàn)的。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了用于測(cè)定哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)化療劑的應(yīng)答的方法，其中該方法包括步驟(a)從哺乳動(dòng)物分離生物樣品，(b)檢測(cè)生物樣品中SPARC蛋白的表達(dá)，和(c)定量生物樣品中SPARC蛋白的量。本發(fā)明進(jìn)一步提供了利用白蛋白-結(jié)合蛋白作為療法，利用SPARC和SPARC的抗體或SPARC結(jié)合-蛋白作為療法，用于將化療劑遞送至哺乳動(dòng)物疾病部位的方法，其中該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中該藥物組合物包含與能結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白的化合物偶聯(lián)的化療劑和藥學(xué)可接受載體。此外，本發(fā)明提供了包含與能結(jié)合SPARC蛋白的化合物偶聯(lián)的化療劑和藥學(xué)可接受載體的組合物。另外，本發(fā)明提供了包含SPARC識(shí)別基團(tuán)和治療劑的遞送試劑，其中所述治療劑與SPARC識(shí)別基團(tuán)偶聯(lián)。此外，本發(fā)明提供了用于將化療劑遞送至哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，其中該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中該藥物組合物包含與能結(jié)合白蛋白的SPARC蛋白偶聯(lián)的化療劑和藥學(xué)可接受載體。本發(fā)明的組合物可以是小分子、大分子或蛋白質(zhì)。
圖1圖解說(shuō)明了MX-1腫瘤異種移植物中染色的白蛋白和SPARC。
圖2圖解說(shuō)明了紫杉醇通過(guò)單層內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)胞吞作用。
發(fā)明詳述目前已發(fā)現(xiàn)包含白蛋白-結(jié)合蛋白的組合物存在另外的定位機(jī)制。白蛋白-結(jié)合蛋白，如SPARC、cubilin和TGFβ，可用于將治療劑靶向以白蛋白-結(jié)合蛋白的過(guò)表達(dá)為特征的疾病部位。
本發(fā)明提供了與試劑偶聯(lián)的基團(tuán)的用途，其中所述基團(tuán)能結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白，如SPARC、cubilin或TGFβ，并且所述試劑為疾病的治療、顯影或遞送試劑，所述疾病中白蛋白-結(jié)合蛋白起著重要作用并且相對(duì)正常組織過(guò)表達(dá)。優(yōu)選，白蛋白-結(jié)合蛋白選自SPARC、cubilin或TGFβ。最優(yōu)選，白蛋白-結(jié)合蛋白為SPARC并且結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白的基團(tuán)為SPARC識(shí)別基團(tuán)。合適的SPARC識(shí)別基團(tuán)包括但不限于，配體、小分子、抗體。
本發(fā)明還提供了用于測(cè)定人或其他哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)化療劑的應(yīng)答的方法。該方法包括(a)從人分離生物樣品，(b)檢測(cè)生物樣品中SPARC蛋白的表達(dá)，和(c)定量生物樣品中SPARC蛋白的量。一旦確定腫瘤表達(dá)的SPARC的量，可例如通過(guò)將SPARC的表達(dá)與所給治療劑的劑量相關(guān)聯(lián)而確定化療劑的有效性。本發(fā)明還提供了SPARC抗體作為疾病治療劑或顯影劑的用途，該疾病中SPARC起著重要作用并且相對(duì)正常組織過(guò)表達(dá)。
在下文中，為簡(jiǎn)單起見(jiàn)所有結(jié)合白蛋白的蛋白質(zhì)(包括SPARC)稱為SPARC。SPARC蛋白負(fù)責(zé)某些人腫瘤中白蛋白的累積。由于白蛋白為化療藥物的主要載體，SPARC的表達(dá)水平為透過(guò)和保留在腫瘤中的化療藥物量的指示。因此，SPARC的表達(dá)水平為腫瘤對(duì)化療應(yīng)答的預(yù)示。
在本發(fā)明方法的上下文中可從目的哺乳動(dòng)物分離任何合適的生物樣品。優(yōu)選，如通過(guò)腫瘤活組織檢查從腫瘤分離生物樣品?；蛘?，可從哺乳動(dòng)物的體液，包括例如，腦脊液、血液、血漿、血清或尿液分離生物樣品。用于分離生物樣品的技術(shù)和方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。
任何合適的藥物活性劑可用于本發(fā)明方法(例如，與SPARC識(shí)別基團(tuán)偶聯(lián)的化療劑)，只要該活性劑的轉(zhuǎn)運(yùn)或結(jié)合需要白蛋白。合適的活性劑包括但不限于，酪氨酸激酶抑制劑(染料木黃酮)、生物活性劑(TNF或tTF)、放射性核素(例如，131I、90Y、111In、211At、32P和其他已知治療放射性核素)、阿霉素、安沙霉素抗生素、門冬酰胺酶、博來(lái)霉素、白消安、順氯氨鉑、卡波氯氨鉑、亞硝脲氮芥、卡西他濱、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、氮烯唑胺、放線菌素、柔紅霉素、右雷佐生、多烯紫杉醇、阿霉素、鬼臼亞乙苷、埃博霉素、5-氟脫氧尿苷、氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、依立替康、環(huán)己亞硝脲、二氯甲二乙胺、巰嘌呤、meplhalan、氨甲喋呤、雷帕霉素(西羅莫司(sirolimus))和衍生物、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、亞硝基脲(nitrosurea)、紫杉醇、帕米膦酸鹽(pamidronate)、噴司他丁、普卡霉素、丙卡巴肼、美羅華(rituximab、CD20人鼠嵌合性單克隆抗體)、鏈脲霉素、鬼臼噻吩苷、硫鳥嘌呤、三胺硫膦、紫杉烷、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞賓、泰索(taxol，紫杉酚)、考布他汀(combretastatins)、discodermolides、反鉑(transplatinum)、血管靶向試劑、抗-血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子化合物(“抗-VEGF”)、抗-表皮生長(zhǎng)因子受體化合物(“抗-EGFR”)、5-氟尿嘧啶和其衍生物。
此外，該藥物活性劑可以是毒素如蓖麻毒A、放射性核素、抗體自身的Fc片段、單鏈抗體、Fab片段、雙抗體等等。所選的藥物活性劑本身可識(shí)別和結(jié)合SPARC或適當(dāng)?shù)馗街谧R(shí)別SPARC的SPARC識(shí)別基團(tuán)，包括例如，蛋白質(zhì)或非-蛋白質(zhì)、抗體、抗體自身的Fc片段、單鏈抗體、Fab片段、雙抗體、肽或其他的非-蛋白質(zhì)小分子。
可根據(jù)本發(fā)明的方法給予一種或多種化療劑的一種或多種劑量。本發(fā)明方法中化療劑的類型和數(shù)量取決于針對(duì)的特定腫瘤類型的標(biāo)準(zhǔn)化療方案。換言之，特定的癌癥可用單一化療劑常規(guī)治療，而另一種可用化療劑組合常規(guī)治療。本領(lǐng)域中很好地描述了用于合適的療法、化學(xué)療法、放射性核素等等結(jié)合或聯(lián)合抗體或其片段的方法。
本發(fā)明對(duì)其有效的疾病包括任何身體組織，包括軟組織、結(jié)締組織、骨、實(shí)體器官、血管等等中增殖、組織重塑、增生、擴(kuò)大的傷口愈合的異常情況。通過(guò)發(fā)明的組合物能治療或診斷的疾病的實(shí)例包括癌癥、糖尿病或其他視網(wǎng)膜病、炎癥、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植物或血管內(nèi)裝置再狹窄等等。
