專利名稱：一種檢測(cè)奶中無機(jī)磷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無機(jī)磷的檢測(cè)方法，具體屬于一種檢測(cè)奶中無機(jī)磷的方法，即檢測(cè)母乳、牛奶或羊奶中無機(jī)磷的方法。
背景技術(shù)：
對(duì)于新生的嬰兒，母乳或牛奶或羊奶是他們成長和發(fā)育的最主要的食物來源。而恰恰這個(gè)時(shí)期，是小兒生長最快的時(shí)期，正處于成骨旺盛期及大腦和智力尚不完善的階段，需要攝入適量的營養(yǎng)素，才能保證正常的生長發(fā)育，并預(yù)防營養(yǎng)不良、佝僂病、貧血等。離子化元素如鈣、磷是正常凝血和神經(jīng)肌肉功能所必需的，由于它們是骨骼的重要組成部分，故又稱大元素。但是如果吸收的鈣磷比例失調(diào)，會(huì)引起低鈣血癥，引起佝僂病，而且奶中的鐵易受到奶中高磷、高鈣的影響形成不溶性的含鐵化合物，不能被人體吸收利用，可導(dǎo)致小兒身體虛弱、易困易倦，發(fā)生缺鐵性貧血。正常母乳中鈣磷的比例為2∶1，易于吸收，對(duì)防治佝僂病有一定作用；而牛奶為1.2∶1，不易吸收。因此，測(cè)定母乳和牛奶中鈣磷的指標(biāo)是很重要的。通過測(cè)定嬰兒食用奶中鈣磷的含量，從而及時(shí)合理添加輔食。當(dāng)然隨著人們生活水準(zhǔn)的提高，商業(yè)牛奶成為人們基本的營養(yǎng)品。但牛奶和經(jīng)過商業(yè)加工后的牛奶，好些重要成分的指標(biāo)不夠，牛乳中含鈣少、含磷多，容易形成難溶性的磷酸鈣，影響腸道鈣、磷吸收。如果吃牛奶的孩子，添加含鈣多、含磷少的白蘿卜，糾正鈣、磷比例，即能提高鈣吸收量。所以，需要合理的添加和調(diào)節(jié)才不至于由于飲用牛奶而導(dǎo)致營養(yǎng)失調(diào)。長久以來，國內(nèi)外人們只是關(guān)注尿液和血清中無機(jī)磷的測(cè)定，對(duì)測(cè)定奶中無機(jī)磷的方法很少提及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)奶中無機(jī)磷的方法，這種方法可適用于臨床和商業(yè)使用。
本發(fā)明提供一種檢測(cè)奶中無機(jī)磷的方法，該方法基于鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH為6.5-7.5的HEPES緩沖溶液中定量地檢測(cè)奶中的無機(jī)磷，其具體檢測(cè)步驟如下1、取母乳或牛奶或羊奶，在高速臺(tái)式離心機(jī)上離心得上層液；2、取上述上層液，轉(zhuǎn)入超濾杯，在室溫及5×105Pa的氮?dú)鈼l件下使用截留分子量為10kD的PM-10超濾膜用超濾器超濾，收取濾出的無色清亮液，在-17℃至-20℃保存，以供測(cè)量；
3、配制pH6.5-7.5的HEPES緩沖溶液，并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液；4、把2ml的HEPES緩沖溶液加到干凈的紫外比色皿中，作為空白，用微量進(jìn)樣器吸取2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液10-100μl，加到此比色皿中，此時(shí)溶液由無色變黃，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，443nm有最大吸收；5、在上述的比色皿中，加入摩爾數(shù)2倍于鄰苯二酚紫溶液的Yb3+溶液，此時(shí)溶液由黃變藍(lán)，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)最大吸收峰由上述的443nm變?yōu)?23nm；6、取上述無色清亮液，逐漸用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，隨著清亮液的加入，最大吸收峰又由623nm逐漸向443nm變回，溶液的顏色也逐漸由藍(lán)變回黃色，當(dāng)吸收峰在443nm達(dá)到最大，溶液的顏色完全變黃時(shí)，停止加清亮液；7、按[Yb3+]×2×103/V奶計(jì)算出奶中無機(jī)磷的含量；其中，所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1、不需要合成任何試劑、在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，檢測(cè)過程簡(jiǎn)單，而且可以用肉眼明顯觀察到此效應(yīng)；2、我們對(duì)奶作超慮處理后，奶中的剩余的其它許多成份如鈣、鐵、醣份等，對(duì)無機(jī)磷的檢測(cè)沒有任何干擾；3、本發(fā)明的檢測(cè)是定量的，有很大的線性范圍，而且誤差很?。?、用檢測(cè)體系去檢測(cè)母乳和商業(yè)牛奶中的無機(jī)磷，通過測(cè)定母乳中無機(jī)磷的含量，可以了解新生嬰兒無機(jī)磷的供應(yīng)狀況；通過測(cè)定商業(yè)牛奶中無機(jī)磷的指標(biāo)，可以提高牛奶加工的質(zhì)量，從而增加牛奶的營養(yǎng)價(jià)值；因此，我們的方法能用于臨床和商業(yè)，將會(huì)有很大的社會(huì)價(jià)值。


圖1至圖8是相應(yīng)實(shí)施例1至實(shí)施例8的檢測(cè)母乳和牛奶中無機(jī)磷的紫外可見吸收?qǐng)D。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1從生育3個(gè)月并哺乳的某一母親取母乳，在TGL-16B型高速臺(tái)式離心機(jī)上離心得上層液(分離掉大量的脂肪)；取上述上層液6ml，轉(zhuǎn)入10ml超濾杯，在室溫及5×105Pa的氮?dú)鈼l件下使用截留分子量為10kD的PM-10超濾膜，用Amicon Model 