專利名稱：水稻籽粒鐵含量快速測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本專利涉及水稻籽粒中鐵含量的快速測定方法。
背景技術(shù)：
水稻是世界上第二大糧食作物，全球有20億以上人口以稻米為主食。長期以來，稻米一直我國人民營養(yǎng)和能量的主要來源，隨著稻米消費(fèi)量的不斷增長，其營養(yǎng)問題也日益暴露出來。WHO數(shù)據(jù)顯示，世界上有近37億人口缺鐵，其中1.5億人患有鐵缺乏性貧血，且多缺鐵性貧血多發(fā)生于嬰幼兒和懷孕婦女。缺鐵嚴(yán)重的影響到兒童智力發(fā)育，因此日糧中含有適量的鐵十分重要。為此世界范圍內(nèi)開展了一系列的針對(duì)鐵缺乏的預(yù)防工作，其中包括強(qiáng)化鐵食物、育種高鐵富集作物等。在我國水稻是主要人類口糧，因此水稻中鐵是人體鐵獲取的主要來源。近年來我國植物育種學(xué)家努力致力于高鐵富集水稻品種的研究。不同水稻品種中的鐵含量變化很大，其性狀主要受相關(guān)基因的控制。控制高鐵含量的基因已經(jīng)在第7，8，9染色體上得到證實(shí)，總表現(xiàn)變異的19％～30％受這些基因的控制。通過雜交育種等技術(shù)培育出高鐵含量的新品種，對(duì)全面改善鐵營養(yǎng)具有廣闊的發(fā)展前景。中國具有豐富的水稻種質(zhì)資源，高鐵種質(zhì)資源篩選涉及區(qū)域廣、工作量大。因此，快速的、準(zhǔn)確的測定作物中鐵含量對(duì)育種者來說顯得尤為重要。傳統(tǒng)的化學(xué)方法存在簡便特點(diǎn)，但由于操作過程易污染或試劑應(yīng)用不當(dāng)?shù)仍颍斐蓽y定結(jié)果偏差過大，無法正確衡量水稻籽粒鐵含量。較為準(zhǔn)確的原子吸收色譜法和能夠痕量測定ICP-MS法均存在處理過程復(fù)雜，耗時(shí)，成本高等缺點(diǎn)，并不受育種工作者歡迎。對(duì)于育種工作者來說并不需要極其精確的掌握水稻籽粒鐵含量，只需要相對(duì)的準(zhǔn)確便可達(dá)到對(duì)育種材料鐵含量的了解。因此，研究該水稻籽粒鐵含量快速測定方法對(duì)育種工作鐵富集種質(zhì)材料篩選具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為育種工作中快速測定水稻籽粒鐵含量提供一個(gè)快速、準(zhǔn)確的方法。
本發(fā)明提供的水稻籽粒鐵含量快速測定方法，包括以下步驟1)將水稻籽粒用石英磨粉機(jī)制粉，過60目篩；2)稱取0.5g粉碎裝入離心管，按米粉與鹽酸溶液質(zhì)量體積比1∶200加入摩爾濃度為2M鹽酸溶液，振蕩30～60min后，離心；3)取上清液過0.45um濾膜，吸取2mL濾液置于比色管中，加入0.5mL10％的氯化羥胺和1.5mL醋酸緩沖液，靜置5min，5N的NaOH溶液調(diào)pH值到4.0-4.5，靜置5min后，加入0.5mL臨聯(lián)吡啶染色液，充分混勻后，于可見分光光度計(jì)上516nm處比色，并根據(jù)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線計(jì)算鐵含量；上述醋酸緩沖液的配制取41.5g無水醋酸鈉用去離子水完全溶解后，加入12mL醋酸，用去離子水稀釋定容至500mL；上述臨聯(lián)吡啶染色液的配制取54.4g三水醋酸鈉、0.1g臨聯(lián)吡啶，然后加入50mL去離子水，完全溶解后用去離子水定容至100mL。
本發(fā)明中的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線是用市售的鐵標(biāo)液按如下濃度梯度0、0.5、1、1.5、2、3ppm配制。
本發(fā)明方法具有快速，準(zhǔn)確，成本低，便于操作的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
已知IR68144水稻品種，本實(shí)驗(yàn)室采用ICP-MS測定含鐵量為18.6mg/kg。