根據(jù)本發(fā)明檢測(cè)和治療的腫瘤類型通常為人和其他哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的那些。腫瘤也可以為接種的結(jié)果，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中。人和其他動(dòng)物情況中遇見(jiàn)腫瘤的許多類型和形式，并且并不試圖限制本方法對(duì)任何特定腫瘤類型或種類的應(yīng)用。如已知的，腫瘤包括由不受控制的和漸進(jìn)性的細(xì)胞分裂產(chǎn)生的異常組織塊，并且通常也稱為“瘤”。本發(fā)明方法可用于例如人中的腫瘤細(xì)胞和相關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞、實(shí)體瘤和與軟組織有關(guān)的腫瘤，如軟組織肉瘤。腫瘤或癌癥可位于口腔和咽、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、骨和關(guān)節(jié)(例如，骨轉(zhuǎn)移性病灶)、軟組織、皮膚(例如，黑色素瘤)乳腺、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、眼和眼眶、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(例如，膠質(zhì)瘤)或內(nèi)分泌系統(tǒng)(例如，甲狀腺)并且不一定限于原發(fā)腫瘤或癌癥。與口腔有關(guān)的組織包括但不限于，舌和口腔組織。癌癥可產(chǎn)生于消化系統(tǒng)組織中，包括例如，食管、胃、小腸、結(jié)腸、直腸、肛門、肝臟、膽囊和胰腺。呼吸系統(tǒng)的癌癥可影響喉、肺和支氣管并且包括例如，非-小細(xì)胞肺癌。腫瘤可產(chǎn)生于子宮頸、子宮體、卵巢外陰、陰道、前列腺、睪丸和陰莖中，其組成雌雄生殖系統(tǒng)，以及膀胱、腎、腎盂和輸尿管中，其包括泌尿系統(tǒng)。腫瘤或癌癥可位于頭和/或頸(例如，喉癌和甲狀旁腺癌)。腫瘤或癌癥也可位于造血系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)，并且包括例如，淋巴瘤(例如，惡性淋巴肉芽腫病和非-惡性淋巴肉芽腫淋巴瘤)、多發(fā)性骨髓瘤或白血病(例如，急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病等等)。優(yōu)選，腫瘤位于膀胱、肝臟、卵巢、腎、消化道、腦或乳腺。
SPARC蛋白具有對(duì)多種配體的親和力。因此，本發(fā)明用于將治療劑遞送至疾病部位的方法以下列發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)對(duì)SPARC具有親和力的化合物或配體(包括白蛋白)可用于將治療藥物遞送至疾病部位，而幾乎沒(méi)有或不遞送至正常組織。
本發(fā)明還提供了將治療組合物從血管轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)內(nèi)皮屏障進(jìn)入腫瘤間質(zhì)組織的方法?？贵w療法和化療的主要障礙為轉(zhuǎn)移通過(guò)內(nèi)皮屏障進(jìn)入腫瘤間質(zhì)組織。白蛋白利用白蛋白受體轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制而通過(guò)內(nèi)皮屏障。該轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制與文獻(xiàn)報(bào)道的相同(gp60和albondin)或?yàn)槠渌窗l(fā)現(xiàn)的機(jī)制。之前已報(bào)道背載于白蛋白上的治療劑表現(xiàn)出增強(qiáng)的腫瘤攝取(Desai，N.等Increased endothelial transcytosis ofnanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)by endothelialgp60 receptorsa pathway inhibited by Taxol，27thAnnual SanAntonio Breast Cancer Symposium(SABCS)(2004)，摘要#1071)。此外，通過(guò)內(nèi)皮屏障的增強(qiáng)的轉(zhuǎn)移可利用生理的白蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制實(shí)現(xiàn)(Schnitzer，J.E.；Oh，P.J.Biol.Chem.269，6072-6082(1994))。
對(duì)于小分子，可進(jìn)行改進(jìn)以提高對(duì)白蛋白的藥物親和力。對(duì)于小分子制劑，可除去防止藥物結(jié)合白蛋白的溶劑?；蛘呷缫韵滤?，小分子可連接至白蛋白、白蛋白抗體、其片段或白蛋白-受體的配體。
對(duì)于生物分子如蛋白質(zhì)、抗體和其片段，可以用白蛋白結(jié)合肽設(shè)計(jì)改造該生物制劑而使得其呈現(xiàn)對(duì)白蛋白的親和力。肽可以為白蛋白結(jié)合序列、白蛋白的抗體或抗體片段、白蛋白載體的抗體或抗體片段(如gp60/albondin/凈化劑受體/或TGF-β受體)，或胞膜窯中發(fā)現(xiàn)的任何蛋白質(zhì)、白蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抗體。本發(fā)明還涉及制備為具有一個(gè)SPARC化合價(jià)和另一個(gè)經(jīng)內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn)的效應(yīng)器(如gp60/albondin/凈化劑受體/或TGF-β受體)化合價(jià)的嵌合體，或內(nèi)皮細(xì)胞胞膜窯中發(fā)現(xiàn)的任何蛋白質(zhì)的抗體或其合適的片段。
本發(fā)明還提供經(jīng)SPARC抗體的補(bǔ)體固定和/或細(xì)胞招募介導(dǎo)的免疫應(yīng)答而破壞SPARC表達(dá)組織(如腫瘤和心瓣再狹窄組織)的方法。在這種情況下，如同Rituxan(一種抗-CD20抗體)，效應(yīng)器部分為Fc片段，其可介導(dǎo)伴有SPARC表達(dá)細(xì)胞的直接破壞的補(bǔ)體激活或免疫細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答產(chǎn)生的組織破壞而招募至SPARC表達(dá)組織。
本發(fā)明還提供利用SPARC的中和抗體抑制SPARC活性的方法。中和抗體具有阻斷SPARC與其效應(yīng)器在體內(nèi)相互作用的能力。例如，中和抗體可阻斷SPARC與細(xì)胞表面組分的相互作用或SPARC結(jié)合其天然配體(如白蛋白、生長(zhǎng)因子和Ca2+)。
本發(fā)明還提供了用于測(cè)定人或其他哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)抗-SPARC療法的應(yīng)答的方法。該方法包括(a)從人分離生物樣品，(b)檢測(cè)生物樣品中SPARC蛋白的表達(dá)，和(c)定量生物樣品中SPARC蛋白的量。由于抗-SPARC療法依賴于疾病組織中SPARC抗體與SPARC的結(jié)合，疾病組織中SPARC的存在對(duì)于活性是必要的。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了使用結(jié)合至SPARC識(shí)別基團(tuán)的一種或多種診斷試劑(如以上所述的抗體或其片段)的方法。診斷試劑包括放射性同位素或放射性核素、MRI造影劑、X射線造影劑、超聲造影劑和PET造影劑。用于結(jié)合(conjugation)的方法為本領(lǐng)域所知。
可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何合適的方法檢測(cè)和定量樣品中SPARC蛋白的表達(dá)。蛋白質(zhì)檢測(cè)和定量的合適的方法包括蛋白質(zhì)印跡、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、銀染、BCA測(cè)定法(Smith等，Anal.Biochem.，150，76-85(1985))，Lowry蛋白質(zhì)測(cè)定法(例如在Lowry等，J.Biol.Chem.，193，265-275(1951)中描述)，其為基于蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物的比色測(cè)定法，和Bradford蛋白質(zhì)測(cè)定法(例如在Bradford等，Anal.Biochem.，72，248(1976)中描述)，其基于根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)合的考馬斯藍(lán)G-250吸光度的變化。可通過(guò)之前任何方法分析腫瘤活組織檢查或其可通過(guò)利用抗-SPARC抗體(單克隆或多克隆的)與合適的顯象系統(tǒng)(即，HRP底物和HRP-偶聯(lián)的二抗)一起的免疫組織化學(xué)分析。
