專利名稱：一種驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑的質(zhì)量控制方法，特別涉及驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
驢膠補(bǔ)血顆粒(沖劑)是由阿膠、黃芪、黨參、熟地黃、白術(shù)、當(dāng)歸經(jīng)提取加工制成，具有滋陰補(bǔ)血，健脾益氣，調(diào)經(jīng)活血之功效。用于久病體虛，氣虛血虧型月經(jīng)不調(diào)。臨床廣泛應(yīng)用于貧血癥、白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和月經(jīng)病等的治療，療效確切(余三紅.驢膠補(bǔ)血沖劑的臨床應(yīng)用概述.湖南中醫(yī)雜志.1999，(1)40)。驢膠補(bǔ)血顆粒(沖劑)的配方和質(zhì)量控制方法已經(jīng)收入在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)(WS3-B-2159-96)和中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十六冊(cè)(WS3-B-3062-98)。分別描述如下標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-2159-96驢膠補(bǔ)血顆粒(沖劑)Lüjiao Buxue Keli處方阿膠 216g黃芪 180g黨參 180g熟地黃120g白術(shù) 90g 當(dāng)歸 60g制法以上六味，取當(dāng)歸、白術(shù)進(jìn)行蒸餾，收集蒸餾液備用，殘?jiān)c黃芪、黨參、熟地黃加水煎煮三次，第一次1.5小時(shí)，第二、三次各1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.10(75～80℃)的清膏，冷卻后，加乙醇使含醇量為50～55％，攪勻，冷卻，靜置，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.25，備用，阿膠粉碎成細(xì)粉，與蔗糖粉1800g混勻，加入上述濃縮液、蒸餾液，混勻，制成顆粒，干燥，過篩，制成2000g，即得。
性狀本品為黃棕色的顆粒；味甜。
鑒別取本品10g，加乙醚20ml，浸泡1小時(shí)，濾過，濾液揮干，殘?jiān)?.5％香草醛硫酸溶液，顯紫紅色。
檢查總氮量 取本品1.5g，精密稱定，照氮測(cè)定法(附錄IXL第一法)測(cè)定，含氮量不得少于1.30％。
其他 應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄IC)。
功能與主治滋陰補(bǔ)血，健俾益氣，調(diào)經(jīng)養(yǎng)血。用于久病體虛，血虧氣虛，婦女血虛、經(jīng)閉、經(jīng)少等癥。
用法與用量口服，一次20g，一日4次。
規(guī)格每袋裝20g貯藏密封。
標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-3062-98驢膠補(bǔ)血顆粒Lüjiao Buxue Keli處方阿膠 黃芪 黨參 熟地黃 白術(shù) 當(dāng)歸性狀本品為黃棕色的顆粒；味甜。
鑒別(1)取本品30g，研細(xì)，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸至約1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加乙醇10ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10靗，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮藍(lán)白色熒光斑點(diǎn)。
(2)取本品50g，研細(xì)，加甲醇60ml，浸泡4小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液加于已處理好的中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲甙對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查總氮量 取本品1.5g，精密稱定，照氮測(cè)定法(附錄IXL)測(cè)定，含氮量不得少于1.30％。
其他 應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄IC)。
功能與主治滋陰補(bǔ)血，健脾益氣，調(diào)經(jīng)活血。用于久病體虛，氣虛血虧型月經(jīng)不調(diào)等婦科疾患。
用法與用量開水沖服，一次20g，一日2次。
規(guī)格每袋裝20g
貯藏密封，置陰涼干燥處。
由于上述標(biāo)準(zhǔn)采用的質(zhì)量控制方法對(duì)當(dāng)歸和黃芪進(jìn)行了定性鑒別和對(duì)總氮量進(jìn)行定量，未對(duì)熟地黃、白術(shù)、黨參的定性鑒別和黃芪甲苷進(jìn)行定量，故不能達(dá)到很好的質(zhì)量控制。由于中藥成分復(fù)雜，且不同產(chǎn)地、不同季節(jié)、不同來源的藥材質(zhì)量差異較大，并直接影響制劑的質(zhì)量，引起藥物質(zhì)量的變化和影響療效。所以建立一個(gè)方法可行、穩(wěn)定可靠的驢膠補(bǔ)血制劑質(zhì)量控制方法有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是基于上述質(zhì)量控制方法的不足而進(jìn)行的，目的在于建立一種更好的驢膠補(bǔ)血制劑質(zhì)量控制方法，在原來標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加熟地黃、白術(shù)、黨參的定性鑒別和黃芪甲苷的定量方法，使制劑質(zhì)量更可控，從而保證藥物質(zhì)量和臨床療效。
