專利名稱：納米金電極的制備方法及其體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種納米金電極的制備方法及其在體外檢測(cè)表阿霉素濃度的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抗腫瘤藥物表阿霉素(EPI)是一種蒽環(huán)類的抗腫瘤藥物，是阿霉素的同分異構(gòu)體，它通過插入雙鏈DNA(dsDNA)相鄰堿基對(duì)之間，并與DNA雙螺旋產(chǎn)生強(qiáng)烈作用，多用于惡性淋巴瘤、乳腺癌、骨肉瘤、白血病和肺癌的治療，是多種抗癌藥中應(yīng)用較多的一種。但該藥有一定的骨髓抑制和心臟毒性副作用，對(duì)肝功能不全者易產(chǎn)生蓄積中毒，因此檢測(cè)病人服用表阿霉素后的尿樣或血樣含量對(duì)于選擇最佳的給藥方案，保證用藥的安全是完全必要的。
至今，表阿霉素的定量檢測(cè)方法主要有1、利用同位素標(biāo)記的放射性免疫法(H.V.Vunakis，J.J Langone，L.L.Riceberg，L.Levine，Cancer res.，1999，34，2546)，其存在放射性污染，又是多相體系，分離結(jié)合和未結(jié)合標(biāo)記物操作繁雜，影響因素多。
2、光譜分析(Manfait M，Nabiev I，Morjani H，J.Cell Pharmacol.，1992，3，120)，常用的紫外光度法，由于表阿霉素本身在紫外光區(qū)即存在吸收峰，可以檢測(cè)定量檢測(cè)其濃度，但存在靈敏度低、特異性差的缺點(diǎn)，特別是易受代謝物干擾。
3、色譜法(J.P.Tassin，J.Dubois，G.Atassi，J.Chromatogr.B，Biomed.Appl.，1997，671，449)，又稱層析法，通過層析作用，使樣品中表阿霉素與理化性質(zhì)不同的組分得以分離，進(jìn)行定量檢測(cè)，其優(yōu)點(diǎn)是特異性高，但一般均要求對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，所用儀器都昂貴尚難普及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種成本低廉、靈敏度高、抗干擾性好、穩(wěn)定性高的納米金電極的制備方法及其將所制備的納米金電極用于體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法。
本發(fā)明所述的納米金電極的制備方法如下1)將裸玻碳電極打磨，然后拋光成鏡面；2)將拋光好的玻碳電極清洗，晾干備用；3)將預(yù)處理好的玻碳電極放入KAuCl4和KCl的電解液中，在0～0.7V電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安掃描5～100次，掃描速率為20～100mv/s，循環(huán)結(jié)束后得到納米金電極，按質(zhì)量比KAuCl4∶KCl為1∶1～5。
在將裸玻碳電極在金相砂紙上打磨時(shí)，最好將裸玻碳電極依次在2#、4#、6#金相砂紙上打磨。當(dāng)用氧化鋁粉拋光成鏡面時(shí)最好將打磨后的裸玻碳電極依次在1μ、0.3μ和0.05μ的氧化鋁粉拋光成鏡面。
在將拋光好的玻碳電極清洗時(shí)，最好將拋光好的玻碳電極依次用丙酮、NaOH、HNO3和水超聲波清洗。
本發(fā)明所述的納米金電極的應(yīng)用是用于體外檢測(cè)表阿霉素的濃度，其技術(shù)方案是采用納米金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑電極為對(duì)電極組成三電極系統(tǒng)，以示差脈沖伏安法在體外迅速靈敏地測(cè)定表阿霉素的濃度。
本發(fā)明所述的將上述所制備的納米金電極用于體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法，其步驟為1)在電解池中加入磷酸鹽緩沖液(PBS)，然后分別加入配制好的濃度為10-6～10-9mol/L的表阿霉素標(biāo)樣溶液，采用上述制備的納米金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑電極為對(duì)電極組成三電極系統(tǒng)，以2～10mV/s的速度掃描，從0V掃描至0.8V記錄其相應(yīng)的示差脈沖伏安圖的峰電流值，將得到的峰電流與表阿霉素標(biāo)樣溶液的濃度關(guān)聯(lián)，得到線性模型；2)取待測(cè)樣本重復(fù)與步驟1表阿霉素標(biāo)樣溶液相同的電化學(xué)過程，定量分析，得到其峰電流值，帶入步驟1得到的線性模型中，通過計(jì)算得到表阿霉素的濃度。
本發(fā)明制備的納米金電極識(shí)別表阿霉素靈敏度高，抗干擾性能好，穩(wěn)定性高，重復(fù)信號(hào)好，檢測(cè)限度達(dá)到10-9mol/L，在10-7～10-8mol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，適合在體外檢測(cè)識(shí)別表阿霉素。實(shí)驗(yàn)證明，納米金電極可以顯著催化表阿霉素的氧化還原反應(yīng)。其體外識(shí)別檢測(cè)，效果高于其它方法識(shí)別檢測(cè)，且成本低、耗時(shí)少，方法簡(jiǎn)便易重復(fù)，可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)。