任何合適的SPARC抗體均可用于本發(fā)明的方法，只要該抗體呈現(xiàn)特異性結(jié)合SPARC?？贵w可以是單克隆或多克隆的；并且可通過(guò)動(dòng)物的免疫產(chǎn)生或通過(guò)重組DNA技術(shù)(如噬菌體展示和體外誘變或抗體重鏈和輕鏈基因可變區(qū)的合成)而產(chǎn)生。多克隆抗體包括但不限于，人抗體和源自例如下列動(dòng)物的人源化抗體，如鳥類(例如，雞)、嚙齒類(例如，大鼠、小鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠)、母牛、山羊、綿羊、兔等等。單克隆抗體包括源自抗體產(chǎn)生細(xì)胞(包括但不限于人細(xì)胞)的單個(gè)克隆的抗體，和源自其他動(dòng)物類型(例如雞、兔、大鼠、小鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠、母牛、山羊、綿羊等等)的細(xì)胞的抗體。合成的抗體包括利用重組DNA技術(shù)經(jīng)重鏈和輕鏈基因可變區(qū)的遺傳工程而產(chǎn)生的抗體。合成的抗體還包括具有SPARC結(jié)合活性的化學(xué)合成的抗體片段或源自噬菌體展示或類似技術(shù)的抗體。
用于人的用途，為了避免免疫原性和免疫應(yīng)答，優(yōu)選利用人源化的抗-SPARC抗體或合適的片段如Fab′、Fab或Fab2。人源化抗體或其片段例如可利用下列已建立方法的一種產(chǎn)生1)可利用人IgG主鏈代替SPARC抗體的可變CDR域而構(gòu)建人源化抗體，其中重鏈和輕鏈在分開(kāi)的啟動(dòng)子下分別表達(dá)或在具有IRES序列的一個(gè)啟動(dòng)子下共表達(dá)；2)可利用設(shè)計(jì)改造具有人免疫系統(tǒng)的小鼠產(chǎn)生人源化單克隆抗體；3)可利用噬粒(M13，λ大腸桿菌噬菌體，或能表面展示的任何噬菌體系統(tǒng))產(chǎn)生SPARC的人源化抗體。為了構(gòu)建全長(zhǎng)抗體，可變區(qū)可轉(zhuǎn)移至重鏈和輕鏈的CDR上。哺乳動(dòng)物細(xì)胞如CHO、293或人骨髓細(xì)胞中重鏈和輕鏈的共表達(dá)產(chǎn)生全長(zhǎng)抗體。類似地，可利用沿用已久的方法制備Fab’、Fab或Fab2片段和單鏈抗體。
SPARC的抗體也不限于完整的抗體或保留SPARC結(jié)合位點(diǎn)的抗體的片段(例如，F(xiàn)ab和Fab2)?？贵w也不限于任何一類型的抗體，例如IgM、IgA、IgG、IgE、IgD和IgY?？贵w還不限于二價(jià)抗體、單價(jià)或具有SPARC的一價(jià)和效應(yīng)器(如tTF或蓖麻毒A)的另一價(jià)的嵌合體。人源化抗體不限于IgG。同樣的技術(shù)可用于產(chǎn)生所有其他種類的抗體如IgE、IgA、IgD、IgM，每種具有適于特定疾病靶向的不同的抗體-依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)活性?？贵w的功能片段可通過(guò)限制性蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生。這些片段可以是單價(jià)的(如Fab’)或二價(jià)的(如Fab2)。片段還可在大腸桿菌中作為單鏈scfv或雙抗體合成。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含直接能發(fā)揮其藥理學(xué)作用的藥物活性劑或與能結(jié)合SPARC或其他白蛋白結(jié)合部分的化合物偶聯(lián)的藥物活性劑，和藥學(xué)可接受載體的組合物。遞送試劑，其可以是包含與SPARC識(shí)別基團(tuán)偶聯(lián)的藥物活性劑的藥物組合物，以使得治療有效量的藥物活性劑遞送給哺乳動(dòng)物的量給予哺乳動(dòng)物，如人。
本發(fā)明還提供了用于將化療劑遞送給哺乳動(dòng)物中腫瘤的方法。該方法包括給予人或其他哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中該藥物組合物包含與能結(jié)合SPARC蛋白的化合物或配體偶聯(lián)的化療劑和藥學(xué)可接受載體。在此闡述的與本發(fā)明的其他實(shí)施方案有關(guān)的化療劑、腫瘤、哺乳動(dòng)物和其組分的描述也適用于遞送化療劑至腫瘤的上述方法的那些相同方面。
優(yōu)選，藥物組合物不包含超過(guò)50％的納米顆粒形式的治療劑。更優(yōu)選，藥物組合物不包含超過(guò)10％的納米顆粒形式的治療劑。甚至更優(yōu)選，藥物組合物不包含超過(guò)5％，或超過(guò)4％或超過(guò)3％的納米顆粒形式的治療劑。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物不包含超過(guò)2％或超過(guò)1％的納米顆粒形式的治療劑。最優(yōu)選，藥物組合物不包含任何納米顆粒形式的治療劑。
本發(fā)明還提供了用于將化療劑遞送至人或其他哺乳動(dòng)物中腫瘤的方法。該方法包括給予人或其他哺乳動(dòng)物治療有效量的遞送試劑，如藥物組合物，其中該遞送試劑(例如，藥物組合物)包含與SPARC識(shí)別基團(tuán)偶聯(lián)的化療劑。例如，化療劑可偶聯(lián)至SPARC識(shí)別基團(tuán)(如識(shí)別SPARC蛋白的抗體)或僅偶聯(lián)至SPARC抗體。藥物組合物優(yōu)選包含偶聯(lián)至SPARC識(shí)別基團(tuán)的化療劑和藥學(xué)可接受載體。在此闡述的與本發(fā)明的其他實(shí)施方案有關(guān)的化療劑、腫瘤、哺乳動(dòng)物和其組分的描述也適用于遞送化療劑至腫瘤的上述方法的那些相同方面。
在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過(guò)SPARC識(shí)別基團(tuán)的方式遞送藥物活性劑至疾病部位的方法，該疾病以人或表達(dá)所述蛋白質(zhì)或標(biāo)志物的其他動(dòng)物中SPARC或另一種白蛋白-結(jié)合蛋白或標(biāo)志物的過(guò)表達(dá)為特征。所述疾病疾病包括身體組織(例如軟組織、結(jié)締組織、骨、實(shí)體器官、血管等等)中增殖、組織重塑、增生、擴(kuò)大的傷口愈合的異常情況。通過(guò)給予包含偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白或另一種白蛋白-結(jié)合蛋白的化合物或配體的治療劑的藥物組合物能治療或診斷的疾病的實(shí)例包括癌癥、糖尿病或其他視網(wǎng)膜病、炎癥、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植物或血管內(nèi)裝置再狹窄等等。在此闡述的與本發(fā)明的其他實(shí)施方案有關(guān)的藥物活性劑、腫瘤、哺乳動(dòng)物和其組分的描述也適用于遞送藥物活性劑的上述方法的那些相同方面。
仍然在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于遞送藥物活性劑(例如，僅SPARC抗體或結(jié)合至SPARC識(shí)別基團(tuán)如SPARC抗體，放射性標(biāo)記的SPARC抗體等等的化療劑)至疾病部位的方法，該疾病以人或表達(dá)所述蛋白質(zhì)或標(biāo)志物的其他動(dòng)物中SPARC的過(guò)表達(dá)為特征。所述疾病包括身體組織(例如軟組織、結(jié)締組織、骨、實(shí)體器官、血管等等)中增殖、組織重塑、增生、擴(kuò)大的傷口愈合的異常情況。通過(guò)給予包含抗-SPARC治療的藥物組合物能治療或診斷的疾病的實(shí)例包括癌癥、糖尿病或其他視網(wǎng)膜病、炎癥、關(guān)節(jié)炎、血管或人工血管移植物或血管內(nèi)裝置再狹窄等等。這里闡述的與本發(fā)明的其他實(shí)施方案有關(guān)的藥物活性劑、腫瘤、哺乳動(dòng)物和其組分的描述也適用于遞送藥物活性劑的上述方法的那些相同方面。
在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，所述組合物包含偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白的化合物或配體的化療劑。該化療劑可利用任何合適的方法偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白的化合物或配體。優(yōu)選，該化療劑經(jīng)共價(jià)鍵(包括例如二硫鍵)化學(xué)偶聯(lián)至化合物。