本發(fā)明可通過以下技術(shù)方法實(shí)現(xiàn)1.白術(shù)的定性鑒別白術(shù)具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎的功效，用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動(dòng)不安。主含揮發(fā)油，油中主要成分為蒼術(shù)酮(Atractylone，C15H20O)、蒼術(shù)醇(Atracylol，C15H20O)、白術(shù)內(nèi)酯A(Butenolide A)、白術(shù)內(nèi)酯B(ButenolideB)、3-β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(Acetoxyatractylon)、3-β-羥基蒼術(shù)酮(Hydroxyatractylon)、芹烷二烯酮(Selina-4(14)，7(11)-dien-8-one)等，此外尚含倍半萜化合物，有桉樹萜(Aronadendrene，C15H24)，還含氧雙香豆素類(Oxicoumarines)、果糖、菊糖、白術(shù)多糖、絲氨酸、谷氨酸等多種氨基酸等成分。中國(guó)藥典2000版一部收載了鑒別其揮發(fā)性成分蒼術(shù)酮的鑒別方法，但蒼術(shù)酮不穩(wěn)定，在制劑中未能鑒別出。本發(fā)明鑒別驢膠補(bǔ)血制劑中白術(shù)的脂溶性成分。
1.1供試品溶液的制備方法用極性或中等極性溶劑超聲處理或回流提取成分的制備方法(固體制劑)，溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、乙醚或乙酸乙酯等；或液體、半固體制劑加適量硅藻土混勻，干燥，然后同上述方法同法制備的方法；對(duì)于液體制劑，最直接的方法為采用與水不互溶的中等極性溶劑萃取成分的制備方法，溶劑如乙醚、乙酸乙酯等；或固體制劑加水溶解后用與水不互溶的中等極性溶劑萃取成分的制備方法，溶劑如乙醚、乙酸乙酯等；另根據(jù)實(shí)踐，該方法制備的供試品溶液也適合用于標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-3062-98驢膠補(bǔ)血顆粒項(xiàng)下當(dāng)歸鑒別方法。方法包括但不僅限于
方法1取驢膠補(bǔ)血顆粒35g(約相當(dāng)于原藥材15g)，加熱水30ml溶解，加乙酸乙酯振搖提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法2取驢膠補(bǔ)血顆粒35g，研細(xì)，加甲醇回流1小時(shí)，過濾，濾液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法3取驢膠補(bǔ)血顆粒35g，加熱水30ml溶解，加乙醚振搖提取2～3次，每次20～40ml，合并乙醚液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法4取驢膠補(bǔ)血口服液(約相當(dāng)于原藥材15g)，加乙酸乙酯振搖提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法5取驢膠補(bǔ)血膏(約相當(dāng)于原藥材15g)，加硅藻土3g，混勻，干燥，粉碎，加乙酸乙酯50ml回流1小時(shí)，過濾，濾液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
1.2白術(shù)對(duì)照藥材溶液的制備取白術(shù)對(duì)照藥材1g，加水15ml，加熱煎煮30分鐘，放冷，濾過，濾液加乙酸乙酯振搖提取2～3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
1.3缺白術(shù)陰性對(duì)照溶液制備按驢膠補(bǔ)血顆粒處方工藝制備缺白術(shù)陰性對(duì)照，取缺取缺白術(shù)陰性對(duì)照(相當(dāng)于供試品溶液所含白術(shù)量)，同供試品溶液制備方法同法制備，即得。
1.4TLC鑒別法照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、缺白術(shù)陰性對(duì)照溶液及上述對(duì)照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。缺取缺白術(shù)陰性對(duì)照無(wú)干擾。
2.熟地黃鑒別熟地黃具有滋陰補(bǔ)血，益精填髓的功效。用于肝腎陰虛，腰膝酸軟，骨蒸潮熱，盜汗遺精，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，心悸怔忡，月經(jīng)不調(diào)，崩漏下血，眩暈，耳鳴，須發(fā)早白。主含環(huán)烯醚萜、單萜及其苷類，如梓醇、二氫梓醇、乙酰梓醇、桃葉珊瑚苷等，此外還含有糖類、多種氨基酸等。本發(fā)明鑒別了熟地黃中的5-羥甲基糠醛成分。
2.1供試品溶液制備同白術(shù)鑒別供試品溶液制備。
2.15-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液制備取5-羥甲基糠醛對(duì)照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，即得。
2.3缺熟地黃陰性對(duì)照溶液制備按驢膠補(bǔ)血顆粒處方工藝制備缺熟地黃陰性對(duì)照，取缺取缺熟地黃陰性對(duì)照(相當(dāng)于供試品溶液所含熟地黃量)，同供試品溶液制備方法同法制備，即得。
2.4TLC鑒別法照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、缺熟地黃陰性對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液各2～6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺熟地黃陰性對(duì)照無(wú)干擾。
展開劑根據(jù)薄層板厚度及溫、濕度等可以調(diào)節(jié)不同比例和溶劑成分，如正己烷-乙酸乙酯(8∶2)等，也適合于標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-3062-98驢膠補(bǔ)血顆粒項(xiàng)下與當(dāng)歸同時(shí)鑒別。能以能得到清晰的斑點(diǎn)達(dá)到良好鑒別為宜。
3.黨參的鑒別黨參具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺功效。用于脾肺虛弱，氣短心悸，食少便溏，虛喘咳嗽，內(nèi)熱消渴。主含糖和苷類，如丁香苷β-D-吡喃葡萄糖己苷、α-D-呋喃果糖乙醇苷、黨參苷I等；還含生物堿及含氮成分、揮發(fā)性成分、三萜(齊墩果酸等)和鐵、鋅、銅、錳、鈷、鉻、鉬、硒等20多種微量元素和氨基酸類等。
本發(fā)明鑒別驢膠補(bǔ)血制劑中黨參的水溶性苷類成分，以黨參對(duì)照藥材為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別，以黨參炔苷對(duì)照品用高效液相色譜法進(jìn)行鑒別。