本發(fā)明采用納米金電極和示差脈沖伏安法聯(lián)用體外檢測(cè)表阿霉素的濃度，克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，通過連續(xù)方便的檢測(cè)病人服用表阿霉素后的尿樣或血樣含量，保證了用藥的安全。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例的示差脈沖伏安圖的峰電流值與表阿霉素標(biāo)樣溶液的濃度關(guān)聯(lián)曲線。在圖1中，橫坐標(biāo)為表阿霉素EPI(mol/L)，縱坐標(biāo)為峰電流值ip/μA。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1納米金電極的制備首先將裸玻碳電極依次在2#、4#、6#金相砂紙上打磨，然后在依次在1μ、0.3μ和0.05μ的氧化鋁粉拋光成鏡面；將拋光好的玻碳電極依次用丙酮、NaOH(1mol-L-1)、HNO3(1mol-L-1)和蒸餾水超聲波清洗5min，晾干后，備用；將預(yù)處理好的玻碳電極放入質(zhì)量比KAuCl4∶KCl為1∶1的電解液中，在O～0.7V電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安5次，掃描速率為20mV/s，循環(huán)結(jié)束后得到納米金電極。
實(shí)施例2將預(yù)處理的玻碳電極(過程同實(shí)施例1)放入質(zhì)量比KAuCl4∶KCl為1∶2的電解液中，在O～0.7V電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安20次，掃描速率為50mV/s，循環(huán)結(jié)束后得到納米金電極。
實(shí)施例3將預(yù)處理的玻碳電極(過程同實(shí)施例1)放入質(zhì)量比KAuCl4∶KCl為1∶5的電解液中，在0～0.7V電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安50次，掃描速率為100mV/s，循環(huán)結(jié)束后得到納米金電極。
實(shí)施例4在電解池中加入10mL0.1M磷酸鹽緩沖液(PBS)，然后分別加入配制好的濃度為10-6M、10-7M、10-8M、10-9M的表阿霉素標(biāo)樣溶液，采用實(shí)施例2制備的納米金電極為工作電極、飽和甘汞電極為參比電極，鉑電極為對(duì)電極組成三電極系統(tǒng)，以5mV/s的速度掃描，從0V掃描至0.8V記錄其相應(yīng)的示差脈沖伏安圖的峰電流值。將得到的峰電流與表阿霉素標(biāo)樣溶液的濃度關(guān)聯(lián)，得到線性模型，如圖1所示。從圖中可以看出，在實(shí)驗(yàn)條件下，DPV氧化峰電流與表阿霉素在10-7～10-8mol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.9996，檢測(cè)限可達(dá)到10-9mol/L。
實(shí)施例5分別配制表阿霉素溶液濃度為10-6M、10-7M、10-8M作為待測(cè)樣品，按實(shí)施例4的示差脈沖伏安法重復(fù)上述DPV測(cè)量，將所測(cè)得的峰電流值帶入線性模型，得到表阿霉素的濃度，表阿霉素平行測(cè)定10次的標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6％，說明電極的重現(xiàn)性較好。
實(shí)施例6與實(shí)施例4類似，其區(qū)別在于在三電極系統(tǒng)中，電極的掃描速度為2mV/s。
實(shí)施例7與實(shí)施例4類似，其區(qū)別在于在三電極系統(tǒng)中，電極的掃描速度為10mV/s。
權(quán)利要求
1.納米金電極的制備方法，其特征在于其具體步驟如下1)將裸玻碳電極打磨，然后拋光成鏡面；2)將拋光好的玻碳電極清洗，晾干備用；3)將預(yù)處理好的玻碳電極放入KAuCl4和KCl的電解液中，在0～0.7V電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安掃描5～100次，掃描速率為20～100mv/s，循環(huán)結(jié)束后得到納米金電極，按質(zhì)量比KAuCl4∶KCl為1∶1～5。
2.如權(quán)利要求1所述的納米金電極的制備方法，其特征在于所述的打磨是將裸玻碳電極依次用2#、4#、6#金相砂紙打磨。
3.如權(quán)利要求1所述的納米金電極的制備方法，其特征在于所述的拋光是將打磨后的裸玻碳電極依次用1μ、0.3μ和0.05μ的鋁粉拋光成鏡面。
4.如權(quán)利要求1所述的納米金電極的制備方法，其特征在于所述的清洗是將拋光好的玻碳電極依次用丙酮、NaOH、HNO3和水超聲波清洗。
5.如權(quán)利要求1所述的方法制備的納米金電極用于體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法，其特征在于其具體步驟如下1)在電解池中加入磷酸鹽緩沖液，然后分別加入配制好的濃度為10-6～10-9mol/L的表阿霉素標(biāo)樣溶液，采用納米金電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑電極為對(duì)電極組成三電極系統(tǒng)，以2～10mV/s的速度掃描，從0V掃描至0.8V記錄其相應(yīng)的示差脈沖伏安圖的峰電流值，將得到的峰電流與表阿霉素標(biāo)樣溶液的濃度關(guān)聯(lián)，得到線性模型；2)取待測(cè)樣本重復(fù)與步驟1表阿霉素標(biāo)樣溶液相同的電化學(xué)過程，定量分析，得到其峰電流值，帶入步驟1得到的線性模型中，通過計(jì)算得到表阿霉素的濃度。
全文摘要
納米金電極的制備方法及其體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法，涉及一種納米金電極及應(yīng)用。提供一種成本低、靈敏度高、抗干擾性好、穩(wěn)定性高的納米金電極制備方法及其將納米金電極用于體外檢測(cè)表阿霉素濃度的電化學(xué)方法。制備時(shí)將裸玻碳電極打磨后拋光成鏡面，再清洗晾干，再放入KAuCl
文檔編號(hào)G01N27/403GK1928542SQ20061012219
公開日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2006年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月18日
發(fā)明者張其清, 徐俊, 翁建, 葉社房 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)