本發(fā)明還提供了包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物的方法，所述組合物包含偶聯(lián)至SPARC識(shí)別基團(tuán)的化療劑或放射性元素。該化學(xué)治療的或放射性的試劑可利用任何合適的方法偶聯(lián)至識(shí)別SPARC的抗體。優(yōu)選，該化療劑可經(jīng)共價(jià)鍵(包括例如二硫鍵)化學(xué)偶聯(lián)至化合物。
優(yōu)選，可用于本發(fā)明方法中的化合物或配體能結(jié)合SPARC蛋白。在本發(fā)明一優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物為結(jié)合SPARC蛋白的配體。合適的配體實(shí)例包括鈣陽(yáng)離子(Ca2+)、銅陽(yáng)離子(Cu2+)、鐵陽(yáng)離子(Fe2+)、血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子(PDGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、膠原(例如，膠原I、膠原II、膠原III、膠原IV、膠原V和膠原IX)、玻連蛋白(vitronectin)、血小板反應(yīng)蛋白-1、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、白蛋白和羥基磷灰石陽(yáng)離子。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物為小分子。術(shù)語(yǔ)“小分子”指具有小于約600分子量的任何分子。合適的小分子的實(shí)例包括蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂類、輔酶(例如維生素)、抗原、激素和神經(jīng)遞質(zhì)。優(yōu)選，小分子為化學(xué)的(例如，有機(jī)或無(wú)機(jī)化學(xué)的)肽或擬肽、蛋白質(zhì)或糖類。在本發(fā)明又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物為直接針對(duì)SPARC蛋白的抗體。結(jié)合SPARC蛋白的合適的抗體或其片段可用于本發(fā)明方法中。
已在幾乎所有的癌癥類型中證實(shí)腫瘤組織中SPARC的表達(dá)。已證實(shí)SPARC在腫瘤組織上的加工可源自SPARC的腫瘤表達(dá)或是基質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的。通過(guò)外源SPARC的給予，腫瘤的SPARC表型可從SPARC陰性轉(zhuǎn)換至SPARC陽(yáng)性。因此，SPARC陽(yáng)性腫瘤將變?yōu)閷?duì)化療劑敏感的?；蛘?，SPARC可以為放射性同位素標(biāo)記的或與不同的毒素偶聯(lián)而賦予其直接或間接殺死腫瘤的能力。
可利用已知技術(shù)合成和純化SPARC。可通過(guò)將SPARC結(jié)構(gòu)基因/cDNA置于強(qiáng)啟動(dòng)子/翻譯起始位點(diǎn)調(diào)控下而產(chǎn)生表達(dá)外源SPARC的細(xì)胞并且載體轉(zhuǎn)染入哺乳動(dòng)物細(xì)胞以驅(qū)動(dòng)SPARC在這些細(xì)胞中的表達(dá)?；蛘?，SPARC可利用桿狀病毒或其他病毒(如腺病毒)表達(dá)。通過(guò)這些細(xì)胞表達(dá)的SPARC可通過(guò)傳統(tǒng)的純化方法如離子交換、體積排阻或C18色譜法純化。純化的SPARC可與防腐劑配制于鹽水中并且通過(guò)靜脈內(nèi)、通過(guò)氣霧劑、通過(guò)皮下注射或其他方法給予。
本發(fā)明還提供了用于將化療劑遞送給哺乳動(dòng)物腫瘤的方法。該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中該藥物組合物包含與能結(jié)合白蛋白的SPARC蛋白偶聯(lián)的化療劑和藥學(xué)可接受載體。在此闡述的與本發(fā)明的其他實(shí)施方案有關(guān)的化療劑、腫瘤、哺乳動(dòng)物和其組分的描述也適用于遞送化療劑至腫瘤的上述方法的那些相同方面。
用于體內(nèi)使用，偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白的化合物或配體的化療劑如所希望地配制入包含生理學(xué)可接受載體的藥物組合物中。任何合適的生理學(xué)可接受載體可用于本發(fā)明的上下文中，并且所述載體為本領(lǐng)域所熟知。
用于體內(nèi)使用，抗-SPARC治療劑如所希望地配制入包含生理學(xué)可接受載體的藥物組合物中。任何合適的生理學(xué)可接受載體可用于本發(fā)明的上下文中，并且所述載體為本領(lǐng)域所熟知。
載體通常為液體，但也可以是固體，或液體和固體組分的組合。如所希望的，載體為生理學(xué)可接受的(例如，藥物或藥理學(xué)可接受的)載體(例如，賦形劑或稀釋劑)。生理學(xué)可接受的載體為大家所熟知并且很容易得到。至少部分地通過(guò)靶組織和/或細(xì)胞的定位以及用于給予該組合物的具體方法確定載體的選擇。
通常，所述組合物可制成可注射的(無(wú)論是液體溶液或懸浮液)；還可制備適于在注射之前添加液體而制備溶液或懸浮液的固體形式；并且還可乳化該制劑。適于注射用途的藥物制劑包括無(wú)菌水溶液或分散體；包含已知的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和冷凍保護(hù)劑的制劑，包含芝麻油、花生油或丙二醇水溶液的制劑以及用于無(wú)菌注射溶液或分散體臨時(shí)制備的無(wú)菌粉劑。所有情況中，制劑必須為無(wú)菌的并且必須為至易于注射程度的液體。其在制備和貯藏條件下必須穩(wěn)定并且必須保存時(shí)防微生物(如細(xì)菌和真菌)的污染作用。作為游離堿或藥理學(xué)可接受鹽的活性物質(zhì)的溶液可適當(dāng)?shù)嘏c表面活性劑(如羥基纖維素)混合制備于水中。分散體還可以制備于甘油、液體聚乙二醇和其混合物和油類中。在常規(guī)的貯藏和使用條件下，這些制劑包含防腐劑以防止微生物的生長(zhǎng)。
偶聯(lián)至結(jié)合SPARC蛋白的化合物或配體的化療劑(例如，抗-SPARC治療)可以中性或鹽形式配制入組合物中。藥物可接受鹽包括酸加成鹽(與蛋白質(zhì)的游離氨基形成的)并且其與無(wú)機(jī)酸類(例如，鹽酸或磷酸)或有機(jī)酸類(如醋酸、草酸、酒石酸、杏仁酸等等)形成。與游離羧基形成的鹽也可源自無(wú)機(jī)堿(例如，鈉、鉀、銨、鈣或氫氧化鐵)，以及有機(jī)堿(如異丙胺、三甲胺、組氨酸、普魯卡因等等)。
組合物可進(jìn)一步包括任何其他合適的組分，尤其用于提高組合物和/或其終端使用的穩(wěn)定性。因此，存在本發(fā)明組合物的多種合適的制劑。下列制劑和方法僅為論證性的而決不為限制。
適于經(jīng)吸入給予的制劑包括氣霧劑制劑。氣霧劑制劑可置于加壓的可接受推進(jìn)劑中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮等等。其也可配制為常壓制劑，用于通過(guò)噴霧器或霧化器遞送。
適于腸胃外給藥的制劑包括水性的和非水性的等滲無(wú)菌注射溶液，其可包含抗-氧化劑、緩沖液、抑菌劑和使得該制劑與指定受體的血液等滲的溶質(zhì)，以及水性的和非水性的無(wú)菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、稠化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。制劑可以單元?jiǎng)┝炕蚨鄤┝棵芊馊萜鞔嬖冢绨碴澈托∑?，并且可以冷凍干?凍干)的狀態(tài)保存，立即使用之前僅需添加無(wú)菌的液體賦形劑，例如注射用水?？蓮闹八龅臒o(wú)菌粉劑、粒劑和片劑類型制備臨時(shí)的注射溶液和懸浮液。本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施方案中，偶聯(lián)至結(jié)合SPARC蛋白的化合物(例如，抗-SPARC治療)的化療劑被配制成用于注射(例如，腸胃外給藥)。在這方面，如所希望的，制劑適于瘤內(nèi)給藥，但也可配制成用于靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、皮下注射等等。
適于肛門給藥的制劑可通過(guò)將活性組分與各種基質(zhì)(如乳化基質(zhì)或水溶性基質(zhì))混合而制備栓劑。適于陰道給藥的制劑除了包含活性組分之外還含有本領(lǐng)域已知的合適的載體，所述制劑可以下列的方式存在子宮托、棉塞、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫或噴霧劑而存在。