3.1供試品溶液制備方法采用極性溶劑超聲處理或回流提取樣品，提取溶劑可以為水、甲醇、乙醇、丙酮等，提取液蒸干后用水微熱使溶解，為達(dá)到更好的精制效果，提取液可先經(jīng)低極性溶劑除去小極性成分，所述的低極性溶劑為石油醚、氯仿、乙醚等，水層繼續(xù)用正丁醇萃取，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，即得；或通過D101大孔吸附樹脂柱進(jìn)一步精制，即正丁醇液蒸干殘?jiān)铀芙猓崾谷芙?，通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液。?duì)于液體制劑，最直接的方法為直接萃取，同上述方法制備。供試品溶液制備方法包括但不僅限于方法1取驢膠補(bǔ)血制劑顆粒35g(約相當(dāng)于原藥材15g)，加甲醇50ml，超聲處理45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml微熱使溶解，用石油醚洗滌2次，每次15ml，取水層，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙猓ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
方法2取驢膠補(bǔ)血口服液適量(約相當(dāng)于原藥材15g)，用石油醚洗滌2次，每次20ml，取水層，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙猓ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
方法3取驢膠補(bǔ)血制劑顆粒30g，加乙醇50ml，加熱回流60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml微熱使溶解，用石油醚(或三氯甲烷、乙醚)洗滌2次，每次15ml，取水層，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?ml量瓶中，即得。
方法4取驢膠補(bǔ)血制劑顆粒35g，加水30ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙?，通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
3.2黨參對(duì)照藥材溶液制備取黨參對(duì)照藥材2g，同法供試品溶液制備方法同法制備，即得。
3.3缺黨參陰性對(duì)照溶液制備按驢膠補(bǔ)血顆粒處方工藝制備缺黨參陰性對(duì)照，取缺取缺黨參陰性對(duì)照(相當(dāng)于供試品溶液所含黨參量)，同供試品溶液制備方法同法制備，即得。
3.4TLC鑒別法照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、缺黨參陰性對(duì)照溶液及黨參對(duì)照藥材溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5～1)或乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(2∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點(diǎn)。缺黨參陰性對(duì)照無(wú)干擾。
3.5HPLC鑒別法黨參炔苷對(duì)照品溶液制備精密稱取黨參炔苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
檢測(cè)波長(zhǎng)確定取上述黨參炔苷對(duì)照品溶液，于200-400nm光譜掃描，其最大吸收波長(zhǎng)為242，253，267，282nm處均有最大吸收，優(yōu)選267nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VID)測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(18～25∶82～75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm；分別精密吸取黨參炔苷對(duì)照品溶液與上述供試品溶液的甲醇稀釋液(1→5)各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品色譜中，呈現(xiàn)出與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。缺黨參陰性對(duì)照無(wú)干擾。
4.黃芪甲苷定量黃芪具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌的功效。用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白尿，糖尿病。主含皂苷類、多糖類、黃酮類、氨基酸類和無(wú)機(jī)類等成分。黃芪甲苷為其有效成分之一。本專利公開了驢膠補(bǔ)血制劑黃芪甲苷定量方法，所述的黃芪甲苷定量方法為以下高效液相色譜法、薄層色譜掃描法中的一種4.1供試品溶液的制備方法包括溶劑提取-正丁醇萃取精制—堿溶液洗滌除雜—正丁醇提取物—上大孔吸附樹脂柱精制等關(guān)鍵步驟，方法采用極性溶劑溶解或超聲處理或回流提取適量樣品(約相當(dāng)于原藥材10～30g)，提取溶劑可以為水、甲醇、乙醇等，有機(jī)溶劑提取液蒸干后用水微熱使溶解，水層用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用堿溶液充分洗滌2次，所述的堿溶液為化學(xué)上可接受的堿性化合物的水溶液，包括但不僅限于氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉等，棄去堿洗液，正丁醇液蒸干(如為不揮發(fā)堿液則先用水洗滌至中性)，殘?jiān)铀谷芙?，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水1～4倍柱體積洗脫，棄去水液，再用15％～40％乙醇約0.5～3倍柱體積洗脫，棄去洗脫液，繼用60％～80％乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色后繼續(xù)1～3個(gè)柱體積，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
4.2高效液相色譜法取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材20g)，加熱水使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得對(duì)照品溶液的制備。照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VID)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(30～36∶70～64)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。精密吸取對(duì)照品溶液10祃、20祃，供試品溶液20祃，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
