專利名稱：安神補(bǔ)腦液中維生素b的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是指中藥制劑中成份含量的測定方法。
背景技術(shù)：
“安神補(bǔ)腦液”是根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論和治療原理，利用現(xiàn)代醫(yī)藥科學(xué)的先進(jìn)技術(shù)，由是鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗六味中藥及維生素B1為原料藥制成的口服液。經(jīng)上海醫(yī)科大學(xué)附屬華山醫(yī)院、上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院、上海中醫(yī)學(xué)院附屬岳陽醫(yī)院等多家醫(yī)院的臨床驗(yàn)證，“安神補(bǔ)腦液”對由“神經(jīng)衰弱”引起的失眠、多夢、健忘、頭暈、耳鳴、記憶力減退、頭痛等癥狀有顯著療效，特別是該癥同時(shí)引起的食欲不振、畏寒肢冷、腰膝酸軟、胃寒痙痛、四肢酸軟、倦怠乏力等癥狀也有顯效，得到醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可和專家們的好評。
維生素B1的生物化學(xué)名稱叫硫胺素，是一種水溶性維生素，其最重要的作用就是作為輔酶參加碳水化合物代謝，另外維生素B1還有增進(jìn)食欲與消化功能，維護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)正常功能等作用。
目前，“安神補(bǔ)腦液”的質(zhì)量控制方法采用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量。
該方法存在的缺點(diǎn)是維生素B1為本制劑的主要成分之一，而在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有進(jìn)行含量測定。
測定維生素B1的方法有滴定法、熒光法、電化學(xué)分析法、化學(xué)發(fā)光法及色譜法。由于中藥復(fù)方制劑所含成分極為復(fù)雜，因此，只能采用高效液相色譜法。采用高效液相色譜法使用紫外檢測器進(jìn)行含量測定，因維生素B1理化性質(zhì)(易溶于水、乙醇中微溶、加熱分解等)的原因，維生素B1無法與中藥復(fù)方制劑中其它成分分離，致使樣品中維生素B1色譜峰不能達(dá)到基線分離，測定結(jié)果不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種采用高效液相色譜法使用蒸發(fā)光散射檢測器，測定安神補(bǔ)腦液中維生素B1的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明包括下列步驟(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液適量，以乙酸乙酯提取，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯，移置量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)PH值至PH5.0～5.5)與乙腈的混合溶液，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品，精密稱定，置容量瓶中，加水定容，即得；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液適量，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
優(yōu)選的本發(fā)明可通過下列步驟實(shí)施(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液10～30ml，以乙酸乙酯提取2～4次，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為10～15mM乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)至PH5.0～5.5)-乙腈(85～9515～5)，流動相流速為0.1～0.3ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.1～0.3mg維生素B1的溶液，即得。
(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
最佳的本發(fā)明可通過下列步驟實(shí)施(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液25ml，以乙酸乙酯提取3次，每次30ml，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為13mM乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)至PH5.2)-乙腈(95∶5)，流動相流速為0.2ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為115℃，霧化氣體為空氣或氮?dú)猓瑲怏w流速為2.8L/min；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.25mg維生素B1的溶液，即得；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
本發(fā)明是通過大量試驗(yàn)所得到的切實(shí)可行的方法，樣品采用乙酸乙酯提取的方法，在不影響維生素B1含量測定結(jié)果的前提下，有效地去除了藥物中的雜質(zhì)，參見附圖1、2、3。本方法具有操作簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易掌握的特點(diǎn)，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的發(fā)明目的。


圖1、維生素B1對照品HPLC圖。
圖2、安神補(bǔ)腦液樣品HPLC圖。
圖3、缺維生素B1陰性液樣品HPLC圖。
具體實(shí)施例方式
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明所公開的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其它實(shí)施方案，本發(fā)明實(shí)施例僅作為示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改進(jìn)，但只要使用本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，均在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)例維生素B1含量測定方法的建立。
儀器與試劑日本島津LC-10A高效液相色譜儀，Alltech 2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器[美國奧泰科技(中國)有限公司]；N2000液相色譜工作站(浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司)。
對照品維生素B1。
乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸餾水。
樣品批號安神補(bǔ)腦液(1)050101；(2)050102；(3)050103，吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。
方法與結(jié)果(1)線性關(guān)系精密稱取維生素B1對照品適量，加水制成每1ml中含維生素B10.252mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密吸取4、8、12、16、20μ1，注入高效液相色譜儀，按上述條件測定，以峰面積的自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，維生素B1進(jìn)樣量的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，線性回歸，回歸方程為Y＝5.944+1.096X r＝0.9996。
結(jié)果表明在1.008～5.04μg范圍內(nèi)維生素B1峰面積的自然對數(shù)與進(jìn)樣量的自然對數(shù)具有良好的線性關(guān)系。
(2)精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10μl，測各次峰面積，結(jié)果見表1。
表1.精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