此外，組合物可包含另外的治療或生物學(xué)-活性劑。例如，可存在對(duì)特定的適應(yīng)癥治療有效的治療因子?？刂蒲装Y的因子，如布洛芬或甾體，可為減少與藥物組合物的體內(nèi)給藥有關(guān)的腫脹和炎癥以及生理痛苦的部分。
具體實(shí)施例方式
下列實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明但不應(yīng)該認(rèn)為以任何方式限制其范圍。
實(shí)施例1該實(shí)施例舉例說(shuō)明SPARC與白蛋白在MX-1腫瘤異種移植物中的共-定位。
已顯示3期轉(zhuǎn)移性的乳腺癌試驗(yàn)中紫杉醇白蛋白納米顆粒(Abraxane，ABX或ABI-007)具有超過(guò)Taxol(TAX)的改善的響應(yīng)率(33％對(duì)比19％，p＜0.0001)(參見(jiàn)例如，O’Shaughnessy，SABCS)。近來(lái)證實(shí)了白蛋白-介導(dǎo)的紫杉醇(P)經(jīng)內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn)和ABX對(duì)比TAX的紫杉醇增加的瘤內(nèi)累積(參見(jiàn)例如，Desai，SABCS 2003)。白蛋白結(jié)合SPARC(參見(jiàn)例如，Schnitzer，J.Biol.Chem.，269，6072-82(1994)) 。
MX-1腫瘤細(xì)胞系源于人乳腺癌。免疫染色人MX-1腫瘤異種移植物、人原發(fā)乳腺腫瘤組織(n＝141)和正常人乳腺組織(n＝115)的連續(xù)低溫切片并且對(duì)白蛋白、SPARC(利用抗-SPARC抗體)和小窩蛋白(caveolin)-1染色分級(jí)(0-4)。培養(yǎng)的MX-1細(xì)胞也對(duì)SPARC免疫染色。用放射性紫杉醇(P)(20mg/kg IV)制備紫杉醇白蛋白納米顆粒(Abraxane，ABX或ABI-007)和Taxol(TAX)，并且用于確定紫杉醇在無(wú)胸腺小鼠正常組織中的生物學(xué)分布。
MX-1腫瘤中白蛋白染色為聚集的并且與SPARC共-定位(圖1)。小窩蛋白-1染色證實(shí)含有白蛋白的區(qū)域中血管密度與無(wú)白蛋白的區(qū)域無(wú)差異。SPARC由MX-1培養(yǎng)細(xì)胞的表達(dá)通過(guò)用抗-SPARC抗體陽(yáng)性染色證實(shí)。對(duì)于7/10組織，正常組織中(SPARC陰性)的紫杉醇累積對(duì)于ABX相比TAX明顯更低(p≤0.004)。與正常組織的1％相比，46％的人原發(fā)乳腺腫瘤呈現(xiàn)強(qiáng)的SPARC染色(等級(jí)＞2)(p＜0.0001)。在50個(gè)腫瘤組織的亞組中，SPARC表達(dá)與分級(jí)、ER狀態(tài)或PgR狀態(tài)無(wú)關(guān)；然而p53-陰性腫瘤中有高SPARC表達(dá)的趨勢(shì)。
白蛋白和SPARC的共-定位提示SPARC通過(guò)其白蛋白結(jié)合活性可起乳腺腫瘤中白蛋白結(jié)合的瘤內(nèi)靶標(biāo)的作用。由于ABX中紫杉醇的轉(zhuǎn)運(yùn)取決于白蛋白(參見(jiàn)例如，Desai SABCS，2003)，此可解釋ABX相比TAX改善的腫瘤累積。正常組織中ABX累積比TAX更低，與正常組織中缺乏SPARC表達(dá)相一致。對(duì)SPARC篩查患者使得能鑒定對(duì)ABX更多響應(yīng)的患者。這些腫瘤中SPARC的存在允許利用抗-SPARC抗體的靶向和治療。
實(shí)施例2該實(shí)施例舉例說(shuō)明了MX-1腫瘤細(xì)胞中SPARC的表達(dá)。
MX-1細(xì)胞培養(yǎng)于蓋玻片上并且利用本領(lǐng)域已知的方法用針對(duì)人SPARC的抗體染色。觀察到抗體染色，其證實(shí)MX-1表達(dá)SPARC。這些結(jié)果提示MX-1腫瘤細(xì)胞中檢測(cè)到的SPARC表達(dá)為SPARC通過(guò)MX-1腫瘤細(xì)胞分泌的結(jié)果。對(duì)于MX-1腫瘤細(xì)胞，染色比正常的初級(jí)細(xì)胞如HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)、HLMVEC(人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞)和HMEC(人乳腺上皮細(xì)胞)更強(qiáng)。雖然大部分SPARC染色為內(nèi)部SPARC，如通過(guò)共聚焦顯微鏡檢查和未滲透細(xì)胞的染色證實(shí)的，檢測(cè)到顯著性水平的表面SPARC。
實(shí)施例3該實(shí)施例舉例說(shuō)明了人乳腺癌細(xì)胞中SPARC蛋白的過(guò)表達(dá)。
利用Cybrdi Inc.(Gaithersburg，MD)的腫瘤陣列測(cè)定人乳腺癌細(xì)胞中的SPARC表達(dá)。分析結(jié)果在表1中顯示。染色強(qiáng)度分級(jí)為“陰性”至4+，數(shù)字越高對(duì)應(yīng)的過(guò)表達(dá)強(qiáng)度就越大。與正常組織的1％相比，49％的乳腺癌SPARC染色陽(yáng)性(2+和以上)(p＜0.0001)。
實(shí)施例4該實(shí)施例舉例說(shuō)明了紫杉醇白蛋白納米顆粒(ABI-007)的內(nèi)皮受體(gp60)-介導(dǎo)的小窩轉(zhuǎn)胞吞作用。
證實(shí)III期轉(zhuǎn)移性的乳腺癌試驗(yàn)中紫杉醇(P)白蛋白納米顆粒(Abraxane，ABX或ABI-007)具有超過(guò)Taxol的改善的響應(yīng)率(33％對(duì)比19％，p＜0.0001)(SABCS，O’Shaughnessy等，2003)。Taxol(TAX)中的Cremophor截留P微膠粒于血漿中，減少細(xì)胞分區(qū)可得到的紫杉醇(參見(jiàn)例如，Sparreboom等，Cancer.Res.，59，1454(1999))。無(wú)胸腺小鼠中的研究顯示與相等劑量的TAX相比，ABX具有30-40％更高的瘤內(nèi)紫杉醇濃度(SABCS，Desai等.，2003)。白蛋白通過(guò)特異性受體(gp60)-介導(dǎo)的小窩轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞(EC)(參見(jiàn)例如，John等，Am.J.Physiol.，284，L187(2001))。假設(shè)ABX中白蛋白-結(jié)合的紫杉醇可通過(guò)gp60轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)腫瘤微血管EC，并且相比TAX該機(jī)制可能對(duì)于ABX尤其具有活性。
進(jìn)行一系列的實(shí)驗(yàn)對(duì)ABX和TAX評(píng)估紫杉醇通過(guò)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HLMVEC)的結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)。熒光紫杉醇(FP)用作探針并且熒光ABX和TAX與FP配制以探測(cè)紫杉醇通過(guò)培養(yǎng)在transwell裝置上的EC單層的結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)。
對(duì)于ABX，紫杉醇結(jié)合細(xì)胞(HUVEC)比TAX高10倍。與TAX相比，對(duì)于HUVEC和HMVEC，紫杉醇從ABX轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)EC單層分別提高2-3倍和2-4倍。轉(zhuǎn)運(yùn)依賴于白蛋白。紫杉醇從ABX的轉(zhuǎn)運(yùn)受抗-SPARC抗體存在的抑制，所述抗體已知結(jié)合gp60，小窩白蛋白轉(zhuǎn)胞吞作用必需的受體。已知的小窩轉(zhuǎn)胞吞作用抑制劑，NEM和β-甲基環(huán)糊精(BMC)也抑制紫杉醇從ABX轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)內(nèi)皮單層(圖2)。小窩轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制將P從ABX的轉(zhuǎn)運(yùn)降低到TAX轉(zhuǎn)運(yùn)的水平。