4.3薄層色譜掃描法取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材15g)，加熱水使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙?，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液2靗與6靗、對(duì)照品溶液2靗與4靗，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。
4.4黃芪甲苷限量通過上述2種定量方法對(duì)已上市三批驢膠補(bǔ)血顆粒(湖南九芝堂股份有限公司)黃芪甲苷的測(cè)定結(jié)果，并結(jié)合中國(guó)藥典2005版黃芪藥材中黃芪甲苷含量不得少于0.040％的限量規(guī)定，確定本品每服用量制劑(顆粒1袋)含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于0.30mg。
實(shí)施例1驢膠補(bǔ)血顆粒(處方、制法同衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2159-96)白術(shù)鑒別取本品35g，加熱水40ml溶解，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材1g，加水15ml，煎沸30分鐘，放冷，濾過，濾液加乙酸乙酯振搖提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。
熟地黃鑒別取5-羥甲基糠醛對(duì)照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
黨參鑒別取本品35g，加水40ml加熱使溶解，用石油醚洗滌2次，每次20ml，取水層，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次40ml，合并回收正丁醇液，殘?jiān)铀?ml微熱使溶解，通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黨參對(duì)照藥材2g，加水30ml，煎沸45分鐘，放冷，濾過，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點(diǎn)。
黃芪甲苷含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品40g，加熱水適量使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
測(cè)定法 精密吸取對(duì)照品溶液10祃、20祃，供試品溶液20祃，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
本品每袋含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于0.30mg。
實(shí)施例2驢膠補(bǔ)血合劑處方阿膠 216g黃芪 180g黨參 180g熟地黃120g白術(shù) 90g 當(dāng)歸 60g制法以上六味，阿膠加水使溶解，當(dāng)歸、白術(shù)進(jìn)行蒸餾，收集蒸餾液備用，殘?jiān)c黃芪、黨參、熟地黃加水煎煮，合并煎液，濾過，合并上述當(dāng)歸、白術(shù)煎液，濃縮，冷卻，加乙醇使含醇量為40％～85％，攪勻，冷卻，靜置，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，與上述阿膠液混勻，加入適量增溶劑、矯味劑、防腐劑，混勻，加水至2000ml，過濾，即得。
白術(shù)鑒別取本品40ml，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材1g，加水15ml，煎沸30分鐘，放冷，濾過，濾液加乙酸乙酯振搖提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。
熟地黃鑒別取5-羥甲基糠醛對(duì)照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
黨參鑒別取本品20ml，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取黨參炔苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VID)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(22∶78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm。分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品一致。
黃芪甲苷含量測(cè)定取本品30ml，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙猓爬?，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，繼用70％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液2μl與6μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。
本品每1ml含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于15μg。
權(quán)利要求