8010超濾器超濾，收取濾出的無色清亮液(收集到原奶體積的3/4)，在-17℃至-20℃保存，以供測(cè)量；配制pH7.0的HEPES(10mM)緩沖溶液，并配制2×10-3M的YbCl3溶液和2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液；把2ml的HEPES緩沖溶液加到干凈的紫外比色皿中，作為空白，用微量進(jìn)樣器吸取2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液50μl，加到此比色皿中，此時(shí)溶液由無色變黃，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，443nm有最大吸收；在上述的比色皿中，加入2×10-3M的Yb3+溶液100μl，此時(shí)溶液由黃變藍(lán)，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)最大吸收峰由上述的443nm變?yōu)?23nm；取上述清亮液，逐漸用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在HP8453紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，隨著清亮液的加入，最大吸收峰又由623nm逐漸向443nm變回，溶液的顏色也逐漸由藍(lán)變回黃色，當(dāng)吸收峰在443nm達(dá)到最大，溶液的顏色完全變黃時(shí)，此時(shí)清亮液加入量為62μl；計(jì)算 得此母乳中無機(jī)磷含量為2.42mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖1。
實(shí)施例2配制pH6.5的HEPES(10mM)緩沖溶液，其余同實(shí)施例1，得母乳中無機(jī)磷含量為2.42mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖2。
實(shí)施例3用Yb(ClO4)3的溶液，取另一人的母乳，其余同實(shí)施例1， 得母乳中無機(jī)磷含量為2.34mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖3。
實(shí)施例4用ErCl3的溶液，其余同實(shí)施例1， 得母乳中無機(jī)磷含量為2.42mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖4。
實(shí)施例5用Nd(ClO4)3的溶液，其余同實(shí)施例1， 得母乳中無機(jī)磷含量為2.42mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖5。
實(shí)施例6用Sm(ClO4)3的溶液，取商業(yè)軟袋包裝蒙牛品牌牛奶， 得牛奶中無機(jī)磷含量為12.5mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖6。
實(shí)施例7用GdCl3的溶液，取商業(yè)軟袋包裝伊利品牌牛奶， 得牛奶中無機(jī)磷含量為12.5mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖7。
實(shí)施例8用HoCl3的溶液，取商業(yè)軟袋包裝恒康品牌牛奶， 得牛奶中無機(jī)磷含量為11.54mmol/L，紫外可見吸收?qǐng)D見圖8。
按實(shí)施例1測(cè)5個(gè)哺乳母親的母乳，得母乳中無機(jī)磷酸含量為2.31-2.46mmol/L；測(cè)5種商業(yè)品牌純牛奶，得商業(yè)純牛奶中無機(jī)磷含量為11.54-12.5mmol/L。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)奶中無機(jī)磷的方法，其特征在于包括如下步驟(1)取母乳或牛奶或羊奶，在高速臺(tái)式離心機(jī)上離心得上層液；(2)取上述上層液，轉(zhuǎn)入超濾杯，在室溫及5×105Pa的氮?dú)鈼l件下使用截留分子量為10kD的PM-10超濾膜用超濾器超濾，收取濾出的無色清亮液，在-17℃至-20℃保存，以供測(cè)量；(3)、配制pH6.5-7.5的HEPES緩沖溶液，并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液；(4)、把2ml的HEPES緩沖溶液加到干凈的紫外比色皿中，作為空白，用微量進(jìn)樣器吸取2×10-3M的鄰苯二酚紫溶液10-100μl，加到此比色皿中，此時(shí)溶液由無色變黃，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，443nm有最大吸收；(5)、在上述的比色皿中，加入摩爾數(shù)2倍于鄰苯二酚紫溶液的Yb3+溶液，此時(shí)溶液由黃變藍(lán)，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，最大吸收峰由上述的443nm變?yōu)?23nm；(6)、取無色清亮液，逐漸用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，隨著清亮液的加入，最大吸收峰又由623nm逐漸向443nm變回，溶液的顏色也逐漸由藍(lán)變回黃色，當(dāng)吸收峰在443nm達(dá)到最大，溶液的顏色完全變黃時(shí)，停止加無色清亮液；(7)、按[Yb3+]×2/V奶計(jì)算出奶中無機(jī)磷的含量；其中，所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
2.按權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)母乳和牛奶中無機(jī)磷的方法，其特征在于所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
全文摘要
本發(fā)明使用鐿離子、以鄰苯二酚紫為顯色劑在pH6.5－7.5的HEPES緩沖溶液在紫外可見分光光度儀上定性、定量的去測(cè)定奶中無機(jī)磷的含量，測(cè)定過程簡(jiǎn)單、方便、無干擾，測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確；用檢測(cè)體系去檢測(cè)母乳和商業(yè)牛奶中的無機(jī)磷，通過測(cè)定母乳中無機(jī)磷的含量，可以了解新生嬰兒無機(jī)磷的供應(yīng)狀況；通過測(cè)定商業(yè)牛奶中無機(jī)磷的指標(biāo)，可以提高牛奶加工的質(zhì)量，從而增加牛奶的營養(yǎng)價(jià)值；該方法可適用于臨床和商業(yè)。
文檔編號(hào)G01N21/78GK1865925SQ20061001276
公開日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2006年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月26日
發(fā)明者陰彩霞, 霍方俊, 楊頻 申請(qǐng)人:山西大學(xué)