這些結(jié)果證實(shí)紫杉醇通過(guò)gp60-介導(dǎo)的小窩轉(zhuǎn)胞吞作用從ABX主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)EC，而P主要通過(guò)副細(xì)胞(非-小窩)機(jī)制從TAX似乎以2-4倍更低的速率轉(zhuǎn)運(yùn)。該途徑可能在某種程度上引起所見(jiàn)的ABX相對(duì)TAX提高的紫杉醇的瘤內(nèi)濃度。TAX中的Cremophor抑制紫杉醇通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)胞吞作用。
實(shí)施例5該實(shí)施例在頭和頸鱗狀癌中利用納米顆粒白蛋白-結(jié)合的紫杉醇(ABI-007)證實(shí)SPARC過(guò)表達(dá)與高響應(yīng)率的相關(guān)性。
頭和頸(H&N)以及肛管的鱗狀細(xì)胞癌(SCC)患者的I和II期臨床研究中，對(duì)于動(dòng)脈內(nèi)遞送的納米顆粒白蛋白-結(jié)合的紫杉醇(Abraxane，ABX或ABI-007)，分別觀察到78％和64％的響應(yīng)率(參見(jiàn)例如，Damascelli等，Cancer，92(10)，2592-2602(2001)，和Damascelli等，AJR，181，253-260(2003))。在比較ABX和Taxol(TAX)的體外細(xì)胞毒性中，觀察到鱗狀頸(A431)系對(duì)ABX(0.004μg/ml)比TAX(0.012μg/ml)表現(xiàn)出改善的IC50。近來(lái)證實(shí)了白蛋白-介導(dǎo)的紫杉醇(P)經(jīng)內(nèi)皮小窩轉(zhuǎn)運(yùn)和ABX相比TAX的P增加的瘤內(nèi)累積(參見(jiàn)例如，Desai，SABCS 2003)。
免疫染色人H&N腫瘤組織(n＝119)和正常人H&N組織(n＝15)并且利用腫瘤和正常組織陣列對(duì)SPARC染色分級(jí)(0-4)。利用多克隆兔抗-SPARC抗體進(jìn)行免疫染色。在新的I期劑量擴(kuò)大研究中(ABX IV給予超過(guò)30分鐘q3w)，分析頭和頸癌患者(n＝3)的亞組對(duì)ABX的應(yīng)答。
對(duì)比正常組織中的0％(0/15)，H&N腫瘤的60％(72/119)過(guò)表達(dá)SPARC(等級(jí)≥2)(p＜0.0001)。I期研究中，2/3 H&N患者在135mg/m2(1pt)和225mg/m2(1pt)劑量水平的2輪治療后達(dá)到部分響應(yīng)(PR)。在260mg/m2下的1/3患者繼續(xù)發(fā)展。
發(fā)現(xiàn)60％的鱗狀H&N腫瘤中過(guò)表達(dá)SPARC。此可解釋之前在鱗狀H&N癌中所見(jiàn)的由于白蛋白-結(jié)合的紫杉醇結(jié)合這些腫瘤中表達(dá)的SPARC而引起的高的ABX單-試劑活性。新的I期研究中2/3鱗狀H&N腫瘤患者達(dá)到PR。
SPARC染色--------0 -/+ 1 2 3 4H&N腫瘤陣列-癌 17 14 16 23 20 29--------(14％) (12％) (13％) (19％) (17％) (24％)-正常 13 0 2 0 0 0--------(87％) (0％) (13％) (0％) (0％) (0％)免疫染色人H&N腫瘤組織(n＝119)和正常人H&N組織(n＝15)并且利用腫瘤和正常組織陣列對(duì)SPARC染色分級(jí)(0-4)。利用多克隆兔抗-SPARC抗體進(jìn)行免疫染色。對(duì)比正常組織中的0％(0/15)，H&N腫瘤的60％(72/119)過(guò)表達(dá)SPARC(等級(jí)≥2)(p＜0.0001)。此可解釋之前在鱗狀H&N癌中所見(jiàn)的由于白蛋白-結(jié)合的紫杉醇結(jié)合這些腫瘤中表達(dá)的SPARC而引起的高的ABX單-藥劑活性。
在新的I期劑量擴(kuò)大研究中(ABX IV給予超過(guò)30分鐘q3w)，分析頭和頸癌患者(n＝3)的亞組對(duì)ABX的應(yīng)答。I期研究中，2/3 H&N患者在135mg/m2(1pt)和225mg/m2(1pt)劑量水平的2輪治療后達(dá)到部分響應(yīng)(PR)。在260mg/m2下的1/3患者繼續(xù)發(fā)展。來(lái)自這些患者的腫瘤組織對(duì)SPARC染色并且1個(gè)應(yīng)答患者顯示SPARC強(qiáng)的過(guò)表達(dá)。
另一個(gè)用動(dòng)脈內(nèi)Abraxane治療的頭和頸(H&N)鱗狀細(xì)胞癌(SCC)患者的II期臨床研究中，注意到68％的總響應(yīng)率。對(duì)其組織分析SPARC染色的10個(gè)應(yīng)答患者中，發(fā)現(xiàn)70％強(qiáng)烈過(guò)表達(dá)SPARC。
實(shí)施例6該實(shí)施例舉例說(shuō)明了標(biāo)記的白蛋白進(jìn)入MX-1腫瘤細(xì)胞的內(nèi)在化作用和在MX-1細(xì)胞內(nèi)與胞內(nèi)SPARC表達(dá)的共定位。
MX-1細(xì)胞培養(yǎng)于蓋玻片上并且用合適的藥劑滲透。細(xì)胞暴露于熒光白蛋白并且洗滌后暴露于SPARC抗體。此后暴露于具有與白蛋白不同熒光標(biāo)記的二次抗體。令人驚訝地觀察到標(biāo)記的白蛋白與存在的SPARC在細(xì)胞內(nèi)的共定位，表明白蛋白迅速內(nèi)在化并且靶向胞內(nèi)SPARC。
實(shí)施例7該實(shí)施例證實(shí)相比Taxol，包含紫杉醇和白蛋白的藥物組合物經(jīng)gp60(白蛋白受體)的內(nèi)皮轉(zhuǎn)胞吞作用的提高。
人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HLMVEC)在transwell上生長(zhǎng)至匯合。20μg/mL濃度的包含紫杉醇和白蛋白的本發(fā)明藥物組合物或包含熒光紫杉醇(Flutax)的Taxol添加至transwell上面的室。
利用熒光計(jì)連續(xù)監(jiān)測(cè)紫杉醇通過(guò)轉(zhuǎn)胞吞作用從上面的室轉(zhuǎn)運(yùn)至底下的室。還使用僅包含F(xiàn)lutax而無(wú)白蛋白的對(duì)照。具有Flutax的對(duì)照顯示無(wú)轉(zhuǎn)運(yùn)，證實(shí)匯合的HLMVEC單層的完整性。5％HSA(生理濃度)存在下來(lái)自白蛋白-紫杉醇組合物的紫杉醇的轉(zhuǎn)運(yùn)比來(lái)自Taxol的紫杉醇更快。白蛋白-紫杉醇組合物和Taxol的轉(zhuǎn)運(yùn)速率常數(shù)(Kt)分別為1.396h-1和0.03h-1。對(duì)于白蛋白-紫杉醇組合物，轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)單層的紫杉醇總量比Taxol高三倍。因此，白蛋白或包含針對(duì)gp60受體或其他內(nèi)皮細(xì)胞受體的抗體或片段的其他合適的模擬物的使用可幫助所需的治療劑通過(guò)內(nèi)皮屏障進(jìn)入腫瘤間質(zhì)組織的轉(zhuǎn)運(yùn)。
實(shí)施例8該實(shí)施例證實(shí)抗-SPARC抗體特異性結(jié)合SPARC。
通過(guò)超聲處理從HUVEC細(xì)胞制備全細(xì)胞提取物。在5-15％的SDS-PAGE上分離蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上并且用SPARC的多克隆抗體和SPARC的單克隆抗體顯象。兩種抗體與38kDa的單一條帶反應(yīng)，38KDa為SPARC的正確分子量。當(dāng)通過(guò)同樣的方法分析MX-1時(shí)，在澄清的細(xì)胞裂解物或富含膜的膜級(jí)分中檢測(cè)到SPARC。
實(shí)施例9該實(shí)施例證實(shí)正常組織中SPARC表達(dá)的缺乏。
免疫染色正常人和小鼠組織并且利用腫瘤和正常組織陣列對(duì)SPARC染色分級(jí)(0-4)。利用多克隆兔抗-SPARC抗體進(jìn)行免疫染色。除食管外，任何正常組織中不表達(dá)SPARC。同樣地，除了雌性小鼠的腎外，任何正常小鼠組織中不表達(dá)SPARC。然而，有可能該表達(dá)歸因于和SPARC同源的卵泡抑素(follistatin)。
人正常組織中的SPARC表達(dá)胃0/8結(jié)腸 0/9直腸 0/15肝臟 0/14脾臟 0/10肺0/14腎1/14腦1/14睪丸 0/8前列腺0/3心臟 0/9
扁桃體0/10淋巴結(jié)0/10盲腸 0/10食管 5/5胰腺 0/5眼球 0/5卵巢 0/5小鼠正常組織肝臟 0/19腎(M) 0/8腎(F) 6/8肺0/16肌肉 0/20腦0/20心臟 0/18胃0/20脾臟 0/20所有參考文獻(xiàn)，包括在此引用的出版物、專利申請(qǐng)和專利在此通過(guò)引用引入至本文，就像每一參考文獻(xiàn)分別和明確地表明通過(guò)引用引入并且在此整體闡述的相同程度。