利用本發(fā)明方法測定同樣IR68144水稻籽粒鐵含量，包括以下步驟1)將水稻籽粒經(jīng)脫殼處理后，取籽粒30-40粒于石英磨粉機(jī)上震蕩研磨，得到米粉，過60目篩即可。以上過程應(yīng)避免接觸含鐵器具。
2)稱取0.5g米粉，放入25mL圓底塑料具塞離心管中。用移液管吸取10mL2M的鹽酸溶液，加入離心管中，塞緊管塞，用食指小心彈擊離心管底部，使米粉充分混入鹽酸溶液。然后將離心管置于振蕩器上震蕩30min后離心，離心速率為4000r/min。
3)取上清液過0.45um濾膜，用移液槍準(zhǔn)確吸取2mL過濾液，加入干凈比色管中；然后，用移液槍準(zhǔn)確吸取0.5mL10％的氯化羥胺，用手輕輕搖動(dòng)比色管使其充分混合后，靜止放置5min；然后用2mL移液槍吸取1.5mL醋酸緩沖液，用手混勻；用1mL移液槍吸取0.6mL5N的氫氧化鈉溶液，把pH調(diào)到4.5，以上步驟完成后，靜止5min，使溶液pH穩(wěn)定；然后用移液槍吸取0.5mL臨聯(lián)吡啶染色液加入該溶液中，用手混勻，靜止30min充分染色后，于可見分光光度計(jì)上516nm比色，根據(jù)用市售的鐵標(biāo)準(zhǔn)液配制的該濃度為0、0.5、1、1.5、2、3ppm的梯度曲線。并按如下公式計(jì)算的鐵含量為19.8mg/kg。
籽粒中鐵含量(mg/kg)＝(根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出的測試溶液鐵含量×10mL/稱樣重)×1000上述醋酸緩沖液的配制取41.5g無水醋酸鈉用去離子水完全溶解后，加入12mL醋酸，用去離子水稀釋定容至500mL；上述臨聯(lián)吡啶染色液的配制取54.4g三水醋酸鈉、0.1g臨聯(lián)吡啶，然后加入50mL去離子水，完全溶解后用去離子水定容至100mL。
以上所用玻璃儀器在使用前需用鹽酸溶液浸泡過夜。
試驗(yàn)表明，采用本發(fā)明方法與用ICP-MS測定水稻籽粒含鐵量接近。
權(quán)利要求
1.水稻籽粒鐵含量快速測定方法，其特征是包括以下步驟1)將水稻籽粒用石英磨粉機(jī)制粉，過60目篩；2)稱取0.5g米粉裝入離心管，按米粉與鹽酸溶液質(zhì)量體積比1∶200加入摩爾濃度為2M鹽酸溶液，振蕩30～60min后，離心；3)取上清液過0.45um濾膜，吸取2ml濾液置于比色管中，加入0.5mL10％的氯化羥胺和1.5mL醋酸緩沖液，靜置5min，用5N的NaOH溶液調(diào)pH值到4.0-4.5，靜置5min后，加入0.5mL臨聯(lián)吡啶染色液，充分混勻后，于可見分光光度計(jì)上516nm處比色，并根據(jù)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線計(jì)算鐵含量；上述醋酸緩沖液的配制取41.5g無水醋酸鈉用去離子水完全溶解后，加入12mL醋酸，用去離子水稀釋定容至500mL；上述臨聯(lián)吡啶染色液的配制取54.4g三水醋酸鈉、0.1g臨聯(lián)吡啶，然后加入50mL去離子水，完全溶解后用去離子水定容至100mL。
全文摘要
本發(fā)明公開的水稻籽粒鐵含量快速測定方法，簡述如下將水稻籽粒磨粉，過60目篩；用鹽酸溶液浸提米粉中的鐵，獲得含鐵溶液，經(jīng)染色后，于可見分光光度計(jì)上516nm處比色，根據(jù)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線計(jì)算水稻籽粒中鐵含量。本發(fā)明方法具有快速，準(zhǔn)確，成本低，便于操作的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/27GK1920537SQ20061005347
公開日2007年2月28日 申請(qǐng)日期2006年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月20日
發(fā)明者楊肖娥, 何萬領(lǐng), 馮英, 郝虎林, 吳春勇 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)