(3)重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號樣品，按含量測定方法進(jìn)行多次測定(n＝5)，結(jié)果見表2。
表2 重現(xiàn)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

(4)回收率試驗(yàn)本試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知含量的樣品5份，分別精密加入一定量維生素B1對照品溶液，按含量測定法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。
表3 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

(5)樣品的含量測定安神補(bǔ)腦液是一種中西藥組合的復(fù)方制劑，為確保藥物中維生素B1含量測定的準(zhǔn)確性，比較了用乙酸乙酯提取和未用乙酸乙酯提取兩種方法處理供試品過程中樣品的維生素B1的含量，結(jié)果用乙酸乙酯提取后，樣品的雜質(zhì)峰峰面積明顯降低，而對維生素B1的含量無任何影響。
樣品含量測定根據(jù)確定的方法，測定了3個(gè)批號的樣品，結(jié)果見表4。
表4 樣品含量測定

含量限度的制訂依據(jù)上述樣品測定結(jié)果，其平均值為96.54％。
下面列舉實(shí)施例進(jìn)一步說明詳細(xì)說明本發(fā)明，對本發(fā)明并不構(gòu)成限制。
實(shí)施例1(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液10ml，以乙酸乙酯提取2次，每次20ml，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為10mM乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)至PH5.0)-乙腈(85∶15)，流動相流速為0.1ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為110℃，霧化氣體為空氣或氮?dú)猓瑲怏w流速為2.9L/min。
(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1m1含0.1mg維生素B1的溶液，即得。
(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
實(shí)施例2(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液25ml，以乙酸乙酯提取3次，每次30ml，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為13mM乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)至PH5.2)-乙腈(90∶10)，流動相流速為0.2ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為110.5℃，霧化氣體為空氣或氮?dú)?，氣體流速為3.0L/min。
(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.25mg維生素B1的溶液，即得。
(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
實(shí)施例3(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液30ml，以乙酸乙酯提取4次，每次30ml，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為15mM乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)至PH5.5)-乙腈(95∶5)，流動相流速為0.3ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為115℃，霧化氣體為空氣或氮?dú)?，氣體流速為2.8L/min。
(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.30mg維生素B1的溶液，即得。
(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
權(quán)利要求
1.一種安神補(bǔ)腦液中維生素B1的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括下列步驟(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液適量，以乙酸乙酯提取，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯，移置量瓶中，加水至刻度，搖勻；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為乙酸銨溶液與乙腈的混合溶液，將該乙酸銨溶液用酸調(diào)PH值至PH5.0～5.5，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水定容；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液適量，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的安神補(bǔ)腦液中維生素B1的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液10～30ml，以乙酸乙酯提取2～4次，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為10～15mM乙酸銨溶液—乙腈(85～95∶15～5)，將該乙酸銨溶液用乙酸調(diào)PH值為5.0～5.5，流動相流速為0.1～0.3ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.1～0.3mg維生素B1的溶液；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的安神補(bǔ)腦液中維生素B1的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括如下步驟(a)供試品溶液制備精密量取安神補(bǔ)腦液25ml，以乙酸乙酯提取3次，每次30ml，棄去乙酸乙酯提取液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻；(b)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為13mM乙酸銨溶液—乙腈(95∶5)，將該乙酸銨溶液用乙酸調(diào)PH值為5.2，流動相流速為0.2ml/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為115℃，霧化氣體為空氣或氮?dú)猓瑲怏w流速為2.8L/min；(c)對照品溶液制備取干燥至恒重的維生素B1對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加水制成每1ml含0.25mg維生素B1的溶液；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)二點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種安神補(bǔ)腦液中維生素B
文檔編號G01N30/86GK1865984SQ200610016840
公開日2006年11月22日 申請日期2006年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月10日
發(fā)明者解鈞秀, 于江波, 王永彬 申請人:吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司