除非在此另有陳述或明顯與上下文矛盾，在描述本發(fā)明的上下文中術(shù)語(yǔ)“一”和“一個(gè)”以及“這個(gè)”和類似的指代的使用(特別是在下列權(quán)利要求內(nèi)容中)將視為包括單數(shù)和復(fù)數(shù)。除非另作說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“包含”、“具有”、“包括”和“含有”認(rèn)為是開(kāi)放式術(shù)語(yǔ)(即指“包括但不限于”)。除非在此另有陳述，在此數(shù)值范圍的列舉僅試圖用作分別涉及落入該范圍的每一單獨(dú)值的簡(jiǎn)寫方法，并且每一單獨(dú)的值并入說(shuō)明書中就像其在此分別敘述一樣。除非在此另有陳述或明顯與上下文矛盾，在此描述的所有方法可以任何合適的順序進(jìn)行。在此提供的任何和所有實(shí)施例或例證性的術(shù)語(yǔ)(例如“如”)的使用僅是想更好地闡明本發(fā)明并且除另外要求的以外，不造成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。說(shuō)明書中術(shù)語(yǔ)不應(yīng)視為表示本發(fā)明的實(shí)踐所必需的任何未要求的要素。
在此描述了本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，包括發(fā)明人已知實(shí)施本發(fā)明的最佳方式。根據(jù)閱讀上述說(shuō)明書，那些優(yōu)選實(shí)施方案的改變對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。發(fā)明人期望熟練技術(shù)工人酌情應(yīng)用所述改變，并且發(fā)明人試圖在在此具體描述之外實(shí)踐本發(fā)明。因此，本發(fā)明包括如適用法允許的至此附加的權(quán)利要求中所敘述主題的所有改進(jìn)和等同形式。另外，除非在此另有陳述或明顯與上下文矛盾，其所有可能的改變中任何上述要素的組合包括在本發(fā)明中。
權(quán)利要求
1.用于測(cè)定哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)化療劑應(yīng)答的方法，該方法包括(a)從哺乳動(dòng)物分離生物樣品，(b)檢測(cè)生物樣品中SPARC蛋白的表達(dá)，和(c)定量生物樣品中SPARC蛋白的量。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述生物樣品分離自腫瘤。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述生物樣品分離自體液。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述體液選自腦脊液、血液、血漿、血清和尿液。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述腫瘤位于膀胱、肝臟、卵巢、腎、消化道、腦或乳腺。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
7.用于將治療劑遞送至哺乳動(dòng)物中疾病部位的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含偶聯(lián)至能結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白的化合物的治療劑以及藥學(xué)可接受載體，條件是所述藥物組合物不包含超過(guò)50％的納米顆粒形式的治療劑。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述藥物組合物不包含超過(guò)10％的納米顆粒形式的治療劑。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述藥物組合物不包含超過(guò)5％的納米顆粒形式的治療劑。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述白蛋白-結(jié)合蛋白為SPARC蛋白。
11.權(quán)利要求7的方法，其中所述疾病部位為腫瘤。
12.權(quán)利要求7的方法，其中所述治療劑為診斷試劑。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述診斷試劑選自放射性試劑、MRI造影劑、X射線造影劑、超聲造影劑和PET造影劑。
14.權(quán)利要求7的方法，其中所述化合物為結(jié)合SPARC蛋白的配體。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述配體選自鈣陽(yáng)離子(Ca2+)、銅陽(yáng)離子(Cu2+)、鐵陽(yáng)離子(Fe2+)、血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子(PDGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、膠原I、膠原II、膠原III、膠原IV、膠原V和膠原IX、玻連蛋白、血小板反應(yīng)蛋白-1、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、白蛋白和羥基磷灰石。
16.權(quán)利要求7的方法，其中能結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白的化合物為小分子。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述小分子選自化學(xué)品、蛋白質(zhì)和糖類。
18.權(quán)利要求7的方法，其中能結(jié)合白蛋白-結(jié)合蛋白的化合物為SPARC蛋白的抗體。
19.權(quán)利要求11的方法，其中所述腫瘤位于膀胱、肝臟、卵巢、腎、消化道、腦或乳腺。
20.權(quán)利要求7的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
21.權(quán)利要求7的方法，其中給藥途徑選自靜脈內(nèi)的、腹腔內(nèi)的、瘤內(nèi)的和吸入的。
22.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體為多克隆抗體。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗體在選自雞、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、倉(cāng)鼠、綿羊、母牛和山羊的動(dòng)物中制備。
24.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體為人源化的。
25.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體為單克隆的。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述抗體通過(guò)產(chǎn)生抗-SPARC抗體的單個(gè)細(xì)胞系與骨髓瘤系融合而制備。
27.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體通過(guò)選自下組的方法而體外制備肽合成器、通過(guò)展示噬菌體轉(zhuǎn)化入抗體、以及抗體的重鏈和輕鏈基因可變區(qū)的誘變或合成。
28.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體選自單價(jià)的、多價(jià)的、單特異性的、雙特異性的、單鏈的和Fab片段。
29.權(quán)利要求27的方法，其中所述抗體為嵌合體。
