專(zhuān)利名稱(chēng)：豆科作物根瘤原基的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。是一種豆科作物根瘤原基的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
根瘤原基是豆科植物固氮根瘤的前期物質(zhì)，其主要功能是形成有固氮能力的根瘤。過(guò)去，只重視有固氮能力的根瘤，對(duì)根瘤原基重視不夠，檢測(cè)手段落后，檢測(cè)出的數(shù)量少，誤差大，精度低?，F(xiàn)在，隨著科技的進(jìn)步和無(wú)固氮能力根瘤的增多，人們對(duì)生物固氮研究方法和手段不斷改進(jìn)，人們清醒地認(rèn)識(shí)到豆科植物根瘤原基的重要性，它決定豆科植物固定大氣中的氮源，適應(yīng)環(huán)境的能力，也決定了植物的生長(zhǎng)力。所以，國(guó)內(nèi)外的植物生理科學(xué)方面的研究人員對(duì)豆科植物根瘤原基的研究非常重視。根瘤原基作為豆科植物形成根瘤的核心組份而成為植物生理研究工作的一個(gè)熱點(diǎn)和突破口，而其檢測(cè)方法相對(duì)滯后，很少有人研究。
傳統(tǒng)的檢測(cè)根瘤原基的方法一般采用在解剖鏡下，解剖檢測(cè)，這種方法，測(cè)量過(guò)程中干擾因素較多，工作效率低，誤差大，使一些較小的根瘤原基檢測(cè)不到，部分被忽視，致使根瘤原基總量偏低。本發(fā)明就是針對(duì)以上缺欠，進(jìn)行改進(jìn)，采取對(duì)豆科植物根瘤原基進(jìn)行染色、脫余色，并與檢測(cè)過(guò)程融為一體，使檢測(cè)出的根瘤原基數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，精度提高，是目前最為可行的有效途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從以上技術(shù)背景出發(fā)，對(duì)豆科作物根瘤原基進(jìn)行染色，增加可辨率，減少根瘤原基的視覺(jué)損失，然后脫余色得到準(zhǔn)確的根瘤原基數(shù)。
本發(fā)明的關(guān)鍵是對(duì)染色劑的選擇和檢測(cè)步驟。我們經(jīng)過(guò)多次的試驗(yàn)篩選，確定高分子有機(jī)化合物亮綠作為染色劑直接給根瘤原基著色，而此染色劑不對(duì)其它組織染色，具有專(zhuān)一性。將染色的過(guò)程與檢測(cè)的過(guò)程融為一體，最終獲得根瘤原基的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)和信息，，從而更好的滿(mǎn)足科研需要。具體染色檢測(cè)方法按以下步驟a.前期準(zhǔn)備整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程全部采用去離子水(Mili-Q)，配置脫色液10～15％NaOH、0.24NHCl和0.15～0.2％亮綠；b.根系的收集將豆科作物根系用自來(lái)水洗凈，放入200mlMili-Q水漂洗；c.去雜質(zhì)在室溫25℃條件下，取一定量的豆科作物根系，放在潔凈的燒杯中，用10～15％NaOH浸泡6小時(shí)；再用Mili-Q水洗去NaOH，直到根系的棕色清失，繼續(xù)用0.24NHCl浸泡10分鐘；d.根瘤原基染色取出以上處理過(guò)的根系，用0.15～0.2％亮綠浸泡染色30分鐘；e.脫余色用Mili-Q水洗去根瘤原基以外質(zhì)體上的綠色，用Mili-Q水浸泡8-10小時(shí)；f.進(jìn)行檢測(cè)用解剖鏡檢測(cè)根瘤原基的形成數(shù)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明在國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2005CB121101)課題中得到應(yīng)用。在課題的進(jìn)行中采用本發(fā)明的方法與步驟對(duì)大豆根瘤原基的檢測(cè)，較目前采用常規(guī)檢測(cè)手段效率提高2倍，精度提高15％以上，每取得了較好的效果。
本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，精確度高，實(shí)用性強(qiáng)。對(duì)豆科作物根瘤原基的深入研究很有幫助，具有很好的推廣前景。
權(quán)利要求
1.在豆科作物根瘤原基的檢測(cè)中，一種檢測(cè)豆科作物根瘤原基的方法，其特征在于采用了具有專(zhuān)一性的高分子有機(jī)化合物亮綠作為染色劑，將染色與脫余色的過(guò)程與檢測(cè)融為一體，最終獲取準(zhǔn)確的根瘤原基數(shù)據(jù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用了如下檢測(cè)步驟a.前期準(zhǔn)備整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程全部采用去離子水(Mili-Q)，配置脫色液10～15％NaOH、0.24NHCl和0.15～0.2％亮綠；b.根系的收集將豆科作物根系用自來(lái)水洗凈，放入200mlMili-Q水漂洗；c.去雜質(zhì)在室溫25℃條件下，取一定量的豆科作物根系，放在潔凈的燒杯中，用10～15％NaOH浸泡6小時(shí)；再用Mili-Q水洗去NaOH，直到根系的棕色清失，然后繼續(xù)用0.24NHCl浸泡10分鐘；d.根瘤原基染色取出以上處理過(guò)的根系，用0.15～0.2％亮綠浸泡染色30分鐘；e.脫余色用Mili-Q水洗去根瘤原基以外質(zhì)體上的綠色，用Mili-Q水浸泡8-10小時(shí)；f.進(jìn)行檢測(cè)用解剖鏡檢測(cè)根瘤原基的形成數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域中豆科作物根瘤原基的檢測(cè)方法。本發(fā)明改進(jìn)了傳統(tǒng)檢測(cè)豆科作物根瘤原基的檢測(cè)方法，確定了具有專(zhuān)一性染色劑的種類(lèi)和檢測(cè)步驟，增加檢測(cè)精度，提高檢測(cè)效率，并在染色的過(guò)程中對(duì)根瘤原基細(xì)胞進(jìn)行分離染色，將染色的過(guò)程與檢測(cè)融為一體，最終獲得高精度的檢測(cè)結(jié)果，從而更好的滿(mǎn)足科研需要。
文檔編號(hào)G01N1/28GK1936551SQ20061001652
公開(kāi)日2007年3月28日 申請(qǐng)日期2006年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月13日
發(fā)明者喬云發(fā), 韓曉增, 苗淑杰 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所