1.一種驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法至少包括以下方法中的一種a.對(duì)白術(shù)進(jìn)行定性鑒別；b.對(duì)熟地黃進(jìn)行定性鑒別；c.對(duì)黨參進(jìn)行定性鑒別；d.對(duì)黃芪甲苷成分進(jìn)行定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，所述的白術(shù)的定性鑒別方法為以下方法中的一種a.取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材15g)，加水適量使溶解，加乙酸乙酯、乙醚任意一種溶劑振搖提取1～3次，合并提取液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取白術(shù)對(duì)照藥材1g，加水適量，加熱煮沸30分鐘，放冷，濾過，濾液同供試品溶液方法同法制備，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及上述對(duì)照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。b.取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材15g)，研細(xì)，加甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中任意一種溶劑提取0.5～1小時(shí)，提取方法為超聲處理和回流提取中的一種，提取液過濾，濾液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及對(duì)照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，所述的熟地黃鑒別方法為取5-羥甲基糠醛對(duì)照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取[白術(shù)鑒別]項(xiàng)下的供試品溶液及上述對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，所述的黨參鑒別方法為以下方法中的一種a.取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材15g)，加水、甲醇、乙醇中的任意一種溶劑，超聲處理或回流提取0.5～1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙?，用石油醚、三氯甲烷、乙醚中的任意一種溶劑洗滌0～2次，取水層，用水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙?，通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水洗脫，棄去水液，續(xù)用50％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黨參對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及上述對(duì)照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5～1)或乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(2∶8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點(diǎn)。b.精密稱取黨參炔苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作為黨參炔苷對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI D)測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm；分別精密吸取對(duì)照品溶液與本權(quán)利要求方法a項(xiàng)下供試品溶液的甲醇稀釋液(1→5)各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，供試品色譜中，呈現(xiàn)出與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，所述的黃芪甲苷定量方法為以下方法中的一種a.取驢膠補(bǔ)血制劑適量(約相當(dāng)于原藥材20g)，加水、甲醇、乙醇中的任意一種溶劑，超聲處理或回流提取0.5～1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙?，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，合并正丁醇液，用堿溶液充分洗滌1～2次，棄去堿洗液，用正丁醇飽和的水洗含不揮發(fā)堿的正丁醇液至中性，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀崾谷芙猓爬?，通過D10l型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水約50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇約30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇約80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得對(duì)照品溶液的制備。照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VI D)測(cè)定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。b.取本權(quán)利要求方法a項(xiàng)下供試品溶液的1/2濃縮液，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液2μl與6μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，所述的黃芪甲苷定量限度為本品一次服用量含黃芪以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于0.30mg。
7.權(quán)利要求1所述的驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，在顆粒劑、丸劑、片劑、膠囊劑、糖漿劑、煎膏劑、合劑、流浸膏劑與浸膏劑等制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種驢膠補(bǔ)血制劑的質(zhì)量控制方法，該方法增加了驢膠補(bǔ)血制劑中黨參、熟地黃、白術(shù)的定性鑒別，并對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行定量，使產(chǎn)品質(zhì)量得到更有效的控制，并為臨床療效提供更可靠保證。
文檔編號(hào)G01N30/00GK1850208SQ20061020016
公開日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者徐蕾 申請(qǐng)人:徐蕾