30.權(quán)利要求18的方法，其中所述治療劑選自酪氨酸激酶抑制劑、激酶抑制劑、生物活性劑、生物分子、放射性核素、阿霉素、安沙霉素抗生素、門冬酰胺酶、博來(lái)霉素、白消安、順氯氨鉑、卡波氯氨鉑、亞硝脲氮芥、卡西他濱、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、氮烯唑胺、放線菌素、柔紅霉素、右雷佐生、多烯紫杉醇、阿霉素、鬼臼亞乙苷、埃博霉素、5-氟脫氧尿苷、氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、依立替康、環(huán)己亞硝脲、二氯甲二乙胺、巰嘌呤、meplhalan、氨甲喋呤、雷帕霉素(西羅莫司(sirolimus))、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、亞硝基脲、紫杉醇、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普卡霉素、丙卡巴肼、美羅華、鏈脲霉素、鬼臼噻吩苷、硫鳥嘌呤、三胺硫膦、紫杉烷、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞賓、泰索、考布他汀、discodermolides、反鉑、抗-血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子化合物(“抗-VEGF”)、抗-表皮生長(zhǎng)因子受體化合物(“抗-EGFR”)、5-氟尿嘧啶及其衍生物和組合。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述治療劑為激酶抑制劑。
32.權(quán)利要求31的方法，其中所述激酶抑制劑為染料木黃酮。
33.權(quán)利要求30的方法，其中所述治療劑為生物分子。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述生物分子選自tTF和TNF。
35.權(quán)利要求18的方法，其中所述治療劑為放射性核素。
36.權(quán)利要求18的方法，其中所述治療劑為介導(dǎo)補(bǔ)體激活和細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)腫瘤的細(xì)胞毒性的抗體。
37.權(quán)利要求18的方法，其中所述腫瘤位于膀胱、肝臟、卵巢、腎、消化道、腦或乳腺。
38.權(quán)利要求18的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
39.權(quán)利要求18的方法，其中給藥途徑為靜脈內(nèi)的、腹腔內(nèi)的、瘤內(nèi)的或吸入的。
40.包含偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白的化合物的治療劑和藥學(xué)可接受載體的組合物，條件是該組合物不包含超過(guò)50％的納米顆粒形式的所述治療劑。
41.權(quán)利要求40的組合物，其中能結(jié)合SPARC蛋白的化合物為抗體或其片段。
42.權(quán)利要求41的組合物，其中所述抗體或其片段為人源化的并且選自單價(jià)的、多價(jià)的、單特異性的、雙特異性的、單鏈的、單價(jià)Fab’、二價(jià)Fab2、scfv、雙抗體和嵌合體。
43.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑為化學(xué)治療劑、放射性核素或肽。
44.權(quán)利要求41的組合物，其中所述抗體為多克隆的。
45.權(quán)利要求44的組合物，其中所述抗體在選自雞、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、倉(cāng)鼠、綿羊、母牛和山羊的動(dòng)物中制備。
46.權(quán)利要求45的組合物，其中所述抗體為人源化的。
47.權(quán)利要求41的組合物，其中所述抗體為單克隆的。
48.權(quán)利要求47的組合物，其中所述抗體通過(guò)產(chǎn)生抗-SPARC抗體的單個(gè)細(xì)胞系與骨髓瘤系融合而制備。
49.權(quán)利要求41的組合物，其中所述抗體通過(guò)選自下組的方法而體外制備肽合成器、通過(guò)展示噬菌體轉(zhuǎn)化入抗體、以及抗體的重鏈和輕鏈基因可變區(qū)的誘變或合成。
50.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑選自酪氨酸激酶抑制劑、激酶抑制劑、生物活性劑、生物分子、放射性核素、阿霉素、安沙霉素抗生素、門冬酰胺酶、博來(lái)霉素、白消安、順氯氨鉑、卡波氯氨鉑、亞硝脲氮芥、卡西他濱、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、喜樹堿、氮烯唑胺、放線菌素、柔紅霉素、右雷佐生、多烯紫杉醇、阿霉素、鬼臼亞乙苷、埃博霉素、5-氟脫氧尿苷、氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、依立替康、環(huán)己亞硝脲、二氯甲二乙胺、巰嘌呤、meplhalan、氨甲喋呤、雷帕霉素(西羅莫司(sirolimus))、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、亞硝基脲、紫杉醇、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普卡霉素、丙卡巴肼、美羅華、鏈脲霉素、鬼臼噻吩苷、硫鳥嘌呤、三胺硫膦、紫杉烷、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞賓、泰索、考布他汀、discodermolides、反鉑、抗-血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子化合物(“抗-VEGF”)、抗-表皮生長(zhǎng)因子受體化合物(“抗-EGFR”)、5-氟尿嘧啶及其衍生物和組合。
51.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑為激酶抑制劑。
52.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑為選自tTF和TNF的生物分子。
53.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑為放射性核素。
54.權(quán)利要求41的組合物，其中所述治療劑為介導(dǎo)補(bǔ)體激活和細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)腫瘤的細(xì)胞毒性的抗體。
55.權(quán)利要求41的組合物，其中給藥途徑為靜脈內(nèi)的、腹腔內(nèi)的、瘤內(nèi)的或吸入的。
56.包含SPARC識(shí)別基團(tuán)和治療劑的遞送試劑，其中所述治療劑偶聯(lián)至SPARC識(shí)別基團(tuán)，條件是所述遞送試劑不包含超過(guò)50％的納米顆粒形式的所述治療劑。
57.權(quán)利要求56的遞送試劑，其中所述SPARC識(shí)別基團(tuán)包含抗體或其片段，選自單價(jià)Fab’、二價(jià)Fab2、scfv、雙抗體、嵌合體抗體或其片段，并且其中所述治療劑為化學(xué)治療劑、放射性核素、肽、細(xì)胞毒劑、激酶抑制劑、生物分子或診斷試劑和其組合。
58.權(quán)利要求56的遞送試劑，其中所述SPARC識(shí)別基團(tuán)為人源化抗體或其片段。
59.用于將化療劑遞送至哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，其中所述方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含偶聯(lián)至能結(jié)合白蛋白的SPARC蛋白的化療劑和藥學(xué)可接受載體。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述SPARC從選自桿狀病毒或腺病毒的病毒表達(dá)。
61.權(quán)利要求59的方法，其中所述SPARC利用色譜法純化。
62.權(quán)利要求61的方法，其中所述色譜法選自離子、大小排阻或C-18色譜法。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于測(cè)定哺乳動(dòng)物腫瘤對(duì)化療劑的應(yīng)答的方法，包括檢測(cè)和定量分離自人的樣品中的SPARC蛋白。本發(fā)明還提供了用于將化療劑遞送至表達(dá)SPARC的人腫瘤的方法，包括給予包含偶聯(lián)至結(jié)合SPARC蛋白的化合物的化療劑的藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含偶聯(lián)至能結(jié)合SPARC蛋白的化合物的化療劑和藥學(xué)可接受載體的組合物。
文檔編號(hào)G01N33/574GK1980699SQ200580020748
公開(kāi)日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2005年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月14日
發(fā)明者V·特利烏, N·P·德賽, P·蘇恩-施昂 申請(qǐng)人:阿布拉西斯生物科學(xué)公司