專利名稱：蠶桑產(chǎn)品降血糖效果的體外檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物產(chǎn)品降血糖效果的體外檢測(cè)方法，特指一種蠶桑產(chǎn)品對(duì)2型糖尿病降血糖效果的體外檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
降血糖效果的檢測(cè)方法有多種，如經(jīng)典的檢測(cè)血液中胰島素的含量(對(duì)1型糖尿病)；體內(nèi)糖尿病檢測(cè)(CN96195689.5)；可用肉眼觀察的血糖檢測(cè)條(CN99117739.8)；無創(chuàng)激光血糖檢測(cè)儀(CN200510020410.3)。研究證實(shí)蠶桑產(chǎn)品如全蠶粉，蠶蛹粉，桑葉粉，桑根粉，桑椹等具有降血糖效果，并逐漸開發(fā)出相關(guān)產(chǎn)品。目前，檢驗(yàn)這些蠶桑產(chǎn)品降血糖的效果，主要是通過高血糖動(dòng)物(實(shí)驗(yàn)鼠)的體內(nèi)驗(yàn)證。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不僅周期長(zhǎng)，需要相當(dāng)?shù)娜肆拓?cái)力，而且程序煩瑣。根據(jù)對(duì)蠶桑產(chǎn)品對(duì)2型糖尿病降血糖作用為抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用機(jī)理，建立體外檢測(cè)方法，即省時(shí)、省力，又可實(shí)行科學(xué)規(guī)范操作，有利于產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蠶桑產(chǎn)品對(duì)2型糖尿病降血糖的體外檢測(cè)方法。實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案的制備步驟是(1)蠶桑產(chǎn)品降血糖有效成分的提取將蠶桑樣品粉碎，按1∶1體積比與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環(huán)境下浸提、過濾、分離；(2)麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；
(3)α-糖苷酶抑制劑活性測(cè)定將麥芽糖糖苷酶溶液，上述浸提液37℃預(yù)溫5-10分鐘，加入桑蠶粉浸提液后繼續(xù)水浴，用Na2CO3終止反應(yīng)；取20ul溶液測(cè)定葡萄糖含量；(4)降血糖效果的評(píng)估(計(jì)算)抑制劑活力單位定義為在相同的條件下降低1個(gè)酶活力單位所需的抑制劑量，抑制百分比＝(抑制劑活力/酶活力)×100％。
本發(fā)明的體外檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，周期短，2天內(nèi)可出檢測(cè)結(jié)果；準(zhǔn)確率高，可達(dá)到為陽性對(duì)照的96.95％。
本發(fā)明通過對(duì)蠶桑樣品降血糖有效成分的分離，運(yùn)用生物化學(xué)的方法檢測(cè)α-葡萄糖苷酶的抑制效果，經(jīng)與高血糖動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)及臨床實(shí)驗(yàn)比較，具有較好的一致性。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1.操作簡(jiǎn)便根據(jù)蠶桑產(chǎn)品對(duì)2型糖尿病降血糖為抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用機(jī)理，測(cè)定分析蠶桑產(chǎn)品對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果。
2.省時(shí)、省力一個(gè)檢測(cè)周期在2天內(nèi)可出結(jié)果，常規(guī)分析試劑。
3.有利于產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化根據(jù)對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果，評(píng)估產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的制備步驟如下1、蠶桑產(chǎn)品降血糖有效成分的提取按1∶1的比例將蠶桑產(chǎn)品如全蠶粉，蠶蛹粉，桑葉粉，桑根粉，桑椹等與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環(huán)境下浸提24小時(shí)；然后，過濾、分離浸提液。
2、麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液(PH7.2～7.6)中，4000RPM 4℃離心10分鐘，再10000RPM離心20分鐘，取上清作麥芽糖糖苷酶。
3、α-糖苷酶抑制劑活性測(cè)定50ul麥芽糖糖苷酶溶液中，加水50ul，再加100ul底物0.028M麥芽糖/0.1M馬來酸PH6.8，37℃預(yù)溫水酶混合物5分鐘，加入即蠶桑產(chǎn)品浸提液后37℃水浴，用2.6M Na2CO340ul終止反應(yīng)。取20ul溶液測(cè)定葡萄糖含量。
4、降血糖效果的評(píng)估(計(jì)算)酶活力單位定義為在37℃，pH 6.8的條件下，1min內(nèi)水解麥芽糖釋放1μmol葡萄糖所需的酶量。抑制劑活力單位定義為在相同的條件下降低1個(gè)酶活力單位所需的抑制劑量。抑制百分比＝(抑制劑活力/酶活力)×100％。
運(yùn)用上述方法檢測(cè)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化、超低溫冷凍干燥制備的全蠶粉對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果，50mg/ml劑量全蠶粉和拜糖平的抑制效果分別為79％和81.6％。高血糖動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，按1mg/天的劑量，罐胃全蠶粉和拜糖平20天后空腹血糖值分別降低35.37％和35.02％；30天后餐后2小時(shí)的血糖值分別降低了15.68％和18.29％。
檢測(cè)不同方法制備的全蠶粉對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制效果的體外實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)生物轉(zhuǎn)化、超低溫冷凍干燥制備的全蠶粉為93.93％，經(jīng)防氧化處理后再經(jīng)冷凍干燥制成的全蠶粉(CN95115559.8)為93.35％，將鮮活健康蠶直接經(jīng)真空冷凍干燥得到的全蠶粉(CN03116235.5)為91.91％，而陽性對(duì)照(拜糖平)為94.80％。
權(quán)利要求
1.一種蠶桑產(chǎn)品對(duì)2型糖尿病降血糖效果的體外檢測(cè)方法，其特征是(1)蠶桑產(chǎn)品降血糖有效成分的提取將蠶桑樣品粉碎，與浸提緩沖液混勻，置4-8℃環(huán)境下浸提、過濾、分離；(2)麥芽糖糖苷酶的制備取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；(3)α-糖苷酶抑制劑活性測(cè)定將麥芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下預(yù)溫，加入蠶桑樣品浸提液后繼續(xù)水浴，用Na2CO3終止反應(yīng)，測(cè)定葡萄糖含量；(4)進(jìn)行降血糖效果的評(píng)估計(jì)算。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蠶桑樣品對(duì)2型糖尿病降血糖效果的體外檢測(cè)方法。其采取將蠶桑樣品粉碎，與浸提緩沖液混勻，置4－8℃環(huán)境下浸提、過濾、分離；再取小鼠小腸粘膜，磨碎并重懸于磷酸緩沖液中，離心分離麥芽糖糖苷酶；將麥芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下預(yù)溫，加入蠶桑樣品浸提液后繼續(xù)水浴，用Na
文檔編號(hào)G01N31/00GK1866024SQ200610040720
公開日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2006年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月30日
發(fā)明者桂仲爭(zhēng), 侯成香 申請(qǐng)人:江蘇科技大學(xué)